一种具有护肝作用的复方灵芝孢子油的制备方法

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体涉及一种具有护肝作用的复方灵芝孢子油的制备方法。

背景技术

灵芝药用在我国已有2000多年的历史，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品。灵芝为多孔菌科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效，用于眩晕不眠、心悸气短、虚劳咳喘。灵芝又称林中灵，主要生长在较湿润的地方。还是好气性真菌，它的整个生长发育过程中都需要新鲜的空气。尤其是子实体生长发育阶段，对二氧化碳更为敏感。

灵芝主含氨基酸、多肽、蛋白质、真菌溶菌酶，以及糖类(还原糖和多糖)、麦角甾醇、三萜类、香豆精甙、挥发油、硬脂酸、苯甲酸、生物碱、维生素B2及C等；孢子还含甘露醇、海藻糖。对多种理化及生物因素引起的肝损伤有保护作用。无论在肝脏损害发生前还是发生后，服用灵芝都可保护肝脏，减轻肝损伤。灵芝还能促进肝脏对药物、毒物的代谢，对于中毒性肝炎有确切的疗效。尤其是慢性肝炎，灵芝可明显消除头晕、乏力、恶心、肝区不适等症状，并可有效地改善肝功能，使各项指标趋于正常。所以，灵芝可用于治疗慢性中毒、各类慢性肝炎、肝硬化、肝功能障碍。

灵芝孢子是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子。每个灵芝孢子只有4～6个微米，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁质纤维素所包围，人体很难充分吸收。破壁后更适合人体肠胃直接吸收。灵芝孢子粉具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。其药用价值日益受到重视,研究发现灵芝孢子具有增强机体免疫力,抑制肿瘤,保护肝损伤,辐射防护作用。

灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳流体萃取技术从破壁的灵芝孢子中提取的油状脂质物，集成了灵芝孢子的多种活性成分。灵芝孢子油，主要成份是饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸等，含有少量灵芝酸成分有抗脑缺血、再灌注损伤作用及抗氧化清除自由基作用。其中三萜类灵芝酸具有强烈的药理活性,有护肝、解毒、杀灭癌细胞和止痛等功能。

灵芝及其加工产品在市场上大多数都是以单一方式出现，并不能很好的发挥其药用价值。利用灵芝子实体和灵芝孢子粉的相互组合能够实现药用活性价值最大化。并且其工艺比较繁琐，市面上还未大量出现此类产品，具有很好的市场前景。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处提供一种具有护肝作用的复方灵芝孢子油的制备方法。该方法是先将灵芝细粉，灵芝孢子粉破壁得到破壁灵芝孢子粉，分别制粒得到灵芝子实体颗粒和破壁灵芝孢子粉颗粒，再将两种颗粒分别干燥，按比例混合后进行二氧化碳超临界萃取，最终得到复方灵芝孢子油。

本发明的目的具体是通过以下方式实现的：

一种具有护肝作用的复方灵芝孢子油得制备方法，该方法包括以下步骤：

将灵芝子实体颗粒与破壁灵芝孢子粉颗粒混合，混合物进行CO

优选上述灵芝子实体为紫芝。

上述灵芝子实体颗粒是通过以下方法制备得到的：将灵芝子实体粉碎，过40～50目筛，得灵芝细粉；灵芝细粉中加入灵芝细粉质量20～30％的水，制粒，55～60℃烘干，得灵芝子实体颗粒。

灵芝子实体制成颗粒后萃取率会显著提高。在超临界萃取过程中，反应釜底部是用棉花作为填料，制粒之后不易泄露、减少损耗。

上述灵芝孢子粉破壁时使用的破壁机厂家为南京纳达超微科技有限公司，型号为JRG-30，冷却形式为封闭式水冷，破壁率≥98％；孢子粉的破壁率可以达到92％～95％。

上述破壁灵芝孢子粉颗粒是通过以下方法制备得到的：将破壁率达92％以上的灵芝孢子粉加入灵芝孢子粉质量20～30％水，制粒，55～60℃烘干，得破壁灵芝孢子粉颗粒。

上述具有护肝作用的复方灵芝孢子油的制备方法中，所述CO

具体步骤为：a)将灵芝细粉制粒，灵芝孢子粉破壁之后制粒，分别干燥；b)干燥后的灵芝子实体颗粒和破壁灵芝孢子粉颗粒，按1：1～2重量比例进行混合均匀，装入萃取器中，从萃取器底部通入CO

