一种香豆素类衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于香豆素类化合物技术领域，具体涉及一种香豆素类衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

前列腺癌是发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，随着我国人均寿命的不断增长,饮食结构的改变和诊断技术的提高,近年前列腺癌发病率呈逐渐升高的态势，为社会和人民带来了沉重的负担。

现有技术针对前列腺癌的治疗方法一般包括激素疗法、化疗法或手术疗法等。激素疗法一般采用恩杂鲁胺等抗雄激素药物治疗，然而治疗后期往往导致去势抵抗性前列腺癌；化疗法一般以甲氨蝶呤等细胞毒性药物为主，会对患者身体产生骨髓抑制等副作用；手术疗法则面临术后护理等系列问题。因此，亟需开发特异性针对前列腺癌疾病的有效治疗药物。研究表明，内皮素受体A(ETA)在前列腺癌的发病过程中呈过度表达特征，拮抗ETA的表达对前列腺癌的治疗具有积极意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种香豆素类衍生物及其制备方法与应用，该香豆素类衍生物可显著抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖，20mg/kg的给药剂量下能显著抑制肿瘤组织中内皮素受体A的表达，与多西他赛合用可明显降低血清中前列腺特异性抗原的表达水平，从而发挥抗肿瘤增殖的作用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种香豆素类衍生物，所述香豆素类衍生物的结构式为

本发明还提供了制备上述的香豆素类衍生物的方法，该方法为：

S1、将香豆素、N,N-二异丙基乙胺和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯溶于N，N-二甲基甲酰胺中，在室温的条件下反应0.5h，然后加入氨基官能化聚乙二醇，室温的条件下反应12h，经柱层析分离，得到中间产物；

所述氨基官能化聚乙二醇的结构式为

S2、将S1中得到的中间产物和DL-焦谷氨酸混合后，加入N,N-二异丙基乙胺和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯进行反应，经柱层析分离，得到香豆素类衍生物；所述香豆素类衍生物的结构式为

优选地，S1中所述香豆素、N,N-二异丙基乙胺和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、氨基官能化聚乙二醇和N，N-二甲基甲酰胺的用量比为2.0g：2.65g：7.8g：4.0g：20mL。

优选地，S1中所述柱层析为硅胶吸附柱层析。

优选地，，S2中所述中间产物、DL-焦谷氨酸、N,N-二异丙基乙胺和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯的质量比为2.0：0.93：1.4：4.1。

优选地，S2中所述柱层析为硅胶吸附柱层析。

本发明还提供了上述的香豆素类衍生物的应用，所述香豆素类衍生物用于制备抗前列腺癌药物。

本发明还提供了上述的香豆素类衍生物的应用，所述香豆素类衍生物用于制备内皮素受体A拮抗药物。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

本发明制备的的香豆素类衍生物能用于制备抗前列腺癌药物，本发明制备的香豆素类衍生物能能显著抑制肿瘤组织中内皮素受体A的表达，可用于制备内皮素受体A拮抗药物。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1为实施例1制备的香豆素类衍生物的结构表征质谱图。

图2为实施例1制备的香豆素类衍生物的结构表征氢谱图。

图3为实施例1制备的香豆素类衍生物的结构表征碳谱图。

图4为实施例2的香豆素类衍生物对LNCaP细胞增殖抑制作用的图。

图5为实施例3的香豆素类衍生物对LNCaP细胞中ETA的抑制作用图。

图6为实施例4的LNCaP细胞移植瘤裸鼠的给药方式示意图。

图7为实施例4的小鼠肿瘤体积指标图和肿瘤特异性抗原指标图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的香豆素类衍生物，所述香豆素类衍生物的结构式为

本实施例还提供了制备上述的香豆素类衍生物的方法，该方法为：

S1、将2.0g香豆素、2.65g N,N-二异丙基乙胺和7.8g O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，在室温的条件下反应0.5h，然后加入4.0g氨基官能化聚乙二醇，室温的条件下反应12h，经硅胶吸附柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20：1)分离，得到中间产物；

