一种茶树花粉提取物在制备改善环境微塑料诱发的认知障碍产品中的应用

技术领域

本发明涉及一种茶树花粉提取物在制备改善环境微塑料诱发的认知障碍产品中的应用，属于茶树花粉的新应用。

背景技术

进入环境的塑料通过光和热氧化过程进行缓慢降解(生物降解的程度较低)，削弱材料的完整性，可降解为直径<5mm的塑料，称为微塑料

我国茶树种植历史悠久且分布范围广，卫生部公告2013年第1号批准茶树花为新资源食品

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发明目的

本发明解决的技术问题在于提供茶树花粉提取物在改善微塑料诱发的认知障碍的药品或保健品中的应用，从而为神经退行性疾病的治疗提供一种有效的解决办法。

技术方案

本发明提供了一种茶树花粉提取物在制备改善环境微塑料诱发的认知障碍产品中的应用

进一步而言，茶树花粉提取物在制备改善微塑料诱导的认知障碍的药品中的应用。

所述的应用，其特征在于，所述应用包括将茶树花粉提取物与药学可接受的辅料制成片剂、颗粒剂、汤剂或胶囊。

所述的应用，其特征在所述的茶树花粉提取物经水浸泡超声提取制备而成。

所述的的应用，其特征在于所述的茶树花粉提取物由如下步骤制得；茶树花粉以20倍于生药体积的水超声，功率20KHz，45℃，提取30min，200目过滤，合并滤液，冷冻干燥，得到茶树花粉提取物。

所述的应用，其特征在于按重量百分比计，所述的茶树花粉提取物的茶多酚含量5.10-6.31％，茶多糖10.78-15.82％，脯氨酸、谷氨酸与天冬氨酸等的总氨基酸含量20.70-26.04％。

有益效果

(1)本发明采用茶树花粉提取物对微塑料诱导的神经退行性疾病作用进行了考察，结果显示茶树花粉提取物在25、50mg/kg剂量下均可改善微塑料诱导的小鼠神经退行性疾病表现，显著改善小鼠脑组织病理损伤，而等生药量换算下的茶多酚灌胃(2.5mg/kg/d)连续灌胃120天并没有发现明显的改善效果。口服花粉提取物能显著改善微塑料诱发的小鼠认知障碍行为、脑系数及病理组织变化和紧密连接蛋白的异常表达，可能是花粉中多种物质共同起作用的结果，茶树花粉提取物除含有茶多酚类成分之外，还含有茶氨酸、糖蛋白、多种氨基酸及微量元素等。因此，茶树花粉提取物具有抗神经退行性疾病的作用。以茶树花粉为活性物质，单独使用或与其他具有药理学活性的化合物或提取物组成复方使用，按照药学领域的常规制剂方法制成各种剂型的抗神经退行性疾病中产品如药物或保健品，或与其他药物等制成复方制剂，用于在保持疗效的情况下减少药物作用中的不良反应，可为神经退行性疾病的预防提供了一种有效的解决办法。

(2)本发明涉及实验材料来源于原植物茶树，原植物分布范围广，成本低，毒副作用小，药理活性明确，具有广泛的应用价值。

附图说明

图1茶树花粉提取物对聚苯乙烯诱导的小鼠神经退行性疾病行为学改变的影响(X±SD，n＝3)。A为矿场实验的运动速度结果，B为矿场实验的运动距离结果，C为矿场实验的沿边运动距离结果；D为悬尾实验结果；E为强迫游泳实验结果。图中：APS：聚苯乙烯模型组；TP：茶多酚(2.5mg/kg)；CSHHF：茶树花粉提取物(25mg/kg、50mg/kg)；

图2茶树花粉提取物对聚苯乙烯诱导的神经退行性疾病小鼠脑系数影响(n＝8)。APS：聚苯乙烯模型组；TP：茶多酚(2.5mg/kg)；CSHHF：茶树花粉提取物(25mg/kg、50mg/kg)；

图3茶树花粉提取物对聚苯乙烯诱导的神经退行性疾病组织病理改变的影响(X±SD，n＝3)。APS：聚苯乙烯模型组；TP：茶多酚(2.5mg/kg)；CSHHF茶树花粉提取物(25mg/kg、50mg/kg)；

图4茶树花粉提取物对聚苯乙烯诱导的神经退行性疾病血脑屏障紧密连接蛋白Occludin(A)、ZO-1蛋白(B)表达量的影响(X±SD，n＝3)；APS：聚苯乙烯模型组；TP：茶多酚(2.5mg/kg)；CSHHF茶树花粉提取物(25mg/kg、50mg/kg)；

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1

1、材料与仪器

清洁级雄性C57BL/6小鼠，体重18～22g，由扬州大学比较医学中心提供。水为纯净水。聚苯乙烯纳米颗粒(批号:PSN100j2401粒径:100nm江苏智川科技有限公司生产)。茶多酚(批号:T418534，阿拉丁生产)。茶树花为福建武夷山正岩大红袍茶树的干燥花(武夷山市夷仙茶叶有限公司提供)。异戊巴比妥(国药集团化学试剂有限公司生产)。

