鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物

技术领域

本发明涉及鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas genus)细菌的提取物，包含至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或所述提取物的组合物，其用途，以及其在美容方法中的应用。

背景技术

激活激肽释放酶/激肽系统(KKS)使得无活性酶原因子XII和前激肽释放酶转化为酶(活性形式)：被激活的因子XII(FXIIa)和激肽释放酶(KK)。激肽释放酶切割高分子量激肽原(HK)并释放缓激肽(BK)。缓激肽及其活性代谢物desArg9BK分别与受体B2(RB2)和B1(RB1)结合。配体BK和desArg9BK与它们的受体RB2和RB1的相互作用产生血管舒张和血管通透性，导致水离开血管进入组织，并可能导致血细胞渗出。

因此，缓激肽参与了血管舒张并且参与了血管通透性的增加。使用缓激肽能拮抗剂是利用上述系统的所有美容疾病的有效替代方法之一。

发明内容

本发明人已经令人惊讶地证实了鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物可以用作激肽释放酶-激肽系统的抑制剂，并因此减轻发红(redness)的出现。此外，他们已经表明，在由辣椒素刺激的皮肤模型上，包含Sphingomonas xenophaga提取物的组合物能够显著减少发红的现象。

皮肤发红是一种皮肤病症，主要出现在面部，可能有多种原因。它可以是短暂的(热潮红)，也可以是永久性的。皮肤发红的特征是毛细血管舒张。

这种发红可由多种因素引发，诸如(i)外部刺激，诸如食用食物或热或酒精饮料，温度的快速变化，热或冷，相对低的湿度，皮肤于强风或气流(风扇、空调)中的暴露，以及某些表面活性剂的施用；或者(ii)与皮肤病症相关的发红，诸如红斑痤疮、玫瑰痤疮(acnerosacea)、特应性皮炎、脂溢性皮炎；以及(iii)过敏性皮肤反应后的发红。

这些红色斑块通常是不美观的，通常是不舒服的，并产生实质性的心理不适。

由辣椒素刺激的皮肤尤其用作反应性皮肤模型。

通常，反应性皮肤由皮肤的特定反应性来定义。

响应受试者与可能具有各种来源的触发要素(triggering element)的接触，这种皮肤反应性通常会导致不适的迹象。这可以是冷敷或热敷，或者反应性皮肤的表面上某些产品的施用，暴露于温度的突然变化等。还有相关的因素，诸如年龄和皮肤类型。

在接触触发要素后的几分钟内出现的这些不适的迹象是反应性皮肤的基本特征之一。这些不适的迹象主要是不美观的感觉，即在皮肤区域感觉到或多或少的不愉快感觉，诸如紧绷、刺痛、瘙痒、发热、不适等。

本发明因此涉及Sphingomonas xenophaga种细菌的提取物。

本发明的另一目的是一种组合物，其包含至少一种Sphingomonas xenophaga种的细菌或Sphingomonas xenophaga种细菌的提取物。根据本发明的组合物优选是化妆品组合物。

本发明还涉及至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物作为缓激肽合成抑制剂的用途。

本发明的另一目的是用于皮肤发红的非治疗性美容处理方法，包括：局部施用至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物，或包含至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物的组合物。

本发明还涉及用于反应性皮肤的非治疗性美容处理方法，包括：局部施用至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物，或包含至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物的组合物。

鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物

术语“细菌”是指原核微生物，优选变形菌门(proteobacterium)。

在本发明的框架中，术语“细菌的提取物”是指由细菌产生和/或分泌，因此存在于细菌培养物的培养基中的化合物集合，和/或包含在细菌中，因此存在于离心后的细菌培养物的细菌沉淀物(诸如细胞内介质，和/或壁和/或细胞膜的成分)中的化合物集合。

