包含靛玉红衍生物作为活性成分的药物组合物

技术领域

本公开涉及用于预防或治疗创面的组合物，更具体地涉及包含靛玉红衍生物作为活性成分用于预防或治疗创面的药物组合物，以及包含靛玉红衍生物作为活性成分用于预防或治疗创面的化妆品组合物或食品组合物。

背景技术

皮肤起到保护身体的防护屏障的作用，可以看作是防止微生物入侵等的第一道防线。创面愈合和恢复是创面、灼伤、擦伤或其他外伤性皮肤损伤或外科手术后组织完整性和功能恢复的基础。如果创面愈合延迟或发生外科创面开放，将发生严重的临床问题。

目前，Dong Kook Pharm的“Madecassol”(1985年发行)和Dong Wha Pharm的“Fucidin”(1980年发行)在韩国主要用作创面愈合剂。尽管两种药物的功效通常相似，但Fucidin的抗菌活性强，而Madecassol在减少疤痕方面更有效。

现有的类固醇软膏可以有效减少炎症、抑制免疫力、治疗过敏性疾病等，但它们会引起痘痕、皮肤皱纹、毛囊炎等副作用，并且对脚气等细菌性疾病无效。此外，含抗生素的软膏在儿童柔软皮肤的创面上使用时可能会产生耐药性问题，并可能引起各种副作用。因此，为了克服类固醇软膏或抗生素软膏的局限性，在韩国市场上出现了基于创面愈合机制的创面愈合剂。同时，不同于普通的皮肤创面，严重的意外创面，在皮肤病例如黑色素瘤手术后产生的大创面，与其他疾病例如糖尿病相关的创面等需要长时间的愈合并且经常引起疤痕。Daewoong制药发布了“EGF Saesal Yongo”，这是韩国第一种包含表皮生长因子(EGF)的非处方创面愈合剂。表皮生长因子通过促进创面的覆盖(上皮重新形成)和肉芽组织的增殖，有助于预防疤痕。然而，由于表皮生长因子是蛋白质，因此生产表皮生长因子需要大量成本和工作。

已经提出将干细胞用于创面愈合以克服这些限制。然而，按原样使用干细胞具有因DNA转移而致癌的风险，并且由于干细胞本身的体积较大，可能导致血管闭塞或心肌梗塞。并且，使用异体细胞例如脐带血细胞的移植可能由于细胞表面抗原而引起排斥。另外，细胞治疗剂例如干细胞的缺点在于制备过程复杂并且在储存和运输方面存在许多限制。因此，需要一种在解决细胞治疗剂的基本问题的同时还能够以最小的副作用实现最大的治疗效果的方法。

本公开的发明人已经努力开发具有普遍温和的作用方式和一致且优异的生物利用度而对人体没有副作用的创面愈合剂。结果，他们发明了一种新的组合物，用于预防创面处的微生物感染、愈合创面和减少疤痕(通过上皮重新形成和肉芽组织的增殖)。

发明内容

技术问题

本公开涉及提供包含靛玉红衍生物作为活性成分用于预防或治疗创面的药物组合物，其对人体没有副作用并且显示出优异的创面愈合作用。

本公开还旨在提供用于非人类动物的用于治疗或减轻糖尿病创面的药物组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

本公开还旨在提供用于预防或减轻创面的化妆品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

本公开还旨在提供包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分的食品组合物。

本公开还旨在提供一种通过向人类或非人类动物透皮施用所述组合物来治疗创面的方法。

本公开还旨在提供一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物在制备药物或用于治疗动物创面的药物中的新用途。

技术方案

本公开提供了用于预防或治疗创面的药物组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物还可以包含臭檀吴萸(Euodiasutchuenensis Dode)提取物，或者还可以包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种。

根据本公开的一个示例性实施方案，创面可能是由灼伤、溃疡、受伤、外科手术、分娩、慢性创面、糖尿病创面或皮炎引起的。

根据本公开的一个示例性实施方案，药物组合物可以用于皮肤的局部施用。

根据本公开的一个示例性实施方案，药物组合物可以制成选自乳膏、凝胶、软膏、乳剂、混悬剂、喷雾剂和透皮贴剂的制剂。

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物可以是还包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

根据本公开的一个示例性实施方案，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5。

根据本公开的一个示例性实施方案，基于组合物的总重量，活性成分的含量可以为1重量％至20重量％。

根据本公开的一个示例性实施方案，表面活性剂可以选自聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯脱水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)中的一种或多于一种。

根据本公开的一个示例性实施方案，油可以是选自聚乙氧基蓖麻油(

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物还可以包含环糊精，并且基于100重量份的所述组合物中存在的活性成分，所述环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

本公开还提供用于非人类动物的用于治疗或减轻创面的药物组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

本公开还提供用于预防或减轻创面的化妆品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物还可以包含臭檀吴萸(Euodiasutchuenensis Dode)提取物，或者还可以包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种。

根据本公开的一个示例性实施方案，化妆品组合物可以选自淡香水、精华、润肤露、乳霜、面膜、凝胶、粉、粉底和洁肤液中的一种。

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物可以是还包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

根据本公开的一个示例性实施方案，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5。

根据本公开的一个示例性实施方案，基于组合物的总重量，活性成分的含量可以为1重量％至20重量％。

根据本公开的一个示例性实施方案，表面活性剂可以选自聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯脱水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)中的一种或多于一种。

根据本公开的一个示例性实施方案，油可以是选自聚乙氧基蓖麻油(

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物还可以包含环糊精以更好地溶解。基于组合物中存在的100重量份活性成分，环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

本公开还提供用于预防或减轻创面的食品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

根据本公开的一个示例性实施方案，组合物还可以包含臭檀吴萸(Euodiasutchuenensis Dode)提取物，或者还可以包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种。

有益效果

本发明包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分的组合物不仅在正常状态下而且在糖尿病状态下均能促进创面愈合，并且显示出减轻、预防或治疗创面包括糖尿病创面的优异效果。因此，它可以有效地用作减轻、预防或治疗普通创面或糖尿病创面的药物组合物、化妆品组合物或食品组合物，或用作治疗糖尿病创面的兽用组合物。

另外，当与靛玉红衍生物一起使用时，根据本公开的臭檀吴萸提取物或香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷几乎没有毒性，并且提供了更好的创面恢复和愈合、弹性改善等效果，且与现有的类固醇药物不同，其对人体没有副作用。

附图说明

图1示出了取决于用实施例1至实施例4和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物处理的角质形成细胞的细胞运动性。对照组(con)是指未用靛玉红衍生物处理的角质形成细胞。

图2定量示出了取决于用实施例1至实施例4和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物处理的角质形成细胞的细胞运动性。

图3示出了在不同时间(第0天和第14天)用根据本公开的实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)对小鼠急性创面组织进行成像和染色的结果。用本公开的实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠急性创面组织用马松三色和天狼星红染色的结果显示在图3的底部(胶原蛋白染色)。

图4示出了在不同时间(第1天、第3天、第5天、第9天和第12天)用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠急性创面组织的上皮重新形成程度的量化结果。

图5示出了在第14天测量用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠的创面尺寸(cm

图6a示出了取决于用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷或实施例9至实施例11制备的混合物处理的角质形成细胞的细胞运动性。

图6b定量示出了取决于用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷或实施例9至实施例11制备的混合物处理的角质形成细胞的细胞运动性。

图7示出了在不同时间(第0天和第12天)用实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9中制备的混合物或EGF(阳性对照组)对小鼠急性创面进行成像和染色的结果。图7左下方的图示出了在不同时间(第0天和第12天)用本公开实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9制备的混合物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠急性创面上皮重新形成程度的量化结果。图7右下方的图示出了在第1天和第12天用本公开实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9制备的混合物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠的创面大小(mm

图8a示出了用对照组(con)、实施例8中制备的臭檀吴萸提取物(1μg/mL)(臭檀吴萸1μg/mL)或阳性对照组(VPA 100μM)处理角质形成细胞并在18小时后细胞运动性的成像结果。

图8b示出了用实施例1的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)或实施例12和实施例13的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)处理角质形成细胞并在18小时后细胞运动性的成像结果。

图8c示出了根据图8a和图8b计算细胞运动性的结果。

图8d示出了用实施例3的靛玉红衍生物(0.1μM，1μM)、实施例14的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)或实施例8的臭檀吴萸(Euodiasutchuenensis Dode)提取物的混合物处理角质形成细胞并在18小时后计算细胞运动性的结果。

图9a示出了在不同时间(第0天和第12天)用实施例1的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例12和实施例13的混合物、对照组(con)、实施例8的臭檀吴萸(Euodia sutchuenensis Dode)提取物或阳性对照组(EGF和VPA)处理的小鼠急性创面组织的成像和染色结果。

图9b示出了在第1天测量图9a中每组的小鼠急性创面的创面尺寸(mm

图9c示出了在第12天测量图9a中每组的小鼠急性创面的创面尺寸(mm

图10示出了在不同时间对糖尿病动物模型中的正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位进行成像的结果。

图11示出了在糖尿病动物模型中的正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位的面积在不同时间测量的创面闭合率(％)的结果。

图12示出了通过用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)对来自糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位组织进行染色而获得的H&E图像。

图13示出了通过用范吉逊氏染色剂和天狼猩红对糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位组织进行染色而获得的图像，以评估胶原蛋白的合成程度。

图14示出了通过用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)对来自糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组、阳性对照组以及第一和第二测试组的创面部位组织进行染色在第14天获得的H&E图像。

图15示出了通过用范吉逊氏染色剂和马松三色对糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组以及第一和第二测试组的创面部位组织染色而获得的图像，以评估胶原蛋白合成程度。

图16示出了糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组、阳性对照组以及第一和第二测试组的创面部位周围观察到的血管生成的结果。

图17示出了通过将本发明的实施例2中制备的靛玉红衍生物溶解在各种油或表面活性剂中制备的乳溶液。

图18a是由吐温80和PEG 400的2:1表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图，图18b是由吐温80和PEG 400的1:1表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图，图18c是由吐温80和PEG 400的1:2表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图。在图18a至图18c的三元相图中，形成稳定乳液的区域由红点标志物。

图19示出了在室温(25℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对溶解度(％)变化的结果。

图20示出了在低温(4℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对溶解度(％)变化的结果。

图21示出了在室温(25℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对Wnt报告物活性(％)的变化的结果。

图22示出了在低温(4℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对Wnt报告物活性(％)的变化的结果。

最佳实施方式

在下文中，详细描述本公开。

本公开的发明人已经在普通动物模型或诱导糖尿病的动物模型中制造创面。然后，在对创面部位皮肤施用一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物之后，根据时间评估创面面积、组织学结构、胶原蛋白含量等。结果，证实了一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的皮肤施用的创面愈合和皮肤再生的效果。

本公开还提供了用于预防或治疗创面的药物组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物是即使长时间处理细胞也几乎没有细胞毒性的物质。由于其在细胞再生、创面愈合和产生胶原蛋白方面显示出优异的效果，因此可以广泛用于具有预防或治疗创面功能的药物、食品、化妆品等。另外，已经证实，由于选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物对糖尿病状态下诱导的创面具有优异的细胞再生、愈合创面和产生胶原蛋白作用，因此它其可以广泛用于具有预防或治疗糖尿病创面功能的药物、食品、化妆品等。

有各种靛玉红衍生物，例如5-甲氧基靛玉红-3'-肟、5-甲氧基靛玉红-3'-甲肟、靛玉红3'-肟、6-溴代靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红、5,6-二氯靛玉红3'-肟、5,6-二氯靛玉红3'-甲肟、5,6-二氯靛玉红3'-丙基肟、6-氯-5-硝基靛玉红、6-氯-5-硝基靛玉红-3'-肟、6-氯靛玉红-3'-甲肟、5-氯靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-肟、5-溴靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-乙肟、5,6-二氯靛玉红-3'-丙肟、6-氯靛玉红-3'-苄肟等。其中，已证实选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物具有最优异的治疗和愈合创面的作用。

同时，通过体外实验证实，与其他现有的靛玉红衍生物相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物进行的处理提高了创面闭合率(％)，提供了更好的创面愈合效果(1.5倍至2.0倍)，并使创面愈合最快。

