一种香樟香型烟用香料的制备方法

技术领域

本发明涉及烟用香料领域，更具体地，涉及一种香樟香型烟用香料的制备方法。

背景技术

烟草提取物是一类重要的烟用香料，可以有效提高卷烟香气量和浓度，增益卷烟香气品质。烟草提取物种类取决于烟叶原料，导致烟草提取物的种类较少。目前，越来越多的研究利用微生物发酵烟草原料，产生新的香味物质，开发新型烟草提取物。

高品质的茯砖茶中存在一种冠突散囊菌，俗称“金花”，在生长过程中能够产生氧化酶和大分子降解酶类，可催化茶叶中大分子物质降解为单糖、氨基酸等小分子，催化多酚类化合物氧化成对人体有益的物质，提升茶叶口感。

因此，如何通过冠突散囊菌制备新型的烟用香料成为本领域亟需解决的技术难题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种通过冠突散囊菌制备的香樟香型烟用香料的制备方法的新技术方案。

根据本发明的第一方面，提供了一种香樟香型烟用香料的制备方法。

该香樟香型烟用香料的制备方法包括如下步骤：

步骤(1)：将烟叶原料和水混合后进行高温灭菌处理，得到烟草固态培养基；

步骤(2)：将冠突散囊菌孢子配制为孢子悬浮液；

步骤(3)：根据体积质量比(5-100):1000将孢子悬浮液与烟草固态培养基混合均匀，发酵培养得到发酵烟草，其中，孢子悬浮液的体积的单位为mL，烟草固态培养基的质量的单位为g；

步骤(4)：根据体积质量比为(2-10):1将第一含水乙醇与发酵烟草混合后回流提取，得到第一发酵烟草醇提液和一提发酵烟草，其中，第一含水乙醇的体积的单位为mL，发酵烟草的质量的单位为g；

步骤(5)：根据体积质量比为(2-10):1将第二含水乙醇与一提发酵烟草混合后回流提取，得到第二发酵烟草醇提液，其中，第二含水乙醇的含水量小于第一含水乙醇的含水量，第二含水乙醇的体积的单位为mL，一提发酵烟草的质量的单位为g；

步骤(6)：将第一发酵烟草醇提液和第二发酵烟草醇提液混合，得到备用发酵烟草醇提液；

步骤(7)：对备用发酵烟草醇提液进行减压浓缩处理，得到前处理发酵烟草醇提液；

步骤(8)：根据体积比为(0.5-5):1将第三含水乙醇加入前处理发酵烟草醇提液，离心取上清液进行减压浓缩处理，即得到香樟香型烟用香料，其中，第三含水乙醇的含水量大于第一含水乙醇的含水量。

可选的，所述步骤(1)中的烟叶原料为烟叶碎片。

可选的，所述步骤(1)具体如下：

将烟叶碎片过筛后，取小粒径烟叶碎片，根据体积质量比(1-2):(5-1)将去离子水和烟叶碎片混合，在121℃下灭菌15min，得到烟草固态培养基，其中，去离子水的体积的单位为mL，烟叶碎片的质量的单位为g。

可选的，所述步骤(2)中的孢子悬浮液的OD

可选的，所述步骤(3)具体如下：

根据体积质量比(5-100):1000将孢子悬浮液与烟草固态培养基混合均匀，置于30℃培养箱中培养1d-7d，期间每12h晃动翻匀一次，发酵结束后得到发酵烟草。

可选的，所述步骤(4)和所述步骤(5)中的回流提取条件如下：

温度110℃，时间1h-6h。

可选的，所述步骤(4)中的第一含水乙醇为50％-95％乙醇，所述步骤(5)中的第二含水乙醇为10％-60％乙醇。

可选的，所述步骤(7)具体如下：

将备用发酵烟草醇提液减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到前处理发酵烟草醇提液。

可选的，所述步骤(8)具体如下：

根据体积比为(0.5-5):1将第三含水乙醇加入前处理发酵烟草醇提液，于-20℃静置一段时间，离心取上清液，减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，即得到香樟香型烟用香料，其中，第三含水乙醇的含水量大于第一含水乙醇的含水量。

