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抗人CD45RC抗体及其用途

文献发布时间：2023-06-19 11:57:35

发明领域

本发明涉及分离的抗人CD45RC抗体或其结合片段，编码分离的抗人CD45RC抗体或其结合片段的核酸和表达载体，包含前述的组合物，及前述作为药物的用途，包括用于预防和/或治疗CD45RC

发明背景

CD45(也称为白细胞共同抗原(LCA)、EC3.1.3.48、T200、Ly5和PTPRC)构成第一个原型的受体样蛋白酪氨酸磷酸酶(RPTP)。CD45表达限于所有有核造血细胞，它是该细胞中最丰富的细胞表面糖蛋白之一，占几乎10％的细胞表面，且估计在质膜中以约25μM存在(Trowbridge&Thomas,1994.Annu Rev Immunol.12:85-116；Hermiston et al.,2003.AnnuRev Immunol.21:107-37；Holmes,2006.Immunology.117(2):145-55)。

CD45包含细胞外结构域、单个跨膜结构域和大的细胞质结构域。跨膜和细胞质结构域在物种间高度保守。具体来说，CD45的细胞质结构域包含两个串联复制的磷酸酶结构域，其中仅膜近端结构域具有酶活性(Desai et al.,1994.EMBOJ.13(17):4002-10)。CD45中更近C末端的第二磷酸酶结构域的功能尚未确定，尽管有人提出其可能通过稳定第一结构域而间接地促进CD45活性。通过这个细胞质结构域，CD45调节酪氨酸蛋白激酶的Src家族(例如T细胞中的Lck；或B细胞中的Lyn、Fyn和Lck)的活性，以充当造血细胞中磷酸酪氨酸水平的核心调节因子(Palacios&Weiss,2004.Oncogene.23(48):7990-8000；Lowell,2004.Mol Immunol.41(6-7):631-43)。

与跨膜和细胞质结构域相比，CD45的细胞外结构域在不同的白细胞谱系之间显示出更高的多态性。实际上，这个细胞外结构域是高度糖基化的，并含有O联糖基化且唾液酸化的三个选择性剪接的外显子(4、5和6-分别编码A、B和C决定簇)(Hermiston et al.,2003.Annu Rev Immunol.21:107-37；Holmes,2006.Immunology.117(2):145-55)。因此，可通过在白细胞分化和细胞激活中进行动态受控的选择性剪接，从而导致分子的细胞外结构域中发生变化，来产生大小、形状和电荷不同的CD45同工型(Hall et al.,1988.JImmunol.141(8):2781-7；Lynch,2004.Nat Rev Immunol.4(12):931-40)。

含有全部三个选择性剪接外显子的最大CD45同工型(isoform)CD45RABC为约235kDa，而缺乏全部三个外显子的最小同种型CD45RO为约180kDa。介于之间，可能还有包含三个外显子的仅两个(CD45RAB、CD45RAC、CD45RBC)或仅一个(CD45RA、CD45RB、CD45RC)的同工型。

虽然不同CD45同工型的功能尚不清楚，但这些同工型的差异表达已与T细胞的激活水平关联，并可使幼稚T细胞与记忆T细胞分离(Birkeland et al.,1989.Proc NatlAcad Sci USA.86(17):6734-8)。例如，CD45RA存在于外周幼稚成熟CD4

CD4

因此，消除CD45RC

GVHD是干细胞移植患者发病和死亡的重要原因。这是T细胞介导的免疫反应性过程，在该过程中供体细胞对抗受体细胞发生反应。目前，用免疫调节药物如皮质类固醇进行免疫抑制是预防GVHD的主要手段。尽管随着时间在提高存活上已取得进展，但皮质类固醇仍在高比例的患者中无法预防GVHD(少于50％的急性GVHD患者和40-50％的慢性GVHD患者，取决于初始疾病的严重程度-Garnett et al.,2013.Ther Adv Hematol.4(6):366-378)，与显著的毒性相关，并且许多当前可用的挽救疗法关联有免疫抑制增加和感染并发症。因此，仍存有未满足的对于开发用于GVHD的新型治疗策略以改善移植后的长期结果的需求。

本发明人先前已经描述了消减CD45RC

在此，本发明人已经开发了针对人CD45RC的新型单克隆抗体。这个抗体与目前市场上可获得的抗人CD45RC抗体(例如MT2克隆)竞争，表现出相当的反应性模式，但对T细胞具有显著更好的细胞毒活性且浓度最低。实际上，与目前可用的其他抗体相比，本发明的抗hCD45RC抗体显示出更好的亲和力，并从而具有更好的治疗效果。

