组合物及其制备方法、应用、培养基及其制备方法

技术领域

本申请涉及药物领域，具体而言，涉及一种组合物及其制备方法、应用、培养基及其制备方法。

背景技术

人体皮肤表面和肠道中贮存着大量的微生物，自出生开始就伴随着我们，与人类为共生关系。其中，皮肤表面菌群或表面微生态，作为人体皮肤物理屏障更外层的一种重要生物屏障，对皮肤的健康状态有着重要作用。

本申请旨在提供一种可以改变皮肤表面菌群丰度的组合物及其制备方法。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种组合物及其制备方法、应用、培养基及其制备方法，其旨在调节皮肤表面的菌群丰度。

本申请提供一种的组合物，所述组合物的原料包括按质量百分数计的以下组分：

丙二醇8-12％，异硬脂醇异硬脂酸酯2-8％，卡波0.1-0.5％，黄原胶0.05-0.3％，氢氧化钠0.1-0.4％，EDTA二钠0.1-0.4％，苯氧乙醇0.5-3％，山梨酸钾0.01-0.04％以及木棉花醇提物2-7％。

发明人发现本申请提供的药物组合物能够调节皮肤菌群，降增加红球菌、贪噬菌以及根瘤菌的含量。通过增加红球菌、贪噬菌以及根瘤菌从而达到调节皮肤菌群的目的，增加皮肤表面菌群的种类，可以在皮肤表面形成屏障，降低环境对皮肤的刺激，从而达到养肤的目的。

本申请还提供一种上述组合物的制备方法，包括：

采用30-80vol％的乙醇水溶液超声提取木棉花，干燥提取液得到所述木棉花醇提物；

混合所述组合物的所有原料。

在本申请的一些实施例中，超声提取的温度为45-75℃，时间为35-55min，所述乙醇水溶液与所述木棉花的质量比为(50-60):1。

在本申请的一些实施例中，所述采用30-80vol％的乙醇水溶液超声提取木棉花的步骤之后还包括使用D101型号的大孔树脂对提取得到的滤液纯化得到所述提取液。

本申请还提供一种组合物在制备调节皮肤菌群的药剂中的应用，所述组合物包括木棉花醇提物以及药学上可接受的辅料；

所述调节皮肤菌群包括：增加皮肤表面的红球菌、贪噬菌或者根瘤菌中的至少一种。

在本申请的一些实施例中，所述组合物的原料包括按质量分数计的以下组分：

丙二醇8-12％，异硬脂醇异硬脂酸酯2-8％，卡波0.1-0.5％，黄原胶0.05-0.3％，氢氧化钠0.1-0.4％，EDTA二钠0.1-0.4％；苯氧乙醇0.5-3％，山梨酸钾0.01-0.04％以及木棉花黄酮2-7％。

一种培养基的制备方法，培养基用于培养红球菌、贪噬菌或者根瘤菌；所述培养基的制备方法包括混合木棉花醇提物和辅料。

在本申请的一些实施例中，所述木棉花醇提物通过以下步骤制得：

将木棉花花瓣烘干粉碎，使用超声波提取后取提取液，提取的参数为：30-80vol％的乙醇水溶液，超声温度为45-75℃，超声时间为35-55min，料液比为1：(50-60)；使用D101型号的大孔树脂进行动态吸附纯化所述提取液，然后冷冻干燥得到木棉花醇提物。

在本申请的一些实施例中，所述培养基的制备方法包括按质量百分数计的以下组分混合原料：

水78.03％；丙二醇10％；异硬脂醇异硬脂酸酯5％；所述木棉花醇提物5％；卡波0.35％；黄原胶0.1％；氢氧化钠0.3％；EDTA二钠0.2％；苯氧乙醇1％以及山梨酸钾0.02％。

本申请还提供一种培养基，培养基用于培养红球菌、贪噬菌或者根瘤菌；所述培养基包括木棉花黄酮和辅料，或者，所述培养基包括木棉花醇提物和辅料；

可选地，所述木棉花醇提物的制备方法包括：

将木棉花花瓣烘干粉碎，使用超声波提取后取提取液，提取的参数为：30-80vol％的乙醇水溶液，超声温度为45-75℃，超声时间为35-55min，料液比为1：55；使用D101型号的大孔树脂进行动态吸附纯化所述提取液，然后冷冻干燥得到木棉花醇提物。

