豆甾醇在制备防治生殖器官衰老或损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药的技术领域，具体涉及一种豆甾醇在制备防治生殖器官衰老或损伤药物中的应用。

背景技术

女性生殖系统主要包括子宫、输卵管及卵巢。子宫是产生月经和孕育胎儿的场所；输卵管是输送卵细胞进入子宫的肌性管道；卵巢是分泌激素和产生卵子的器官。生殖衰老或损伤不仅使生殖器官功能下降影响生育能力和生育质量，还会造成内分泌功能紊乱，继而引起全身多系统疾病患病风险增高，例如心血管疾病、骨质疏松、老年性痴呆、肥胖、肿瘤、糖尿病等，其危害不可小觑。

生殖器官衰老和损伤若不及时治疗，将会严重影响着女性的生殖健康和生活质量。目前暂无有效缓解子宫及输卵管衰老或损伤的药物，而防治卵巢功能受损或衰老的策略有基因治疗、卵巢体外激活、人工卵巢、线粒体移植、干细胞疗法、药物干预等。相较于其他方法存在伦理学、探索较少等问题，药物干预具有安全性较高、操作性方便、经济等优势，是目前应用最为广泛且有效的方式之一。目前在各种模式动物中已发现具有保护生殖功能的药物例如有雷帕霉素、褪黑素、白藜芦醇、辅酶Q10、非瑟酮、达沙替尼及槲皮素等等。随着现代化学药物对一些疾病疗效不佳，某些药物的不良反应与耐药性表现越来越突出，人们开始呼唤回归自然。

豆甾醇(stigmasterol,ST)是一类植物甾醇，广泛存在于多种植物中，其中大豆、烟草中含量丰富，因其功效丰富而成为天然药物开发的研究热点之一，被广泛应用于食品、化妆品等多个领域，而目前没有任何其他的证据表明其对生殖器官衰老和损伤具有改善保护效应。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术的不足，提供一种豆甾醇在制备防治生殖器官衰老或损伤药物中的应用，豆甾醇可有效减轻生殖器官衰老和损伤，有效保护生殖系统器官功能，使其受到的损害减小。

为实现上述目的，本发明提供一种豆甾醇在制备防治生殖器官衰老药物中的应用。

进一步地，所述生殖器官衰老包括子宫功能衰退、输卵管功能衰退及卵巢功能衰退。

进一步地，所述生殖器官衰老包括卵巢储备功能下降、早发性卵巢功能不全、卵巢早衰以及早绝经或绝经综合征。

进一步地，所述生殖器官衰老为小鼠的子宫功能衰退、输卵管功能衰退及卵巢功能衰退。

本发明还提供一种豆甾醇在制备防治生殖器官损伤药物中的应用。

进一步地，所述生殖器官损伤包括年龄增长带来的生殖器官损伤、因遗传或免疫功能缺陷或环境造成的生殖器官损伤、医源性生殖器官损伤或病理性生殖器官损伤中的一种或多种。

进一步地，所述医源性生殖器官损伤包括化疗引起的生殖功能受损，所述化疗包括药物化疗。

进一步地，所述生殖器官包括子宫、输卵管以及卵巢。

本发明还提供一种用于防治生殖器官衰老或损伤的药物组合物，所述药物组合物以豆甾醇为有效成分。

进一步地，所述药物组合物的剂型为注射剂、口服制剂或外用制剂。所述制剂还包括药学上可接受的药用载体；所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂和润滑剂中的一种或几种。

进一步地，所述药物组合物的剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂、喷雾剂、膜剂、混悬剂、锭剂、酏剂、糖浆剂、油包水或水包油乳剂、口服液或滴丸剂中的一种或多种。

进一步地，本发明提供的药物可通过任何合适途径施用，例如以注射形式通过肠胃外施用，或以以下形式通过口服途径施用：例如，片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、糖衣丸、丸剂、糖锭剂、含水或无水溶液、混悬剂、油包水或水包油乳剂、酏剂或糖浆剂。对于肠胃外施用，所述药物可制备成分散剂、混悬剂、乳剂、无菌注射溶液或含无菌粉的分散剂。所述药物也作为长效注射剂提供。所述药物的其他合适施用形式为：栓剂、喷雾剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂和皮肤贴剂。所述药物可使用本领域任何已知方法来制备成上述所列举的任何形式。

