一种用于畜禽抗炎促生长的植物提取物菌酶生物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物制剂技术领域，具体涉及一种用于畜禽抗炎促生长的植物提取物菌酶生物制剂及其制备方法。

背景技术

博落回[Macleaya cordata(Willd.)R.BR.]又名落回、号筒杆、号筒草、三钱三等，是罂栗科博落回属多年生直立草本植物，主要分布在北美、欧洲、中国南部和西北部。化学和药理研究表明，生物碱是博落回发挥药理作用的主要物质，如抗菌、抗真菌、抗炎、抗癌、交感神经和局部麻醉作用。博落回含有丰富的生物碱、甾体、皂苷等，其中被提取鉴定的生物碱达74个，苯胼异喹啉类生物碱是含量较高的一类生物碱，其中主要为白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱等，在抗菌、消炎、促生长等方面很有发展前景。博落回含有的主要活性成分为生物碱，其中主要为血根碱和白屈菜红碱，两种活性成分总量不少于2.25％。还包含有原阿片碱、α-别隐品碱、β-别隐品碱、乙氧基白屈菜红碱等其它生物碱。

博落回中的多种生物碱具有很强的抗炎活性，所以在禽畜的养殖中，逐渐以博落回提取物代替抗生素使用。但博落回提取物单独使用，抗炎促生长的效果有限，例如博落回提取物与葡萄糖氧化酶联合使用可以改善蛋鸡的产蛋性能、饲料效率和抗氧化性能(曲浩杰等，饲料工业，2020年第41卷第14期)，将博落回提取物与葡萄糖氧化酶联合使用，主要是促生长，抗炎效果还有待提高。此外博落回的传统提取法主要有浸渍法、煎煮法、回流提取法和水蒸气蒸馏法，其机理主要根据中草药各种成分在溶剂中的溶解性质不同，选用的溶剂对无用成分溶解度小，对有用活性成分溶解度大，从而将有效成分从植物中提取出来。但传统提取法因效率低、耗能大、杂质多。因此，需要一种提取物菌酶生物制剂，既具有优异的抗炎作用，又能显著促进禽畜生长，预防禽畜患病提高成活率和生长性能。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种用于畜禽抗炎促生长的植物提取物菌酶生物制剂及其制备方法。本发明制备的博落回散与葡萄糖氧化酶、丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌混合得到博落回散菌酶生物制剂，具有显著的抗炎促生作用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种用于畜禽抗炎促生长的植物提取物菌酶生物制剂，包括以下重量份的原料：

博落回散5～10份，葡萄糖氧化酶0.1～1.0份，丁酸梭菌0.5～1.5份，枯草芽孢杆菌0.1～1.0份。

优选的，包括以下重量份的原料：

博落回散8份，葡萄糖氧化酶0.5份，丁酸梭菌1.0份，枯草芽孢杆菌0.5份。

优选的，所述博落回散由以下方法制备：

(1)将博落回全株洗净干燥后粉碎，将粉碎后的博落回进行超临界二氧化碳萃取，得到萃取液；

(2)将萃取得到的残渣用酸性乙醇吸收，然后超声细胞破碎，过滤后得到的浸提液；

(3)将萃取液和浸提液混合，进行浓缩干燥，得到博落回散。

优选的，步骤(1)中，所述萃取的温度为35-50℃，流体压力为20-40Mpa，流速为0.3-0.5ml/min，萃取时间1-3h。

优选的，步骤(2)中，所述酸性乙醇为含有0.1mol/L硫酸的乙醇-水溶液，所述乙醇与水的体积比为50：50，所述乙醇为体积分数90％的乙醇；所述残渣与酸性乙醇的加入量之比为1g：(5～10)ml。

优选的，步骤(2)中，所述超声细胞破碎的时间1～3h，超声的功率1200～1800W，频率为25KHz。

优选的，步骤(3)中，所述萃取液和浸提液的质量比为(1～3)：1。

优选的，所述丁酸梭菌的保藏号为CGMCC NO.4729；所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CGMCC No.15646。