本申请实施例提供的培养基能够促进红球菌、贪噬菌或者根瘤菌的增长。

具体实施方式

为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请实施例的组合物及其制备方法、应用、培养基及其制备方法进行具体说明。

一种组合物，组合物的原料包括按质量百分数计的以下组分：

丙二醇8-12％，异硬脂醇异硬脂酸酯2-8％，卡波0.1-0.5％，黄原胶0.05-0.3％，氢氧化钠0.1-0.4％，EDTA二钠0.1-0.4％；苯氧乙醇0.5-3％，山梨酸钾0.01-0.04％以及木棉花醇提物2-7％。

作为示例性地，原料中丙二醇的质量百分含量为8-12％，例如可以为8％、9％、10％、11％或者12％等等。

原料中异硬脂醇异硬脂酸酯的质量百分含量为2-8％，例如可以为2％、3％、4％、5％、6％、8％等等。

原料中卡波的质量百分含量为0.1-0.5％，例如可以为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％等等。

原料中黄原胶的质量百分含量为0.05-0.3％，例如可以为0.05％、0.08％、0.1％、0.15％、0.21％、0.26％、0.28％、0.3％等等。

原料中氢氧化钠的质量百分含量为0.1-0.4％，例如可以为0.1％、0.15％、0.2％、0.26％、0.31％、0.36％、0.4％等等。

原料中EDTA二钠的质量百分含量为0.1-0.4％；例如可以为0.1％、0.16％、0.21％、0.27％、0.3％、0.37％、0.4％等等。

原料中苯氧乙醇的质量百分含量为0.5-3％，例如可以为0.5％、0.7％、1.1％、1.8％、2.3％、2.7％、3％等等。

原料中山梨酸钾的质量百分含量为0.01-0.04％例如可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％等等。

原料中木棉花醇提物的质量百分含量为2-7％，例如可以为2％、2.3％、3.2％、4％、4.8％、5％、6.2％、7％等等。

在本实施例中，木棉花醇提物为采用乙醇提取的木棉花的方法制得，可以理解的是，在本申请的其他实施例中，木棉花醇提物的提取溶剂可以为丙醇、丙三醇、乙二醇等醇溶剂进行提取。

发明人发现本申请提供的药物组合物能够调节皮肤菌群，能够增加皮肤表面的红球菌、贪噬菌以及根瘤菌的含量。增加红球菌、贪噬菌以及根瘤菌从而达到丰富皮肤表面菌群的种类、调节皮肤菌群的目的，可以在皮肤表面形成屏障，降低环境对皮肤的刺激，从而达到养肤的目的。

本申请提供一种上述组合物的制备方法，包括：

采用30-80vol％的乙醇水溶液超声提取木棉花，干燥提取液得到所述木棉花醇提物；

混合所述组合物的所有原料。

在本申请的一些实施例中，上述木棉花是经过干燥粉碎后的物料。

作为示例性地，乙醇水溶液的体积浓度可以为30％、34％、45％、52％、63％、72％、80％等等。

在一些实施例中，超声提取的温度为45-75℃，例如可以为45℃、56℃、61℃、70℃、75℃等等。超声提取的时间为35-55，例如可以为35min、38min、42min、47min、50min、55min等等。

在提取过程中，乙醇水溶液与木棉花的质量比为(50-60):1。例如可以为50:1、52:1、55:1或者60:1等等。

在本申请的一些实施例中，采用30-80vol％的乙醇水溶液超声提取木棉花的步骤之后还包括使用D101型号的大孔树脂对提取得到的滤液纯化得到所述提取液。

采用醇提之后，过滤去除乙醇，再使用D101型号的大孔树脂纯化得到提取液。然后再干燥所述提取液，例如采用冷冻干燥的方式干燥提取液得到所述木棉花醇提物。

可以理解的是，在本申请的其他实施例中，木棉花醇提物可以为水溶液，例如，上述得到提取液后可以不再需要干燥。或者，在本申请的其他实施例中，可以采用其他方法进行纯化，不仅限于上述的大孔树脂纯化的方法。