再进一步地，所述药物组合物还含有药学上可接受的载体和/或辅料，以制备为相应的药物组合物。

更进一步地，根据所制备成的剂型，本发明提供的药物组合物可搭配多种载体，例如稳定剂、增溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂或其他赋形剂后进行相应形式的混合制备得到上述多种剂型的药物。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明的豆甾醇具备保护生殖器官衰老和损伤的能力，并通过构建果蝇衰老模型和化疗性卵巢损伤小鼠模型进行了验证，发现豆甾醇延缓雌性果蝇的生殖衰老，同时在化疗药导致的生殖系统器官损伤过程中有效抑制卵泡数量的下降、雌激素的降低、子宫和输卵管的器官衰老，由此，可以将豆甾醇制备成多种形式的制剂，应用于生殖器官衰老和损伤的保护。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的给药期间小鼠卵巢功能的检测结果；其中，A为NC组、CTX组、ST组小鼠卵巢HE染色图，B为NC组、CTX组、ST组小鼠规律动情周期百分比结果，C为光学显微镜下NC组、CTX组、ST组小鼠卵泡的计数结果；D为NC组、CTX组、ST组小鼠血清中AMH浓度结果；

图2为本发明实施例1不同处理组小鼠输卵管HE染色图；其中，A为NC组小鼠输卵管HE染色图，B为CTX组小鼠输卵管HE染色图，C为ST组小鼠输卵管HE染色图；

图3为本发明实施例1不同处理组小鼠子宫HE染色图；其中，A为NC组小鼠子宫HE染色图，B为CTX组小鼠子宫HE染色图，C为ST组小鼠子宫HE染色图；

图4为本发明实施例2提供的ST组与Control组的产卵数目对比结果。

具体实施方式

下面结合实施案例详细说明本发明的实施情况，但它们并不构成对本发明的限定，仅作举例而已。同时通过说明本发明的优点将变得更加清楚和容易理解。

本发明公开了一种豆甾醇在制备防治生殖器官衰老或损伤药物中的应用。化疗导致的卵巢损伤，是实验研究中常见且得到公认的卵巢损伤模型，基于此模型研究的治疗方式对多种卵巢损伤因素的治疗均具有借鉴意义。具体的，通过给与受试哺乳动物体一定剂量的CTX溶液以诱导产生化疗性卵巢损伤，并对受试哺乳动物体给与含有效剂量的豆甾醇药物及单纯对照组的受试哺乳动物体给与生理盐水，连续给药一段时间后检测受试哺乳动物体的卵巢功能，结果发现含有效剂量的豆甾醇药物有利于减轻化疗药物所致的卵巢损伤，同时对受试哺乳动物体的重要脏器也没有产生不良反应。

本发明术语的定义和使用：

豆甾醇：是一类植物甾醇，广泛存在于多种植物中，具有抗氧化、抗癌、降糖降脂、抗炎等作用。

化疗：是化学药物治疗的简称，通过使用化学治疗药物杀灭癌细胞达到治疗目的。在临床上化疗药物也有不同的种类，根据其作用机制不同，可以分为烷化剂，抗代谢类，抗生素类，抗肿瘤药物，植物类抗肿瘤药物，激素类抗肿瘤药物，以及杂类的药物等。大部分患者需要联合使用两种以上的化疗药物治疗的，也包括口服化疗药物以及静脉用药等，另外，部分患者也可以采取介入的方式通过动脉灌注药物。

CTX：环磷酰胺，是进入人体内被肝脏或肿瘤内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解，变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用的氮芥类衍生物。

实施例1

化疗导致的生殖损伤，是实验研究中常见且得到公认的生殖损伤模型，基于此模型研究的治疗方式对多种生殖损伤因素的治疗均具有借鉴意义。具体的，通过给与受试哺乳动物体一定剂量的CTX溶液以诱导产生化疗性生殖损伤，并对受试哺乳动物体给与豆甾醇及单纯对照组的受试哺乳动物体给与生理盐水，连续给药一段时间后检测受试哺乳动物体的生殖功能，结果发现含有效剂量的豆甾醇有利于减轻化疗药物所致的生殖功能衰退。

本发明所述应用方法包括以下步骤：

S1：制备化疗性生殖损伤C57BL/6小鼠模型：

避光条件下，用生理盐水配置浓度为10mg/ml的CTX溶液，充分混匀溶解；称取小鼠体重，根据CTX给予120mg/kg的量计算每只小鼠注射量；

左手固定小鼠，右手吸取相应量CTX溶液腹腔注射入小鼠体内；空白对照组给予相应量的生理盐水，其余过程与模型建立相同；

S2：药物治疗：

化疗前灌胃给予豆甾醇组(ST组)小鼠豆甾醇溶液400mg/kg(1kg体重的老鼠给予入400mg的药物，溶于100ul浓度为5％的乙醇内。)共14天，化疗后继续给予相应剂量此药物14天，空白对照组(NC组)和单纯造模组(CTX组)小鼠给予相同体积生理盐水。