另外，当将一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物施用于小鼠的创面时，可以肯定的是，小鼠的急性创面与阳性对照组EGF相当或可以更快地进行上皮重新形成，并且增加了胶原组织的各种创面愈合标志物。特别地，化学式1的靛玉红衍生物(A3334)显示出比阳性对照组EGF稍好的创面修复效果，但被证实在“减少疤痕”方面更有效，因为皮肤的表皮层被均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等。

并且，已经证实，与阳性对照组EGF相比，化学式2的靛玉红衍生物(A3051)在相同的时间段内表现出的创面修复效果好2倍至6倍，表明它可以更快地修复创面。另外，证实了与用阳性对照组EGF处理时相比，在创面愈合过程中表皮层被干净而均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等，这表明与EGF相比，它在减少疤痕形成方面非常有效。

就是说，已经证实，与现有的创面愈合剂或靛玉红衍生物不同，选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物除了愈合创面，还具有通过诱导皮肤的表皮层的均匀修复来减少疤痕形成的出人意料的显著效果。

在糖尿病状态下，由于多种原因而导致例如溃疡等创面发生时，创面愈合显著延迟，这通过后述的测试例进行了证明。证实了与现有的Wnt信号传导途径活化剂VPA相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物的处理提供了治疗、减轻或预防糖尿病创面的优异效果。

因此，选自本公开的化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物可以用作具有治疗包括糖尿病创面在内的创面的作用的药物组合物、化妆品组合物等。

根据本公开的组合物使细胞运动性最大化并改善角质形成细胞和成纤维细胞中胶原蛋白的产生和积累，它们在正常状态或糖尿病状态下诱导的创面愈合中起重要作用。

角质形成细胞是在表皮中发现的主要细胞类型。它们构成表皮的基础层，并通过扩展和修饰角质形成细胞的结构形成最外层(角质层、角化层)，直到它们在皮肤表面形成成熟细胞的角质层。创面愈合的速度受角质形成细胞的增殖和迁移速度等因素的影响。可以看出，根据本公开的组合物对创面愈合具有有效的作用，因为它增加了角质形成细胞的迁移速度。另外，如上所述，根据本公开的组合物除了具有优异的创面愈合作用之外，还具有减少皮肤表皮层修复的减少疤痕的作用。考虑到大多数创面愈合剂仅限于创面治疗，创面愈合过程中形成的疤痕应随后使用疤痕处理剂进行处理，由于例如炎症等继发性问题，创面处理和疤痕处理无法同时实现，具有创面愈合和减少疤痕作用的治疗剂将非常有用。

换言之，在各种现有的靛玉红衍生物中，根据本公开的组合物可以包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分，其显示出预防或愈合创面的显著作用(约2倍)作为活性成分(测试例1)。如上所述，该组合物的优点在于急性创面迅速的上皮重新形成并且激活了胶原蛋白的产生和积累。另外，它通过激活成纤维细胞的迁移和增殖表现出非常显著的创面愈合作用。

本公开的组合物可以是还含有臭檀吴萸提取物的混合物，并且可以是还含有选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。

以特定比例含有臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合物在创面愈合中显示出优异的效果。具体地，通过体外实验证实，与单独用一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物处理时相比，与靛玉红衍生物和提取物一起处理时，创面闭合率(％)和创面愈合效果提高到超过简单的协同作用(2倍)。

特别地，与单独用臭檀吴萸提取物或单独用靛玉红衍生物处理时相比，当用它们的混合物处理时可获得约1.5倍至2倍的更好结果。换言之，与单独使用臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物时相比，本公开的用于治疗创面的组合物提供了显著的效果，这超出了预期从各个组合物所得效果的简单总和。

此外，还通过动物实验证实，与臭檀吴萸提取物或单独的靛玉红衍生物相比，与靛玉红衍生物的混合物具有显著的效果。

提取物可以从作为原料的臭檀吴萸的茎、叶、果实、其粉碎产物或其混合物制备。原料可以使用选自水、C

本公开的组合物可以是还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。低分子量化合物和靛玉红衍生物以特定比例的混合物表现出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，当用靛玉红衍生物以及选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种化合物共同进行处理时，与仅用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物处理相比，创面闭合率(％)得到改善，创面的愈合效果提高到超过简单的协同效果(1.4倍至2.3倍)，创面愈合快了6小时。换言之，通过实验证实，最优选使用靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种的组合。

如下所述的测试实施例所示，选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物与一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物在18小时内恢复了细胞运动性。特别地，香草酸甲酯和靛玉红衍生物(A3051)的混合物显示出比未处理的对照组好5倍的效果。

选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物是包括在臭檀吴萸提取物、北枳椇(Hovenia dulcis)提取物、柑橘提取物、扁蓄(Polygonumaviculare)提取物、蓼提取物和鱼腥草(Houttuynia cordata)提取物中的成分。提取物没有特别限制，只要其是从一种或多于一种选自臭檀吴萸、北枳椇、柑橘、扁蓄、蓼和鱼腥草的茎、叶、果实、其粉碎产物或混合物作为原料提取的即可。具体地，原料可以使用选自水、C

香草酸甲酯可能主要存在于北枳椇提取物中，橙皮苷可能主要存在于臭檀吴萸提取物和柑橘提取物中，而槲皮苷可能主要存在于蓼提取物、扁蓄提取物和鱼腥草提取物中。

本公开中使用的靛玉红衍生物不仅可以以游离形式提供，而且可以以其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、药学上可接受的多晶型物或药学上可接受的前药的形式提供。靛玉红衍生物的盐没有特别限制，只要它可以混合在药物或化妆品组合物中即可。它包括无机盐或有机盐，并且可以是酸式盐或碱式盐。特别地，阳离子盐可以是碱金属盐，例如钠盐、钾盐等，碱土金属盐，例如钙盐、镁盐、钡盐等，碱性氨基酸盐，例如精氨酸、赖氨酸等；铵盐，例如铵盐、三环己基铵盐等，或链烷醇胺盐，例如单乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、单异丙醇胺盐、二异丙醇胺盐、三异丙醇胺盐等。盐可以具体地为碱金属盐，更具体地为四钠盐。

由于根据本公开的组合物表现出优异的治疗创面和减少疤痕的效果，能够修复细胞损伤并且能够治疗创面、修复皮肤和减少疤痕，因此可以有效地用于治疗和预防由例如灼伤、溃疡、损伤、外科手术、分娩、慢性创面、糖尿病创面或皮炎引起的皮肤创面。

在本公开中，“糖尿病创面”是指在糖尿病患者中出现的慢性创面。慢性创面是指由于糖尿病引起的周围血管损伤导致的血液循环不良而导致其愈合被延迟的创面。

具体而言，糖尿病创面可能是由以糖尿病状态的皮肤的表皮、真皮或皮下组织的灼伤、溃疡、损伤、外科手术、整形手术、植入、分娩、慢性创面或皮炎引起的。更具体地说，它可能是由选自糖尿病足溃疡、糖尿病血管病和糖尿病足感染的一种或多于一种引起的。本公开的组合物可以应用于作为医疗器械的贴剂。

具体地，灼伤灼伤可以是由日光、化学物质、辐射或热引起的灼伤。具体而言，溃疡可以是糖尿病性溃疡。具体而言，慢性创面可以是褥疮或压疮。具体地，尽管不限于此，皮炎可以是选自脓疱病、擦烂红斑、毛囊炎和湿疹中的一种。

在本公开中，术语“含有……作为活性成分”是指足以治疗皮肤上的创面的量。

在本公开中，“减轻”可以指与与缓解或治疗疾病相关的参数有关的任何行为，例如减轻症状的严重程度，“预防”可以指与与减轻、治疗或延缓病症相关的参数有关的任何行为，例如延缓症状的发作。

在该组合物中，基于组合物的总重量，靛玉红衍生物的含量可以为0.001-80重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得充分的预防或愈合创面的效果。并且，如果其超过80重量％，则可能引起皮肤刺激。

当组合物还包含臭檀吴萸提取物时，对一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物与提取物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于干重，基于10重量份的提取物，可以混合5重量份至15重量份的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

并且，当组合物还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物时，对选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于1摩尔的低分子量化合物可以混合1mol至20mol的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

臭檀吴萸提取物或低分子量化合物在组合物中的浓度没有特别限制，只要是本领域中的一种常见物质即可。基于组合物的总重量，臭檀吴萸提取物或低分子量化合物的含量可以为以干重计0.001重量％至5重量％或以湿重计0.001重量％至50重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得足够的创面愈合效果。并且，如果其超过5重量％(干重)或50重量％(湿重)，则可能引起皮肤刺激。

本公开的用于预防或治疗创面的组合物可以口服或肠胃外施用。肠胃外施用可以通过静脉内注射、皮下注射、肌内注射、腹膜内注射、皮肤施用、透皮施用等来实现。具体而言，可以通过皮肤施用或透皮施用来实现。

药物组合物或药物的剂量可以根据要治疗的患者或动物的年龄、性别或体重而变化。最重要的是，这将取决于要治疗的对象的状况、要治疗的疾病的具体类别或类型、施用途径或治疗剂的特性。

药物组合物的剂量根据活性成分对于要治疗的患者或对象的体内吸收率、要治疗的患者或对象的排泄率、年龄、体重、性别和状况、要治疗的疾病的严重程度等适当地选择。通常，日剂量可以是0.1mg/kg至1000mg/kg，特别是1mg/kg至500mg/kg，更特别是5mg/kg至250mg/kg，最特别是10mg/kg至100mg/kg。如果需要，可以以给定的时间间隔多次施用制备为单位剂型的制剂。

当本公开的组合物是用于口服或注射的组合物时，根据本发明的组合物可以还包含常用的合适的载体、赋形剂或稀释剂，可以按照常规方法制成口服制剂，例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等，外用制剂、栓剂或用于注射的无菌溶液。

组合物可以单独或与其他治疗剂组合施用，作为用于预防或治疗的药物。当组合施用时，它可以与其他治疗剂顺序或同时施用。

本公开的组合物中可以包含的载体、赋形剂或稀释剂可以包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。

通常，使用常用的稀释剂或赋形剂例如填充剂、增量剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等制备制剂。用于口服的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且该固体制剂通过将本公开的组合物与至少一种赋形剂例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合来制备。除了简单的赋形剂外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁或滑石。液体制剂包括混悬剂、内服的液体、乳剂、糖浆等。除了常用的简单稀释剂例如水或液体石蜡外，制剂还可以包含各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂。作为非水溶液或混悬剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、可注射酯如油酸乙酯等。作为栓剂的基质，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂精黄油、甘油明胶等。

当将组合物配制成用于肠胃外施用的液体、霜、露、凝胶或气雾剂时，可以包含常用的合适添加剂，例如防腐剂、帮助药物渗透的溶剂、在软膏或乳膏的情况下的软化剂等。用于局部施用的制剂还可以包含常用的载体，例如乳霜或软膏基质或用于洗剂的乙醇或油醇。载体可以占制剂的约1％至98％，更一般地，占制剂的约80％。

根据本公开的组合物可以被制备成可以直接施加或喷雾到皮肤或创面上的制剂，例如乳膏、露、软膏、气雾剂、凝胶或面膜。适合在每种制剂中混合的成分和制备该制剂的方法是本领域众所周知的。当制备制剂时，本领域技术人员可以适当地选择用于制备外用普通制剂的成分。

对于软膏、乳膏、凝胶、露等，此类成分包括，例如白凡士林、黄凡士林、羊毛脂、白蜂蜡、鲸蜡醇、硬脂醇、硬脂酸、氢化油、胶态烃、聚乙二醇、液体石蜡、角鲨烷等的基质，例如油酸、肉豆蔻酸异丙酯、三异辛酸甘油酯、克罗米通、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯、月桂酸己酯、脂肪酸、脂肪酸酯、脂族醇、植物油等的溶剂或增溶剂，例如生育酚衍生物、L-抗坏血酸、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚等的抗氧化剂，例如对羟基苯甲酸酯等的防腐剂，例如甘油、丙二醇、透明质酸钠等的保湿剂，例如聚氧乙烯衍生物、甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、卵磷脂等的表面活性剂，或例如羧乙烯基聚合物、黄原胶、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等的增稠剂。