有趣的是，本发明的抗体还可用于预防或治疗其中在病理学上涉及免疫应答的某些单基因疾病。单基因疾病由单基因缺陷引起。超过4000种人类疾病由这些与单个特定基因相关的缺陷导致。迄今为止，大多数治疗选择都围绕治疗病症的症状，以期改善患者的生活质量而进行。基因疗法是对这种类型疾病的持久治疗的主要希望。然而，所遇到的主要障碍存在于在将基因递送至受病症影响的合适细胞的技术的开发中，以及针对转基因产物或载体的免疫应答限制了治疗功效这一事实。

在单基因疾病中，有些与免疫系统相关基因有关(例如，T和/或B细胞原发性免疫缺陷和多内分泌腺病念珠菌病外胚层营养不良症(polyendocrinopathy candidiasis-ectodermal dystrophy)[APECED])，或与免疫功能无关但其缺陷与炎症和/或免疫反应相关的基因有关[例如杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)]。

APECED，也称为I型自身免疫多腺综合征(auto-immune polyglandular syndrometype I，APS 1)，是一种罕见的由AIRE基因突变引起的多器官常染色体隐性自身免疫疾病，所述AIRE基因是允许在髓质上皮胸腺细胞(medullary epithelial thymic cell，mTEC)中表达组织限制性抗原(TRA)和允许自身反应性T细胞缺失的转录调节因子。在人类中，已经描述了AIRE基因中导致患病率1-9：1000000的APECED的超过100种突变(Orphanet,http://www.orpha.net)。APECED的临床表型通常由存在以下3种主要症状中的2种来定义：甲状旁腺功能减退(hypoparathyroidism)、肾上腺功能不全(阿狄森氏病(Addison’s disease))和慢性黏膜皮肤念珠菌病(CMC)。这种疾病还与多种自身免疫和外胚层特征相关，所述特征例如1型糖尿病、牙釉质发育不全(enamel hypoplasia)、白癜风、卵巢早衰、角膜炎、恶性贫血、脱发、外分泌性胰腺炎、间质性肺病、肾炎和其他病症。

DMD是一种单基因疾病，其中编码肌营养不良蛋白的DMD基因的突变会导致严重的X连锁肌营养不良症，其在后期会影响所有随意肌(voluntary muscle)以及心肌和呼吸肌。在DMD患者和mdx小鼠中，疾病的病理生理学均涉及免疫应答(综述参见Rosenberg et al.,2015.Sci Transl Med.7(299):299rv4)。DMD的标准疗法是皮质类固醇，例如泼尼松龙(prednisolone)。在mdx小鼠中，还采用了降低效应免疫应答或炎症的治疗，例如静脉内免疫球蛋白、曲尼司特(tranilast)、血红素加氧酶-1诱导剂、IL-1受体拮抗剂和IL-2，以扩增调节性T细胞(Treg)(Villalta et al.,2014.Sci Transl Med.6(258):258ra142；Rosenberg et al.,2015.Sci Transl Med.7(299):299rv4)。然而，即便面临当前有有前景的新型治疗，DMD患者的平均预期寿命仍大大降低。

令人惊讶地，本发明人已经证明，用特异性消减CD45RC

因此，本发明的抗体代表了一种用于预防和/或治疗单基因疾病例如DMD和APECED的有前景的方法。

发明概述

本发明涉及分离的抗人CD45RC抗体或其结合片段，其中所述抗体或其结合片段包含：

(a)包含以下三个CDR的HCVR：

(i)序列SEQ ID NO：1的VH-CDR1；

(ii)VH-CDR2，其具有选自包含序列SEQ ID NO：4、5、6、8、100、116、117、118和119的组的序列；和

(iii)序列SEQ ID NO：3的VH-CDR3；和

(b)包含以下三个CDR的LCVR：

(i)VL-CDR1，其具有选自包含序列SEQ ID NO：15(SASSSVS-X

(ii)序列SEQ ID NO：16的VL-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：17的VL-CDR3。

在一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含：

(a)包含以下三个CDR的HCVR：

(i)序列SEQ ID NO：1的VH-CDR1；

(ii)VH-CDR2，其具有选自包含序列SEQ ID NO：4和5的组的序列；和

(iii)序列SEQ ID NO：3的VH-CDR3；和

(b)包含以下三个CDR的LCVR：

(i)序列SEQ ID NO：15的VL-CDR1，其中X

(ii)序列SEQ ID NO：16的VL-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：17的VL-CDR3。

在一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含：

(a)包含以下三个CDR的HCVR：

(i)序列SEQ ID NO：1的VH-CDR1；

(ii)序列4的VH-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：3的VH-CDR3；和

(b)包含以下三个CDR的LCVR：

(i)序列SEQ ID NO：15的VL-CDR1，其中X

(ii)序列SEQ ID NO：16的VL-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：17的VL-CDR3。

在一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含：

(a)包含以下三个CDR的HCVR：

(i)序列SEQ ID NO：1的VH-CDR1；

(ii)VH-CDR2，其具有选自包含序列SEQ ID NO：4、6和100的组的序列；和

(iii)序列SEQ ID NO：3的VH-CDR3；和

(b)包含以下三个CDR的LCVR：

(i)VL-CDR1，其具有选自包含序列SEQ ID NO：15和18的组的序列，其中X

(ii)序列SEQ ID NO：16的VL-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：17的VL-CDR3。

