一种骨化三醇的药物组合物
文献发布时间:2023-06-19 10:25:58
技术领域
本发明属于药物化学领域,具体地涉及骨化三醇的新杂质及其药物组合物。
背景技术
骨化三醇(Calcitriol),又称1,25-二羟胆钙化醇或1,25-二羟维生素D
骨化三醇作为需要长期服用的高活性药物,开展相关的安全性研究如杂质研究十分重要。目前,中国药典(2020版)未收载骨化三醇品种,欧洲药典(EP9.0)及美国药典(USP40)中收载了该品种,并控制了杂质包括:骨化三醇前体、反式骨化三醇、1β-骨化三醇、亚甲基骨化三醇以及骨化三醇前体三唑啉加合物。
发明人以化合物S为起始原料,经过格氏反应、羟基脱保护反应以及光反应制备得到骨化三醇。在制备过程中发明人意外发现,尽管未使用足以使双键氧化的氧化剂,且制备过程中多处采用氩气保护,但是制得的骨化三醇仍不可避免地发生了氧化降解,生成杂质I。这说明该杂质的产生与合成路线本身相关性低,难以通过路线优化避免。但该杂质并未被收入上述药典或标准中,也未见报道或公开。因此,确定杂质I的化学结构和制备方法,建立检测方法,分析杂质含量,并确定合理的杂质限度,对保证骨化三醇的产品质量及用药安全性十分必要。
发明内容
本发明提供了一种化合物杂质I,具有如下结构:
杂质I存在环氧化结构,而环氧化结构属于遗传毒性杂质的警示结构(参见文献:马磊,马玉楠,陈震,蒋煜.遗传毒性杂质的警示结构[J].中国新药杂志,2014,23(18):2106-2111),按照人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)发布的ICH M7《诱变性杂质评估和控制》,该杂质属于第3类基因毒性杂质,存在潜在的基因毒性风险,有必要对其进行分析、检测与控制。
本发明还提供了一种骨化三醇的药物组合物,其中杂质I的含量不高于1.0%,在一些实施例中,不高于0.2%;在一些实施例中,不高于0.1%。
本发明还提供了一种骨化三醇的药物组合物,该药物组合物包含骨化三醇和杂质I,其中杂质I的含量不高于1.0%;在一些实施例中,不高于0.2%;在一些实施例中,不高于0.1%。
本发明还提供了杂质I在骨化三醇原料药或骨化三醇制剂的质量控制中的用途。
本发明还提供了一种杂质I的制备方法,包括以下步骤:
(1)将骨化三醇溶解于二氯甲烷-氯仿混合溶液中;
(2)将步骤(1)的溶液降温至0℃左右,加入溶有适量间氯过氧苯甲酸的二氯甲烷-氯仿混合溶液,保温反应,生成杂质I;其中,在一些实施例中,还包括对产物杂质I的洗涤纯化步骤;在一些实施例中,还包括对产物杂质I的洗涤纯化步骤,纯化使用的洗脱液为二氯甲烷:甲醇(30:1)。
本发明还提供了一种杂质I的高效液相色谱检测方法,包括如下参数:
色谱柱:苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6*250mm,3μm);
流动相:流动相A:乙腈-Tris缓冲液(40:60)(Tris缓冲液:称取1.0g三(羟基甲基)氨基甲烷于900mL水中,用磷酸调节pH为7.0~7.5,用水稀释至1000mL混匀),流动相B:乙腈;
梯度程序:
流速:1.0mL/min;检测波长:230nm;柱温:30℃;进样量:100μL;在一些实施例中,杂质I含量的计算方法为外标法。
本发明中所述的含量指重量百分比含量。
本发明中所述的杂质的含量,指杂质占骨化三醇量的重量百分含量。
本发明所述的0℃左右,指0±4℃。
本发明的有益效果在于:
(1)提供了一种新化合物杂质I;
(2)提供了一种骨化三醇的药物组合物并限定了药物组合物中杂质I的含量,使杂质I的含量同时低于第3类基因毒性杂质可接受摄入量(按TTC法计算)以及有关物质控制限度,进而使骨化三醇药物组合物的安全性得到提高,产品质量得到进一步保障;
(3)提供了一种杂质I在骨化三醇原料药或骨化三醇制剂的质量控制中的用途;
(4)提供了一种杂质I的制备方法;
(5)提供了一种杂质I的检测方法,为该杂质的检测和控制提供保证。
具体实施方式
为了进一步说明本发明,并便于理解本发明,仅提供部分实施例并做详细说明。本领域技术人员可以理解,以下实施例并非是对本发明保护范围的限制。
实施例1杂质I的制备方法
向单口瓶中加入0.28g骨化三醇、200mL混合溶液(二氯甲烷:氯仿=1:1),搅拌降温至0℃左右,向瓶内滴加20mL溶有0.16g间氯过氧苯甲酸的混合溶液(二氯甲烷:氯仿=1:1),滴毕,保温反应2.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇=20:1)监测反应完全后,向瓶内加入1N的碳酸氢钠水溶液100mL洗涤1次。无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压旋干。柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1)洗脱,洗脱液减压旋干得80.0mg杂质I。MS:m/z 455.31[M+Na]
实施例2杂质I的检测方法
按照高效液相色谱法(中国药典2015版四部通则0512)测定杂质I的含量。
Tris缓冲液:称取1.0g三(羟基甲基)氨基甲烷于900mL水中,用磷酸调节pH为7.0~7.5,用水稀释至1000mL混匀;
供试品溶液:取样品适量,精密称定,置于玻璃试管中,加入乙醚适量,摇匀,加入预先活化的固相萃取小柱,调节压力进行洗脱至洗脱液不再流出,再加入一定比例的乙酸乙酯-正己烷洗脱液适量,洗脱至洗脱液不再流出,自然晾干小柱,加入乙醇适量,洗脱至洗脱液不再流出,合并洗脱液置量瓶中,加20%乙醇溶液稀释制成每1mL中约含骨化三醇3.2μg的溶液。
对照品溶液:取杂质I对照品适量,精密称定,加60%乙醇溶解并稀释制成32ng/mL的对照品溶液,摇匀。
色谱条件:色谱柱:以苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6*250mm,3μm);
流动相:流动相A:乙腈-Tris缓冲液(40:60),流动相B:乙腈;
梯度程序:
流速:1.0mL/min;检测波长:230nm;柱温:30℃;进样量:100μL。
测定法:精密量取对照品溶液和供试品溶液,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,按外标法计算。检得杂质I的含量为0.08%。
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