对于气雾剂制剂，除了用于制备软膏、乳膏、凝胶、混悬剂、乳液、液体、洗剂等的成分外，可以混合稳定剂、缓冲剂、调味剂、悬浮剂、乳化剂、芳香族化合物、防腐剂、增溶剂或其他合适的添加剂。

具体地，也可以将组合物制备成包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

在乳液制剂中，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。乳液制剂的组成可以通过根据常规方法构建的拟三元相图确定。具体地，可以通过在特定范围内以不同的混合重量比将油(聚乙氧基化蓖麻油(

具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂已获得美国食品和药物管理局的批准，可用于对人的静脉注射。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

在本公开的一个示例性实施方案中，表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐油酸酯(吐温80)，聚乙二醇是PEG 400，其是两亲的、水可分散的和非离子的。因此，可以提供针对难溶性活性成分(活性成分包括一种或多于一种化学式1至化学式4的靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物)优化的乳液制剂。

油可以是选自聚乙氧基化蓖麻油(

组合物可以还包含环糊精以更好地溶解。基于组合物中存在的100重量份的活性成分，环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

已经证实，乳液制剂是一种稳定的制剂，在4℃至25℃下3个月内Wnt活性和在蒸馏水中的溶解度均未发生变化，能够长时间保持活性成分的活性并有效地改善了体内吸收。

一种制备用于预防或治疗创面的乳液组合物的方法，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分，包括：

1)通过混合油、表面活性剂和聚乙二醇制备第一溶液的步骤；

2)制备包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分的第二溶液的步骤；和

3)通过将第一溶液与第二溶液混合来制备乳液组合物的步骤。

第二溶液可以还包含臭檀吴萸提取物和选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种。

第二溶液可以还包含环糊精以更好地溶解。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白以增加药物的生物利用度的物质。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂已获得美国食品和药物管理局的批准，可用于对人的静脉注射。

油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

在加水后用显微镜观察本公开的乳液组合物时，本公开的乳液完全溶解并且形成溶液状态的乳液制剂(F8)。作为观察本公开的乳液的稳定性的结果，证实形成平均直径为20nm至1500nm，特别是30nm至50nm的纳米级球形液滴，并且它们显示出窄的尺寸分布。

另外，证实了本公开的乳液长时间保持稳定性，而在室温下3个月内活性成分的溶解度或活性没有变化。另外，当口服或局部施用时，本公开的乳液制剂可以提供有效改善的吸收。

本公开还提供用于非人类动物的用于预防或减轻创面的药物组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

本公开还提供了一种通过对人类或非人类动物透皮施用所述组合物来治疗创面的方法。

本公开还提供了一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物在制备药物或用于动物的治疗创面的药物中的新用途。

由于根据本公开的组合物表现出优异的治疗创面和减少疤痕的效果，能够修复细胞损伤并且能够治疗创面、修复皮肤和减少疤痕，因此可以有效地用于治疗和预防由例如灼伤、溃疡、损伤、外科手术、分娩、慢性创面、糖尿病创面或皮炎引起的皮肤创面。

在本公开中，“糖尿病创面”是指在糖尿病患者中出现的慢性创面。慢性创面是指由于糖尿病引起的周围血管损伤导致的血液循环不良而导致其愈合被延迟的创面。

具体而言，糖尿病创面可能是由糖尿病状态的皮肤的表皮、真皮或皮下组织的灼伤、溃疡、损伤、外科手术、整形手术、植入、分娩、慢性创面或皮炎引起的。更具体地说，它可能是由选自糖尿病足溃疡、糖尿病血管病和糖尿病足感染的一种或多于一种引起的。本公开的组合物可以应用于作为医疗装置的贴剂。

除一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分外，“药物”、“兽用组合物”或“用于动物的药物”还可包含通常用于制备药物组合物的合适的载体、赋形剂或稀释剂等。

“载体”是使递送到细胞或组织容易的化合物。“稀释剂”是溶解于水中的化合物，其中目标化合物溶解于其中，从而稳定了目标化合物的生物活性形式。

载体、赋形剂或稀释剂可以是例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等，但不特别限于此。

药物、兽用组合物或用于动物的药物的剂量可以根据待治疗患者或动物的年龄、性别或体重而变化。最重要的是，这将取决于要治疗的对象的状况、要治疗的疾病的具体类别或类型、施用途径或治疗剂的特性。

药物、兽用组合物或用于动物的药物的剂量根据活性成分的体内吸收率、要治疗的患者或对象的排泄率、年龄、体重、性别和状况、要治疗的疾病的严重程度等适当地选择。通常，日剂量可以是0.1mg/kg至1000mg/kg，特别是1mg/kg至500mg/kg，更特别是5mg/kg至250mg/kg，最特别是10mg/kg至100mg/kg。如果需要，可以以给定的时间间隔多次施用制备为单位剂型的制剂。

药物、兽用组合物或用于动物的药物可以单独或与其他治疗剂组合施用，作为用于预防或治疗的药物。当组合施用时，它可以与其他治疗剂顺序或同时施用。

用于动物的药物、兽用组合物或药物可以按照常规方法制备成口服制剂，例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、锭剂、混悬剂、乳液、糖浆剂、气雾剂等。可以使用常用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、增量剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等来制备制剂。

对于药物、兽用组合物或用于动物的药物的制剂，可以参考上述药物组合物的制剂。

治疗创面的方法可以包括将组合物肠胃外施用给人类或非人类动物，特别是哺乳动物。例如，可将组合物经皮或透皮施用于在正常或糖尿病状态下诱发创面的待治疗对象。

对于治疗的施用剂量、施用方法和施用时间，可以参考上述药物组合物、药物、兽用组合物或用于动物的药物的施用剂量、施用方法和施用时间。

在另一方面，本公开涉及用于预防或减轻创面的化妆品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

本公开的靛玉红衍生物是即使长时间处理细胞也几乎没有细胞毒性的物质。因为它在再生细胞、愈合创面和产生胶原蛋白方面表现出优异的效果，所以可以通过预防或治疗创面来提供美容效果。另外，已经证实，由于靛玉红衍生物对于糖尿病状态下诱导的创面具有再生细胞、愈合创面和产生胶原蛋白方面优异的作用，因此可以通过预防或治疗糖尿病创面提供美容效果。

有各种靛玉红衍生物，例如5-甲氧基靛玉红-3'-肟、5-甲氧基靛玉红-3'-甲肟、靛玉红-3'-肟、6-溴代靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红、5,6-二氯靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红3'-甲肟、5,6-二氯靛玉红3'-丙基肟、6-氯-5-硝基靛玉红、6-氯-5-硝基靛玉红-3'-肟、6-氯靛玉红-3'-甲肟、5-氯靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-肟、5-溴靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-乙肟、5,6-二氯靛玉红-3'-丙肟、6-氯靛玉红-3'-苄基肟等。其中，已证实选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物具有最优异的治疗和愈合创面的作用(测试例1)。

同时，通过体外实验证实，与其他现有的靛玉红衍生物相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物进行的治疗提高了创面闭合率(％)，提供了更好的创面愈合效果(1.5倍至2.0倍)，并使创面愈合最快。

另外，当将一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物施用于小鼠的创面时，确定小鼠的急性创面与阳性对照组EGF相当或可以更快地上皮重新形成，并且增加了胶原组织的各种创面愈合标志物。特别地，化学式1的靛玉红衍生物(A3334)显示出比阳性对照组EGF稍好的创面修复效果，但被证实在“减少疤痕”方面更有效，因为皮肤的表皮层被均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等。

并且，已经证实，与阳性对照组EGF相比，化学式2的靛玉红衍生物(A3051)在相同的时间段内表现出的创面修复效果好2倍至6倍，表明它可以更快地修复创面。另外，证实了与用阳性对照组EGF治疗时相比，在创面愈合过程中表皮层被干净而均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等，这表明与EGF相比，它在减少疤痕形成方面非常有效。

就是说，已经证实，与现有的创面愈合剂或靛玉红衍生物不同，选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物除了愈合创面，还具有通过诱导皮肤的表皮层的均匀修复来减少疤痕形成的出人意料的显著效果。

在糖尿病状态下，由于多种原因而导致例如溃疡等创面出现时，创面愈合显著延迟，这通过后述的测试例进行了证明。证实了与现有的Wnt信号传导途径活化剂VPA相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物的处理提供了治疗、减轻或预防糖尿病创面的优异效果。

因此，选自本公开的化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物可以用作具有治疗包括糖尿病创面在内的创面的作用的化妆品组合物。

根据本公开的组合物使细胞运动性最大化并改善角质形成细胞和成纤维细胞中胶原蛋白的产生和积累，它们在正常状态或糖尿病状态下诱导的创面愈合中起重要作用。

在该组合物中，基于组合物的总重量，靛玉红衍生物的含量可以为0.001-80重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得充分的预防或治愈创面的效果。并且，如果其超过80重量％，则可能引起皮肤刺激。

本公开的组合物可以是还含有臭檀吴萸提取物的混合物，并且可以是还含有选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。

特定比例的臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合物显示出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，与单独用一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物处理时相比，当用靛玉红衍生物和提取物一起处理时，创面闭合率(％)提高，创面愈合效果提高到超过简单的协同作用(2倍)。

特别地，当用混合物处理时，与单独用臭檀吴萸提取物处理时或单独用靛蓝素衍生物处理时相比，可获得约1.5倍至2.0倍的更好结果。换言之，与单独使用臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物时相比，本公开的用于治疗创面的组合物提供了显著的效果，这超出了预期从各个组合物所得效果的简单总和。

此外，还通过动物实验证实，与臭檀吴萸提取物或单独的靛玉红衍生物相比，与靛玉红衍生物的混合物具有显著的效果。

提取物可以从作为原料的臭檀吴萸的茎、叶、果实、其粉碎产物或其混合物制备。原料可以使用选自水、C

本公开的组合物可以是还包含选自香草酸甲酯，橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。低分子量化合物和靛玉红衍生物以特定比例的混合物表现出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，当用靛玉红衍生物以及选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种化合物进行处理时，与仅用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物治疗相比，创面闭合率(％)得到改善，创面的愈合效果提高到超过简单的协同效果(1.4倍至2.3倍)，创面愈合快了6小时。换言之，通过实验证实，最优选使用靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种的组合。

如下所述的测试实施例所证明的，选自香草酸甲酯，橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物与一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物在18小时内恢复了细胞运动性。特别地，香草酸甲酯和靛玉红衍生物(A3051)的混合物显示出比未处理的对照组好5倍的效果。

选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物是包括在臭檀吴萸提取物、北枳椇(Hovenia dulcis)提取物、柑橘提取物、扁蓄(Polygonumaviculare)提取物、蓼提取物和鱼腥草(Houttuynia cordata)提取物中的成分。提取物没有特别限制，只要其是从一种或多于一种选自臭檀吴萸、北枳椇、柑橘、扁蓄、蓼和鱼腥草的茎、叶、果实、其粉碎产物或混合物作为原料提取的即可。具体地，原料可以使用选自水、C

香草酸甲酯可能主要存在于北枳椇提取物中，橙皮苷可能主要存在于臭檀吴萸提取物和柑橘提取物中，而槲皮苷可能主要存在于蓼提取物、扁蓄提取物和鱼腥草提取物中。

当组合物还包含臭檀吴萸提取物时，对一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物与提取物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于干重，基于10重量份的提取物，可以混合5重量份至15重量份的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

并且，当组合物还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷一种或多于一种低分子量化合物时，对选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于1摩尔的低分子量化合物可以混合1mol至20mol的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

臭檀吴萸提取物或低分子量化合物在组合物中的浓度没有特别限制，只要是本领域中通常的一种即可。基于组合物的总重量，臭檀吴萸提取物或低分子量化合物的含量可以为以干重计0.001重量％至5重量％或以湿重计0.001重量％至50重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得足够的创面愈合效果。并且，如果其超过5重量％(干重)或50重量％(湿重)，则可能引起皮肤刺激。