根据本发明的提取物可以通过本领域技术人员熟知的任何常规方法制备。这些方法通常包括发酵、分离(isolation)、分离(separation)和纯化步骤。

典型地，鞘氨醇单胞菌属的细菌在合适的培养基中培养，并以期望的密度培养。优选地，通过任何已知的方法(诸如离心)来浓缩细菌本身。然后，经浓缩的细菌可以直接用作原料制剂，或者可以进行本领域技术人员熟知的额外处理步骤，诸如冻干、脱水、过滤、纯化、冷冻，任选随后进行解冻、灭菌、柱层析、研磨等。

优选地，细菌提取物是细菌的裂解物，尤其包含细菌中包含的且因此在离心后存在于细菌培养物的细菌沉淀物中的化合物。优选地，细菌提取物是包含细胞内介质和/或壁和/或细胞膜的成分的细菌裂解物。

裂解物通常是指在生物细胞破坏或溶解结束时获得的物质，该破坏或溶解是指通过称为细胞裂解的现象而由此引起所考虑的微生物的细胞中天然含有的细胞内生物成分的释放。

就本发明而言，术语裂解物不加区别地用于指代通过相关微生物的裂解而获得的所有裂解物或仅仅是裂解物的一部分。

因此，应用的裂解物完全或部分由细胞内生物成分以及细胞壁和膜的成分形成。

这种细胞裂解可以使用不同的技术进行，诸如渗透休克、热休克(诸如冷冻任选地随后解冻)、通过超声波，或者例如在离心类型的机械应力下进行。

优选地，在本发明框架内应用的裂解物通过包括以下步骤的方法获得：

i)离心步骤；

ii)回收沉淀物的步骤；

iii)冷冻沉淀物的步骤；

iv)解冻沉淀物的步骤；

v)任选地，尤其在121℃下，通过高压灭菌进行灭菌的步骤。

在本发明的具体实施方式中，细菌提取物包含经灭活的细菌。

这里，“灭活的”具有本领域技术人员通常使用的含义，即在各种原因(热、化学、机械、酶类物质)的作用下抑制细菌的活性。具体地，通过加热，更尤其通过高压灭菌使细菌灭活。

所述提取物优选具有缓激肽抑制活性。

根据本发明的提取物的细菌是Sphingomonas xenophaga。在优选的实施方式中，所述细菌是由L’Oréal,101Avenue Gustave Eiffel,37390Notre Dame d’Oé根据布达佩斯条约于2019年11月21日在国家微生物保藏中心((CNCM)，巴黎，法国)以CNCM I-5455号登记的Sphingomonas xenophaga。

优选地，所述提取物包含在化妆品组合物中的化妆品可接受的介质中。

组合物

本发明还涉及一种组合物，尤其是化妆品组合物，其包含至少一种Sphingomonasxenophaga的细菌或上文定义的提取物。

优选地，根据本发明的化妆品组合物旨在局部施用。

这里，“化妆品组合物”具有本领域技术人员通常使用的含义。具体地，它是指旨在放置为与人体的各种表面部分(尤其是表皮、毛发系统、指甲、嘴唇和外生殖器官)以及口腔的黏膜接触的物质或制剂，目的仅仅是或主要是清洁它们、装饰它们、使它们具有香气、修饰它们的外观、保护它们、使它们保持良好状态或纠正体味。

“Sphingomonas xenophaga种的细菌”是指活的、半活的、灭活的或死亡形式的细菌。

术语“细菌提取物”如鞘氨醇单胞菌属细菌提取物段落中所定义。

根据本发明的组合物中细菌或细菌提取物的量根据所考虑的组合物类型而变动。优选地，微生物或提取物的量相对于组合物的总重量，以干重量计介于0.0001％和30％之间；相对于组合物的总重量，以干重量计介于0.001％和15％之间；相对于组合物的总重量，以干重量计介于0.01％和10％之间；相对于组合物的总重量，以干重量计介于0.01％和5％之间；或者，相对于组合物的总重量，以干重量计介于0.01％和3％之间。