在一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含：

1)序列SEQ ID NO：61的HCVR和序列SEQ ID NO：81的LCVR；

2)序列SEQ ID NO：62的HCVR和序列SEQ ID NO：82的LCVR；

3)序列SEQ ID NO：62的HCVR和序列SEQ ID NO：83的LCVR；

4)序列SEQ ID NO：62的HCVR和序列SEQ ID NO：84的LCVR；

5)序列SEQ ID NO：63的HCVR和序列SEQ ID NO：82的LCVR；

6)序列SEQ ID NO：63的HCVR和序列SEQ ID NO：83的LCVR；

7)序列SEQ ID NO：63的HCVR和序列SEQ ID NO：84的LCVR；

8)序列SEQ ID NO：64的HCVR和序列SEQ ID NO：82的LCVR；

9)序列SEQ ID NO：64的HCVR和序列SEQ ID NO：83的LCVR；

10)序列SEQ ID NO：64的HCVR和序列SEQ ID NO：84的LCVR；

11)序列SEQ ID NO：101的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

12)序列SEQ ID NO：101的HCVR和序列SEQ ID NO：103的LCVR；

13)序列SEQ ID NO：65的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

14)序列SEQ ID NO：65的HCVR和序列SEQ ID NO：103的LCVR；

15)序列SEQ ID NO：62的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

16)序列SEQ ID NO：101的HCVR和序列SEQ ID NO：82的LCVR；

17)序列SEQ ID NO：121的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

18)序列SEQ ID NO：122的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

19)序列SEQ ID NO：123的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

20)序列SEQ ID NO：124的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

21)序列SEQ ID NO：63的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

22)序列SEQ ID NO：67的HCVR和序列SEQ ID NO：85的LCVR；

23)序列SEQ ID NO：67的HCVR和序列SEQ ID NO：103的LCVR；或

24)包含与1)至23)的HCVR和LCVR的非CDR区的序列具有至少70％同一性的非CDR区的序列的HCVR和LCVR。

在一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含：

(a)包含以下三个CDR的HCVR：

(i)序列SEQ ID NO：1的VH-CDR1；

(ii)VH-CDR2，其具有选自包含序列SEQ ID NO：4、5、6、8、100、116、117、118和119的组的序列；和

(iii)序列SEQ ID NO：3的VH-CDR3；和

(b)包含以下三个CDR的LCVR：

(i)VL-CDR1，其具有选自包含序列SEQ ID NO：15和18的组的序列，其中SEQ IDNO：15和18中的X

(ii)序列SEQ ID NO：16的VL-CDR2；和

(iii)序列SEQ ID NO：17的VL-CDR3；

优选其中LCVR的Kabat位置L71的氨基酸残基是Phe(F)。

本发明进一步涉及编码本发明的分离的抗体或其结合片段的核酸。

本发明进一步涉及包含权利要求7所述的核酸的表达载体。

本发明进一步涉及包含本发明的核酸或本发明的表达载体的细胞。

本发明进一步涉及包含以下的药物组合物：本发明的分离的抗体或其结合片段、本发明的核酸、本发明的表达载体或本发明的细胞，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

本发明进一步涉及本发明的分离的抗体或其结合片段，本发明的核酸，本发明的表达载体，本发明的细胞或本发明的药物组合物，用作药物。

本发明进一步涉及本发明的分离的抗体或其结合片段，本发明的核酸，本发明的表达载体，本发明的细胞或本发明的药物组合物，用于以下：

-在有此需要的受试者中诱导免疫耐受；和/或

-预防和/或减少移植排斥。

本发明进一步涉及本发明的分离的抗体或其结合片段，本发明的核酸，本发明的表达载体，本发明的细胞或本发明的药物组合物，用于预防、减少和/或治疗CD45RC

本发明进一步涉及本发明的分离的抗体或其结合片段，本发明的核酸，本发明的表达载体，本发明的细胞或本发明的药物组合物，用于预防和/或治疗移植物抗宿主病(GVHD)。

本发明进一步涉及一种用于检测或定量样品、细胞、组织或器官中的hCD45RC的体外方法，其包括使所述样品、细胞、组织或器官与本发明的分离的抗体或其结合片段接触，任选其中分离的抗体或其结合片段是带标记的。

定义

“抗体”或“免疫球蛋白”

如本文所用，术语“免疫球蛋白”是指具有两条重链和两条轻链的组合的蛋白，而无论其是否具有任意相关的特异性免疫反应性。“抗体”是指对目标抗原(例如人CD45RC)具有显著已知的特异性免疫反应活性的组装体。本文所用的术语“抗hCD45RC抗体”是指对人CD45RC蛋白显示免疫特异性的抗体。如本文别处所述，对人CD45RC的“特异性”不排除与hCD45RC的物种同源物的交叉反应。