根据本公开的化妆品组合物可以还包含能够通过减轻创面来增强美容效果的添加剂，尽管不特别限于此。

根据本公开的化妆品组合物可以是还含有臭檀吴萸提取物的混合物，可以是还含有选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。

根据本公开的化妆品组合物可以制备成淡香水、精华、露、乳霜、面膜、凝胶、散粉、粉底或洁肤液制剂。例如，它可以制备成淡香水、滋养乳液、滋养精华液、按摩霜、美容沐浴添加剂、润肤露、身体乳、沐浴油、婴儿油、婴儿爽身粉、沐浴露、淋浴霜、防晒乳、防晒霜、晒斑膏(suntan cream)、护肤露、护肤霜、抗紫外线化妆品、卸妆乳、美容脱毛剂、面部/身体乳、面部/身体霜、美白霜、护手霜、护发乳、美容霜、茉莉油、沐浴皂、液体皂、美容皂、洗发水、洗手液、非医疗用的药用肥皂、肥皂膏、洗面奶、身体洁肤露、头皮清洁剂、护发素、香皂、牙齿美白凝胶、牙膏等。为此，本公开的组合物可以还包含通常用于制备化妆品组合物的溶剂或合适的载体、赋形剂或稀释剂。

可以还添加到本公开的化妆品组合物中的溶剂没有特别限制。例如，可以使用水、盐水、DMSO或其组合。载体、赋形剂或稀释剂可以包括纯净水、油、蜡、脂肪酸、脂肪酸醇、脂肪酸酯、表面活性剂、湿润剂、增稠剂、抗氧化剂、黏度稳定剂、螯合剂、缓冲剂、低级醇等，但不限于此。另外，如果需要，可以包括皮肤增白剂、保湿剂、维生素、抗UV剂、香料、染料、抗生素、抗菌剂或抗真菌剂。

油可以是氢化植物油、蓖麻油、棉籽油、橄榄油、棕榈仁油、霍霍巴油或鳄梨油，蜡可以是蜂蜡、鲸蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、褐煤蜡、地蜡、液体石蜡或羊毛脂。

脂肪酸可以是硬脂酸、亚油酸、亚麻酸或油酸，脂肪酸醇可以是鲸蜡醇、辛基十二烷醇、油醇、泛醇、羊毛脂醇、硬脂醇或十六烷醇，脂肪酸酯可以是肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯或硬脂酸丁酯。并且，表面活性剂可以是本领域已知的阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂。具体地，可以使用源自天然物质的表面活性剂。

另外，化妆品工业中广泛已知的各种保湿剂、增稠剂、抗氧化剂等也可以以本领域已知的量使用。

具体地，本公开的化妆品组合物可以是还包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

在乳液制剂中，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。乳液制剂的组成可以通过根据常规方法构建的拟三元相图确定。具体地，可以通过在特定范围内以不同的混合重量比将油(聚乙氧基化蓖麻油(

具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂是已获得美国食品和药物管理局批准的稳定物质，可用于对人的静脉注射。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

在本公开的一个示例性实施方案中，表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐油酸酯(吐温80)，聚乙二醇是PEG 400，其是两亲的、水可分散的和非离子的。因此，可以提供针对难溶性活性成分(活性成分包括一种或多于一种化学式1至化学式4的靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物)优化的乳液制剂。

油可以是选自聚乙氧基化蓖麻油(

组合物可以还包含环糊精以更好地溶解。基于组合物中存在的100重量份的活性成分，环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

已经证实，乳液制剂是一种稳定的制剂，在4℃至25℃下3个月内Wnt活性和在蒸馏水中的溶解度均未发生变化，能够长时间保持活性成分的活性并有效地改善了体内吸收。

一种制备用于预防或减轻创面的乳液组合物的方法，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分，包括：

1)通过混合油、表面活性剂和聚乙二醇制备第一溶液的步骤；

2)制备包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分的第二溶液的步骤；和

3)通过将第一溶液与第二溶液混合来制备乳液组合物的步骤。

第二溶液可以还包含臭檀吴萸提取物和选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种。

第二溶液可以还包含环糊精以更好地溶解。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂是已获得美国食品和药物管理局批准的稳定物质，可用于对人的静脉注射。

油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

在加水后用显微镜观察本公开的乳液组合物时，本公开的乳液完全溶解并且形成溶液状态的乳液制剂(F8)。作为观察本公开的乳液的稳定性的结果，证实形成平均直径为20nm至1500nm，特别是30nm至50nm的纳米级球形液滴，并且它们显示出窄的尺寸分布。

另外，证实了本公开的乳液长时间保持稳定性，而在室温下3个月内活性成分的溶解度或活性没有变化。另外，当口服或局部施用时，本公开的乳液制剂可以提供有效改善的吸收。

在另一方面，本公开涉及用于预防或减轻创面的食品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物是即使长时间处理细胞也几乎没有细胞毒性的物质。由于其在细胞再生、创面愈合和产生胶原蛋白方面显示出优异的效果，因此可以广泛用于具有预防或治疗创面功能的药物、食品、化妆品等。另外，已经证实，由于选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物对糖尿病状态下诱导的创面具有优异的细胞再生、愈合创面和产生胶原蛋白作用，因此它其可以广泛用于具有预防或治疗糖尿病创面功能的药物、食品、化妆品等。

有各种靛玉红衍生物，例如5-甲氧基靛玉红-3'-肟、5-甲氧基靛玉红-3'-甲肟、靛玉红-3'-肟、6-溴代靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红、5,6-二氯靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红-3'-甲肟、5,6-二氯靛玉红-3'-丙基肟、6-氯-5-硝基靛玉红、6-氯-5-硝基靛玉红-3'-肟、6-氯靛玉红-3'-甲肟、5-氯靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-肟、5-溴靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-乙肟、5,6-二氯靛玉红-3'-丙肟、6-氯靛玉红-3'-苄基肟等。其中，已证实选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物具有最优异的治疗和愈合创面的作用。

同时，通过体外实验证实，与其他现有的靛玉红衍生物相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物进行的治疗提高了创面闭合率(％)，提供了更好的创面愈合效果(1.5倍至2.0倍)，并使创面愈合最快。

另外，当将一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物施用于小鼠的创面时，可以肯定的是，小鼠的急性创面与阳性对照组EGF相当或可以更快地上皮重新形成，并且增加了胶原组织的各种创面愈合标志物。特别地，化学式1的靛玉红衍生物(A3334)显示出比阳性对照组EGF稍好的创面修复效果，但被证实在减少疤痕方面更有效，因为皮肤的表皮层被均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等。

并且，已经证实，与阳性对照组EGF相比，化学式2的靛玉红衍生物(A3051)在相同的时间段内表现出的创面修复效果好2倍至6倍，表明它可以更快地修复创面。另外，证实了与用阳性对照组EGF处理时相比，在创面愈合过程中表皮层被干净而均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等，这表明与EGF相比，它在减少疤痕形成方面非常有效。

就是说，已经证实，与现有的创面愈合剂或靛玉红衍生物不同，选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物除了愈合创面，还具有通过诱导皮肤的表皮层的均匀修复来减少疤痕形成的出人意料的显著效果。

在糖尿病状态下，由于多种原因而导致例如溃疡等创面出现时，创面愈合显著延迟，这通过后述的测试例进行了证明。证实了与现有的Wnt信号传导途径活化剂VPA相比，用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物的治疗提供了治疗、减轻或预防糖尿病创面的优异效果。

根据本公开的组合物使细胞运动性最大化并改善角质形成细胞和成纤维细胞中胶原蛋白的产生和积累，它们在正常状态或糖尿病状态下诱导的创面愈合中起重要作用。

本公开的组合物可以是还含有臭檀吴萸提取物的混合物，并且可以是还含有选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。

特定比例的臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合物显示出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，与单独用一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物处理时相比，当用靛玉红衍生物和提取物一起处理时，创面闭合率(％)提高，创面愈合效果提高到超过简单的协同作用(2倍)。

特别地，当用混合物处理时，与单独用臭檀吴萸提取物处理时或单独用靛玉红衍生物处理时相比，可获得约1.5倍至2.0倍的更好结果。换言之，与单独使用臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物时相比，本公开的用于治疗创面的组合物提供了显著的效果，这超出了预期从各个组合物所得效果的简单总和。

此外，还通过动物实验证实，与单独的臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物相比，与靛玉红衍生物的混合物具有显著的效果。

提取物可以从作为原料的臭檀吴萸的茎、叶、果实、其粉碎产物或其混合物制备。原料可以使用选自水、C

本公开的组合物可以是还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。低分子量化合物和靛玉红衍生物以特定比例的混合物表现出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，当用靛玉红衍生物以及选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种化合物进行处理时，与仅用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物治疗相比，创面闭合率(％)得到改善，创面的愈合效果提高到超过简单的协同效果(1.4倍至2.3倍)，创面愈合快了6小时。换言之，通过实验证实，最优选使用靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种的组合。

如下所述的测试实施例所示，选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物与一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物在18小时内恢复了细胞运动性。特别地，香草酸甲酯和靛玉红衍生物(A3051)的混合物显示出比未处理的对照组好5倍的效果。

选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物是包括在臭檀吴萸提取物、北枳椇(Hovenia dulcis)提取物、柑橘提取物、扁蓄(Polygonumaviculare)提取物、蓼提取物和鱼腥草(Houttuynia cordata)提取物中的成分。提取物没有特别限制，只要其是从一种或多于一种选自臭檀吴萸、北枳椇、柑橘、扁蓄、蓼和鱼腥草的茎、叶、果实、其粉碎产物或混合物作为原料提取的即可。具体地，原料可以使用选自水、C

香草酸甲酯可能主要存在于北枳椇提取物中，橙皮苷可能主要存在于臭檀吴萸提取物和柑橘提取物中，而槲皮苷可能主要存在于蓼提取物、扁蓄提取物和鱼腥草提取物中。

当组合物还包含臭檀吴萸提取物时，对一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物与提取物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于干重，基于10重量份的提取物，可以混合5重量份至15重量份的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

并且，当组合物还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷一种或多于一种低分子量化合物时，对选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于1摩尔的低分子量化合物可以混合1mol至20mol的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

臭檀吴萸提取物或低分子量化合物在组合物中的浓度没有特别限制，只要是本领域中通常的一种即可。基于组合物的总重量，臭檀吴萸提取物或低分子量化合物的含量可以为以干重计0.001重量％至5重量％或以湿重计0.001重量％至50重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得足够的创面愈合效果。并且，如果其超过5重量％(干重)或50重量％(湿重)，则可能引起皮肤刺激。

本公开的食品组合物可以制备成各种食品，例如饮料、口香糖、茶、维生素复合物、粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖果、年糕、面包等。由于本公开的食品组合物是由毒性低、副作用小的植物提取物制备的，因此可以长期安全地用于预防目的。

当本公开的靛玉红衍生物包含在食品组合物中时，其可以基于总重量的0.001重量％至80重量％的比例添加。

当将食品组合物制成饮料时，没有特别限制。像普通饮料一样，它可以还包含其他成分，例如各种调味剂、天然碳水化合物等。天然碳水化合物可以包括例如葡萄糖等的单糖，例如果糖等的二糖，例如蔗糖等的多糖，例如糊精、环糊精等的普通糖，例如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇等。调味剂可以包括天然调味剂(甜蛋白、甜叶菊提取物(例如甜菊双糖苷A、甘草皂苷等)、合成调味剂(糖精、阿斯巴甜等)等。

另外，本公开的食品组合物可以包含各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、调味剂(如合成调味剂、天然调味剂等)、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。

这些成分可以单独使用或组合使用。尽管添加剂的比例在本公开中不是重要因素，但是基于100重量份的本公开的食品组合物，其通常选自约0.1重量份至50重量份。

具体地，食品组合物可以是还包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

在乳液制剂中，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。乳液制剂的组成可以通过根据常规方法构建的拟三元相图确定。具体地，可以通过在特定范围内以不同的混合重量比将油(聚乙氧基化蓖麻油(