在细菌以活的形式配制在组合物中的情况下，每克组合物中活细菌的量可以从10

优选地，该组合物包含化妆品可接受的介质。

本文中，“化妆品可接受的介质”是指可以应用于角蛋白材料(诸如皮肤和黏膜)的无毒载体。因此，化妆品可接受的介质与皮肤、外皮(tegument)和/或黏膜相容，其不会引起任何不适的感觉，或者更普遍地说，不会导致使用者暂停或停止施用化妆品组合物的病症。

更具体地，所述化妆品可接受的介质可包括水和/或一种或多种水混溶性有机溶剂，所述水混溶性有机溶剂可以选自直链或支链的C1-C6一元醇，诸如乙醇、异丙醇、叔丁醇；多元醇，诸如甘油、丙二醇、己二醇(o 2-甲基-2,4-戊二醇)和聚乙二醇；多元醇醚，诸如二丙二醇单甲醚；和它们的混合物。

优选地，相对于组合物的总重量，根据本发明的组合物具有20重量％至95重量％，更优选30重量％至70重量％的水含量。

有利地，相对于组合物的总重量，组合物包含含量为0.5重量％至25重量％，优选5重量％至20重量％，更优选10重量％至15重量％的一种或多种水混溶性有机溶剂。

正如本领域技术人员所熟知的，用于局部施用的组合物还可包含化妆品领域中常用的添加剂，诸如亲水性或亲脂性胶凝剂、不同于本发明的提取物的亲水性或亲脂性活性剂、防腐剂、抗氧化剂、香味剂、气味吸收剂、着色剂，及它们的混合物。

优选地，所述组合物进一步包含：

-至少一种添加剂，所述至少一种添加剂选自亲水性或亲脂性胶凝剂、不同于本发明提取物的亲水性或亲脂性活性剂、防腐剂、抗氧化剂、香味剂、气味吸收剂、着色剂，及它们的混合物；和/或

-至少一种乳化剂；和/或

-至少一种油。

这些各种添加剂的量通常是在具体领域中使用的量，例如组合物总重量的0.01％至20％。

显然，本领域技术人员应该选择这些额外的成分和/或活性剂，和/或其量，使得根据本发明的提取物的有利性质不会或基本上不会被预期的添加所改变。

在实施方式中，鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物是组合物的唯一活性剂。

在另一实施方式中，本发明的组合物可以进一步包含不同于本发明细菌或提取物的其他活性剂。这些活性剂可对血管舒张、发红、反应性皮肤或其他不美观因素产生影响。

在本发明的具体实施方式中，根据本发明的组合物还包含至少一种选自以下的活性剂：乙酰基二肽-1鲸蜡酯；丹参根提取物；泉水，诸如理肤泉(La Roche Posay)；及它们的混合物。

根据本发明的组合物可以具有常规用于局部施用的所有剂型，尤其处于水性溶液、水醇溶液、水包油(O/W)或油包水(W/O)或多重(三重：W/O/W或O/W/O)乳液、水性凝胶或使用球状物的油相在水性相中的分散体的形式，其中这些球状物可能是离子型和/或非离子型的脂质囊泡(脂质体、囊泡、油质体)。这些使用常规方法来制备。

有利地，根据本发明的组合物具有凝胶，或者乳液(emulsion)、粉末或糊剂的形式。此外，根据本发明的组合物可以是或多或少的流体，并且具有白色或有色霜剂、软膏、乳剂(milk)、洗液、精华液、糊剂、发泡凝胶、焕肤品(peeling)、面膜、护理品、爽肤水(tonic)或泡沫的外观。它可以任选地以喷雾的形式施用在皮肤上。它也可以具有固体形式，例如具有棒的形式。

根据本发明的组合物可以包含油相。

作为适用于根据本发明的组合物的油，可以提及例如：

-烃油，

-合成酯和醚，尤其是脂肪酸的酯和醚，诸如式R'COOR2和R'OR2的油，其中R’代表含8至29个碳原子的脂肪酸残基，R2代表含3至30个碳原子的任选支链化的烃链；