抗体和免疫球蛋白包含轻链和重链，它们之间具有或不具有链间共价连接。对脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构具有相对深入的理解。上位术语“免疫球蛋白”包括五种不同的抗体类别，它们在生化上并不相同。尽管以下讨论将整体针对IgG类免疫球蛋白分子，但是所有五类抗体都在本发明的范围内。对于IgG，免疫球蛋白包含两条相同的分子量为约23kDa的多肽轻链，和两条相同的分子量为约53-70kDa的重链。这四条链以“Y”构型通过二硫键连接，其中轻链从“Y”的开口处开始并继续通过可变区与重链归在一起。抗体的轻链分为kappa(κ)或lambda(λ)。每个重链类别可以与κ或λ轻链结合。通常，轻链和重链彼此共价结合，并且当免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或基因工程宿主细胞产生时，两条重链的“尾”区通过共价二硫键或非共价键彼此结合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉头末端的N-端延伸至每条链末端的C-端。本领域技术人员将理解，重链被分类为gamma(γ)、mu(μ)、alpha(α)、delta(δ)或epsilon(ε)，其中有一些亚类(例如γ1-γ4)。这条链的性质决定了抗体的“类别”，分别为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类或“同种型”(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等)已被充分表征，并已知赋予功能特化。鉴于本公开的内容，这些类别和同种型中每一种的修饰形式对于本领域技术人员都是容易辨别的，并且因此在本发明的范围内。如上所述，抗体的可变区允许抗体选择性地识别并特异性地结合抗原上的表位。即，抗体的轻链可变区(V

“表征为具有[……]氨基酸由不同的氨基酸取代”

如本文所用，短语“表征为具有[……]氨基酸由不同的氨基酸取代”对于给定序列是指在所述序列中存在“保守性氨基酸修饰”。

“保守性氨基酸修饰”

“保守性氨基酸修饰”是指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体或其结合片段的结合特征的修饰。这样的保守性修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术例如定点诱变和PCR介导的诱变，将修饰引入抗体或其结合片段中。

保守性氨基酸取代通常是其中氨基酸残基由具有理化性质相似的侧链的氨基酸残基取代的那些氨基酸取代。指定的可变区和CDR序列可包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个或更多个氨基酸插入、缺失和/或取代。在进行取代时，优选的取代将是保守性修饰。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β支链侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本发明的抗体或其结合片段的CDR和/或可变区中的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替代，并且可以使用本文所述的测定法检测改变的抗体所保留的功能(即本文所述的性质，例如与hCD45RC的结合)。在另一个实施方案中，可以将本发明的抗体或其结合片段的CDR和/或可变区中的氨基酸片段替换为侧链家族成员顺序和/或组成不同的结构相似的片段。

“CD45”

如本文所用，术语“CD45”(也称为CD45R或PTPRC)是指以不同同工型存在的跨膜糖蛋白。CD45的这些独特同工型的细胞外结构域结构并不相同，这源于分别编码CD45胞外区的A、B和C决定簇的3个可变外显子(外显子4、5和6)的选择性剪接。与限制性表位反应的抗体聚类为“CD45R”。因此，抗CD45RA、抗CD45RB和抗CD45RC抗体分别识别包括A、B和C决定簇的表达的CD45同工型。CD45的各种同工型具有不同的细胞外结构域，但在膜的近端具有相同的细胞外序列，以及跨膜结构域和大的胞质尾区段(含有两个串联的同源且高度保守的约300个残基的磷酸酶结构域)。CD45及其同工型与T和B淋巴细胞上的淋巴细胞磷酸酶相关磷蛋白(LPAP)非共价结合。据报道，CD45与几种其它细胞表面抗原，包括CD1、CD2、CD3和CD4相关。CD45参与信号传导淋巴细胞激活。以字母“h”开头(例如hCD45)时，意指CD45是人起源的。

“CD45RC”

如本文所用，术语“CD45RC”是指本领域技术人员公知的200-220kDa单链I型膜糖蛋白。CD45RC是CD45的选择性剪接同工型，包含编码C决定簇的外显子6(因此称为术语CD45RC，即CD45限于C决定簇)，但缺少分别编码A和B决定簇的外显子4和5。人CD45RC的氨基酸序列在SEQ ID NO：104中给出，对应于UniProt登录号P08575-10(版本10，于2018年3月28日修改—校验和(Checksum)：F92C874C9A114890)。这个CD45RC同工型在B细胞以及CD8

“CD45RC

如本文所用，术语“CD45RC

然后，在产生针对CD45RC细胞表面标志物的如上所述的抗体后，本领域技术人员可容易地选择作用于CD45RC

“CDR”或“互补决定区”