本发明的第二方面，提供植物提取物菌酶生物制剂的制备方法，所述制备方法为：将博落回散、葡萄糖氧化酶、丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌按重量份称取后，混合均匀，得到植物提取物菌酶生物制剂。

本发明的第三方面，提供植物提取物菌酶生物制剂在禽畜抗炎促生长中的应用。

植物提取物菌酶生物制剂的添加量为250g/吨(饲料)。

本发明的有益效果：

(1)本发明制备的博落回散与葡萄糖氧化酶、丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌混合得到博落回散菌酶生物制剂。与单独使用博落回散、或博落回散与葡萄糖氧化酶相比，博落回散与葡萄糖氧化酶、丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌之间具有协同促进作用，抗炎促生长的效果显著。

(2)本发明的制备方法简单，成本低，无毒副作用，可长期使用，禽畜不会产生“抗药性”，可在各类家禽和牲畜中广泛使用。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

正如背景技术部分介绍的，博落回中的多种生物碱具有抗炎活性，博落回散与葡萄糖氧化酶联合使用可以改善蛋鸡的产蛋性能、饲料效率和抗氧化性能。博落回与其他物质复配既能抗炎又促生长的相关研究较少。

基于此，本发明的目的是提供一种用于畜禽抗炎促生长的植物提取物菌酶生物制剂及其制备方法。本发明通过对博落回的提取方法进行研究，博落回先经超临界二氧化碳萃取，得到的残渣用酸性乙醇吸收，再进行超声细胞破碎后，将萃取液和浸提液混合，浓缩干燥得到的博落回散与葡萄糖氧化酶、丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌复配可以协同促进禽畜的抗炎和促生长。虽然丁酸梭菌是饲料中常用的“替抗”添加剂，但是经研究发现，丁酸梭菌CGMCC No.4729并非常用的“替抗”菌种，但与博落回散与葡萄糖氧化酶和枯草芽孢杆菌复配后可以显著提高博落回散的抗炎性。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。

本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。

说明：丁酸梭菌的保藏号为CGMCC NO.4729；枯草芽孢杆菌的保藏号为CGMCCNo.15646，均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。

实施例1博落回散由以下方法制备：

(1)将博落回全株洗净干燥后粉碎至20目，将粉碎后的博落回进行超临界二氧化碳萃取，萃取的温度为43℃，流体压力为30Mpa，流速为0.4ml/min，萃取时间2h，得到萃取液。

(2)将萃取釜内的残渣取出，用酸性乙醇吸收，酸性乙醇为含有0.1mol/L硫酸的乙醇-水溶液，乙醇与水的体积比为50：50，乙醇为体积分数90％的乙醇；残渣与酸性乙醇的固液比为1g：7.5mL。然后进行超声细胞破碎，时间2h，超声的功率1200W，频率为25KHz。细胞破碎完毕，过滤后得到浸提液。

(3)将萃取液和浸提液按2：1的质量比混合，然后减压浓缩，喷雾干燥得到博落回散。

实施例2

将按照实施例1的方法制备的博落回散8kg，葡萄糖氧化酶0.5kg，丁酸梭菌(CGMCCNO.4729)1.0kg，枯草芽孢杆菌(CGMCC No.15646)0.5kg混合均匀，得到植物提取物菌酶生物制剂。

实施例3

将按照实施例1的方法制备的博落回散5kg，葡萄糖氧化酶1.0kg，丁酸梭菌(CGMCCNO.4729)0.5kg，枯草芽孢杆菌(CGMCC No.15646)1.0kg混合均匀，得到植物提取物菌酶生物制剂。

实施例4

将按照实施例1的方法制备的博落回散10kg，葡萄糖氧化酶0.1kg，丁酸梭菌(CGMCC NO.4729)1.5kg，枯草芽孢杆菌(CGMCC No.15646)0.1kg混合均匀，得到植物提取物菌酶生物制剂。