可选的，所述步骤(8)中的第三含水乙醇为95％乙醇。

本公开的香樟香型烟用香料的制备方法利用冠突散囊菌进行发酵，可产生芳樟醇、芳樟醇氧化物、α-松油醇、异氟尔酮等香味成分，具有香樟香型特征。通过多次醇提及浓缩处理后，有效提高了香樟香型烟用香料的品质。

具体实施方式

现在将详细描述本发明的各种示例性实施例。应注意到：除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、数字表达式和数值不限制本发明的范围。

以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。

对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。

在这里示出和讨论的所有例子中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它例子可以具有不同的值。

本公开的香樟香型烟用香料的制备方法包括如下步骤：

步骤(1)：将烟叶原料和水混合后进行高温灭菌处理，得到烟草固态培养基。

为了控制成本，步骤(1)中的烟叶原料可为烟叶碎片。上述烟叶碎片可为选叶过程中由于人工分拣原因产生烟叶碎片，或者打叶分风过程中产生的烟叶碎片。

进一步的，为了提供更优质的培养基，步骤(1)具体如下：

将烟叶碎片过筛后，取小粒径烟叶碎片，根据体积质量比(1-2):(5-1)将去离子水和烟叶碎片混合，在121℃下灭菌15min，得到烟草固态培养基，其中，孢子悬浮液的体积的单位为mL，烟草固态培养基的质量的单位为g。

步骤(2)：将冠突散囊菌孢子配制为孢子悬浮液。

步骤(2)中的孢子悬浮液的OD

步骤(3)：根据体积质量比(5-100):1000将孢子悬浮液与烟草固态培养基混合均匀，发酵培养得到发酵烟草，其中，孢子悬浮液的体积的单位为mL，烟草固态培养基的质量的单位为g。

为了改善发酵效果，步骤(3)具体如下：

根据体积质量比(5-100):1000将孢子悬浮液与烟草固态培养基混合均匀，置于30℃培养箱中培养1d-7d，期间每12h晃动翻匀一次，发酵结束后得到发酵烟草，其中，孢子悬浮液的体积的单位为mL，烟草固态培养基的质量的单位为g。

步骤(4)：根据体积质量比为(2-10):1将第一含水乙醇与发酵烟草混合后回流提取，得到第一发酵烟草醇提液和一提发酵烟草，其中，第一含水乙醇的体积的单位为mL，发酵烟草的质量的单位为g。

步骤(5)：根据体积质量比为(2-10):1将第二含水乙醇与一提发酵烟草混合后回流提取，得到第二发酵烟草醇提液，其中，第二含水乙醇的含水量小于第一含水乙醇的含水量，第二含水乙醇的体积的单位为mL，一提发酵烟草的质量的单位为g。

为了提高提取率，步骤(4)和步骤(5)中的回流提取条件如下：

温度110℃，时间1h-6h。

为了提高提取率，提高香味品质，步骤(4)中的第一含水乙醇为体积百分含量50％-95％乙醇，步骤(5)中的第二含水乙醇为体积百分含量10％-60％乙醇。

步骤(6)：将第一发酵烟草醇提液和第二发酵烟草醇提液混合，得到备用发酵烟草醇提液。

步骤(7)：对备用发酵烟草醇提液进行减压浓缩处理，得到前处理发酵烟草醇提液。

步骤(7)可具体如下：

将备用发酵烟草醇提液减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到前处理发酵烟草醇提液。

步骤(8)：根据体积比为(0.5-5):1将第三含水乙醇加入前处理发酵烟草醇提液，离心取上清液进行减压浓缩处理，即得到香樟香型烟用香料，其中，第三含水乙醇的含水量大于第一含水乙醇的含水量。

