一种米格列奈钙或其制剂中R-异构体的检测方法

技术领域

本发明涉及药品和化工检测技术领域，具体涉及一种米格列奈钙或其制剂中米格列奈钙R-异构体的检测方法。

背景技术

米格列奈钙，化学名称为：双{(2S)-2-苄基-4-[(3aR,7aS)八氢异吲哚-2-基]-4-氧代丁酸}单钙盐二水合物，结构式如下：

米格列奈钙是由日本橘生药品工业株式会社开发，2002年12月申请用于Ⅱ型糖尿病患者控制餐后血糖，2004年4月在日本上市，目前国内已有多家上市销售。米格列奈钙通过关闭胰腺β细胞膜上的ATP依赖性K

日本药典18版收载了米格列奈钙及其制剂，对杂质要求极高，要求单个杂质不得过0.10％，总杂不得过0.15％。但并未对R-异构体杂质进行控制。R-异构体作为米格列奈钙及其制剂中的杂质成分，必须被严格控制在一定的限度以内，保证药物的安全性。其结构式如下：

专利CN 110568100 B公开了一种米格列奈钙R-异构体的检验方法，虽然可以将米格列奈钙峰与R-异构体峰分开，但理论塔板数低、峰型差，难以保证方法的灵敏度检测。另外，该方法运行时间较长，检测效率低。

发明内容

鉴于上述问题，本申请提供一种米格列奈钙或其制剂中米格列奈钙R-异构体的检测方法，该检测方法中米格列奈钙峰与R-异构体峰的分离度高、理论塔板数高，能显著改善R-异构体的拖尾情况，且分析运行时间更短。

本申请通过如下技术方案实现：

一种米格列奈钙或其制剂中米格列奈钙R-异构体的检测方法，所述方法包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取米格列奈钙或其制剂，制成供试品溶液；

色谱条件：采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱，以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸为流动相；

测定法：取供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定。

优选的，供试品溶液的制备方法为：取米格列奈钙或其制剂，加有机溶剂溶解，用流动相稀释，得到浓度为0.1～3mg/ml的供试品溶液；进一步优选的，所述供试品溶液的制备方法为：取米格列奈钙或其制剂适量，精密称定，置容量瓶中，加有机溶剂超声溶解，用流动相稀释制成1mg/ml的供试品溶液。更进一步优选的，所述供试品溶液的制备方法为：取米格列奈钙或其制剂约25mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml有机溶剂超声溶解，用流动相稀释至刻度，得到供试品溶液。其中，所述有机溶剂为甲醇或无水乙醇。

优选的，所述流动相为92-99：1-8：0.02-0.10的正己烷-无水乙醇-三氟乙酸溶液；进一步优选的，所述流动相为94-98：2-6：0.03-0.07的正己烷-无水乙醇-三氟乙酸溶液；更进一步优选的，所述流动相为95-97：3-5：0.04-0.06的正己烷-无水乙醇-三氟乙酸溶液；最优选的，所述流动相为96：4：0.05的正己烷-无水乙醇-三氟乙酸溶液。

优选的，检测波长为200-250nm，柱温为25-40℃，流速为0.2-2ml/min，进样量为1-30μl；进一步优选的，检测波长为200-220nm，柱温为30-37℃，流速为0.5-2ml/min，进样量为10-20μl；最优选的，检测波长为210nm，柱温为35℃，流速为1.0ml/min，进样量为10μl。

本申请所述米格列奈钙制剂包括但不限于片剂和胶囊剂。

本申请的有益效果：

本申请与现有技术相比，具有以下优势：①更好的实现米格列奈钙和R异构体的分离；②显著改善了R异构体的拖尾情况；③显著提高了R异构体理论塔板数，提高了检测灵敏度；④显著缩短了检测时间。

本申请的显著效果通过以下对比试验详细说明：

对比试验1

方法1：检测方法为本申请实施例1的方法；溶液制备方法为：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，加适量无水乙醇超声溶解，加流动相“正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)”制成每1ml含0.2mg的混合溶液。

方法2：检测方法为专利CN110568100 B实施例1的方法；溶液制备方法为：取米格列奈钙、R-异构体对照品适量，精密称定，加流动相“乙腈-三氟乙酸(100:0.1)”制成每1ml含0.2mg的混合溶液。