-矿物或合成来源的直链或支链烃；

-具有8至26个碳原子的脂肪醇；

-部分烃和/或硅氟化油；

-硅油；

-它们的混合物。

上文引用的油列表中的术语“烃油”是指主要含碳和氢原子的任何油。

油相可以包含可以存在于油相中的其它脂肪体，例如为含8至30个碳原子的脂肪酸；蜡；硅树脂；和硅弹性体。本领域技术人员可以以各种方式选择这些脂肪，以制备例如在稠度或质地方面具有所需性质的组合物。

根据本发明的具体实施方式，根据本发明的组合物是油包水(W/O)或水包油(O/W)乳液。相对于组合物的总重量，乳液的油相的比例可以在5重量％至80重量％，优选5重量％至60重量％的范围内。乳液通常包含至少一种选自两性乳化剂、阴离子乳化剂、阳离子乳化剂或非离子乳化剂的单独或以混合物形式使用的乳化剂，以及任选的助乳化剂。根据要获得的乳液(W/O或O/W)适当选择乳化剂。相对于组合物的总重量，乳化剂和助乳化剂通常以0.3重量％至30重量％，优选0.5重量％至20重量％的比例存在于组合物中。

对于W/O乳液，作为乳化剂，可提及例如二甲硅烷共聚多元醇(dimethiconecopolyols)和烷基二甲硅烷共聚多元醇(alkyl-dimethicone copolyols)。还可以使用包含至少一个氧化烯基团的交联固体弹性有机聚硅氧烷作为W/O乳液的表面活性剂。

对于O/W乳液，作为乳化剂，可提及例如非离子乳化剂。

根据本发明的组合物可以直接施用在皮肤上，或者，可替代地施用在封闭或非封闭类型的化妆品载体上，旨在局部施用在皮肤上。作为化妆品载体的非限制性示例，可以提及载体上的贴片、柔巾(towelette)、面膜。该组合物在施用至皮肤后可以冲洗或不冲洗。

在优选的实施方式中，本发明框架中使用的组合物旨在用于局部施用。在优选的实施方式中，本发明框架中施用的组合物旨在施用至皮肤。

在本发明框架中，术语“皮肤”是指身体的任何皮肤表面，优选面部或腿部的皮肤，更特别是面部的皮肤。

用途

本发明涉及至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物作为缓激肽抑制剂的用途。

根据本发明使用的细菌或根据本发明使用的提取物的细菌属于鞘氨醇单胞菌属。在实施方式中，所述细菌是选自Sphingomonas abaci、Sphingomonas adhaesiva、Sphingomonas aerolata、Sphingomonas aquatilis、Sphingomonas asaccharolytica、Sphingomonas aurantiaca、Sphingomonas azotifigens、Sphingomonas dokdonensis、Sphingomonas echinoides、Sphingomonas faeni、Sphingomonas fennica、Sphingomonashaloaromaticamans、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas koreensis、Sphingomonasmali、Sphingomonas melonis、Sphingomonas natatoria、Sphingomonas oligophenolica、Sphingomonas panni、Sphingomonas parapaucimobilis、Sphingomonas paucimobilis、Sphingomonas phyllosphaerae、Sphingomonas pituitosa、Sphingomonas pruni、Sphingomonas roseiflava、Sphingomonas sanguinis、Sphingomonas soli、鞘氨醇单胞菌sp(Sphingomonas sp)、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonas trueperi、Sphingomonas wittichii、Sphingomonas xenophaga、Sphingomonas yabuuchiae和Sphingomonas yunnanensis、Sphingomonas yanoikuyae的种。在本发明的实施方式中，细菌是Sphingomonas xenophaga。在优选的实施方式中，细菌是由L’Oréal,101AvenueGustave Eiffel,37390Notre Dame d’Oé根据布达佩斯条约于2019年11月21日在国家微生物保藏中心((CNCM)，法国，巴黎)以CNCM I-5455号登记的Sphingomonas xenophaga。