如本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”意指在重链和轻链多肽的可变区内发现的非邻接抗原结合位点。根据表1的规则鉴定CDR，其根据以下推断：Kabat et al.,1991.Sequences of proteins of immunological interest(第5版).Bethesda,MD:U.S.Dep.of Health and Human Services；和Chothia and Lesk,1987.J Mol Biol.196(4):901-17：

表1

*Saul&Poljak,1992.Proteins.14(3):363-71

“表位”

如本文所用，术语“表位”是指一种或多种蛋白上抗体或其结合片段与之结合的氨基酸的特定排列。表位通常由分子的化学活性表面基团如氨基酸或糖侧链组成，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是线性(或连续的)表位或构象表位，即，涉及抗原的不同区域中可以不必是连续的两个或更多个氨基酸序列。

“框架区”或“FR”或“非CDR区”

本文所用的术语“框架区”、“FR”或“非CDR区”包括作为可变区的一部分但不是CDR的一部分的氨基酸残基(例如，使用Kabat/Chothia的CDR定义)。因此，可变区框架的长度在约100-120个氨基酸之间，但仅包括CDR以外的那些氨基酸。

对于HCVR的具体实例和Kabat/Chothia定义的CDR：

-根据Chothia/AbM的定义，FR1可对应于可变区的涵盖氨基酸1-25的结构域，或根据Kabat的定义在5个残基之后；

-FR2可对应于可变区的涵盖氨基酸36-49的结构域；

-FR3可对应于可变区的涵盖氨基酸67-98的结构域；以及

-FR4可对应于可变区的从氨基酸104-110至可变区末端的结构域。

轻链的框架区同样被各LCVR的CDR分开。在天然存在的抗体中，每个单体抗体上存在的六个CDR是短的非连续的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现三维构型时，所述氨基酸序列特异性定位以形成抗原结合位点。重链和轻链可变结构域的其余部分显示氨基酸序列中较小的分子间变异性，并且称为框架区。框架区大部分采用β-折叠构象，并且CDR形成环，该环连接β-折叠结构，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，这些框架区形成支架，所述支架通过链间非共价相互作用将六个CDR定位在正确的方向。由定位的CDR形成的抗原结合位点限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这个互补表面促进抗体与免疫反应性抗原表位的非共价结合。CDR的位置可由本领域普通技术人员容易地确定。

“重链区”

如本文所用，术语“重链区”包括衍生自免疫球蛋白重链的恒定结构域的氨基酸序列。包含重链区的蛋白包含C

“铰链区”

如本文所用，术语“铰链区”包括连接C

“高变环”

术语“高变环”与互补决定区(CDR)不是严格意义上的同义词，因为高变环(HV)是基于结构定义的，而CDR是基于序列变异性定义的(Kabat et al.,1991.Sequences ofproteins of immunological interest(5

“同一性”或“同一的(identical)”

如本文所用，术语“同一性”或“同一的”当用于两个或更多个氨基酸序列的序列之间、或两个或更多个核酸序列的序列之间的关系时，是指氨基酸序列或核酸序列之间的序列相关性程度，如通过两个或更多个氨基酸残基或核酸残基的片段之间的匹配数目所确定。“同一性”测量由特定数学模型或计算机程序(即“算法”)处理的具有缺口比对(如果有的话)的两个或更多个序列中较小的序列之间的相同匹配的百分比。

相关氨基酸序列或核酸序列的同一性可以通过已知方法容易地计算。这样的方法包括但不限于描述于以下的那些：Lesk A.M.(1988).Computational molecular biology:Sources and methods for sequence analysis.New York,NY:Oxford UniversityPress；Smith D.W.(1993).Biocomputing:Informatics and genome projects.SanDiego,CA:Academic Press；Griffin A.M.&Griffin H.G.(1994).Computer analysis ofsequence data,Part 1.Totowa,NJ:Humana Press；von Heijne G.(1987).Sequenceanalysis in molecular biology:treasure trove or trivial pursuit.San Diego,CA:Academic press；Gribskov M.R.&Devereux J.(1991).Sequence analysis primer.NewYork,NY:Stockton Press；Carillo et al.,1988.SIAM J Appl Math.48(5):1073-82。

设计用于测定同一性的优选方法以在所检测的序列之间给出最大匹配。测定同一性的方法描述在公众可获得的计算机程序中。用于测定两个序列之间同一性的优选的计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAP(Genetics Computer Group,University ofWisconsin,Madison,WI；Devereux et al.,1984.Nucleic Acids Res.12(1Pt 1):387-95)、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul et al.,1990.J Mol Biol.215(3):403-10)。BLASTX程序可从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和其它来源(BLAST Manual,Altschulet al.NCB/NLM/NIH Bethesda,Md.20894)由公众获得。也可使用公知的Smith Waterman算法来测定同一性。

“免疫特异性的”、“特异于”或“特异性结合”