方法3：检测方法为专利CN100441570 C“色谱条件与系统适应性试验”记载的方法；溶液制备方法为：取米格列奈钙、R-异构体对照品适量，精密称定，加流动相“正己烷-氯仿-甲醇-三氟乙酸(80:160:7.5:0.5)”制成每1ml含0.2mg的混合溶液。

检测结果见图1-3和表1。

表1对比试验1检测结果

以上试验结果表明：专利CN 110568100 B的方法(即方法2)在其说明书记载的检测环境下虽然能够实现米格列奈钙和R异构体的分离，但是分离度、理论塔板数明显不如本发明的检测方法(即方法1)，另外R异构体拖尾情况较本发明更严重，且检测时间显著长于本发明；而专利CN100441570 C的方法(即方法3)在其说明书记载的检测环境下无法实现米格列奈钙和R异构体的分离。

对比试验2

方法1：流动相采用乙腈-三氟乙酸(100:0.1)，其他与本申请实施例1相同。

方法2：流动相采用正己烷-氯仿-甲醇-三氟乙酸(80:160:7.5:0.5)，其他与本申请实施例2相同。

检测结果见图4、5和表2。

表2对比试验2检测结果

以上试验结果表明：在本申请检测环境和检测条件下，现有的流动相乙腈-三氟乙酸(100:0.1)和流动相正己烷-氯仿-甲醇-三氟乙酸(80:160:7.5:0.5)根本无法实现米格列奈钙和R异构体的分离。

附图说明

通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：

图1为本发明对现有技术中同浓度实验溶液检测色谱图

图2为专利CN110568100 B方法检测色谱图

图3为专利CN100441570 C方法检测色谱图

图4为本发明方法重现专利CN110568100 B流动相检测色谱图

图5为本发明方法重现专利CN100441570 C流动相检测色谱图

图6为本发明空白溶液色谱图

图7为本发明供试品溶液色谱图

图8为本发明系统适用性溶液色谱图

具体实施方式

下面将参照附图更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然附图中显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

实施例1

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

空白溶液制备：取1ml无水乙醇置25ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得；

供试品溶液的制备：取米格列奈钙约25mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀即得；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，见图6-8。

检测结果表明，系统适用性溶液中米格列奈钙峰与R异构体峰分离度大于2.0，空白溶液不干扰检测，本方法专属性良好。

实施例2

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml甲醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例3

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(92:8:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml甲醇醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例4

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(99:1:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例5

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.02)为流动相

检测波长：210nm

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml甲醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例6

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.10)为流动相

检测波长：210nm

柱温：30℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例7

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：40℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml甲醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例8

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相

检测波长：210nm

柱温：25℃

流速：1.0ml/min

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例9

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：0.2ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例10

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：2.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例11

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液1μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例12

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液30μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例13

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：200nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例14

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：220nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例15

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙片和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例16

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙胶囊和米格列奈钙R-异构体适量，精密称定，置25ml容量瓶中，加1ml无水乙醇超声溶解，用流动相稀释至刻度，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

按上述实施例对系统适用性溶液进行检测，读取米格列奈钙与R异构体的分离度、理论塔板数和拖尾因子，结果见表3：

表3实施例1-16检测结果

检测结果显示，按上述实施例对系统适用性溶液进行检测，米格列奈钙和R异构体分离度良好，理论塔板数高，R异构体拖尾因子小。该结果表明，本申请实施例1-16均能够实现本申请的技术效果。

对照实施例

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-二甲苯基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

流动相：以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)为流动相；

检测波长：210nm；

柱温：35℃；

流速：1.0ml/min；

系统适用性溶液的制备：取米格列奈钙和米格列奈钙R-异构体适量，按表4记载的溶剂助溶和配置样品，制成约含米格列奈钙1mg/ml和米格列奈钙R-异构体15μg/ml的混合溶液。

测定法：精密量取以上溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

按上述对照实施例方法和实施例1、2的方法配制系统适用性溶液，观察溶液性状，并进行检测，结果见表4：

表4对照实施例1-3、实施例1-2配样方法及溶液性状、检测结果

以上结果显示，以对照实施例1、2的方法(即不助溶或直接以异丙醇助溶以流动相配样)制备系统适用性溶液，会出现样品超声不溶解的情况，无法进行检测；对照实施例3以乙腈为助溶剂基线波动大。而本申请以无水乙醇或甲醇助溶、以流动相正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(96:4:0.05)定容制备的溶液澄清，基线波动小，空白无干扰。