具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂是已获得美国食品和药物管理局批准的稳定物质，可用于对人的静脉注射。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

在本公开的一个示例性实施方案中，表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐油酸酯(吐温80)，聚乙二醇是PEG 400，其是两亲的、水可分散的和非离子的。因此，可以提供针对难溶性活性成分(活性成分包括靛玉红衍生物、臭檀吴萸提取物、或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种)优化的乳液制剂。

油可以是选自聚乙氧基化蓖麻油(

组合物可以还包含环糊精以更好地溶解。基于组合物中存在的100重量份的活性成分，环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

已经证实，乳液制剂是一种稳定的制剂，在4℃至25℃下3个月内Wnt活性和在蒸馏水中的溶解度均未发生变化，能够长时间保持活性成分的活性并有效地改善了体内吸收。

另外，本公开提供一种制备用于预防或减轻创面的乳状食品组合物的方法，其包括：

1)通过混合油、表面活性剂和聚乙二醇制备第一溶液的步骤；

2)制备包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分的第二溶液的步骤；和

3)通过将第一溶液与第二溶液混合来制备乳液组合物的步骤。

第二溶液可以还包含臭檀吴萸提取物和选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种。

第二溶液可以还包含环糊精以更好地溶解。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂是已获得美国食品和药物管理局批准的稳定物质，可用于对人的静脉注射。

油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

在加水后用显微镜观察本公开的乳液组合物时，本公开的乳液完全溶解并且形成溶液状态的乳液制剂(F8)。作为观察本公开的乳液的稳定性的结果，证实形成平均直径为20nm至1500nm，特别是30nm至50nm的纳米级球形液滴，并且它们显示出窄的尺寸分布。

另外，证实了本公开的乳液长时间保持稳定性，而在室温下3个月内活性成分的溶解度或活性没有变化。另外，当口服或局部施用时，本公开的乳液制剂可以提供有效改善的吸收。

从下述实施例可以证实，由于选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物表现出显著优异的皮肤再生和促进胶原蛋白合成的作用，因此它可用作药物、化妆品、保健食品等的活性成分，以增强皮肤再生和皮肤弹性。

另一方面，本发明涉及用于增强皮肤再生和皮肤弹性的组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。

[化学式1]

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

本公开的靛玉红衍生物是即使长时间处理细胞也几乎没有细胞毒性的物质。由于它不仅在正常状态下而且在糖尿病状态下都具有在细胞再生、创面愈合和产生胶原蛋白方面表现出优异的作用，所以可以广泛用于具有皮肤再生功能和增强皮肤弹性的药物、食品、化妆品等。

在本公开中，“皮肤再生”是指减轻、去除，缓解或改善皮肤损伤，“增强皮肤弹性”是指维持和增强与皮肤弹性有关的功能。皮肤弹性主要受皮肤真皮层中胶原蛋白的影响。胶原蛋白的生物合成受皮肤内部和外部因素的影响。具体而言，由于自然衰老导致皮肤细胞的细胞活性降低，胶原蛋白的生物合成降低。此外，由于外部因素例如过度暴露于紫外线、皮肤损伤、压力等而产生的活性氧可能通过与蛋白质的巯基(-SH)反应而抑制酶的活性或增加胶原降解酶的表达，从而增加皮肤皱纹并降低皮肤弹性。这导致皮肤老化。

有各种靛玉红衍生物，例如5-甲氧基靛玉红-3'-肟、5-甲氧基靛玉红-3'-甲肟、靛玉红-3'-肟、6-溴代靛玉红-3'-肟、5,6-二氯靛玉红-、5,6-二氯靛玉红3'-肟、5,6-二氯靛玉红3'-甲肟、5,6-二氯靛玉红3'-丙基肟、6-氯-5-硝基靛玉红、6-氯-5-硝基靛玉红-3'-肟、6-氯靛玉红-3'-甲肟、5-氯靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-肟、5-溴靛玉红-3'-甲肟、5-溴靛玉红-3'-乙肟、5,6-二氯靛玉红-3'-丙肟、6-氯靛玉红-3'-苄基肟等。其中，已证实选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物具有最优异的治疗和愈合创面的作用。

当将一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物施用于小鼠的创面时，可以肯定的是，小鼠的急性创面与阳性对照组EGF相当或者可以更快地上皮重新形成，并且增加了各种胶原蛋白的活性。证实了根据本公开的组合物具有最大化细胞运动性并改善胶原蛋白在角质形成细胞和成纤维细胞中的产生和积累的作用，其在创面愈合中起重要作用。因此，根据本发明的组合物可以用作药物、化妆品、保健食品等的活性成分，以增强皮肤再生和皮肤弹性。

已经证实，当将一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物施用于糖尿病动物模型的创面时，创面迅速发生上皮重新形成，胶原活性增强并且角质形成细胞和成纤维细胞的细胞运动性最大化。与现有的Wnt信号通路激活剂VPA相比，在糖尿病状态下增强皮肤再生和皮肤弹性的效果明显更好。

本公开中使用的靛玉红衍生物不仅可以以游离形式提供，而且可以以其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、药学上可接受的多晶型物或药学上可接受的前药的形式提供。靛玉红衍生物的盐没有特别限制，只要它可以混合在药物或化妆品组合物中即可。它包括无机盐或有机盐，并且可以是酸式盐或碱式盐。特别地，阳离子盐可以是碱金属盐，例如钠盐、钾盐等，碱土金属盐，例如钙盐、镁盐、钡盐等，碱性氨基酸盐，例如精氨酸、赖氨酸等；铵盐，例如铵盐、三环己基铵盐等，或链烷醇胺盐，例如单乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、单异丙醇胺盐、二异丙醇胺盐、三异丙醇胺盐等。盐可以具体地为碱金属盐，更具体地为四钠盐。

在该组合物中，基于组合物的总重量，靛玉红衍生物的含量可以为0.001-80重量％。如果含量小于0.01重量％，则可能无法获得充分的预防或治愈创面的效果。并且，如果其超过80重量％，则可能引起皮肤刺激。

本公开的组合物可以是还含有臭檀吴萸提取物的混合物，并且可以是还含有选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种低分子量化合物的混合物。

特定比例的臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合物显示出优异的创面愈合效果。具体而言，通过体外实验证实，与单独用一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物处理时相比，当用靛玉红衍生物和提取物一起处理时，创面闭合率(％)提高，创面愈合效果提高到超过简单的协同作用(2倍)。

特别地，当用混合物处理时，与单独用臭檀吴萸提取物处理时或单独用靛蓝素衍生物处理时相比，可获得约1.5倍至2.0倍的更好结果。

此外，还通过动物实验证实，与单独的臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物相比，与靛玉红衍生物的混合物具有显著的效果。

提取物可以从作为原料的臭檀吴萸的茎、叶、果实、其粉碎产物或其混合物制备。原料可以使用选自水、C

当组合物还包含臭檀吴萸提取物时，对一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物与提取物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于干重基于10重量份的提取物，可以混合5重量份至15重量份的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

本公开的组合物可以是还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物。香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷与靛玉红衍生物以特定比例的混合物显示出优异的增强皮肤再生和皮肤弹性的作用。具体而言，通过体外实验证实，当用靛玉红衍生物以及选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种化合物进行处理时，与仅用选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物治疗相比，创面闭合率(％)得到改善，创面的愈合效果提高到超过简单的协同效果(1.4倍至2.3倍)，创面愈合快了6小时。换言之，通过实验证实，最优选使用靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷中的一种或多于一种的组合。

如下所述的测试实施例所示，选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物与一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物在18小时内恢复了细胞运动性。特别地，香草酸甲酯和靛玉红衍生物(A3051)的混合物显示出比未处理的对照组好5倍的效果。

选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物是包括在臭檀吴萸提取物、北枳椇(Hovenia dulcis)提取物、柑橘提取物、扁蓄(Polygonumaviculare)提取物、蓼提取物和鱼腥草(Houttuynia cordata)提取物中的成分。提取物没有特别限制，只要其是从一种或多于一种选自臭檀吴萸、北枳椇、柑橘、扁蓄、蓼和鱼腥草的茎、叶、果实、其粉碎产物或混合物作为原料提取的即可。具体地，原料可以使用选自水、C

香草酸甲酯可能主要存在于北枳椇提取物中，橙皮苷可能主要存在于臭檀吴萸提取物和柑橘提取物中，而槲皮苷可能主要存在于蓼提取物、扁蓄提取物和鱼腥草提取物中。

当组合物还包含选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物时，对选自化学式1至化学式4的一种或多于一种靛玉红衍生物与选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种低分子量化合物的混合重量比没有特别限制。具体地，基于1摩尔的低分子量化合物可以混合1mol至20mol的靛玉红衍生物。在此范围之外，创面愈合效果的提高可能不明显。

臭檀吴萸提取物或低分子量化合物在组合物中的浓度没有特别限制，只要是本领域中通常的一种即可。基于组合物的总重量，臭檀吴萸提取物或低分子量化合物的含量可以为以干重计0.001重量％至5重量％或以湿重计0.001重量％至50重量％。如果含量小于0.001重量％，则可能无法获得足够的创面愈合效果。并且，如果其超过5重量％(干重)或50重量％(湿重)，则可能引起皮肤刺激。

根据本公开的化妆品组合物可以还包含能够通过减轻创面来增强美容效果的添加剂，但不特别限于此。

根据本公开包含靛玉红衍生物作为活性成分的化妆品组合物可以被制备成淡香水、精华、露、乳霜、面膜、凝胶、散粉、粉底和洁肤液制剂。例如，它可以制备成淡香水、滋养乳液、滋养精华液、按摩霜、美容沐浴添加剂、润肤露、身体乳、沐浴油、婴儿油、婴儿爽身粉、沐浴露、淋浴霜、防晒乳、防晒霜、晒斑霜、护肤露、护肤霜、抗紫外线化妆品、卸妆乳、美容脱毛剂、面部/身体乳、面部/身体霜、美白霜、护手霜、护发乳、美容霜、茉莉油、沐浴皂、液体皂、美容皂、洗发水、洗手液、非医疗用的药用肥皂、肥皂膏、洗面奶、身体洁肤露、头皮清洁剂、护发素、香皂、牙齿美白凝胶、牙膏等。为此，本公开的化妆品组合物可以还包含通常用于制备化妆品组合物的溶剂或合适的载体、赋形剂或稀释剂。

可以还添加到本公开的化妆品组合物中的溶剂没有特别限制。例如，可以使用水、盐水、DMSO或其组合。载体、赋形剂或稀释剂可以包括纯净水、油、蜡、脂肪酸、脂肪酸醇、脂肪酸酯、表面活性剂、湿润剂、增稠剂、抗氧化剂、黏度稳定剂、螯合剂、缓冲剂、低级醇等，但不限于此。另外，如果需要，可以包括皮肤增白剂、保湿剂、维生素、抗UV剂、香料、染料、抗生素、抗菌剂或抗真菌剂。

油可以是氢化植物油、蓖麻油、棉籽油、橄榄油、棕榈仁油、霍霍巴油或鳄梨油，蜡可以是蜂蜡、鲸蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、褐煤蜡、地蜡、液体石蜡或羊毛脂。

脂肪酸可以是硬脂酸、亚油酸、亚麻酸或油酸，脂肪酸醇可以是鲸蜡醇、辛基十二烷醇、油醇、泛醇、羊毛脂醇、硬脂醇或十六烷醇，脂肪酸酯可以是肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯或硬脂酸丁酯。并且，表面活性剂可以是本领域已知的阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂。具体地，可以使用源自天然物质的表面活性剂。

另外，化妆品工业中广泛已知的各种保湿剂、增稠剂、抗氧化剂等也可以以本领域已知的量使用。

本公开的组合物可以直接施用或喷雾到皮肤上。

本公开还涉及用于增强皮肤再生或皮肤弹性的食品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物作为活性成分。食品组合物可以由包含靛玉红衍生物的组合物制成胶囊、片、散、颗粒、液体、丸、薄片、糊、糖浆、凝胶、胶冻或棒。此外，可以通过添加到饮料、茶、香料、口香糖、糖果等中将其制成常规食品。尽管当作为食品食用时，它具有特定的健康益处，但长时间服用药物没有副作用。

