基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法

技术领域

本发明属于水产生物技术领域，具体涉及一种基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法。

背景技术

大麻哈鱼（

为了准确评估人工增殖放流的效果，确定洄游大麻哈鱼的来源，从而填补降海期间的盲区，掌握放流效果的第一手数据，大麻哈鱼放流效果评估研究自放流活动开始以来即全面展开。大麻哈鱼的溯源分析方法目前有剪尾鳍法、T-ID标签法、CWT线标法、VIE荧光法和SSR微卫星标记法；其中，剪尾鳍标记法十余年来仅回捕3尾，T-ID标签法、CWT线标法、VIE荧光法对鱼体伤害较大，SSR微卫星标记法可以通过亲缘关系鉴定准确评估大麻哈鱼放流效果，但该方法中亲本和子代遗传信息提取耗时且耗资巨大，专业门槛高，需要大量专业技术人员做支撑，无法满足大麻哈鱼溯源长期性、周期性评估的现实需要。

因此，在实际工作中需要开发更经济、准确的大麻哈鱼放流效果评估方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法，以提高耳石标记的辨识度，用以准确地评估大麻哈鱼放流效果，从而弥补现有技术的不足。

耳石是硬骨鱼类内耳的钙质结晶，终生生长，且具有代谢上的惰性，一旦沉积，耳石材料不可能被重吸收或者改变。当鱼类处于高环境水温时，其耳石轮纹属宽亮带，当处于低环境水温时则形成窄暗带，以此实现耳石热标记。鱼类整个生命历程里所经过的水环境温度信息均可通过耳石永久保存。尽管，目前已有利用耳石标记进行溯源的研究，但是当前的技术研究局限在耳石标记能够形成，但是标记过于简单，存在标记难以完全分类、标记重复等问题，溯源效果并不理想。

摩斯密码编码简单清晰，二义性小，编码主要是由两个字符表示：“.”、“—”，一短一长。通过不同的排列顺序来表达不同的英文字母、数字和标点符号。如果将摩斯密码规则应用于耳石标记，以增强耳石标记的清晰性、准确性及高度可辨识性，这是本发明的主要研究方案。

为达到上述目的，本发明采取的具体技术方案为：

基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法，该方法首先根据摩斯密码规则设定耳石标记图谱，再在大麻哈鱼受精卵发育至发眼期，调整孵化水温，使大麻哈鱼耳石日轮明暗度和宽窄度按所述图谱要求形成。

进一步的，所述摩斯密码规则为国际上通用规则，是由两个字符表示：“·”、“—”；“—”的编码时长为“·”的2倍；再通过不同的排列顺序来表达不同的英文字母。

进一步的，以高水温期作为编码，“·”为24小时，“—”为48小时，以高温标记，低水温期作为间隔；高温期形成的耳石形成亮带，低温期的耳石形成暗带。

进一步的，在大麻哈鱼受精卵发育至发眼期，调整孵化水温，温差以2~4℃为宜。

进一步的，大麻哈鱼孵化为流水孵化，热标记实施前，观察受精卵发育情况，记录水温；

当受精卵发育至发眼期阶段，按照热标记水温调控周期模式实施时间，运行水温控制设备；高温区设为11±1℃，低温设为8±1℃，且保证全程流水孵化。

上述标记方法能够应用于大麻哈鱼的溯源分析，以准确评估大麻哈鱼放流效果。

本发明的优点和有益效果：

本发明利用摩斯密码规则对大麻哈鱼耳石进行热标记，可根据需要设计不同的字母、数字组合，标记出群体间及批次间不同的标记图谱。且相较于现有耳石标记技术可辨识度更高，标记率可达100%，更适合大麻哈鱼这种河海型生殖洄游鱼类。本发明根据设计好的标记图谱，通过调整大麻哈鱼人工繁育期间的水温，使耳石生长轮出现符合标记图谱的明暗度、宽窄度等不同的变化，并将此变化永久地保存下来。

本发明结合国际通用摩斯密码规则，利用水温对耳石轮纹产生的影响，对放流大麻哈鱼进行标记，提供了一种即经济实用、标记率高又不易混淆，可辨识率高的大麻哈鱼放流标记方法，能够进行大样本量的标记，同时避免了药剂使用对鱼体及环境造成的危害。本发明能够更加完整、更加准确地评估大麻哈鱼放流效果。

