一种常春藤提取物的制备方法

技术领域

本发明属于植物的提取加工技术领域，具体涉及一种常春藤提取物的制备方法。

背景技术

常春藤(拉丁学名：Hedera nepalensis var.sinensis(Tobl.))为五加科常春藤的干燥茎叶，别称土鼓藤、钻天风、三角风，出自《本草纲目拾遗》，具有祛风利湿、活血消肿、平肝、解毒的功效。常春藤的主要成分有三萜皂苷、胡萝卜素、鞣质、糖类等，其中茎中含常春藤苷、鞣质(质量含量为12.01％左右)、树脂等，叶含常春藤苷、肌醇、胡萝卜素、糖类，除此之外含鞣质29.4％左右。皂苷类化合物(例如三萜皂苷)是常春藤植物中发现种类较多，且活性最好的一类成分，具有抗炎、抗肿瘤、抗真菌、杀虫等多种药理活性。

现代的药理学研究表明：常春藤主要的活性成分是皂苷。从常春藤中提取的α-常春藤皂苷和常春藤皂苷C、常春藤皂苷E、常春藤皂苷F均有很好的抗炎作用。双糖链的常春藤皂苷C(hederacoside C)和α-常春藤皂苷被认为是常春藤中的主要药效成分，其中，α-常春藤皂苷可由常春藤皂苷C通过酯水解而形成，欧洲药典规定药用常春藤中常春藤皂苷C的含量不得低于3％。相关技术中记载了常春藤茎叶中常春藤C的含量为1.30％～13.65％，α-常春藤苷的含量为0.56％～4.42％，其叶中的含量为茎秆的3倍～4倍。

相关技术中采用常春藤的粗提物(醇提)做成制剂，其用于治疗咳嗽和呼吸困难等疾病，其主要药效成分就是常春藤皂苷。相关技术中还发现α-常春藤苷特别有助于支气管解痉，其通过抑制受体/配体细胞内化，不断激活腺苷酸环化酶系统，使平滑肌松弛(解痉)，而常春藤苷C和常春藤苷配基不能抑制内化过程；但常春藤苷C具有祛风、利湿，平肝，解毒等功能。

相关技术中还提供了中华常春藤总皂甙的提取及其分离的方法，比较了溶剂提取、微波提取及生物酶等提取方法，再经过不同大孔树脂纯化，制备型反相高效液相色谱分离等手段得到纯度87％的常春藤皂甙C。该工艺使用制备型色谱纯化技术分离常春藤苷C，成本高，技术复杂，不利于工业化生产。

相关技术中还提供了一种制备包含活性成分常春藤苷C和α-常春藤素的常春藤叶提取物的方法，该方法主要是发明了一种富含4％α-常春藤素和6.5％常春藤苷C混合制备的高效提取物。其中该方法并未公开如何分离常春藤苷C和α-常春藤素，且分离常春藤苷C和α-常春藤素总含量均较低。

相关技术中还提供了一种从常春藤中制备常春藤苷C的方法，将常春藤茎叶干燥粉碎，乙醇水提取，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，正丁醇相经乙醇溶解，乙酸乙酯沉淀，硅胶柱分离纯化得到含量大于98％的常春藤苷C单体。该发明虽然可以得到高纯度的常春藤苷C单体，但是工艺复杂，成本高，而且使用了石油醚、氯仿等高危险性试剂，生产安全性低，且未充分利用原料中其他成分，造成资源浪费。

相关技术中还提供了一种常春藤属植物提取物的制备方法，将常春藤原料浸泡后乙醇水溶液提取，过大孔树脂富集(≥40％乙醇水溶液洗脱)，富集液减压干燥得到提取物，其实施例中提取物总苷含量不超过60％(比色法)，单体含量(常春藤苷C或α-常春藤提取物)不超过25％。即上述方法制得的提取物的纯度低。

因此，需要开发一种常春藤提取物的制备方法，该制备方法能够同时制得高纯度的常春藤苷C提取物和α-常春藤苷提取物。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种常春藤提取物的制备方法，该制备方法能够同时制得高纯度的常春藤苷C提取物和α-常春藤苷提取物。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种常春藤提取物的制备方法，包括以下步骤：