食品组合物非常有用，因为它可以日常服用。在食品组合物中，靛玉红衍生物的添加量将根据食品组合物的类型在不负面影响食品味道的范围内变化。通常，食品组合物中靛玉红衍生物的含量为0.001重量％至50重量％，特别是0.1重量％至20重量％。对于胶囊片、散、颗粒、液体、丸、薄片、糊、糖浆、凝胶、胶冻或棒形式的功能性保健食品，添加量通常为0.1重量％至100重量％，特别是0.5重量％至80重量％。

食品组合物除了包含作为活性成分的靛玉红衍生物以外，还可以含有在制备食品时通常添加的成分。实例包括蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养物、佐料和调味剂。碳水化合物的实例包括单糖，例如葡萄糖、果糖等；二糖，例如麦芽糖、蔗糖，寡糖等；多糖，例如糊精、环糊精等；以及糖醇，例如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇，等等。

调味剂可以是天然调味剂(甜蛋白(thaumatin)或甜叶菊提取物(例如甜菊双糖苷A(rebaudioside A)、甘草皂苷等)或合成调味剂(糖精、阿斯巴甜等)。例如，当将本公开的功能性保健食品制成饮料或饮品时，除本公开的组合物外，它还可包含柠檬酸、果糖糖浆、蔗糖、葡萄糖、乙酸、苹果酸、果汁、植物提取物等。

具体地，本公开的用于增强皮肤再生或皮肤弹性的组合物可以是还包含油、表面活性剂和聚乙二醇的乳液制剂。

在乳液制剂中，油、表面活性剂和聚乙二醇的混合重量比可以为0.3-30∶1∶2-2.5，更特别地为10-20∶1∶2-2.5。乳液制剂的组成可以通过根据常规方法构建的拟三元相图确定。具体地，可以通过在特定范围内以不同的混合重量比将油(聚乙氧基化蓖麻油(

具体地，当组合物是乳液制剂时，以组合物的总重量为基准计，活性成分(靛玉红衍生物，或靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种的混合物)的含量可以为1重量％至20重量％。

表面活性剂是基于吐温的非离子型表面活性剂，并用作增溶剂。它在口服或肠胃外药物制剂中用作乳化剂或湿润剂，并在化妆品或食品中用作添加剂。另外，它被用作抑制p-糖蛋白的物质，以增加药物的生物利用度。基于吐温的表面活性剂包括选自以下的一种或多于一种：聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Tween 60)和聚氧乙烯失水山梨糖醇油酸酯(Tween 80)，但不限于此。基于吐温的表面活性剂是已获得美国食品和药物管理局批准的稳定物质，可用于对人的静脉注射。

聚乙二醇是兼具亲水性和疏水性的两亲性聚合物。分子量小的聚乙二醇是液体，但是随着分子量的增加，它变成固体。聚乙二醇可以是选自PEG150、PEG300、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000、PEG10000、PEG20000、PEG30000和PEG40000中的一种。PEG 300是指分子量为300的聚乙二醇。分子量超过10000的聚乙二醇也称为聚环氧乙烷(PEO)。其中，PEG 400为液态，经常用于各种难溶性药物的增溶。特别是，它是经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于人类口服和肠胃外(静脉注射、皮下注射、肌内注射等)的稳定物质。

在本公开的一个示例性实施方案中，表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐油酸酯(吐温80)，聚乙二醇是PEG 400，其是两亲的、水可分散的和非离子的。因此，可以提供针对难溶性活性成分(活性成分包括靛玉红衍生物、臭檀吴萸提取物、或选自香草酸甲酯、橙皮苷和槲皮苷的一种或多于一种)优化的乳液制剂。

油可以是选自聚乙氧基化蓖麻油(

组合物可以还包含环糊精以更好地溶解。基于组合物中存在的100重量份的活性成分，环糊精的含量可以为100重量份至1000重量份。

已经证实，乳液制剂是一种稳定的制剂，在4℃至25℃下3个月内Wnt活性和在蒸馏水中的溶解度均未发生变化，能够长时间保持活性成分的活性并有效地改善了体内吸收。

发明的实施方式

在下文中，将通过实施例等详细地描述本公开。然而，本公开的范围和内容因实施例而减少或不受实施例等的限制。另外，很明显，即使没有具体描述其实验结果，普通技术人员也可以基于包括以下实施例的本公开的描述而容易地实施本公开。同样明显的是，这样的改变和修改包括在本公开的范围内。

①中间体5'-甲氧基-[2,3'-二吲哚啉亚基]-2',3-二酮的合成

在250mL圆底烧瓶中将5-甲氧基靛红(1000mg，5.65mmol)溶解在甲醇(MeOH；225mL)中，并添加乙酸吲哚酚(989mg，5.65mmol)和碳酸钠(Na

②A3334的合成

在100mL圆底烧瓶中将5'-甲氧基-[2,3'-二吲哚啉亚基]-2',3-二酮(670mg，2.29mmol)溶解在吡啶(27mL)中并加入H

①中间体5',6'-二氯-[2,3'-二吲哚啉亚基]-2',3-二酮的合成

在250mL圆底烧瓶中将5,6-二氯靛红(500mg，2.32mmol)溶解在甲醇(MeOH；92.80mL)中，并添加乙酸吲哚酚(405.48mg，2.315mmol)和碳酸钠(Na

②A3051的合成

在100mL圆底烧瓶中将5',6'-二氯-[2,3'-二吲哚啉亚基]-2,3'二酮(600mg，1.81mmol)溶解在吡啶(151mL)中并加入H

化学式3的5,6-二氯靛玉红-3'-丙肟(A3486)和化学式4的6-氯靛玉红-3'-苄基肟(A3538)以与5,6-二氯靛玉红-3′-甲肟或5-甲氧基靛玉红-3′-肟相同的方式合成，并通过溶解在二甲亚砜(DMSO)中用于实验。

使用购自Sigma Aldrich的香草酸甲酯。

使用购自Sigma Aldrich的橙皮苷。

使用购自Sigma Aldrich的槲皮苷。

使用从韩国植物提取物银行(Korea Plant Extract Bank)购买的臭檀吴萸提取物。

通过以适当的比例混合实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷和实施例2的由化学式2表示的靛玉红衍生物(A3051)来制备混合物。

通过将实施例8的臭檀吴萸提取物(0.1μg/mL、1μg/mL、1mg/mL)与实施例1的化学式1表示的靛玉红衍生物(A3334)(0.1μM、1μM、0.5mM)混合来制备混合物。在相应的测试实施例中描述了臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合比例。

通过将实施例8的臭檀吴萸提取物(0.1μg/mL、1μg/mL、1mg/mL)与实施例2的化学式2表示的靛玉红衍生物(A3051)(0.1μM、1μM、0.5mM)混合来制备混合物。在相应的测试实施例中描述了臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合比例。

通过将实施例8的臭檀吴萸提取物(0.1μg/mL、1μg/mL、1mg/mL)与实施例3的化学式3表示的靛玉红衍生物(A3486)(0.1μM、1μM、0.5mM)混合来制备混合物。在相应的测试实施例中描述了臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物的混合比例。

[化学式5]

[化学式6]

以与实施例2-①相同的方式，制备实施例2的靛玉红衍生物(化学式2)的中间体的化学式6的5,6-二氯靛玉红。

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

在50mL圆底烧瓶中将6-氯-5-硝基靛玉红(A2735；350mg，1.02mmol)溶解在吡啶(7mL)中并加入H

[化学式10]

[化学式11]

[化学式12]

[化学式13]

[化学式14]

[化学式15]

[化学式16]

比较实施例1至实施例4中制备的靛玉红衍生物和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物的细胞运动性。

HaCaT细胞是在创面愈合中起重要作用的人角质形成细胞，使用含10％FBS的DMEM在12孔板中培养24小时。然后，在用含5％FBS的DMEM代替培养基后，使用1000p(蓝色)尖端在细胞中心刮擦。然后，在用浓度为5μg/mL或1μM的实施例1至实施例4和对比例1至对比例12的靛玉红衍生物处理划痕部位后，在24小时后观察到细胞运动性。

图1显示了根据实施例1至实施例4和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物的处理的角质形成细胞的细胞运动性，图2定量显示了根据实施例1至实施例4和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物的处理的角质形成细胞的细胞运动性。对照组(con)是指未用靛玉红衍生物治疗的角质形成细胞。

在图2中，创面闭合率(％)是当用实施例1至实施例4和对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物进行处理在创面愈合中起着重要作用的角质形成细胞的细胞运动性的测量，其通过量化图1的结果获得。

从图1可以看出，对比例1至对比例12中制备的靛玉红衍生物与对照组之间的细胞运动性没有差异。

相反，用实施例1至实施例4中制备的靛玉红衍生物处理的细胞与对照组的细胞相比，其细胞运动性提高了多达1.5倍至2倍。另外，证实了与其他类似的靛玉红衍生物相比，用实施例1至实施例4的靛玉红衍生物、A3334、A3051、A3486和A3538进行处理进行的处理将在创面愈合中起重要作用的角质形成细胞的细胞运动性提高了两倍或两倍以上。

就是说，已经证实，与现有的结构非常相似的靛玉红衍生物相比，实施例1至实施例4的靛玉红衍生物表现出出乎意料的效果，这可以看作是超出预期效果的显著增加的效果。

通过动物实验研究了实施例1和实施例2中制备的靛玉红衍生物、对比例例1(IO)的靛玉红衍生物和作为阳性对照组的已知作为现有创面愈合剂的EGF的创面愈合促进作用。

除去进入休息期的7周龄C3H小鼠背部的毛发，并且在该毛发去除区域上形成1.5×1.5cm

通过浸入4％多聚甲醛中固定每只实验小鼠的组织，将其包埋在石蜡中，然后切成4μm的厚度。将切成薄片的组织去石蜡，再水化，然后用马松三色和天狼星红染色，以评估胶原蛋白的合成程度。为进行马松三色染色，将载玻片放在Weigert的苏木精铁溶液中10分钟，然后在比布里希猩红-酸性品红和苯胺蓝中分别放置5分钟。为进行天狼星红染色，将载玻片放在Weigert溶液中8分钟，然后在天狼星红中放置1小时。

图3显示了在不同时间(第0天和第14天)用根据本公开的实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠急性创面组织的成像和染色结果。用本发明的实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)用马松三色和天狼星红染色的小鼠急性创面组织的染色结果示于图3的底部(胶原染色)。

图4显示了在不同时间(第1天、第3天、第5天、第9天和第12天)用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)治疗的小鼠急性创面组织的上皮重新形成程度的定量结果。

图5显示了在第14天测量用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物、对比例1的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠的创面尺寸(cm

如图3至图5所示，与对照组、对比例1或阳性对照组相比，证实了用实施例1和实施例2制备的靛玉红衍生物处理的小鼠模型中的急性创面快速愈合。换言之，已经证实，当将实施例1和实施例2的靛玉红衍生物施用于小鼠的创面时，小鼠的急性创面与阳性对照组EGF相当或更快地上皮重新形成，并且增加了胶原组织的各种创面愈合标志物。

特别地，与阳性对照组EGF相比，实施例1的靛玉红衍生物(A3334)显示出稍微优越的创面修复效果，并且还显示出在皮肤表皮层的修复上减少疤痕的效果，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等。

已经证实，与阳性对照组EGF相比，实施例2的靛玉红衍生物(A3051)在相同时间段的创面修复效果好2倍至6倍，表明其可以更快地修复创面。另外，已经证实，与用阳性对照组EGF处理相比，在创面愈合过程中表皮层被干净而均匀地修复，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等，这表明与EGF相比，它在减少疤痕形成方面非常有效。

换言之，已经证实，与现有的创面愈合剂或靛玉红衍生物不同，实施例1和实施例2的靛玉红衍生物除具有创面愈合作用外，还具有通过诱导皮肤表皮层的均匀修复而减少疤痕形成的出乎意料的显著效果。