S3：卵巢储备功能检测：

小鼠卵巢同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下计数各级卵泡；结果如图1中的A显示在光学显微镜下，NC组和ST组小鼠卵巢切片多见始基卵泡和生长卵泡，而CTX组小鼠卵巢切片所见以闭锁卵泡为主。C显示，经过豆甾醇处理的小鼠的始基卵泡和生长卵泡数目较CTX组显著更高，同时闭锁卵泡数目有所下降。(PMF为始基卵泡；PF为初级卵泡、SF为次级卵泡、ANF为窦卵泡，三者合称生长卵泡；ATF为闭锁卵泡)。另外，D表明ST组小鼠血清中AMH含量较CTX组升高。AMH指的是抗米勒管激素，主要是进行卵巢储备功能的评估，可以预测对控制下卵巢刺激(cos)反应，可以帮助预测绝经。从女性从婴儿时起，尤其是AMH与年龄呈正相关，随着年龄增长逐渐上升，在16岁左右AMH水平达到高峰，此后会保持一个稳定的高水平。直到25岁以后AMH与年龄呈负相关，随着年龄增长而逐渐下降，直到绝经后无法检测。

S4：卵巢内分泌检测：

连续十天用生理盐水蘸取小鼠阴道分泌物进行动情周期检测；图1中的B可以看出，ST组小鼠动情周期更规律，统计所得动情周期规律比例更高。

S5：输卵管HE染色：

小鼠输卵管同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下拍照观察；结果如图2中的A显示在光学显微镜下，各组小鼠输卵管形态改变情况，可见ST组较CTX组在输卵管形态、肌层厚度等显著改善。

S6：子宫HE染色：

小鼠子宫同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下拍照观察；结果如图3中的A显示在光学显微镜下，NC组和ST组小鼠输子宫组织切片腺体较多，而CTX组小鼠卵巢切片所见腺体明显减少且体积增大，为衰老表现。

实施例2

S1：制备黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)w1118(以下简称“果蝇”)的食物

配方：蒸馏水12L，酵母210g，玉米面900g，大豆粉120g，琼脂100g，糖浆800mL，10％尼泊金丁酯150mL，左氧氟沙星30mL。

分别将用蒸馏水溶解好的酵母、玉米面、大豆粉以及琼脂倒入锅中，搅匀。边搅拌边加入800mL糖浆，然后搅拌30min后，以2300W功率加热，煮1.5小时后停火加入150mL尼泊金丁酯及30mL左氧氟沙星，放置2min后倒管。

S2：黑腹果蝇的扩繁

将果蝇培养于新配置的食物中，每管平均放置20对雌雄果蝇。待三龄幼虫化蛹后，移出成蝇并处死，收集8h内羽化未交配的成蝇，雌雄分开，各400只，随机分为4组。培养于食物中备用。

S3：制备含有相应浓度的食物

将此豆甾醇溶液(豆甾醇溶于乙醇溶液，浓度为5mg/ml)充分混匀后取100μL均匀铺洒于小管食物表面，使其充分浸透入食物表面，深度大概为1cm，并放置至表面干燥的状态。

S4：饲养条件

于温度为(25±1)℃，湿度为65％，交替12h的光、暗恒温恒湿培养箱内培养，每2d更换新鲜食物并记录果蝇死亡状况，直至全部死亡。

S5：药物治疗

总共2组，分别是空白对照组(Control组)、豆甾醇组(ST组)。每组均设置有100只开始实验。所有组别每隔一天均更换新鲜食物。

空白对照组为不加任何药物；

ST组为单独添加豆甾醇溶液；

S6：产卵数目计数：

每组5管，每管20只，对照组不加任何药物。每隔一天更换一次相应浓度的食物，在每个时间点每组随机选取4只雌性果蝇与2只年轻雄性果蝇进行交配，统计每组的4只雌性果蝇的总产卵数目。图4所示的结果，结果显示：对于雌性果蝇，在羽化1天至死亡施用ST可以在不同时间段有效增加雌性果蝇的产卵数目，提高雌性果蝇的卵巢功能。

以上，仅为本发明的具体实施方式，应当指出，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭示的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，其余未详细说明的为现有技术。