本申请实施例提供的制备方法得到的组合物具有调节皮肤菌群的作用，增加菌群的多样性，具有改善皮肤表面微生态的作用，可在皮肤表面形成一个较稳定的屏障。

本申请还提供一种能促进根瘤菌增加的组合物制备方法，主要包括以下步骤：

1)制备木棉花醇提物：将木棉花花瓣烘干粉碎，使用超声波提取后取提取液，提取的参数为：30-80vol％的乙醇水溶液，超声温度为45-75℃，超声时间为35-55min，料液比为1：(50-60)；使用D101型号的大孔树脂进行动态吸附纯化所述提取液，然后冷冻干燥得到木棉花醇提物。

通过上述步骤(1)得到的木棉花醇提物，杂质较小，木棉花黄酮含量较高。

2)按质量百分数计的以下组分混合原料：水78.03％；丙二醇10％；异硬脂醇异硬脂酸酯5％；所述木棉花醇提物5％；卡波0.35％；黄原胶0.1％；氢氧化钠0.3％；EDTA二钠0.2％；苯氧乙醇1％以及山梨酸钾0.02％。

采用上述方法制备得到的组合物能够促进根瘤菌增加，其外用后可以促进皮肤表面根瘤菌增加，调节皮肤表面的微生态。

此外，上述能促进根瘤菌增加的组合物制备方法制备得到的组合物可以用于培养根瘤菌。

本申请还提供一种应用，组合物在调节皮肤菌群中的应用，所述组合物包括木棉花醇提物以及药学上可接受的辅料。所述调节皮肤菌群包括：增加皮肤表面的红球菌、贪噬菌或者根瘤菌中的至少一种。

换言之，根据需求，本申请实施例提供的木棉花黄酮可以仅用于增加红球菌、增加贪噬菌、根瘤菌以及伯克霍尔德氏菌至少一种的药物的制备中。

作为示例性地，上述的组合物的原料包括按质量分数计的以下组分：丙二醇8-12％，异硬脂醇异硬脂酸酯2-8％，卡波0.1-0.5％，黄原胶0.05-0.3％，氢氧化钠0.1-0.4％，EDTA二钠0.1-0.4％；苯氧乙醇0.5-3％，山梨酸钾0.01-0.04％以及木棉花黄酮2-7％。

本申请还提供一种培养基的制备方法，该培养基用于培养红球菌、贪噬菌或者根瘤菌。该方法包括混合木棉花醇提物和辅料；例如，木棉花醇提物的制备方法可以采用上述步骤(1)。

在一些实施例中，培养基的制备方法包括按质量百分数计的以下组分混合原料：

水78.03％；丙二醇10％；异硬脂醇异硬脂酸酯5％；所述木棉花醇提物5％；卡波0.35％；黄原胶0.1％；氢氧化钠0.3％；EDTA二钠0.2％；苯氧乙醇1％以及山梨酸钾0.02％。

本申请还提供一种培养基，该培养基包括木棉花黄酮和辅料，或者，所述培养基包括木棉花醇提物和辅料。

木棉花黄酮或者木棉花醇提物均能够促进红球菌、贪噬菌或者根瘤菌的增长。因此，在用于培养红球菌、贪噬菌或者根瘤菌的培养基中加入木棉花黄酮或者木棉花醇提物，有利于菌种的增长。

以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种药物组合物，所述药物组合物主要通过以下步骤制得：

制备木棉花醇提物：

(1)将木棉花花瓣烘干，粉碎过80目筛，使用超声波辅助乙醇提取的技术提取木棉花，提取的参数为：71vol％的乙醇水溶液浓度作为提取液，超声温度为62℃，超声时间为41min，木棉花和乙醇水溶液的质量比为1：55。