S1、将常春藤原料与助提剂溶液混合后，超声提取，得提取液；

S2、将所述提取液浓缩后与乙醇混合，收集浓缩液；

S3、将所述浓缩液过氧化铝层析柱，依次采用水、乙醇水溶液和酸性乙醇水溶液洗脱；

收集所述乙醇水溶液的洗脱液，制得常春藤苷C洗脱液；

收集所述酸性乙醇水溶液的洗脱液，制得α-常春藤苷洗脱液；

S4、将所述常春藤苷C洗脱液结晶，得常春藤苷C提取物；

将所述α-常春藤苷洗脱液结晶，得α-常春藤苷提取物；

所述助提剂溶液包括以下制备原料：

表面活性剂和絮凝剂。

根据本发明制备方法技术方案中的至少一种技术方案，至少具备如下有益效果：

本发明通过助提剂和超声提取的协同作用，使得常春藤原料中常春藤苷类化合物(α-常春藤苷和常春藤苷C)与助提剂溶液之间的液膜厚度足够薄，减小了常春藤苷从原料表面扩散到助提剂溶液过程中的阻力，极大的提高了有效成分的提取率(提取液中总苷含量大于50％)。

助提剂中通过表面活性剂(降低助提剂溶液的表面张力，增加对细胞组织的渗透性、有效成分的解吸、溶解和增溶等)和絮凝剂(与提取液中鞣质等杂质絮凝达到除杂效果；②提高了表面活性剂对有效成分的助溶效果))的互配使用，显著增强了有效成分(α-常春藤苷和常春藤苷C)的提取率，缩短了提取时间，同时达到除杂的效果。

常春藤苷类化合物中含有羟基，在乙醇中溶解性较好；通过在提取液中加入乙醇，防止在浓缩过程中，常春藤苷类化合物因溶剂减少而析出；使得常春藤苷类化合物充分溶解在浓缩液中。

通过采用水、乙醇水溶液和酸性乙醇水溶液洗脱，实现了α-常春藤苷和常春藤苷C的分离。

本发明通过助提剂-超声提取、氧化铝柱层析分离和结晶实现了同时制备高纯度的常春藤苷C和α-常春藤苷，且收率高；整个工艺除乙醇外未使用其他有机溶剂，安全环保，经济高效。

常春藤苷C分子式为C

α-常春藤皂苷分子式为C

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤原料为常春藤叶或常春藤茎的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤叶为常春藤干叶。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤茎为常春藤干茎。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤原料粉碎处理得常春藤原料粉。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤原料粉的粒径为40目～60目。

通过将原料粉碎至合适的目数，增大了原料与助提剂溶液的接触面积，从而加快了提取的效率。

根据本发明的一些实施方式，所述表面活性剂选自吐温20、吐温40和吐温80中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述絮凝剂为羟丙基壳聚糖。

根据本发明的一些实施方式，所述羟丙基壳聚糖的取代度在80％以上。

常春藤皂苷化合物上有很多羟基，电子云密度大，化合物呈电负性，与阳离子型高分子的羟丙基壳聚糖形成离子对，相比于目标化合物(常春藤皂苷化合物)的极性形式，离子对形式更容易被非离子表面活性剂吐温(吐温20、吐温40和吐温80)捕捉，因此提取率显著提高；在提高有效成分提取率的同时，溶出的杂质如鞣质等与羟丙基壳聚糖在超声波的辅助下，使分子高速碰撞，达到很好的絮凝效果。

羟丙基壳聚糖中羟基的引入使整个絮凝剂分子链上存在大量的羟基，使壳聚糖分子结构与鞣酸分子结构融合性更强，与鞣酸胶粒分子中的酚羟基不仅能形成氢键而产生特性吸附作用；其电离会产生离子，其电中和作用也能促进絮凝。

根据本发明的一些实施方式，所述表面活性剂和所述絮凝剂的质量比为2.5～6:1。

在表面活性剂固定的情况下，若絮凝剂过多，过多的正电荷与常春藤苷负电荷中和，而被絮凝造成较多损耗；过少，杂质去除率低，影响有效成分的纯度，进一步影响后续的纯化效果，其次降低了对表面活性剂助溶的协同效果。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液中助提剂的质量分数为0.3‰～0.6‰。

