8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并4,3-d嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的晶体多晶型物及其制备方法

技术领域

本实施方式涉及8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物及其制备方法。

背景技术

FLT3(FMS样酪氨酸激酶3，也称为Flk2)是III类受体酪氨酸激酶(RTK)其中之一，在造血干细胞的增殖和分化中起重要作用。在急性髓细胞性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、肥大细胞增多症和胃肠道间质瘤(GIST)中发现了FLT3的活性突变或过表达。不说活性突变，过表达的FLT3的自分泌或旁分泌配体刺激也可能导致恶性表型。

FLT3的配体由骨髓基质细胞和其他细胞表达，并与其他生长因子配合刺激干细胞、祖细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞的增殖。FLT3与骨髓增生异常和血液系统恶性肿瘤相关。另外，FLT3在大部分树突状细胞的祖细胞中表达，并且FLT3的刺激引起祖细胞的增殖并分化为树突状细胞(DC)。由于树突状细胞是T细胞介导的免疫反应(包括自身免疫反应)的主要引发剂，因此抑制FLT3是下调树突状细胞介导的炎症和自身免疫反应的主要机制。

同时，结晶化合物具有独特的晶体谱图。该谱图可以是单晶型或两种或更多种多晶型(polymorphic form)。这样的多晶型化合物可能在吸湿方面显示出不同，并且它们的物理性质例如溶解度和熔点也不同。因此，尽管多晶型化合物具有相同的化学结构式，但是由于这些化合物具有不同的晶型，因此它们的稳定性和生理活性可能存在差异。特别地，在药物使用的情况下，晶型可能对药物原料制备的便利性、溶解性、储存稳定性和生物药理活性有重大影响。另外，根据每个国家的药物许可当局发布的指南和法规，批准药物销售需要药物晶型的稳定性。

因此，需要开发和研究能够有效抑制FLT3，即使在高温高湿环境下也具有优异的稳定性同时改善溶解性的新晶型。

发明详述

技术问题

本实施方式旨在提供一种能够有效抑制FLT3并且即使在高温高湿环境下也具有优异的稳定性的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物及其制备方法。

问题的解决方法

根据一实施方式，8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(VI))在使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射光谱中在衍射角(2θ±0.2°)为5.7°、8.3°、8.9°、15.4°、16.3°、17.7°、18.7°、21.1°、22.0°、24.3°、25.3°、26.3°、28.3°和30.8°处有峰。

根据一实施方式，8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(X))在使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射光谱中在衍射角(2θ±0.2°)为7.2°、12.9°、14.2°、18.9°、19.1°、21.5°、26.1°和28.9°处有峰。

根据一实施方式，制备8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(VI))的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐悬浮于乙酸乙酯溶剂中。

根据一实施方式，制备8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(VI))的方法包括将由下式2表示的化合物溶解在选自乙醇、甲醇、异丙醇、四氢呋喃和乙酸乙酯中的至少一种有机溶剂中；

[式2]

和向溶液中加入盐酸和异丙醇。

根据一实施方式，制备8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(VI))的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐溶解于二甲亚砜溶剂中；和向溶液中添加反溶剂。

根据一实施方式，制备8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物(晶型(X))的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐溶解于乙醇溶剂中。

本发明的有益效果

根据一实施方式，8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物能够有效抑制FLT3，即使在高温高湿的环境中也具有出色的稳定性且改善溶解性。

根据一实施方式，制备8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物的方法具有优异的可重复性。

附图的简要说明

图1显示了晶型(VI)的X射线粉末衍射(XRPD)结果。

图2显示了晶型(VI)的热重分析(TGA)结果。

图3显示了晶型(VI)的差示扫描量热法(DSC)结果。

图4显示了晶型(X)的X射线粉末衍射(XRPD)结果。

图5显示了晶型(X)的热重分析(TGA)结果。

图6显示了晶型(X)的差示扫描量热法(DSC)结果。

实施发明的最佳方式

下文中将参考实施方式详细描述本发明。实施方式不限于下面公开的内容。相反，只要不改变本发明的主旨，它们可以以各种形式进行修改。

在本说明书中，当一部分被称为“包括”一元素时，除非另外指出，否则应理解为该部分也可以包括其他元素。

本文所用的所有指示成分量、反应条件等的表达和数字，除非另外指出，否则应理解为被术语“约”修饰。

由下式1表示的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐(化合物1)具有抑制蛋白激酶活性的作用(参见韩国专利公开第2014-0144709号)。然而，其溶解度低，并且在潮湿条件下的稳定性低，使其难以开发成注射剂和口服制剂。