如本文所用，如果抗体或其结合片段以可检测水平与抗原(例如hCD45RC)反应，优选以大于或等于约10

抗体或其结合片段对其同源抗原的亲和力通常也表示为平衡解离常数(K

抗体或其结合片段的亲和力可以使用常规技术容易地确定，例如Scatchard,1949.Ann NY Acad Sci.51:660-672所述的。抗体或其结合片段与抗原、细胞或组织的结合性质通常可以使用免疫检测方法来测定和评估，所述免疫检测方法包括例如ELISA、基于免疫荧光的测定，例如免疫组织化学(IHC)和/或荧光激活细胞分选(FACS)或通过表面等离子体共振(SPR，例如使用

“单克隆抗体”

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即，群体中包含的各个抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原位点。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点还在于它们可以在不被其它抗体污染的情况下合成。修饰语“单克隆”不应被解释为需要通过任意特定方法产生抗体。例如，本发明的单克隆抗体或其结合片段可以通过首先由Kohler et al.,1975.Nature.256(5517):495-7描述的杂交瘤方法制备，或者可以使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(专利US4,816,567)。“单克隆抗体”也可以使用例如Clackson et al.,1991.Nature.352(6336):624-8和Marks et al.,1991.J Mol Biol.222(3):581-97中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离。

“预防”或“防止”或“阻止”

如本文所用，术语“预防”、“防止”和“阻止”是指预防性和防止性措施，其中目的是减少受试者在给定时间段内将发展病理状况或病症的机会。这样的减少可以反映在例如受试者中病理状况或病症的至少一种症状的延迟发作中。

“受试者”

如本文所用，术语“受试者”是指哺乳动物，优选人。在一个实施方案中，受试者可以是“患者”，即温血动物，更优选人，其正在等待接受或正在接受医疗护理或曾经/正/将成为医疗程序的对象，或被监测疾病的发展。术语“哺乳动物”在这里是指任意哺乳动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园动物、运动型动物或宠物动物，例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。优选地，哺乳动物是灵长类，更优选是人。

“可变区”或“可变结构域”

如本文所用，术语“可变”是指可变结构域V

Vλ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为L1(λ)、L2(λ)和L3(λ)，并且可定义为包含V

Vκ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为L1(κ)、L2(κ)和L3(κ)，并且可定义为包含V

除非另有说明，否则术语L1、L2和L3分别指V

“治疗”或“改善”

如本文所用，术语“治疗”或“改善”是指治疗性治疗，不包括预防性或防止性措施；其中目的是减缓(减轻)目标病理状况或病症。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些以及怀疑患有病症的那些。如果在接受治疗有效量的本发明的分离的抗体或其结合片段、核酸、表达载体、组合物、药物组合物或药物后，受试者显示可观察和/或可测量的以下一种或多种降低或不存在，则认为所述受试者的目标病理状况或病症得到成功“治疗”：CD45RC

发明详述

本发明涉及分离的抗体或其结合片段，其与人CD45RC(hCD45RC)结合。

如本文所用，“分离的抗体”旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合hCD45RC的分离的抗体基本上不含特异性结合hCD45RC以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合hCD45RC的分离抗体可能与其他抗原(例如来自其他物种的CD45RC分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质，尤其是会干扰抗体的诊断或治疗用途的那些，包括但不限于酶、激素和其他蛋白或非蛋白组分。

在一个实施方案中，分离的抗体或其结合片段是纯化的。

在一个实施方案中，将分离的抗体或其结合片段纯化至：

(1)通过Lowry方法测定，抗体或其结合片段大于以重量计的80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％或更高，并且最优选大于以重量计的96％、97％、98％或99％；

(2)足以通过使用转杯测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或

(3)在还原或非还原条件下的SDS-PAGE并使用考马斯蓝或优选银染色所示的均一性。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与hCD45RC的细胞外结构域结合。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与存在于hCD45RC的细胞外结构域上的至少一个表位结合。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与hCD45的外显子6编码的C决定簇结合。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与hCD45的外显子6编码的C决定簇上的至少一个表位结合。

在一个实施方案中，hCD45的外显子6编码的C决定簇的氨基酸序列包含SEQ IDNO：23或由其组成。在一个实施方案中，编码hCD45的C决定簇的外显子6的核酸序列包含SEQID NO：24或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，所述表位包含SEQ ID NO：23或其片段或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，所述表位包含与SEQ ID NO：23或其片段具有至少约70％，优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，所述表位由包含SEQ ID NO：24或其片段或由其组成的核酸序列编码。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，编码所述表位的核酸序列包含与SEQ ID NO：24或其片段具有至少约70％，优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，所述表位包含SEQ ID NO：23或其片段的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个氨基酸或由其组成；或包含与SEQ ID NO：23或其片段具有至少约70％，优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个氨基酸或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段与至少一个表位结合，所述表位包含SEQ ID NO：23或其片段的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个连续氨基酸或由其组成；或包含与SEQ ID NO：23或其片段具有至少约70％，优选至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个连续氨基酸或由其组成。