2、实验方法

取雄性C57BL/6小鼠体重18～22g。小鼠造模和给药均通过灌胃方式，实验方案依据中国实验动物应用指南设计并获得动物伦理委员会批准。适应性喂养一周后称重并随机分组：空白对照组(Control)，微塑料脑损伤模型组(APS组)，茶多酚组(APS+TP2.5 mg/kg)，茶树花粉提取物低剂量组(APS+CSHHF25mg/kg)及高剂量组(APS+CSHHF50 mg/kg)。实验过程中造模同时开始给药，模型组APS灌胃(40mg/kg/d)，茶树花粉低剂量灌胃25mg/kg/d，茶树花粉高剂量灌胃50mg/kg/d，依据等生药量进行换算确定茶多酚最高灌胃剂量2.5mg/kg/d，连续灌胃第120天。模型组(APS)、空白对照给予等体积生理盐水。实验后三天开展行为学观察实验。

矿场实验：安静的环境下，将动物放入箱内底面中心，同时进行摄像和计时。观察一定时间后停止摄像，观察时间为5min。根据计算机软件观察动物运动速度，运动距离，沿边运动距离。

悬尾实验：将小鼠尾部后1/3处用胶带固定，悬挂于支架上，头部距离台面15cm，摄像，计时5min后停止，利用动物行为学分析软件，观察其挣扎时间进行统计。

强迫游泳实验：实验期间保持安静，光线无明显变化，室温保持在20～25℃。该实验在装有10cm水(23+2℃)的透明有机玻璃圆筒中进行。实验开始时将小鼠放入水中，持续时间为6min，视频记录整个过程。在测试结束时，将动物从水中移出并放回笼中，双盲记录每只小鼠后5min的累积游泳时间。

称体重记录，采用异戊巴比妥麻醉处死解剖后取出脑组织，计算脑系数(脑系数＝脑重(mg)/体重(g))。部分组织4％中性甲醛中固定，常规切片，采用H&E和Nissl染色剂然后，观察脑组织形态、脑损伤及神经元形态。提取部分组织蛋白进行Western Blot实验，观察脑紧密连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白表达情况。

所有数据均用均数±标准差(X±SD)表示。应用GraphPadPrism 8.2统计软件处理，统计采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，P<0.05表示组间差异有统计学意义。

3实验结果：

3.1对微塑料诱导的神经退行性疾病动物行为的影响

矿场实验结果显示：与对照组相比，模型组(APS)小鼠运动距离、运动速度、周边运动距离明显下降；与模型组相比较，茶树花粉提取物高、低剂量组的小鼠运动距离、运动速度、周边运动距离均有明显上升，而茶多酚组未出现显著差异(图1)。

悬尾实验结果显示：与空白对照(Control)比较，模型组(APS)小鼠挣扎时间明显上升；与模型组(APS)相比，花粉提取物高、低剂量组的小鼠挣扎时间明显下降，而茶多酚组没有显著改变小鼠挣扎时间(图1)。

强迫游泳实验结果显示：与空白对照(Control)比较，模型组(APS)小鼠游泳时间明显减少；与模型组(APS)相比，花粉提取物高、低剂量组的游泳时间明显上升，而茶多酚组没有出现统计学差异(图1)。

3.2对微塑料诱导的神经退行性疾病小鼠的脑系数的影响

与空白对照(Control)比较，模型组(APS)小鼠脑系数明显下降；与模型组(APS)相比，花粉提取物高、低剂量组小鼠脑系数明显上升，而茶多酚组小鼠脑系数没有显著性改变(图2)。

3.3对微塑料诱导的神经退行性疾病脑组织病理改变的影响

病理组织切片经H&E、NISSL染色(如图3)，结果表明空白对照(Control)的小鼠脑组织结构完整清晰，组织海马区神经元细胞排列较整齐，神经元细胞数量丰富，模型组(APS)脑组织整体结构轻异常，组织海马CA3区可见部分神经元固缩深染坏死，与模型组(APS)小鼠相比，花粉提取物高、低剂量组的固缩坏死情况明显缓解，我们也观察到茶多酚没有缓解微塑料对脑组织的影响。提示花粉提取物在25、50mg/kg剂量下均可改善微塑料诱导的神经退行性疾病，而茶多酚在2.5mg/kg没有显著改善效果(图3)。

3.4对微塑料损伤模型中脑组织Occludin和ZO-1改变的影响

与空白对照比较，模型组(APS)小鼠紧密连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白表达明显下降；与模型组(APS)相比，花粉提取物高、低剂量组的蛋白表达明显上升，而茶多酚组未出现显著性差异(图4)。

本发明采用茶树花粉提取物对微塑料诱导的神经退行性疾病作用进行了考察，结果显示茶树花粉提取物在25、50mg/kg剂量下均可改善微塑料诱导的小鼠神经退行性疾病表现，显著改善小鼠脑组织病理损伤，而等生药量换算下的茶多酚灌胃(2.5mg/kg/d)连续灌胃120天并没有发现明显的改善效果。口服花粉提取物能显著改善微塑料诱发的小鼠认知障碍行为、脑系数及病理组织变化和紧密连接蛋白的异常表达，可能是花粉中多种物质共同起作用的结果，茶树花粉提取物除含有茶多酚类成分之外，还含有茶氨酸、糖蛋白、多种氨基酸及微量元素等。因此，茶树花粉提取物具有抗神经退行性疾病的作用。以茶树花粉为活性物质，单独使用或与其他具有药理学活性的化合物或提取物组成复方使用，按照药学领域的常规制剂方法制成各种剂型的抗神经退行性疾病中药物或保健品，或与其他药物等制成复方制剂，用于在保持疗效的情况下减少药物作用中的不良反应，可为神经退行性疾病的预防提供了一种有效的解决办法。

最后说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本非发明的优选实施例已对本发明进行了描述，但本领域普通技术人员应当理解，可以在实行上和细节上对其做出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求说明书所限定的本发明的精神和范围。