一种哌柏西利中残留溶剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种哌柏西利中残留溶剂的检测方法，属于药物分析检测领域。

背景技术

哌柏西利，又名帕布昔利布，是由辉瑞公司开发的一种CDK4/6抑制剂，2015年被FDA通过加速审批渠道批准用于HER2-乳腺癌的治疗，上市后凭借“临床疗效好，较来曲唑可使乳腺癌无进展生存期延长一倍；不良反应发生率低；胶囊剂，口服即可，与注射剂相比，安全性更高，便于患者服用，提高患者依从性；靶向性强，由于肿瘤细胞Cyclin D水平升高，能够增加细胞对药物的敏感性”等优点而备受关注。

哌柏西利目前的合成过程中都会用到丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃和甲苯等多种溶剂，为了有效的控制产品质量和保证用药安全，有必要测定哌柏西利中残留溶剂是否符合药典要求。然而哌柏西利溶解性特别差，在有机溶剂和水中均不易溶解；并且用水做溶剂会造成对照溶液不稳定，导致系统适用性不合格，这给哌柏西利残留溶剂的检测造成很大困难，目前尚未有哌柏西利残留溶剂检测方法的报道。

发明内容

针对上述问题，本发明首次开发出了一种操作简单、准确可靠的哌柏西利残留溶剂(丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯共7种溶剂残留)的检测方法。该方法通过加入N,N二甲基甲酰胺助溶使哌柏西利溶于水中，加入磷酸分散提高对照溶液的稳定性，解决溶液配制问题；采用顶空进样，程序升温等色谱条件保证结果的准确可靠。

本发明的技术方案是：一种哌柏西利中残留溶剂的检测方法，其特征是，取哌柏西利置于顶空瓶中，顶空进样，加入空白溶液溶解后，以Agilent DB-624为色谱柱采用气相色谱外标法进行检测；

所述残留溶剂为丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯共7种溶剂。

所述空白溶液为N,N二甲基甲酰胺浓度0.8-1.5％(按体积比计)，磷酸浓度0.4-0.6％(按体积比计)的水溶液。

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624；规格为30m*0.53mm*3μm；

程序升温：40℃保持6分钟，以20℃/min速率升温至200℃；

进样口温度：200℃；

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；

检测器温度：250℃；

载气：N

进样方式：顶空进样法；

平衡时间：30分钟；

平衡温度：80℃；传输线温度：90℃；定量环温度：100℃。

进一步的，其检测方法包括以下步骤：

1)空白溶液：精密量取1.0ml N,N二甲基甲酰胺置于100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸，加水稀释后定容至刻度，配置成空白溶液；

2)混合对照溶液：精密称取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚各500mg，四氢呋喃72mg，甲苯89mg置于同一100ml量瓶中用N,N二甲基甲酰胺定容至刻度；精密量取1.0ml置入100ml量瓶中加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀作为混合对照溶液；

3)供试品溶液：取哌柏西利50mg，精密称量，置20ml顶空瓶中，加5ml空白溶液溶解，得到供试品溶液；

取上述溶液各5ml，分别进样，采用上述的色谱条件进行哌柏西利中残留溶剂的检测，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯的含量。

本发明的有益效果是：本发明首次开发出一种哌柏西利中残留溶剂的检测方法，解决了哌柏西利样品溶解问题和对照溶液不稳定问题。该方法操作简单、重复性好(RSD均在5％以内)，灵敏度高(检测限≤10μg/ml及定量限≤20μg/ml)，数据准确可靠(回收率为96-100％)，为有效控制哌柏西利原料质量和保证用药安全提供参考。

附图说明

图1为空白溶液的色谱图；

图2为混合对照系统适用性实验的色图谱；

图3为样品检测的色谱图。

具体实施方式

实施例

1.仪器与材料

仪器：赛默飞trace1300气相色谱仪，HSS 8650顶空进样器，XS105DU型电子天平；

材料：哌柏西利(批号：03201130GS，03201201GS，03201212GS)；

2.色谱条件

色谱柱：Agilent DB-624；规格为30m*0.53mm*3μm；

程序升温：40℃保持6分钟，以20℃/min速率升温至200℃；

进样口温度：200℃；

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；

检测器温度：250℃；

载气：N

进样方式：顶空进样法；

平衡时间：30分钟；

平衡温度：80℃；传输线温度：90℃；定量环温度：100℃。

3.溶液配制

空白溶液：精密量取1.0ml N,N二甲基甲酰胺置于100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸，加水稀释后定容至刻度。

对照贮备液：分别精密称取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚各500mg，四氢呋喃72mg，甲苯89mg置于100ml量瓶中用N,N二甲基甲酰胺定容至刻度。

混合对照贮备液：精密称取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚各500mg，四氢呋喃72mg，甲苯89mg置于同一100ml量瓶中用N,N二甲基甲酰胺定容至刻度。

4.样品测定

(1)专属性试验

精密量取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯对照贮备液和七者的混合对照贮备液各1.0ml分别置入100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀得到对照溶液和混合对照溶液，取5ml分别进样，绘制图谱。

在上述色谱条件下各组分可以得到较好的分离，各组分保留时间及分离度见表1和图2。空白溶液图谱如图1所示。

表1：各组分保留时间及分离度

(2)系统适用性试验

精密量取混合对照贮备液1.0ml置100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀得到混合对照溶液，取5ml分别进样，连续进样6针，计算各对照品峰面积的相对标准偏差(RSD)见表2。结果表明，RSD均在5％以内。

表2：系统适用性试验数据结果(n＝6)

(3)线性试验

分别精密量取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃和甲苯混合对照贮备液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml置100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀，作为一系列线性试验溶液，每个溶液连续进样三次。以丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯的峰面积为纵坐标，以七者浓度为横坐标建立线性回归曲线。测定结果见表3。

表3：线性试验测定结果

(4)回收率试验

分别精密量取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃和甲苯混合对照贮备液0.8ml、1.0ml、1.2ml置100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀，作为一系列回收率试验溶液。

精密称量哌柏西利50mg共9份，用上述三个浓度每个浓度配制三份供试品溶液，摇匀，作为回收率样品溶液，取5ml进样，记录色谱图，计算回收率。测定结果见表4。

回收率％＝(测得量-样品量)/加入量×100％

表4：回收率试验测定结果

(5)检测限及定量限试验

分别取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯对照贮备溶液1.0ml置100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀得到对照溶液。

分别取对照溶液用水稀释至一定浓度，取5ml进样，记录色谱图以信噪比S/N＝3计算检测限，以信噪比S/N＝10计算定量限，测定结果见表5。

表5：检测限定量限结果

(6)样品检验

空白溶液：精密量取1.0ml N,N二甲基甲酰胺置于100ml量瓶中，加入0.5ml磷酸，加水稀释后定容至刻度。

混合对照溶液：精密称取丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚各500mg，四氢呋喃72mg，甲苯89mg置于同一100ml量瓶中用N,N二甲基甲酰胺定容至刻度。精密量取1.0ml置入100ml量瓶中加入0.5ml磷酸后用水定容，摇匀作为混合对照溶液。

供试品溶液：取哌柏西利50mg，精密称量，置20ml顶空瓶中，加5ml空白溶液溶解即得。

取上述溶液各5ml，分别进样，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯的含量，测定结果见表6。

表6：三批哌柏西利样品残留溶剂测定结果

结果表明，本方法操作简单，准确可靠，为哌柏西利原料药的质量控制提供了一种有效手段，适用于哌柏西利原料药中丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、正庚烷、苯甲醚、四氢呋喃、甲苯残留量的测定。