在一个实施方案中，包含SEQ ID NO：23或由其组成的所述至少一个表位的片段包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个氨基酸残基或由其组成。

在一个实施方案中，包含SEQ ID NO：23或由其组成的至少一个表位的片段包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46或47个氨基酸残基或由其组成，所述氨基酸残基分布于包含SEQ ID NO：23或由其组成的序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、73、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1010、1020、1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1100或更多个连续氨基酸残基。

在一个实施方案中，包含SEQ ID NO：23的序列是SEQ ID NO：99所示的hCD45的序列，对应于UniProt登录号P08575-3(版本3，于2018年3月28日修改-校验和：6E942E2BF6B17AC5)。

在一个实施方案中，包含SEQ ID NO：23的序列是SEQ ID NO：104所示的hCD45RC的序列，对应于UniProt登录号P08575-10(版本10，于2018年3月28日修改-校验和：F92C874C9A114890)。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合由hCD45的外显子4编码的A决定簇。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合由hCD45的外显子4编码的A决定簇上的至少一个表位。

在一个实施方案中，由hCD45的外显子4编码的A决定簇的氨基酸序列包含SEQ IDNO：105或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合由hCD45的外显子5编码的B决定簇。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合由hCD45的外显子5编码的B决定簇上的至少一个表位。

在一个实施方案中，由hCD45的外显子5编码的B决定簇的氨基酸序列包含SEQ IDNO：106或由其组成。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RA。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RA的至少一个表位。

在一个实施方案中，hCD45RA的氨基酸序列包含SEQ ID NO：107或由其组成，对应于UniProt登录号P08575-8(版本8，于2018年3月28日修改-校验和：F42C1FEC9EDE4BC0)。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RB。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RB的至少一个表位。

在一个实施方案中，hCD45RB的氨基酸序列包含SEQ ID NO：108或由其组成，对应于UniProt登录号P08575-9(版本9，于2018年3月28日修改-校验和：745870037910C575)。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RAB。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45RAB的至少一个表位。

在一个实施方案中，hCD45RAB的氨基酸序列包含SEQ ID NO：109或由其组成，对应于UniProt登录号P08575-5(版本5，于2018年3月28日修改-校验和：EA40BE995CD98F7C)。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45R0。在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段不结合hCD45R0的至少一个表位。

在一个实施方案中，hCD45R0的氨基酸序列包含SEQ ID NO：110或由其组成，对应于UniProt登录号P08575-4(版本4，于2018年3月28日修改-校验和：D3CB364EF4243384)。

在一个实施方案中，至少一个表位是构象表位。在另一个实施方案中，至少一个表位是连续表位。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段结合hCD45RC，平衡解离常数(K

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段结合hCD45RC，结合速率(K

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段结合hCD45RC，解离速率(k

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段以以下的至少一项、优选以以下的至少两项、更优选以以下的三项与hCD45RC结合：

-平衡解离常数(K

-结合速率(K

-解离速率(k

用于测定抗体或其结合片段对其配体的亲和力(包括例如测定K

优选的方法是

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是多克隆抗体或其结合片段。

在一个优选的实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是单克隆抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是选自由包含以下或由其组成的组的分子：完整抗体、单链抗体、二聚体单链抗体、单结构域抗体、Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab)'2、Fd、脱岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体。

如本文所用，术语“结合片段”是指本发明的抗体的一个部分或区域，其包含的氨基酸残基比完整抗体少。“结合片段”结合抗原和/或与其所来源的完整抗体竞争抗原结合(例如，特异性结合人CD45RC)。抗体结合片段涵盖但不限于单链抗体、Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab)'2、Fd、脱岩藻糖基化抗体、双抗体(diabody)、三抗体(triabody)和四抗体(tetrabody)。

如本文所用，“单链抗体”是指作为一级结构包含一个连续氨基酸残基的不间断序列或由其组成的蛋白的任意抗体或其片段，包括但不限于(1)单链Fv分子(scFv)；(2)仅含有一个轻链可变结构域或含有包含轻链可变结构域的三个CDR而没有相关重链部分的片段的单链蛋白；和(3)仅含有一个重链可变区或含有包含重链可变区的三个CDR而没有相关轻链部分的片段的单链蛋白。

“单链Fv”，也缩写为“sFv”或“scFv”，是指包含连接成单个氨基酸链的V

如本文所用，“Fv”是指含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这个片段由紧密的非共价结合的一个HCVR和一个LCVR的二聚体组成。从这两个结构域的折叠发出六个高变环(来自重链和轻链各三个环)，其有助于抗原结合并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使是单个可变结构域(或仅包含对抗原特异的三个CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于整个结合位点。