对比例1

以实施例1的方法制备的博落回散为生物制剂。

对比例2

以葡萄糖氧化酶为生物制剂。

对比例3

以丁酸梭菌(CGMCC NO.4729)为生物制剂。

对比例4

以枯草芽孢杆菌(CGMCC No.15646)为生物制剂。

对比例5

以将按照实施例1的方法制备的博落回散8kg，葡萄糖氧化酶0.5kg混合均匀，得到生物制剂。

试验例1

选用体重基本一致的健康24日龄断奶三元杂交商品仔猪400头(公母各半)，随机分成10个处理，每个处理4个重复，每个重复10头(见表1)。

基础饲粮按照NRC标准配制日粮，不含任何抗生素和植物提取物。以饲喂基础饲粮为空白对照，以饲喂恩拉霉素+基础饲粮为对照组，以饲喂实施例2制备的生物制剂+基础饲粮为实施例2组，以饲喂实施例3制备的生物制剂+基础饲粮为实施例3组，以饲喂实施例4制备的生物制剂+基础饲粮为实施例4组，以饲喂对比例1制备的生物制剂+基础饲粮为对比例1组，以饲喂对比例2制备的生物制剂+基础饲粮为对比例2组，以饲喂对比例3制备的生物制剂+基础饲粮为对比例3组，以饲喂对比例4制备的生物制剂+基础饲粮为对比例4组。上述生物制剂和恩拉霉素的添加量均为200mg/kg。试验期42d，试验期对生产性能进行监测，试验期的0d和42d采血，分离血清，-20℃保存，用以测定免疫球蛋白指标(lgM，lgA，lgG)，试验期的生长性能和免疫性能结果见表1和2。

表1生长性能

表2免疫性能

由表1和2可以看出，与使用恩拉霉素和对比例1～5的生物制剂相比，采用实施例2～4制备的生物制剂可以更加显著提高仔猪的生长性能和免疫性能。以空白对照料重比指标为100％，使用恩拉霉素、实施例2～4的生物制剂和对比例1～5的生物制剂后，料重比依次为空白对照的94.7％、87.3％、90.0％、89.3％、94.7％、100.0％、100.0％、97.3％、92.7％，可见实施例2～4制备的生物制剂明显获得更低的料重比。说明采用本发明制备的生物制剂可以增强仔猪的机体免疫力，通过改善养分利用率，在低采食量下提高生产效率，降低料重比，加快仔猪生长发育。

试验例2

选用健康1日龄海兰褐雌性雏鸡1800只，随机分成10个处理，每个处理6个重复，每个重复30只。饲喂基础日粮(NRC建议营养水平)，以饲喂基础饲粮为空白对照，以饲喂金霉素+基础饲粮为对照组，以饲喂实施例2制备的生物制剂+基础饲粮为实施例2组，以饲喂实施例3制备的生物制剂+基础饲粮为实施例3组，以饲喂实施例4制备的生物制剂+基础饲粮为实施例4组，以饲喂对比例1制备的生物制剂+基础饲粮为对比例1组，以饲喂对比例2制备的生物制剂+基础饲粮为对比例2组，以饲喂对比例3制备的生物制剂+基础饲粮为对比例3组，以饲喂对比例4制备的生物制剂+基础饲粮为对比例4组。上述生物制剂和金霉素的添加量均为250g/吨。详细基础日粮组成和营养水平见表3。

试验鸡笼养，自由采食和饮水，同时，严格按照常规管理程序管理和正常免疫程序进行免疫。试验第6周，每个处理随机选择12只鸡(2只/重复)，进行屠宰试验。对以下性能进行检测，所得结果见表4～5。

生产性能：以重复为单位，每天记录采食量，试验始末试验鸡称重，计算日增重、日采食量和死亡率。

抗氧化指标：试验期结束，每个处理随机选择12只鸡(2只/重复)，采集血液和取肝脏样本，测定抗氧化指标(SOD、GSH-PX、MDA)。

表3基础饲粮

表4生产性能

表5抗氧化指标

由表4和5可以看出，与采用对比例1～5的生物制剂和使用金霉素相比，采用实施例2～4制备的生物制剂可以更明显降低雏鸡死淘率，提高增重；同时，降低肝脏和血清MDA含量，提高GSH-PX和T-SOD活性。说明本发明制备的生物制剂可以改善海兰褐雌性雏鸡的生长性能，提高肝脏和血清的抗氧化能力。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。