为了改善香味品质，步骤(8)具体如下：

根据体积比为(0.5-5):1将第三含水乙醇加入前处理发酵烟草醇提液，于-20℃静置一段时间，离心取上清液，减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，即得到香樟香型烟用香料，其中，第三含水乙醇的含水量大于第一含水乙醇的含水量。

进一步的，步骤(8)中的第三含水乙醇为体积百分含量95％乙醇。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所使用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到，实验中使用的设备如无特殊说明，均为本领域技术人员熟知的设备。

实施例1

1、烟叶碎片(2019年襄县C3F烟叶碎片)过10目筛，取小粒径烟叶碎片，根据水(mL)与小粒径烟叶碎片(g)体积质量比为1:1的比例加入去离子水，混合均匀，121℃灭菌15min，得到烟草固态培养基。

2、冠突散囊菌孢子(源自泾阳茯苓茶)用无菌去离子水悬浮，调整OD

3、孢子悬浮液(mL)与烟草固态培养基(g)按照体积质量比1:50混合均匀，置于30℃培养箱中培养4d，期间每12h晃动翻匀一次，发酵结束得到发酵烟草。

4、使用75％乙醇(mL)，按照与发酵烟草(g)的体积质量比为6:1，混合均匀后设置温度110℃回流提取4h，得到第一发酵烟草醇提液和一提发酵烟草。

5、使用20％乙醇(mL)，按照与一提发酵烟草(g)的体积质量比为6:1，混合均匀后设置温度110℃回流提取4h，得到第二发酵烟草醇提液。

6、将第一发酵烟草醇提液和第二发酵烟草醇提液混合，得到备用发酵烟草醇提液。

7、将备用发酵烟草醇提液减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到前处理发酵烟草醇提液。

8、根据体积比为1:1将95％乙醇加入前处理发酵烟草醇提液，于-20℃静置过夜，离心取上清液，再次减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到香樟香型烟用香料T1。

对比例1

1、烟叶碎片(2019年襄县C3F烟叶碎片)过10目筛，取小粒径烟叶碎片，根据水(mL)与小粒径烟叶碎片(g)体积质量比为1:1的比例加入去离子水，混合均匀，121℃灭菌15min，得到预处理烟叶碎片。

2、使用75％乙醇(mL)，按照与预处理烟叶碎片(g)的体积质量比为6:1，混合均匀后设置温度110℃回流提取4h，得到第一烟草醇提液和一提预处理烟叶碎片。

3、使用20％乙醇(mL)，按照与一提预处理烟叶碎片(g)的体积质量比为6:1，混合均匀后设置温度110℃回流提取4h，得到第二烟草醇提液。

4、将第一烟草醇提液和第二烟草醇提液混合，得到备用烟草醇提液。

5、将备用烟草醇提液减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到前处理烟草醇提液。

6、根据体积比为1:1将95％乙醇加入前处理烟草醇提液，于-20℃静置过夜，离心取上清液，再次减压浓缩至密度为1.15±0.005g/mL，得到烟草提取物T0。

采用GC-MS检测T1和T0中的关键香味成分。

T1和T0中的关键香味成分见表1。由表1可知，冠突散囊菌发酵关键香味成分芳樟醇、芳樟醇氧化物、α-松油醇、香茅醇等物质含量明显提升，而烟碱作为烟草提取物中可以提升烟草香气的关键物质成分，含量未被降解。可见，冠突散囊菌发酵制得的烟用香料具有较高的品质。

表1关键香味成分(单位：μg/mL)

虽然已经通过例子对本发明的一些特定实施例进行了详细说明，但是本领域的技术人员应该理解，以上例子仅是为了进行说明，而不是为了限制本发明的范围。本领域的技术人员应该理解，可在不脱离本发明的范围和精神的情况下，对以上实施例进行修改。本发明的范围由所附权利要求来限定。