如本文所用，“双抗体(diabody)”是指通过以下而制备的小抗体片段，即在HCVR和LCVR之间用短接头(约5-10个残基)构建scFv片段，从而实现可变结构域的链间配对而不是链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的HCVR和LCVR存在于不同的多肽链上。双抗体更充分地描述于专利EP0404097、专利申请WO1993011161；和Holliger et al.,1993.Proc NatlAcad Sci USA.90(14):6444-8。

抗体结合片段可以使用标准方法获得。例如，可以根据常规技术通过蛋白酶消化分离的抗体来产生Fab或F(ab')2片段。

还应当理解，可以使用已知方法修饰本发明的抗体或其结合片段。例如，为了减缓体内清除并获得更理想的药代动力学特征，可以用聚乙二醇(PEG)修饰抗体或其结合片段。用于将PEG与抗体或其结合片段偶联和位点特异性结合的方法描述于例如Leong et al.,2001.Cytokine.16(3):106-19；Delgado et al.,1996.BrJCancer.73(2):175-82。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是选自包含单特异性体(unibody)、结构域抗体(domain antibody)和纳米抗体(nanobody)或由其组成的组的分子。

术语“单特异性体(unibody)”是本领域公知的，且是指缺少IgG4抗体的铰链区的抗体片段。铰链区的缺失产生基本上是传统IgG4抗体大小的一半，并具有IgG4抗体的单价结合区而不是二价结合区的分子。

“域抗体”是本领域公知的，且是指抗体的最小功能结合单位，对应于抗体的重链或轻链的可变区。

“单结构域抗体(single-domain antibody)”在本领域中是公知的，且是指包含天然存在的重链抗体的独特结构和功能特性的抗体衍生的蛋白(Muyldermans,2013.AnnuRevBiochem.82:775-97)。这些重链抗体可包含单个可变结构域(V

在一些实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是选自包含以下或由其组成的组的模拟物：affibody、affilin、affitin、adnectin、atrimer、evasin、DARPin、anticalin、avimer、fynomer、versabody和duocalin。

“affibody”是本领域公知的，且是指基于衍生自葡萄球菌蛋白A的IgG结合结构域之一的58个氨基酸残基蛋白结构域的亲和蛋白(Frejd&Kim,2017.Exp Mol Med.49(3):e306；Patent US5,831,012)。

“DARPin”(Designed Ankyrin Repeat Protein，经设计的锚蛋白重复蛋白)是本领域公知的，且是指为利用非抗体蛋白的结合能力而开发的抗体模拟物DRP(designedrepeat protein，经设计的重复蛋白)技术(Binz et al.,2003.J Mol Biol.332(2):489-503；Plüchthun,2015.Annu Rev Pharmacol Toxicol.55:489-511)。

“Anticalin”是本领域公知的，且是指另一种抗体模拟物技术，其中结合特异性衍生自脂质运载蛋白(lipocalin)(Skerra,2008.FEBS J.275(11):2677-83)。Anticalin也可被设计为双靶向蛋白的形式，称为“Duocalin”(Schlehuber&Skerra,2001.Biol Chem.382(9):1335-42)。

“avimer”是本领域公知的，且是指另一种抗体模拟物技术(Silverman et al.,2005.Nat Biotechnol.23(12):1556-61)。

“versabody”是本领域公知的，且是指另一种抗体模拟物技术(专利申请US20070191272)。它们是具有＞15％的半胱氨酸的3-5kDa的小蛋白，其形成高二硫键密度的骨架，取代了典型蛋白具有的疏水核心。用少量的二硫化物替换大量的疏水氨基酸(包括疏水核心)，会导致蛋白更小、更亲水(较少的聚集和非特异性结合)、对蛋白酶和热的抗性更强并且具有较低密度的T细胞表位，因为最有助于MHC呈递的残基是疏水的。众所周知，所有这四个特性都会影响免疫原性，并且预计它们一起会导致免疫原性大大降低。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段还涵盖多特异性抗体或其结合片段，即对多于一种(例如至少两种)不同抗原具有免疫特异性，所述抗原的其中一种是本发明的hCD45RC。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段还涵盖抗体或其结合片段的聚合物，即多于一种(例如至少两种)相同或不同的抗体或其结合片段直接或间接地共价连接在一起。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是包含进一步与治疗剂结合的所述抗体或其结合片段的免疫结合物(immunoconjugate)。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段是包含进一步与显像剂结合的所述抗体或其结合片段的结合物。所述结合物可用于例如成像应用。

在下文中，且除非另有明确说明，否则CDR编号和定义根据Kabat/Chothia定义。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含重链可变区(本文中缩写为HCVR或V

并且：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

和：DIFPGGDYANSNEKFKG

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含至少一个，优选至少两个，更优选以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含HCVR，其包含以下三个CDR：

在一个实施方案中，本发明的抗体或其结合片段包含轻链可变区(本文中缩写为LCVR或V