另外，如图3所示，当用实施例1和实施例2中制备的靛玉红衍生物、对比例1中制备的靛玉红衍生物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠急性创面组织用马松三色、天狼星红和范吉逊氏染剂以研究胶原蛋白的类型和数量时，可以证实，与对照组、对比例1或阳性对照组相比，用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物治疗不仅能快速修复创面，而且显著增加了胶原蛋白的量。

当以与实施例2的小鼠模型相同的方式用表皮生长因子(EGF)处理的小鼠模型用两种染色剂(马松三色和天狼星红)处理时，证实了与用表皮生长因子(EGF)直接处理或用对比例1的靛玉红衍生物处理相比，使用实施例1和实施例2制备的靛玉红衍生物提供了优异的创面愈合效果。

为了分析创面愈合效果，将细胞运动性与实施例2中制备的靛玉红衍生物、实施例5中的香草酸甲酯、实施例6中的橙皮苷、实施例7的槲皮苷以及实施例9至实施例11中制备的混合物进行比较。

HaCaT细胞是在创面愈合中起重要作用的人角质形成细胞，使用含10％FBS的DMEM在12孔板中培养24小时。然后，在用含5％FBS的DMEM代替培养基后，使用1000p(蓝色)尖端在细胞中心刮擦。然后，在分别用实施例2中制备的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷以及实施例9至实施例11中制备的混合物以1μM或5μM的浓度处理刮擦区域之后，在18小时后观察到细胞运动性。

具体而言，实施例2中制备的靛玉红衍生物、实施例6的橙皮苷和实施例7的槲皮苷的浓度为1μM，实施例5的香草酸甲酯的浓度为5μM，实施例9至实施例11中制备的混合物通过将1μM靛玉红衍生物与5μM香草酸甲酯、1μM橙皮苷或1μM槲皮苷混合而制备。

图6a显示了根据用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷或实施例9至实施例11中制备的混合物进行处理的角质形成细胞的细胞运动性。图6b定量显示了根据用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷或实施例9至实施例11中制备的混合物进行处理的角质形成细胞的细胞运动性。对照组(对照)是指未处理的角质形成细胞。创面闭合率(％)是用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷、实施例7的槲皮苷或实施例9至实施例11中制备的混合物处理后角质形成细胞的细胞运动性的测量，角质形成细胞在创面愈合中起重要作用(图6)。

如图6所示，已经证实，实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷或实施例7的槲皮苷的处理与对照组之间的细胞运动性没有差异。

相反，用实施例9至实施例11中制备的混合物处理的细胞与对照组的细胞相比，其细胞运动性提高了多达2.5倍至4倍。

在该实验中，在用每种活性成分处理后，进行了18小时的测量，比图1早6小时。已经证实，与仅用实施例2的靛玉红衍生物(A3051)处理细胞相比，用实施例9至实施例11制备的混合物处理改善了在创面愈合中起重要作用的角质形成细胞的细胞运动性，更快、更多(1.4倍至2.3倍或多于2.3倍)。

换言之，已经证实，与单独使用实施例2的靛玉红衍生物、实施例5的香草酸甲酯、实施例6的橙皮苷或实施例7的槲皮苷相比，显示出意想不到的显著效果(更快和更多(2.5倍至4倍)的细胞运动性恢复)。

在用实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9中制备的混合物(0.5mM A3051和3mM或5mM香草酸甲酯)、作为已知的创面愈合剂的EGF(阳性对照组)或PTD+VPA(阳性对照组2，由Arg Lys Thr Gly His Gln Ile Cys Lys PheArg Lys Cys表示的细胞穿透肽和丙戊酸的混合物)处理动物模型后，研究了促进创面愈合的作用。

去除进入休息期的7周龄C3H小鼠背部的毛发，并且在该毛发去除区域上形成1.5×1.5cm

测量小鼠的创面大小后，将创面组织浸入4％多聚甲醛中固定，包埋在石蜡中，然后切成4μm厚度。将切片组织去石蜡，再水化，然后分析上皮重新形成的程度。

图7显示了在不同时间(第0天和第12天)用实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM，5mM)、实施例9中制备的混合物或EGF(阳性对照组)对小鼠急性创面进行成像和染色的结果。图7左下方的图示出了在不同时间(第0天和第12天)用本公开实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9制备的混合物或EGF(阳性对照组)治疗的小鼠急性创面上皮重新形成程度的定量结果。图7右下方的图示出了在第1天和第12天用本公开实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM、5mM)、实施例9制备的混合物或EGF(阳性对照组)处理的小鼠的创面大小(mm

实施例2、实施例5或实施例9的组合物以适合于“乳溶液”的浓度制备。

实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)用A3051标记，实施例5的香草酸甲酯(2.5mM，5mM)用M2.5和M5标记，实施例9中的混合物用M2.5+A3051或M5+A3051标记。

如图7所示，与对照组或阳性对照组的小鼠模型相比，当用实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例5的香草酸甲酯(2.5mM，5mM)或实施例9制备的混合物治疗时，急性创面迅速愈合。尽管在治疗后第1天创面大小相同，但是与阳性对照组(EGF)相比，施用M5+A3051混合物的小鼠在第12天显示出明显更快的创面修复，更少的疤痕形成和更快的上皮重新形成。

已经证实，由实施例9的混合物制成的M5+A3051混合物在相同时间段内表现出比阳性对照组(EGF)高4倍或高于4倍的创面修复效果，表明其修复创面的速度更快。已经证实，在愈合过程中，皮肤的表皮层被干净、均匀地修补，而没有残留的疤痕，例如疙瘩、凹陷等。换言之，已经证实，尽管实施例2的靛玉红衍生物也具有创面修复作用，但是实施例9的M5+A3051混合物对创面愈合和减少疤痕非常有效。

用实施例1的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)或实施例12和13的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)处理细胞后，比较细胞迁移。

制备未经处理的对照组(con)、仅用实施例8的臭檀吴萸提取物(1μg/mL)处理的组(臭檀吴萸1μg/mL)和用100μM VPA(丙戊酸)处理的阳性对照组。

实验进行如下。首先，将HaCaT细胞在12孔板中培养24小时。HaCaT细胞是人角质形成细胞，已知其在创面愈合中起重要作用。使用含有10％FBS的DMEM。培养24小时后，将培养基换成含5％FBS的DMEM，用1000p(蓝色)的尖端在细胞中心刮擦。然后，在用样品处理刮擦区域之后，在18小时后观察到细胞迁移和运动性。

作为样品，使用实施例1的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)或实施例12和13的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)。在附图中描述了每个样品的名称和组成。

图8a示出了用对照组(con)、实施例8中制备的臭檀吴萸提取物(1μg/mL)(臭檀吴萸1μg/mL)或阳性对照组(VPA 100μM)处理角质形成细胞并在18小时后细胞运动性的成像结果。

8b示出了用实施例1的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.1μM、1μM)或实施例12和实施例13的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)处理角质形成细胞并在18小时后细胞运动性的成像结果。图8c示出了根据图8a和图8b计算细胞运动性的结果。

图8d示出了用实施例3的靛玉红衍生物(0.1μM，1μM)、实施例14的混合物(分别将0.1μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)或实施例8的臭檀吴萸提取物(Euodia sutchuenensis Dode)的混合物处理角质形成细胞并在18小时后计算细胞运动性的结果。

如图8a所示，仅用臭檀吴萸提取物处理(实施例8)，或如图8b所示，只用靛玉红衍生物处理(臭檀吴萸提取物0μg/mL)，与对照组(con)相比，细胞运动性没有差异。这也可以从图8c和图8d中所示的细胞迁移率来证实。

同时，在根据本公开的实施例12、实施例13和实施例14中制备的各种比例的混合物显示出细胞运动性的显著恢复，与单独处理相比，细胞运动性的显著恢复提高约2倍或多于两倍。

特别地，与对照组相比，用臭檀吴萸提取物单独处理的细胞迁移率(％)恢复28％，而用A3051靛玉红衍生物的单独处理的细胞迁移率(％)恢复分别为50％和114％。相比之下，对于实施例12的混合物，其增加至71％和246％，对于实施例14的混合物，其增加至34％至126％，其约为用臭檀吴萸提取物和靛玉红衍生物处理的总和的1.5倍至2倍。换言之，可以看出，与单独使用臭檀吴萸提取物或靛玉红衍生物时相比，本公开的用于处理创面的组合物表现出出乎意料的显著效果，这超出了从各个组合物获得的效果的简单总和。

在用实施例1的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)或实施例12和实施例13的混合物(分别将0.5μM和1μM靛玉红衍生物与1μg/mL的臭檀吴萸提取物混合)处理动物模型后，研究促进创面愈合的作用。

去除进入休息期的7周龄C3H小鼠背部的毛发，并且在该毛发去除区域上形成1.5×1.5cm

将实施例1的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例12和实施例13的混合物(将0.5mM靛玉红衍生物与1mg/mL的臭檀吴萸提取物混合)、实施例8的臭檀吴萸提取物(1mg/mL)(臭檀吴萸提取物1mg/mL)、作为阳性对照组的100μM EGF或500mMVPA(丙戊酸)用作样品。对照组(con)用无样品溶液处理，对照组(con1)仅用水处理，对照组(con2)用10％的DMSO、45％的乙醇、18％的丙二醇和27％的水处理。

图9a示出了在不同时间(第0天和第12天)用实施例1的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)、实施例12和实施例13的混合物、对照组(con)、实施例8的臭檀吴萸提取物(Euodia sutchuenensis Dode)或阳性对照组(EGF和VPA)处理的小鼠急性创面组织的成像和染色结果。

图9b示出了在第1天测量图9a中每组的小鼠急性创面的创面尺寸(mm

在附图中，标出了处理到实验动物创面部位的每个样品的名称和含量。例如，实施例2的靛玉红衍生物(0.5mM)标记为A3051 0.5mM，实施例13的混合物标记为A3051(0.5mM)+臭檀吴萸1mg/mL，EGF(100μM)，VPA(500mM)等。

如图9所示，已经证实，与阳性对照组(EGF，VPA)相比，单独使用靛玉红衍生物进行处理可以导致相似程度的创面修复。

相比之下，如图9所示，与对照组和阳性对照组相比，实施例12和实施例13的混合物导致创面大小的显著恢复。

另外，用天狼星红染色和马松三色染色研究，单独用实施例8的臭檀吴萸提取物和对照组(con)处理的β-连环蛋白、PCNA、角蛋白14和I型胶原蛋白或胶原的表达几乎没有差异。同时，与对照组(con)相比，对于单独用实施例1和实施例2的靛玉红衍生物处理，确定β-连环蛋白、PCNA、角蛋白14和I型胶原蛋白的表达。但是，表达水平与阳性对照组相比略低。

相比之下，与阳性对照组相比，用相同浓度的实施例12和实施例13的靛玉红衍生物和臭檀吴萸提取物的混合物处理的急性创面组织显示β-连环蛋白、PCNA、角蛋白14和I型胶原蛋白的表达显著增加，也显示天狼星红染色和马松三色染色在胶原蛋白染色方面的效果显著优异。换言之，证实了与阳性对照组相比，实施例12和实施例13的混合物增加了β-连环蛋白、PCNA、角蛋白14和I型胶原蛋白的表达，并且使皮肤的表皮层清洁和均匀地修复，而在愈合过程中没有残留疤痕，例如疙瘩、凹陷等。

证实了实施例12和实施例13的混合物改善了影响疤痕形成和创面愈合的各种因素的表达，该混合物通过将对β-连环蛋白、PCNA、角蛋白14和I型胶原蛋白的表达没有影响的臭檀吴萸提取物与表现出轻微影响的实施例1和实施例2的靛玉红素衍生物混合而制备。认为尽管臭檀吴萸提取物本身没有作用，但是当与靛玉红衍生物组合使用时，其表现出改善的作用。

使用3周龄的雄性C57BL/6N小鼠(Koatech，韩国)。在使小鼠习惯正常饮食一周后，给予高脂饮食(产品数据-D12492；60％kcal，以下称为HFD)4周。然后，通过每周一次腹膜内注射40mg/kg链脲菌素(Sigma)，制备糖尿病诱导的动物模型。将小鼠关在保持恒定温度(22±2℃)和相对湿度(40％至60％)的笼子中，进行12/12小时的明/暗循环。