优选地，根据本发明的用途涉及至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或根据本发明的优选化妆品组合物的用途。

优选地，根据本发明的用途是局部使用。优选地，将细菌或细菌提取物或包含其的组合物施用在皮肤上，更优选施用在面部、腿部或身体上，更优选施用在面部上。

术语“缓激肽抑制剂”是指具有抑制或降低缓激肽生物活性效果的化合物。在实施方式中，本发明的鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物例如通过抑制或减少激肽释放酶/激肽系统(KKS)的激活，或通过抑制或减少前激肽释放酶的激活来抑制缓激肽激活上游的反应。优选地，鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物用作前激肽释放酶激活的抑制剂。

这种抑制引起血管舒张和血管通透性的增加的抑制。

因此，本发明还涉及至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物作为血管舒张和/或血管通透性增加的抑制剂的用途。

本发明涉及至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物用于预防和/或治疗与缓激肽合成和/或释放过量相关的美容病症的用途。

本文中，术语“预防(prevent)”或“预防(prevention)”是指任何旨在预防个体出现不适或不安的行为。因此，该术语包括症状，即感觉障碍(dysesthetic sensations)的减缓、停止或限制，但仅限于美容方面。

本文中，术语“处理(treat)”或“处理(treatment)”是指任何旨在改善个体的舒适或安康的行为。因此，该术语包括症状，即感觉障碍(dysesthetic sensations)的减轻、缓解或抑制，但仅限于美容处理。

术语“美容病症”是指不适的迹象、感觉障碍，例如在皮肤区域感觉到的或多或少的不愉快感觉，诸如紧绷、刺痛、瘙痒、发热。其还是指可见的表现，诸如发红、皮肤血管舒张和/或毛细血管扩张。

术语“缓激肽合成和/或释放过量”是指相对于在受试者中观察到的合成和/或释放的平均水平，该受试者皮肤上缓激肽的高合成和/或缓激肽的高释放。术语“高”在本文中是指至少20％、至少50％或至少100％的增加。

优选地，根据本发明的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物的用途是用于预防和/或减少发红、皮肤血管舒张和/或毛细血管扩张。

本文中，术语“发红”或“红色斑块”是指身体、头皮、黏膜或半黏膜的全部或部分皮肤呈现粉红色至红色，甚至深红色。这种表现，也称为红斑(erythema)，可以是健康肤色(红润脸颊)的标志，然而，虽然是良性的，但有时是不希望的且被认为是不美观的。

这种发红可由多种因素引发，诸如(i)外部刺激，诸如食用食物或热或酒精饮料，温度的快速变化，热或冷，相对低的湿度，皮肤于强风或气流(风扇、空调)的暴露，以及某些表面活性剂的施用，或者(ii)与皮肤病症相关的发红，诸如红斑痤疮、玫瑰痤疮、特应性皮炎、脂溢性皮炎；以及(iii)过敏性皮肤反应后的发红。

术语“外部刺激”是指本身不能引起皮肤损伤的刺激，优选选自热、冷、相对低的湿度、皮肤于强风或气流中的暴露。

本文中，术语“皮肤血管舒张”是指身体皮肤、头皮、黏膜或半黏膜的全部或一部分的良性血管舒张，它有时是不希望的并被认为是不美观的。这种类型的血管舒张通常是暂时的。

优选地，根据本发明的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物的用途是预防和/或减少由缓激肽诱导的皮肤血管舒张。

本文中，术语“毛细血管扩张”是指位于皮肤、黏膜的表面附近的小血管的永久性异常扩张。它们通常是红色到紫色，有一条细线，蜿蜒成树状或网状。它们更多地出现在面部或腿部。