[式1]

根据一实施方式，8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物在使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射光谱中在衍射角(2θ±0.2°)为5.7°、8.3°、8.9°、15.4°、16.3°、17.7°、18.7°、21.1°、22.0°、24.3°、25.3°、26.3°、28.3°和30.8°处具有特征峰。在以上衍射角处有特征峰的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物称为晶型(VI)。

根据一实施方式，当用差示扫描量热仪(Differential scanning calorimeter，DSC)分析时，晶型(VI)在150℃至300℃范围内可能显示出峰。例如，可能是150℃至290℃、170℃至300℃、180℃至300℃、200℃至300℃、220℃至300℃、240℃至300℃、220℃至280℃、240℃至280℃或250℃至280℃，但不限于此。

根据一实施方式，8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物在使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射光谱中在衍射角(2θ±0.2°)为7.2°、12.9°、14.2°、18.9°、19.1°、21.5°、26.1°和28.9°处具有特征峰。在以上衍射角处有特征峰的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐的结晶多晶型物称为晶型(X)。

根据一实施方式，当用差示扫描量热仪(DSC)分析时，晶型(X)在150℃至300℃范围内可能显示出峰。例如，可能是170℃至300℃、180℃至300℃、180℃至280℃、180℃至260℃、180℃至240℃、200℃至300℃、200℃至280℃、200℃至260℃、200℃至240℃或200℃至220℃，但不限于此。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐悬浮于乙酸乙酯溶剂中。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的过程方法可以进一步包括在室温(25℃)下将悬浮液搅拌15至25小时。例如，可以将其搅拌15至20小时或20至25小时，但不限于此。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法可以进一步包括在室温(25℃)下干燥悬浮液。在干燥步骤中，可以除去残留的溶剂。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法可以进一步包括在40℃至70℃的温度范围内真空干燥已经去除了残留溶剂的悬浮液15至25小时。例如，可以在40℃至60℃或50℃至60℃的温度范围内的真空干燥，但是不限于此。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法包括将由下式2所示的化合物溶解在选自乙醇、甲醇、异丙醇、四氢呋喃和乙酸乙酯中的至少一种有机溶剂中；

[式2]

和向溶液中加入盐酸和异丙醇。

根据一实施方式，可以使用乙醇作为有机溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法可以进一步包括在50℃至100℃的温度范围内将溶液搅拌3至7小时。例如，可以在70℃至100℃或70℃至80℃的温度范围内搅拌，但不限于此。

之后，该方法可以进一步包括将溶液降低至10℃至40℃的温度范围，并将其搅拌7至15小时以沉淀固体。例如，可以将其降低到10℃至30℃或15℃至30℃的温度范围，但是不限于此。

之后，该方法可以进一步包括将沉淀的固体在50℃至100℃下真空干燥15至25小时。例如，可以在70℃至100℃或70℃至80℃的温度范围内真空干燥，但是不限于此。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐溶解于二甲亚砜溶剂中；和向溶液中添加反溶剂。

所述反溶剂(antisolvent)是为了沉淀溶解的溶质，可以是选自下组的一种或多种：甲基异丁酮(MIBK)、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、异丙醇、乙腈、2-甲基四氢呋喃、丙酮、1-丁醇和甲乙酮(MEK)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用乙腈作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用乙酸异丙酯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用2-甲基四氢呋喃作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用甲苯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用丙酮作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用甲基乙基酮(MEK)作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用甲基异丁基酮(MIBK)作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用乙酸乙酯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和乙腈作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和乙酸异丙酯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和2-甲基四氢呋喃作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂并且使用甲苯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂并且使用丙酮作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和甲基乙基酮(MEK)作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和甲基异丁基酮(MIBK)作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，可以使用二甲基亚砜作为溶剂和乙酸乙酯作为反溶剂来制备晶型(VI)。

根据一实施方式，制备晶型(VI)的方法可以进一步包括过滤由反溶剂沉淀的固体，然后将其在40℃至60℃下真空干燥15至25小时。例如，可以在40℃至60℃或50℃至60℃的温度范围内真空干燥，但是不限于此。

根据一实施方式，制备晶型(X)的方法包括将8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐溶解在乙醇溶剂中。

根据一实施方式，制备晶型(X)的方法可以进一步包括在50℃至100℃的温度范围内加热和回流溶液。例如，它可以在70℃至100℃或70℃至80℃的温度范围内加热回流，但不限于此。