附图说明

图1为实施例1中的经过摩斯密码图谱标记的大麻哈鱼耳石日轮图。

图2为实施例1中的未进行标记的大麻哈鱼耳石日轮图。

图3为实施例2中的经过摩斯密码图谱标记的大麻哈鱼耳石日轮图。

图4为实施例2中的经过摩斯密码图谱标记的大麻哈鱼耳石日轮对比图。

具体实施方式

以下通过具体实施例并结合附图对本发明进一步解释和说明。

实施例1：

一种基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法，该方法包括以下步骤：

（1）耳石标记以字母JL为标记图谱，摩斯密码编码为：· — — — · — · · 。其中“·”为24小时，“—”为48小时，以高温标记；密码间隔区为24小时，以低温标记。标记模式为：24H-24C-48H-24C-48H-24C-48H-24C-24H-24C-48H-24C-24H-24C-24H，其中，H表示高温期，C表示低温期，阿拉伯数字24和48表示持续的时间（单位是小时）。

（2）大麻哈鱼孵化过程为流水孵化，热标记实施前，观察受精卵发育情况，记录水温；

（3） 当受精卵发育至发眼期阶段，按照热标记水温调控周期模式实施时间，运行水温控制设备；高温区设为11℃，低温区设为8℃。

（4）每 6 小时测量一次水温，保证全程流水孵化；

（5）标记结束后，按正常条件进行孵化、培育。

样本选取

选取大麻哈鱼发眼期受精卵各300粒分别作为实验例和对比例样本，实施例样本根据上述方法进行处理；

对比例样本的处理方法为：对比例为恒温11℃培育，其他条件与实验例的培育方法相同。

结果分析：

大麻哈鱼经过上述培育生长成熟之后，大麻哈鱼的耳石日轮图如图1所示，能够明显看出来形成了明暗相间的日轮纹，且进行比对，与所设计的标记模式是完全一致的（24H-24C-48H-24C-48H-24C-48H-24C-24H-24C-48H-24C-24H-24C-24H）；而对比例样本的日轮纹图明显无任何规律（如图2所示）。本方法能够明显区别实验例和对比例样本，这说明了本方法具有极强的可行性。

实施例2：

一种基于摩斯密码规则的大麻哈鱼耳石标记方法，该方法包括以下步骤：

1. 耳石标记以字母CHN为标记图谱，摩斯密码编码为：— · — · · · · ·— ·。其中“·”为24小时，“—”为48小时，以高温标记；密码间隔区为24小时，以低温标记。标记模式为：48H-24C-24H-24C-48H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-48H-24C-24H，其中，H表示高温期，C表示低温期，阿拉伯数字24和48表示持续的时间（单位是小时）。

2. 大麻哈鱼孵化过程为流水孵化，热标记实施前，观察受精卵发育情况，记录水温；

3. 当受精卵发育至发眼期阶段，按照热标记水温调控周期模式实施时间，运行水温控制设备；高温区设为11℃，低温区设为8℃。

4. 每 6 小时测量一次水温，保证全程流水孵化；

5. 标记结束后，按正常条件进行孵化、培育。

选取样本：

选取大麻哈鱼发眼期受精卵各300粒分别作为实验例和对比例样本，各上述实施例样本根据上述方法进行处理；

上述对比例样本的处理方法：对比例标记模式为：48H-48C-48H-48C-48H-48C-48H-48C，其他条件与实验例相同。

结果分析：

大麻哈鱼经过上述培育生长成熟之后，大麻哈鱼的耳石日轮图如图3所示，能够明显看出来形成了明暗相间的日轮纹，且进行比对，与所设计的标记模式是一致的（48H-24C-24H-24C-48H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-24H-24C-48H-24C-24H）。而对比样本的日轮纹图呈现48小时变化规律性（如图4所示）。实验例和对比例样本能够明显区分开，这也说明了，本方法具有极强的可行性。

耳石作为一种内部标记，记录了鱼类整个生命历程里所经过的水环境信息，包括温度、盐度等。水环境信息犹如生活史的指纹，通过耳石生长轮永久性地保存下来。本发明利用温度对耳石日轮形成的影响，利用国际通用摩斯密码规则设计标记方式，采用人为调节水温的方式对大麻哈鱼耳石进行温控标记。通过有规律的改变水温来掌控耳石日轮形成的轨迹，为大麻哈鱼群体建立专属指纹图谱。此标记方法简单，密码组合形式多样，可辨识率高，不伤害鱼体，适用于大规模标记，且检测方法也相对简单。