本发明还涉及根据本发明的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物用于预防和/或减少以紧绷、发热和/或瘙痒为特征的皮肤不适的用途。

方法

本发明涉及用于皮肤发红的非治疗性美容处理方法，包括：局部施用至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物。

优选地，该施用在需要其的受试者上，以有效量的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物来进行。

本文中，术语“有效量”是指鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物的量，其总体上使得能够预防和/或减少皮肤发红，或者鞘氨醇单胞菌属细菌的量，其总体上使得能够预防和/或减少皮肤发红。

在本发明的框架中，术语“皮肤”是指身体的任何皮肤表面，优选面部皮肤。

本发明还涉及用于反应性皮肤的非治疗性美容处理方法，包括：局部施用至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或鞘氨醇单胞菌属细菌的提取物或包含其的组合物。

本文中，术语“反应性皮肤”是指对各种因素，诸如冷敷或热敷出现发热、紧绷和/或刺痛反应的不耐受皮肤。

在具体的实施方式中，根据本发明的用于反应性皮肤的美容处理方法旨在预防和/或减轻皮肤的发热、紧绷和/或刺痛的感觉。

优选地，该施用在需要其的受试者上，以有效量的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌提取物来进行。

本文中，术语“有效量”是指鞘氨醇单胞菌属细菌提取物的量，其总体上使得能够处理反应性皮肤，或者是指鞘氨醇单胞菌属细菌的量，其总体上使得能够处理反应性皮肤。

根据本发明的方法中施用的细菌或施用的提取物的细菌是鞘氨醇单胞菌属的。在实施方式中，菌是选自Sphingomonas abaci、Sphingomonas adhaesiva、Sphingomonasaerolata、Sphingomonas aquatilis、Sphingomonas asaccharolytica、Sphingomonasaurantiaca、Sphingomonas azotifigens、Sphingomonas dokdonensis、Sphingomonasechinoides、Sphingomonas faeni、Sphingomonas fennica、Sphingomonashaloaromaticamans、Sphingomonas jaspsi、Sphingomonas koreensis、Sphingomonasmali、Sphingomonas melonis、Sphingomonas natatoria、Sphingomonas oligophenolica、Sphingomonas panni、Sphingomonas parapaucimobilis、Sphingomonas paucimobilis、Sphingomonas phyllosphaerae、Sphingomonas pituitosa、Sphingomonas pruni、Sphingomonas roseiflava、Sphingomonas sanguinis、Sphingomonas soli、鞘氨醇单胞菌sp、Sphingomonas suberifaciens、Sphingomonas trueperi、Sphingomonas wittichii、Sphingomonas xenophaga、Sphingomonas yabuuchiae和Sphingomonas yunnanensis、Sphingomonas yanoikuyae的种。在本发明的实施方式中，细菌是Sphingomonasxenophaga。在优选的实施方式中，细菌是由L’Oréal,101Avenue Gustave Eiffel,37390Notre Dame d’Oé根据布达佩斯条约于2019年11月21日在国家微生物保藏中心((CNCM)，巴黎，法国)以CNCM I-5455号登记的Sphingomonas xenophaga。

优选地，根据本发明的方法包括局部施用根据本发明的至少一种鞘氨醇单胞菌属细菌或至少一种鞘氨醇单胞菌属的提取物或优选包含其的化妆品组合物。优选地，将细菌、提取物或组合物施用于面部、腿部或身体，更优选面部。

本文中，术语“受试者”是指人。

根据本发明，这些方法是非治疗性方法。

本发明的方法可以包括单次施用。在另一实施方式中，施用是重复的，例如每天重复2至3次，持续一天或更长时间，并且通常在至少4周或4至15周的延长期内，或根据需要尽可能长的时间，如果需要的话可以中断。

在下文的描述和实施例中，除非另有说明，否则百分比是以重量计的百分比，以“在……和……之间”表述的数值范围包括指定的上限和下限。在包装之前，通过本领域技术人员容易确定的顺序和条件混合这些成分。