之后，该方法可进一步包括将溶液降低至20℃至40℃的温度范围以沉淀出固体；过滤沉淀的固体，然后在100℃至140℃的温度范围内真空干燥30至40小时。例如，可以将溶液降低到20℃至35℃或25℃至30℃的温度范围，然后该固体可以在100℃至130℃或120℃至130℃的温度范围内真空干燥，但是不限于此。

发明实施方式

以上内容将通过以下的实施例更详细地描述。然而，以下实施例仅用于说明目的，并且实施例的范围不限于此。

<实施例>

将0.1g的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐加入3ml乙酸乙酯溶剂中。将该溶液在室温(25℃)下搅拌24小时。将其在室温下干燥以除去残留的溶剂，然后将固体在50℃真空干燥24小时，获得850mg的晶型(VI)。

在以下条件下，对由此得到的晶型(VI)进行使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射、热重分析和差示扫描量热法测试。结果分别如图1至3所示。在晶型(VI)的差示扫描量热法(DSC)中，在269.21℃观察到一个峰。晶型(VI)的热重分析(TGA)的结果是重量减少了1.8184％。

*X射线粉末衍射的测试条件

-理学(Rigaku)D/MAX 2200X射线粉末衍射仪

-X射线发生器：Cu，kα，(λ＝1.54056)

-灯管电压：40kV，灯管电流：40mA

-发散射狭缝(DivSlit)：1度

-限高狭缝(DivH.L.Slit)：10毫米

-防散射散狭缝(SctSlit)：1度

-接收狭缝(RecSlit)：0.15毫米

-单色器：固定单色器

-扫描范围：4-40°

-扫描步长：10°/分钟

*热重分析的测试条件

-TA Q5000红外TGA系统

-以10℃/min从30℃加热到300℃

*差示扫描量热法的测试条件

-TA Q2000 DSC

-以10℃/min从30℃加热到300℃

将2.0g的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮加入到60ml乙醇溶剂中。向溶液中加入5N盐酸和0.75ml异丙醇。将其在70℃至80℃下搅拌5小时。将温度降至15℃至30℃，然后搅拌12小时。将由此形成的固体过滤并在70℃至80℃真空干燥18小时，得到1.85g的晶型(VI)。

将764g的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐加入23升的乙醇溶剂中。将温度升至70℃至80℃后，加热回流5小时。然后将温度降至25℃至30℃，并过滤由此形成的固体。由此获得的固体在120℃下真空干燥，得到625g的晶型(X)。

在与实施例1相同的条件下，对由此获得的晶型(X)进行使用Cu-Kα辐射的X射线粉末衍射、热重分析和差示扫描量热法测试。结果分别如图4至6所示。在晶型(X)的差示扫描量热法(DSC)中，在213.71℃观察到一个峰。晶型(X)的热重分析(TGA)的结果是重量减少了2.736％。

将0.1g的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐加到5ml的N-二甲基亚砜溶剂中并在50℃溶解。将温度降低到25℃，并加入10ml乙腈作为反溶剂以沉淀出固体。过滤该固体，然后在50℃下真空干燥24小时以获得720mg的晶型(VI)。

在与实施例4相同的实验中获得840mg的晶型(VI)，不同之处在于使用乙酸异丙酯用作反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得800mg的晶型(VI)，不同之处在于使用2-甲基四氢呋喃用作反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得910mg的晶型(VI)，不同之处在于使用甲苯作为反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得850mg的晶型(VI)，不同之处在于使用丙酮作为反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得910mg的晶型(VI)，不同之处在于使用甲基乙基酮(MEK)作为反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得890mg的晶型(VI)，不同之处在于使用甲基异丁基酮(MIBK)作为反溶剂。

在与实施例4相同的实验中获得780mg的晶型(VI)，不同之处在于使用乙酸乙酯作为反溶剂。

将蒸馏水加入到如上式1所示的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐(化合物1)和实施例中获得的晶型(VI)和晶型(X)中以使浓度为20mg/ml，将其在室温(25℃)下搅拌2小时，然后过滤。之后，用浓度为50％的乙腈稀释200倍。HPLC(高效液相色谱，high performance liquid chromatography)的分析结果如下表1所示。

[表1]

如上表1所示，与化合物1相比，晶型(VI)和晶型(X)具有改善的溶解性。

使用动态水分吸附分析仪(DVS)在25℃下在0％至90％的相对湿度范围内测试如上式1所示的8-溴-2-(1-甲基哌啶-4-基氨基)-4-(4-苯氧基苯基氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮盐酸盐(化合物1)和实施例中得到的晶型(VI)的吸湿性。结果如下表2所示。

[表2]

如上表2所示，与化合物1相比，晶型(VI)具有更好的吸湿性。