所述氨基官能化聚乙二醇的结构式为

S2、将2.0g的S1中得到的中间产物和0.93g的DL-焦谷氨酸混合后，加入1.4g的N,N-二异丙基乙胺和4.1g的O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯进行反应，经硅胶吸附柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30：1)分离，得到香豆素类衍生物，记为NP845；所述香豆素类衍生物的结构式为

图1是本实施例制备的香豆素类衍生物的结构表征质谱图，图2是结构表征氢谱图，图3是结构表征碳谱图。

实施例2

本实施例为实施例1制备的香豆素类衍生物(NP845)的应用，所述香豆素类衍生物用于制备抗前列腺癌药物。

本实施例采用LNCaP细胞系为研究对象，所用细胞系购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

采用细胞计数法(CCK8法)明确NP845对LNCaP的增殖抑制作用：向RPMI 1640培养基中添加10％的胎牛血清和100U/mL青霉素-链霉素(1：1)，在96孔板中接种LNCaP细胞，在5％的二氧化碳中37℃培养24小时，显微镜下观察细胞贴壁生长，状态良好。加入不同浓度的NP845，培养12小时。加入1/10体积的细胞计数试剂(CCK8)，再次培养2小时，使用酶标仪读取450nm处的吸光度。

图4为NP845对LNCaP细胞增殖的抑制作用示意图。由图4可知，ETA阳性工具药阿曲生坦能够显著抑制LNCaP细胞的增殖，其IC

试验表明，香豆素类衍生物NP845在体外可显著抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖，IC

实施例3

本实施例为实施例1制备的香豆素类衍生物(NP845)的应用，所述香豆素类衍生物对LNCaP细胞中ETA的抑制作用。

采用蛋白免疫印迹法(Western blot)明确NP845对LNCaP细胞中ETA的抑制作用：向RPMI 1640培养基中添加10％的胎牛血清和100U/mL青霉素-链霉素(1：1)，在96孔板中接种LNCaP细胞，在5％的二氧化碳中37℃培养24小时，显微镜下观察细胞贴壁生长，状态良好。分别加入NP845使其浓度分别为5，10，25，50，100μM，培养12小时。用RIPA裂解液处理各组细胞，取等量细胞，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离各组细胞。将凝胶转移到硝化纤维膜，采用3％的牛血清蛋白封闭后，加入1:1000稀释后的ETA一抗，室温孵育2小时。加入辣根过氧化物酶偶联的二抗，过夜孵育。

图5为Western blot法分析NP845对LNCaP细胞中ETA的抑制作用。由图5可知，NP845以剂量依赖性的方式抑制LNCaP细胞中ETA的表达，提示NP845是ETA的特异性抑制剂。

实施例4

本实施例为实施例1制备的香豆素类衍生物(NP845)的应用，所述香豆素类衍生物对裸鼠LNCaP移植肿瘤的抑制作用。

图6为LNCaP细胞移植瘤裸鼠的给药方式示意图。以基质胶悬浮LNCaP细胞，调整浓度为(5×10

最后一次给药12小时后采集肿瘤，用卡尺沿两个正交轴测量肿瘤体积。体内小鼠实验表明，NP845在20mg/kg的给药剂量下联合多西他赛能显著抑制肿瘤的增殖速度。采用酶联免疫吸附反应测定各组裸鼠肿瘤组织中特异性抗原的浓度。

图7为裸鼠肿瘤体积和血清前列腺癌特异性抗原指标图，其中(A)为NP845对LNCaP细胞移植瘤体积指标图，(B)为肿瘤特异性抗原指标图。由图7可知，NP845在20mg/kg的给药剂量下联合多西他赛能显著抑制裸鼠肿瘤的增殖速度，并显著降低肿瘤组织中特异性抗原的浓度，提示NP845可能能用于前列腺癌的治疗。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。