与现有技术比较本发明的有益效果：本发明将灵芝子实体颗粒和破壁灵芝孢子粉颗粒按照特定的配方比例进行CO

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明进行进一步解释说明。

实施例1

制备方法如下：

1、将灵芝用药用粉碎机粉碎，过40～50目筛，得灵芝细粉。

2、灵芝细粉加入20～30％水，制粒机中制粒，真空干燥箱中60℃烘干2h，得灵芝子实体颗粒。

3、灵芝孢子粉，破壁机中破壁，破壁率达95％。

4、将破壁好的灵芝孢子粉加入20～30％水，制粒，真空干燥箱中60℃烘干2h，得破壁灵芝孢子粉颗粒。

5、灵芝子实体颗粒与破壁灵芝孢子粉颗粒1：2的重量比例混合均匀，投入超临界萃取设备内，将混合物进行CO

实施例2

灵芝子实体颗粒与破壁灵芝孢子粉颗粒按照1：1的重量比例混合均匀，其余步骤同实施例1

对比例1

1、将灵芝用药用粉碎机粉碎，过40～50目筛，得灵芝子实体细粉。

2、取灵芝孢子粉，破壁机中破壁，破壁率达95％。

将灵芝子实体细粉与破壁灵芝孢子粉按照1：2的重量比例混合均匀，投入超临界萃取设备内，将混合物进行CO

试验例1

1试验材料

1.1受试药物

分别为空白对照组、酒精模型组、破壁灵芝孢子颗粒萃取物组(全部灵芝孢子粉萃取物)、实施例1萃取油、实施例2萃取油、灵芝子实体颗粒萃取物组。

破壁灵芝孢子颗粒萃取物组制备方法：原料灵芝孢子粉，破壁机中破壁，破壁率达95％，将破壁后的灵芝孢子粉加入20～30％水，制粒，真空干燥箱中60℃烘干2h，得破壁灵芝孢子粉颗粒。破壁孢子粉颗粒投入超临界萃取设备内，进行CO

灵芝子实体颗粒萃取物组制备方法：原料灵芝子实体用药用粉碎机粉碎，过40～50目筛，得灵芝细粉。加入20～30％水，制粒机中制粒，真空干燥箱中60℃烘干2h，得灵芝子实体颗粒。灵芝子实体颗粒投入超临界萃取设备内，进行CO

1.2阳性药

水飞蓟素胶囊，MEDA PHARMA GMBH&CO.KG，Germany。规格：140mg/粒；批号：B1902307

1.3动物

昆明种小白鼠，20～25g，雄性，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。生产许可证号：SCXK(辽)2020-0001，SCXK(豫)2020-0005；合格证编号：210726201100522362，410983201100113624；饲料：颗粒饲料，由中国药科大学动物室供给；饲养条件：空调房间，温度18～24℃，相对湿度70％。

2.4仪器

电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司，型号：BS224 S；TGL-16型低温高速离心机：湖南湘仪实验仪器开发有限公司。

试验内容

56只雄性昆明小鼠随机分为7组：空白对照组、酒精模型对照组、水飞蓟素组(60mg/kg)、破壁灵芝孢子颗粒萃取物组(0.5mg/kg)、实施例1组(0.5mg/kg)、实施例2组(0.5mg/kg)、灵芝子实体颗粒萃取物组(0.5mg/kg)。各组灌胃给予相应的药物，空白对照组和模型对照组每天灌胃等体积CMC-Na，给药体积为0.2ml/20g，每日1次，连续14天。从灌胃给药第4天开始，预保护给药1h后除空白对照组外，各组饮用水更换为5％乙醇水溶液。给药第14天上午8点至9点，除空白对照组外，其余各组均按20ml/kg的剂量灌胃31.5％乙醇水溶液，9h后，小鼠麻醉摘眼球取血，4℃3500rpm/min离心10min，分离血清，用试剂盒测定血清中ALT和AST含量。处死小鼠，置于冰上迅速开腹，剖取肝脏，称重记录，计算肝指数(肝湿重/体质量×100％)。数据统计所用软件为SPSS 22.0，多组间比较方差齐性时采用单因素方差分析进行数据统计，两两比较，采用ANOVA检验；两组间比较采用t检验。P﹤0.05表示有统计学意义。

结果表明，与空白对照组相比，酒精模型组小鼠的体重、肝指数、血清AST和ALT含量明显升高(P﹤0.01)。与酒精模型组相比，破壁灵芝孢子颗粒萃取物组、实施例1萃取油、实施例2萃取油、灵芝子实体颗粒萃取物组给药15天显著抑制体重增长(P﹤0.01)。其中实施例1萃取油、实施例2萃取油为最显著，结果见表1。

破壁灵芝孢子颗粒萃取物组、实施例1萃取油、实施例2萃取油、灵芝子实体颗粒萃取物组和水飞蓟素组均可显著降低小鼠肝指数、ALT含量(P﹤0.01)；实施例1萃取油和水飞蓟素组均可显著降低小鼠血清AST含量(P﹤0.01)。结果见表1～2。

表1复方灵芝孢子油对酒精致急性肝损伤小鼠体重的影响(mean±S.D.，n＝10)

表2复方灵芝孢子油对酒精致急性肝损伤小鼠肝指数、血清AST和ALT含量的影响(mean±S.D.，n＝10)

结论：与空白对照组小鼠比较，酒精致急性肝损伤模型组小鼠体重、肝指数、血清AST、ALT含量显著升高。与酒精致急性肝损伤模型组小鼠比较，两种提取比例的复方灵芝孢子油灌胃给药14天后，显著抑制小鼠体重增长和降低小鼠的肝指数、血清AST和ALT。而且比破壁灵芝孢子颗粒萃取物组和灵芝子实体颗粒萃取物组的效果更加显著。其中复方灵芝孢子油比例为1：2时所萃取的复方灵芝孢子油显著降低小鼠血清AST和ALT含量，且显著优于单一萃取物及复方灵芝孢子油比例为1：1组。