给非糖尿病诱发的正常对照组给予正常食物(产品数据-D12450B；10％千卡，以下称为NCD)4周。然后，每周一次腹膜内注射40mg/kg柠檬酸盐缓冲液(pH 4.5)。

为了研究在糖尿病诱导的动物模型中是否适当地诱导了糖尿病，测量了2周的血糖水平。正常对照组的血糖水平为160mg/dL至250mg/dL，糖尿病诱导的动物模型的血糖水平维持在300mg/dL或高于300mg/dL。

准备测试例7的糖尿病诱导的动物模型的正常对照组6只小鼠和每个测试组6只小鼠。去除背部的毛发，并在去除毛发的区域上形成0.8×0.8cm

对于正常对照组，每天一次仅将20μL乳溶液(混合重量比例为80：6：14的

通过以80：6：14的混合重量比混合

[表1]

图10示出了在不同时间对糖尿病动物模型中的正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位进行成像的结果，图11示出了在糖尿病动物模型中从正常对照组、阴性对照组和测试组的创面部位的面积在不同时间测量创面闭合率(％)的结果。

根据等式1计算创面闭合率(％)。

[等式1]

创面闭合率(％)＝[第0天的初始创面面积-测量日的创面面积]/[第0天的初始创面面积]×100

如图10和图11所示，在没有诱发糖尿病的正常对照组中，创面在14天内正常愈合。然而，在糖尿病诱导的阴性对照组中，创面直到14天才愈合，并且保留了约60％至70％的创面部位。相反，在施用了A3334(实施例1)的小鼠中，与正常对照组类似地促进了创面部位的愈合。

图12示出了通过用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)对来自糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组以及测试组的创面部位组织进行染色获得的H&E图像。具体而言，将从正常对照组、阴性对照组或测试组得到的创面部位组织浸入4％低聚甲醛中固定，包埋在石蜡中，然后切成4μm厚。将切片的组织去石蜡，再水化，然后用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)染色以观察组织学结构。

证实了当施用A3334(实施例1)时，获得了改善创面愈合的最优异的效果。尽管作为糖尿病诱导的动物模型的阴性对照组即使在14天后也没有表现出上皮重新形成，但是施用A3334(实施例1)的组尽管诱发了糖尿病也表现出快速的上皮重新形成。

图13示出了通过用范吉逊氏染剂和天狼星红对糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组以及测试组的创面部位组织染色而获得的图像，以评估胶原蛋白合成程度。具体而言，将从正常对照组、阴性对照组或测试组得到的创面部位组织浸入4％低聚甲醛中固定，包埋在石蜡中，然后切成4μm厚。将切片的组织去石蜡，再水化，然后用范吉逊氏染剂和天狼星红染色以观察组织学结构。对于范吉逊氏染剂染色，将切成薄片的组织浸入Weigert溶液中10分钟，然后浸入天狼星红溶液中2分钟。对于天狼星红染色，将切片组织浸入Weigert溶液中8分钟，然后在天狼星红中放置1小时。

如图13所示，证实了A3334(实施例1)比正常对照组(正常)和阴性对照组(载剂)更多地增加了胶原蛋白的合成。

准备测试例7的糖尿病诱导的动物模型的正常对照组6只小鼠和每个测试组6只小鼠。去除背部的毛发，并在去除毛发的区域上形成0.8×0.8cm

对于正常对照组，每天一次仅将20μL乳溶液(混合重量比例为80：6：14的

对于第一测试组，每天一次将20μL的A3334(实施例1)施用于创面部位，持续14天。对于第二测试组，每天一次将20μL的A3051(实施例2)施用于创面部位，持续14天。然后，拍摄每组的创面部位并测量创面面积(图14)。在第14天，用二氧化碳对小鼠进行安乐死后，收获创面部位组织并观察组织学结构。

[表2]

图14示出了通过用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)对来自糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组、阳性对照组以及第一和第二测试组的创面部位组织进行染色在第14天获得的H&E图像。

具体而言，将从正常对照组、阴性对照组、阳性对照组或第一或第二测试组得到的创面部位组织浸入4％低聚甲醛中固定，包埋在石蜡中，然后切成4μm厚。将切片的组织去石蜡，再水化，然后用苏木精(紫色)和曙红(粉红色)染色以观察组织学结构。

如图14所示，在没有诱发糖尿病的正常对照组中，创面在14天内正常愈合。然而，在糖尿病诱导的阴性对照组中，创面直到14天才愈合，并且保留了约70％的创面部位。当施用已知通过激活Wnt信号通路表现出创面愈合作用的VPA(丙戊酸)时，与阴性对照组相似，创面愈合被延迟。然而，在施用了A3334(实施例1)和A3051(实施例2)的小鼠中，与正常对照组类似地促进了创面部位的愈合。

另外，VPA处理组或阴性对照组在14天后仍未发生上皮重新形成，尽管像糖尿病那样诱发了糖尿病，但与正常对照组一样，当使用A3334(实施例1)或A3051(实施例2)时，上皮重新形成很快发生。

图15示出了通过用范吉逊氏染剂和马松三色对糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组以及第一和第二测试组的创面部位组织染色而获得的图像，以评估胶原蛋白合成程度。具体而言，将从正常对照组、阴性对照组、阳性对照组或第一或第二测试组得到的创面部位组织浸入4％低聚甲醛中固定，包埋在石蜡中，然后切成4μm厚。将切片的组织去石蜡，再水化，然后用范吉逊氏染剂和马松三色染色以观察组织学结构。对于范吉逊氏染剂染色，将切成薄片的组织浸入Weigert溶液中10分钟，然后浸入天狼星红溶液中2分钟。对于马松三色染色，将切片组织浸泡在Weigert的苏木精铁溶液中10分钟，然后在比布里希猩红-酸性品红和苯胺蓝中分别放置5分钟。

如图15所示，证实了A3334(实施例1)和A3051(实施例2)比正常对照组(正常)、阴性对照组(载剂)和阳性对照组(VPA)更多地增加了胶原蛋白的合成。

图16示出了从糖尿病动物模型的正常对照组、阴性对照组、阳性对照组以及第一和第二测试组的创面部位周围的血管生成的观察结果。具体而言，将从正常对照组、阴性对照组、阳性对照组或第一和第二测试组得到的创面部位组织浸入4％低聚甲醛中固定，并观察到血管生成。

如图16所示，证实了与正常对照组(正常)或阴性对照组(载剂)不同，A3334(实施例1)和A3051(实施例2)增加了血管生成。由此可见，由于A3334(实施例1)和A3051(实施例2)通过胶原蛋白、α-SMA等的活化显示出优异的组织再生效果，并且与Wnt信号通路激活剂VPA相比，具有通过激活血管生成减少创面愈合时间的优异效果，因此与现有的创面愈合剂相比，它们可以为糖尿病创面提供更好的效果。

为了制备乳溶液，测量实施例2的靛玉红衍生物对各种油和表面活性剂的溶解度。将足够量的在实施例2中制备的靛玉红衍生物粉末添加到每种油或表面活性剂(1mL)中，然后涡旋30分钟。在37℃的培养罐中以50rpm摇动72小时直至达到平衡，然后以16100×g离心5分钟后，将上清液用甲醇适当稀释，然后通过LC/MS/MS进行分析。表3列出了所用的油或表面活性剂以及测得的溶解度。

使用Waters Xevo TQ MS-ACQUITY UPLC系统进行分析。使用

[表3]

图17示出了通过将本发明的实施例2中制备的靛玉红衍生物溶解在各种油或表面活性剂中制备的乳溶液。如图17和表3所示，在根据本公开的实施例2中制备的靛玉红衍生物对于

根据溶解度测试的结果，选择

图18a是由吐温80和PEG 400的2:1表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图，图18b是由吐温80和PEG 400的1:1表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图，图18c是由吐温80和PEG 400的1:2表面活性剂混合物制备的乳溶液的三元相图。在图18a至图18c的三元相图中，形成稳定乳液的区域由红点标记。

从图18a、图18b和图18c可以看出，对于乳溶液，选择吐温80和PEG 400的表面活性剂混合物，其混合重量比为1：2，显示出最宽的范围。然后，为了确定表面活性剂和油相的比率，比较了以各种比例制备的乳溶液的溶解度、液滴尺寸、黏度和ζ电位。

为了开发对实施例2中制备的靛玉红衍生物具有适当溶解度和长期稳定性的水包油乳液制剂，通过混合表面活性剂、聚乙二醇和油来选择最稳定的乳溶液。

由测试例11中选择的表面活性剂、聚乙二醇和油以10：30：60-90：3：7的比例制备各种乳溶液。通过添加活性成分(实施例2粉末的靛玉红衍生物)使得基于组合物的总重量的浓度为10重量％，然后搅拌过夜来制备包含本公开的活性成分的乳液(例如，将实施例2中制备的20g靛玉红衍生物粉末与80g乳液溶液混合以制备100g组合物)。

该组合物可以还包含环糊精作为增溶剂。在该测试例中，基于100重量份的靛玉红衍生物(活性成分)使用100重量份的环糊精，以更好地溶解靛玉红衍生物。

制备的乳液看起来均匀混合并且具有不透明的红色。表4给出了每种乳液的溶解度、液滴大小、黏度和ζ电位的分析结果。

[表4]

如表4所示，随着油含量的增加，液滴尺寸减小。尽管所有制剂均具有适合用作药物和化妆品组合物的物理性能，但F8具有最优选的尺寸、黏度、ζ电位和溶解度。

为了评估乳液的稳定性，以表5中所述的组成以与测试例12相同的方式制备乳液F8和F10至F12。根据低温(4℃)和室温(25℃)下相对溶解度(％)的变化来测量乳液的稳定性。图19和图20记录了制备后3个月的相对溶解度(％)的变化。

[表5]

图19示出了在室温(25℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对溶解度(％)变化的结果，图20示出了在低温(4℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对溶解度(％)变化的结果。

如图19至图20和表5所示，作为监测在低温或室温下保持3个月后相对溶解度变化的结果，本公开的乳液(F8)在制备后和3个月后之间未显示出溶解度％的显著变化。相反，用与本公开的乳液不同的组成制备的乳液(F12、F11和F10)在制备后和3个月后在低温和室温下显示出40％或高于40％的溶解度变化。特别是，证实了在低温保存时溶解度迅速降低了80％以上。

为了研究实施例2的靛玉红衍生物的活性成分是否在乳液中稳定地保持活性，以与测试例13中相同的方式用表5中所述的组成制备乳液F8和F10至F12。根据低温(4℃)和室温(25℃)下相对Wnt报告物活性(％)的变化，测量了靛玉红衍生物在乳液中的活性稳定性。图21和图22记录了制备后3个月的相对Wnt报告物活性(％)的变化。

Wnt报告物活性(％)如下测量。用乳液形式制备的活性成分处理HEKTOP报告物细胞后，在24小时后测量Wnt报告基因活性。

图21示出了在室温(25℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对Wnt报告物活性(％)的变化的结果，图22示出了在低温(4℃)下测量乳液F8和F10至F12的相对Wnt报告物活性(％)的变化的结果。

如图21和图22所示，作为在低温和室温下3个月监测相对Wnt报告物活性(％)的变化的结果，本公开的乳液(F8)在制备后和3个月后之间的Wnt报告物活性％未显示出显著变化。相反，用与本公开的乳液不同的组成制备的乳液(F12、F11和F10)在制备后和3个月后在低温和室温下显示出40％或高于40％的Wnt报告物活性变化。特别是，证实了在低温保存时溶解度迅速降低了80％以上。

制备用于预防或治疗创面的乳膏型化妆品组合物，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物作为活性成分。通过混合如下所述的包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的成分来制备乳膏型化妆品组合物。

制备用于预防或治疗创面的药物组合物(软膏)，其包含一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的混合物作为活性成分。通过混合包含如下所述的一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物的成分来制备用于预防或治疗创面的药物组合物(软膏)。

奶 99.9重量％

一种或多于一种选自化学式1至化学式4的靛玉红衍生物 0.1重量％