(2)将超声提取出来的液相使用D101型号的大孔树脂进行动态吸附纯化，得到提取液放置于冷冻干燥机内冻干成木棉花醇提物的粉料。

根据以下质量百分数配料：

水：78.03％；丙二醇：10％；异硬脂醇异硬脂酸酯：5％；木棉花醇提物粉料：5％；卡波：0.35％；黄原胶：0.1％；氢氧化钠：0.3％；EDTA二钠：0.2％；苯氧乙醇：1％；山梨酸钾：0.02％。

将上述原料混合均匀。

试验例

对实施例1提供的药物组合物进行皮肤微生物多样性的测试，受试者要求年龄为25～45岁，脸部无痤疮，采样前7天未使用过抗生素或者萜类物质。

皮肤微生物采样部位为脸部，受试者在涂抹样品前以及涂抹样品28天后使用无菌的植绒拭子(拭子头在无菌生理盐水中浸湿)，在额头，鼻翼和脸颊各取一支拭子擦拭30s，擦拭面积4cm

收集上述所得的皮肤拭子，送至上海某医药科技有限公司进行16S rDNA基因测序，通过16S rDNA测序的方法，测试结果如表1和表2所示，比较涂抹前和涂抹28天后，皮肤上的微生物菌群的种类和丰度，发现实施例1提供的药物组合物能调节皮肤上的微生物。

表1

表2

表1和表2中C1和D1是同一人的皮肤拭子，C1是涂抹前，D1是连续涂抹实施例1的药物组合物28天后的皮肤拭子。与之相应的，C2和D2是同一人的皮肤拭子，C3和D3是同一人的皮肤拭子。C4和D4是同一人的皮肤拭子。C5和D5是同一人的皮肤拭子。C6和D6是同一人的皮肤拭子。

根据表1中的数据可以看出：

对于同一个人，实用实施例1提供的药物组合物之后，红球菌、贪噬菌、根瘤菌等均增加，红球菌从5％以下增加至20％左右。贪噬菌可以从无增加至10％以上。根瘤菌从0％增加至7％以上。伯克霍尔德氏菌也在部分皮肤拭子中增加。双歧杆菌的占比在部分皮肤拭子中得到稳定，部分皮肤拭子中体现出占比增加的结果。

此外，本申请提供的药物组合物还具有降低痤疮杆菌和葡萄球菌，将60％及以上含量的痤疮杆菌降低到40％以下，有的甚至降低至20％以下。能将23.000％含量的葡萄球菌降低到1.4％；充分说明了本申请实施例1提供的药物组合物具有降低痤疮杆菌和葡萄球菌的能力。

对于皮肤表面的菌群而言，在降低痤疮杆菌和葡萄球菌时，需要提高菌群的种类，确保皮肤表面的菌群不会被破坏。

此外，在本申请的实施例中，棒杆菌、链球菌、乳杆菌、不动杆菌、放线菌、沙雷氏菌、劳森氏菌以及韦荣氏球菌属也有不同程度的增加。

综上可以看出，使用本申请实施例1提供的组合物之后，微生物的种类发生了变化，主要表现在：红球菌、贪噬菌、根瘤菌等均增加；痤疮杆菌和葡萄球菌的降低；降低对皮肤不利的菌种的含量，同时增加一些无明显害处或者有益的菌种含量，增加皮肤表面的菌种丰度，稳定皮肤屏障，降低外界环境对皮肤表面的刺激。

进一步地，在本申请的一些实施例中，上述药物组合物可以用于增加红球菌，或者用于增加贪噬菌，或者用于增加根瘤菌。

从上述表1和表2可以看出，在用于培养根瘤菌的培养基中，加入木棉花醇提物可以促进根瘤菌的生长。在需要培养根瘤菌的场景下，可以在培养基中加入木棉花醇提物。例如，在培养基中加入实施例1提供的组合物。

与之相应地，在用于红球菌或者贪噬菌的培养基中，加入木棉花醇提物可以促进红球菌或者贪噬菌的生长。在需要培养红球菌或者贪噬菌的场景下，可以在培养基中加入木棉花醇提物。例如，在培养基中加入实施例1提供的组合物。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。