将通过下面的实施例来进一步说明本发明。

附图说明

图1示出了血浆前激肽释放酶的Vmax随鞘氨醇单胞菌提取物的浓度百分比的变化。

图2是示出了血浆前激肽释放酶的激活百分比随所用鞘氨醇单胞菌提取物浓度变化的直方图。

图3是示出了发红的临床评分随时间的变化的直方图。

图4是示出了通过自身评价的发红的临床评分随时间的变化的直方图。

具体实施方式

实施例

实施例1：根据本发明的提取物的制备

在3000有效升的生物反应器中，以批模式于完全培养基中进行SphingomonasxenophagaCNCM-I 5455菌株的培养。在此步骤中，不调节pH值，温度保持在26℃，氧气溶解为30％。

下面的表1中描述了初始培养基的组成。

[表1]

一旦达到平台期，便通过离心(10000g连续)进行细胞的提取和分离。然后，回收含有细胞的沉淀物(也称为生物质)，然后在-20℃冷冻，随后解冻，使细胞破裂，从而获得裂解物。然后将裂解物装入袋中，最后在121℃下灭菌30分钟使其稳定。

根据实施例1描述的方法结束时获得的裂解产物包含相对于裂解产物总重量4.5重量％的干物质。

实施例2：体外测试-鞘氨醇单胞菌的提取物对正常血浆前激肽释放酶激活作用的剂量/反应曲线。

通过分光光度法(λ＝405nm)测量发色底物的断裂来监测实施例1的提取物对底物的影响。

通过监测动力学反应和计算反应的最大速度来评估酶活性。结果代表两次独立实验中至少两次重复的平均正负标准偏差。使用Mann Whitney检验(α<0.05)进行统计检验。

提取物在405nm波长处具有恒定但固有的吸收，因此所有实验都需要从测量的吸收中减去该特定吸收。

将正常血浆与浓度为0.02、0.1、0.2、0.3、0.4和0.5％的提取物在0℃下孵育10分钟后，评估前激肽释放酶的激活，随后前激肽释放酶由于硫酸葡聚糖而完全激活。

图1示出了鞘氨醇单胞菌提取物对血浆中前激肽释放酶激活的影响。

在0.02、0.1、0.2和0.3％的浓度下，提取物没有表现出任何显著的抑制作用(p>0.05)。从0.4％的浓度开始可以观察到抑制作用。在0.4％和0.5％的终浓度下，激肽释放酶-激肽系统的抑制率为46.8％和90.8％(p<0.001；图1)。因此，本发明人证实了提取物抑制激肽释放酶-激肽系统激活的能力。

这也可以在图2中观察到，其中图2示出了血浆前激肽释放酶的活性百分比随所用提取物浓度的变化。

总之，用鞘氨醇单胞菌提取物获得的关于激肽释放酶-激肽系统的数据证实了在实验条件下对正常血浆中前激肽释放酶激活的抑制作用(激活前，血浆在0℃下孵育10分钟)。在这些条件下，从浓度0.4％的实施例1的提取物开始，抑制作用是显著的。

实施例3：体内测试—评价鞘氨醇单胞菌提取物的舒缓作用。

该测试在分成两组的10个人身上进行。该测试为：将浓度为3.16×10

包含鞘氨醇单胞菌提取物的组合物用作组合物：

[表2]

临床医生或受试者自己将测试区域的皮肤发红评定为0至4。因此，在以下时刻评定发红水平:

-在施用辣椒素之后和施用组合物之前(T0

-在施用组合物后立即(T0

-在施用辣椒素后5、10、15、20、25和30分钟。

临床评分的变化如图3所示。受试者自己给出的分数变化(因此是自我评价)如图4所示。观察到在两张图上，接受包含鞘氨醇单胞菌提取物的组合物的人群的得分低于对照组。在这些条件下，包含鞘氨醇单胞菌提取物的组合物能够减少发红。