一种骨化三醇的药物组合物

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体地涉及骨化三醇的新杂质及其药物组合物。

背景技术

骨化三醇(Calcitriol)，又称1，25-二羟胆钙化醇或1，25-二羟维生素D

骨化三醇作为需要长期服用的高活性药物，开展相关的安全性研究如杂质研究十分重要。目前，中国药典(2020版)未收载骨化三醇品种，欧洲药典(EP9.0)及美国药典(USP40)中收载了该品种，并控制了杂质包括：骨化三醇前体、反式骨化三醇、1β-骨化三醇、亚甲基骨化三醇以及骨化三醇前体三唑啉加合物。

发明人以化合物S为起始原料，经过格氏反应、羟基脱保护反应以及光反应制备得到骨化三醇。在制备过程中发明人意外发现，尽管未使用足以使双键氧化的氧化剂，且制备过程中多处采用氩气保护，但是制得的骨化三醇仍不可避免地发生了氧化降解，生成杂质I。这说明该杂质的产生与合成路线本身相关性低，难以通过路线优化避免。但该杂质并未被收入上述药典或标准中，也未见报道或公开。因此，确定杂质I的化学结构和制备方法，建立检测方法，分析杂质含量，并确定合理的杂质限度，对保证骨化三醇的产品质量及用药安全性十分必要。

发明内容

本发明提供了一种化合物杂质I，具有如下结构：

杂质I存在环氧化结构，而环氧化结构属于遗传毒性杂质的警示结构(参见文献：马磊,马玉楠,陈震,蒋煜.遗传毒性杂质的警示结构[J].中国新药杂志,2014,23(18):2106-2111)，按照人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)发布的ICH M7《诱变性杂质评估和控制》，该杂质属于第3类基因毒性杂质，存在潜在的基因毒性风险，有必要对其进行分析、检测与控制。

本发明还提供了一种骨化三醇的药物组合物，其中杂质I的含量不高于1.0％，在一些实施例中，不高于0.2％；在一些实施例中，不高于0.1％。

本发明还提供了一种骨化三醇的药物组合物，该药物组合物包含骨化三醇和杂质I，其中杂质I的含量不高于1.0％；在一些实施例中，不高于0.2％；在一些实施例中，不高于0.1％。

本发明还提供了杂质I在骨化三醇原料药或骨化三醇制剂的质量控制中的用途。

本发明还提供了一种杂质I的制备方法，包括以下步骤：

(1)将骨化三醇溶解于二氯甲烷-氯仿混合溶液中；

(2)将步骤(1)的溶液降温至0℃左右，加入溶有适量间氯过氧苯甲酸的二氯甲烷-氯仿混合溶液，保温反应，生成杂质I；其中，在一些实施例中，还包括对产物杂质I的洗涤纯化步骤；在一些实施例中，还包括对产物杂质I的洗涤纯化步骤，纯化使用的洗脱液为二氯甲烷:甲醇(30:1)。

本发明还提供了一种杂质I的高效液相色谱检测方法，包括如下参数：

色谱柱：苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6*250mm,3μm)；

流动相：流动相A：乙腈-Tris缓冲液(40:60)(Tris缓冲液：称取1.0g三(羟基甲基)氨基甲烷于900mL水中，用磷酸调节pH为7.0～7.5，用水稀释至1000mL混匀)，流动相B：乙腈；

梯度程序：

流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：100μL；在一些实施例中，杂质I含量的计算方法为外标法。

本发明中所述的含量指重量百分比含量。

本发明中所述的杂质的含量，指杂质占骨化三醇量的重量百分含量。

本发明所述的0℃左右，指0±4℃。

本发明的有益效果在于：

(1)提供了一种新化合物杂质I；

(2)提供了一种骨化三醇的药物组合物并限定了药物组合物中杂质I的含量，使杂质I的含量同时低于第3类基因毒性杂质可接受摄入量(按TTC法计算)以及有关物质控制限度，进而使骨化三醇药物组合物的安全性得到提高，产品质量得到进一步保障；

(3)提供了一种杂质I在骨化三醇原料药或骨化三醇制剂的质量控制中的用途；

(4)提供了一种杂质I的制备方法；

(5)提供了一种杂质I的检测方法，为该杂质的检测和控制提供保证。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，并便于理解本发明，仅提供部分实施例并做详细说明。本领域技术人员可以理解，以下实施例并非是对本发明保护范围的限制。

实施例1杂质I的制备方法

向单口瓶中加入0.28g骨化三醇、200mL混合溶液(二氯甲烷:氯仿＝1:1)，搅拌降温至0℃左右，向瓶内滴加20mL溶有0.16g间氯过氧苯甲酸的混合溶液(二氯甲烷:氯仿＝1:1)，滴毕，保温反应2.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)监测反应完全后，向瓶内加入1N的碳酸氢钠水溶液100mL洗涤1次。无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压旋干。柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)洗脱，洗脱液减压旋干得80.0mg杂质I。MS:m/z 455.31[M+Na]

实施例2杂质I的检测方法

按照高效液相色谱法(中国药典2015版四部通则0512)测定杂质I的含量。

Tris缓冲液：称取1.0g三(羟基甲基)氨基甲烷于900mL水中，用磷酸调节pH为7.0～7.5，用水稀释至1000mL混匀；

供试品溶液：取样品适量，精密称定，置于玻璃试管中，加入乙醚适量，摇匀，加入预先活化的固相萃取小柱，调节压力进行洗脱至洗脱液不再流出，再加入一定比例的乙酸乙酯-正己烷洗脱液适量，洗脱至洗脱液不再流出，自然晾干小柱，加入乙醇适量，洗脱至洗脱液不再流出，合并洗脱液置量瓶中，加20％乙醇溶液稀释制成每1mL中约含骨化三醇3.2μg的溶液。

对照品溶液：取杂质I对照品适量，精密称定，加60％乙醇溶解并稀释制成32ng/mL的对照品溶液，摇匀。

色谱条件：色谱柱：以苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6*250mm,3μm)；

流动相：流动相A：乙腈-Tris缓冲液(40:60)，流动相B：乙腈；

梯度程序：

流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：100μL。

测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。检得杂质I的含量为0.08％。