当助提剂的浓度过高时，会产生大量泡沫，增加了操作难度，同时也会增大杂质的溶出，不利于后期的分离。浓度过低时，形成的胶束浓度不够，增容效果不明显。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液中絮凝剂的质量分数为0.08‰～0.1‰。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液的pH为7.5～8.5。

由于α-常春藤苷其水溶性较差，通过调节pH，可有效提高α-常春藤苷的提取率；pH过大，影响羟丙基壳聚糖絮凝效果，协同效果反而导致α-常春藤苷提取率低，纯度低。

且由于提取过程中的弱碱性环境，被部分离子化的常春藤苷更易被氧化铝柱层析吸附，再通过极性差异以及目标成分与氧化铝柱层析吸附的难易度，采用梯度洗脱达到很好的分离效果。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液的pH通过选用碱性物质调节。

根据本发明的一些实施方式，所述碱性物质包括无机碱、碳酸盐和碳酸氢盐。

根据本发明的一些实施方式，所述无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铯中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述碳酸盐为碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述碳酸氢盐为碳酸氢钠、碳酸氢钾和碳酸氢铯中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液的制备原料还包括水。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液与所述常春藤原料的质量比为1:12～25。

根据本发明的一些实施方式，所述助提剂溶液与所述常春藤原料的质量比为1:15～20。

根据本发明的一些实施方式，所述超声提取的参数如下：提取时间30min～45min，提取温度为45℃～60℃，超声频率为20kHz～25kHz。

过高的温度会破坏表面活性剂的结构，影响提取效率，且温度过高，常春藤苷C存在降解现象，在合适的温度范围内，升高温度可加速有效组分分子的运动速度，加速扩散，增加溶解量。

超声时间过长，会打破絮凝剂与杂质絮凝的结构，导致絮凝效果变差，合适的超声辅助，可以提高分子将的碰撞，促使絮凝剂与杂质之间的链接作用力的形成，提高絮凝效果；过高的超声频率会破坏絮凝剂与杂质分子形成的分子结构，降低絮凝效果。

根据本发明的一些实施方式，所述超声提取为间歇式超声提取。

根据本发明的一些实施方式，所述间歇式超声提取的总时长由若干个相邻的超声时间和间隔时间组成。

根据本发明的一些实施方式，所述间歇式超声提取的每次间歇时间为5s～10s。

根据本发明的一些实施方式，所述间歇式超声提取的每次超声时间为5min～6min。

根据本发明的一些实施方式，所述浓缩为减压浓缩。

根据本发明的一些实施方式，所述浓缩过程中浓缩至固体含量为9％～15％。

根据本发明的一些实施方式，所述浓缩液中乙醇的体积分数为30％～40％。

通过将浓缩液中乙醇的体积分数控制在上述范围，确保α-常春藤苷完全溶解，且达到去除部分极性较大的杂质的目的。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述水的用量为0.25BV～0.5BV。

少量水去除掉极性较大不易被吸附的少量杂质，过多水对树脂吸附物无影响；但会影响提取时间，同时还会造成水资源浪费。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述水的流速为1BV/h～1.5BV/h。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50％～60％。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述乙醇水溶液的用量为2BV～2.5BV。

用量小于限定范围，洗脱不完全，高于限定范围，会存在少量α-常春藤苷被洗下，且浪费溶剂。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述乙醇水溶液的流速为1BV/h～1.5BV/h。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述酸性乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70％～80％。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述酸性乙醇水溶液的用量为2BV～3BV。

用量小于限定范围，洗脱不完全，高于限定范围会存在少量杂质被洗脱下来，且浪费溶剂。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述酸性乙醇水溶液的流速为1BV/h～1.5BV/h。

根据本发明的一些实施方式，步骤S3中所述酸性乙醇水溶液的pH为5～6。

pH不在上述范围内，其分离效果差，过酸、或碱性，杂质易被洗脱来下，影响α-常春藤苷的纯度。且pH过高会导致α-常春藤苷洗脱不完全。

根据本发明的一些实施方式，所述酸性乙醇水溶液的pH选用酸调节。

根据本发明的一些实施方式，所述酸为氯化氢或硫酸中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述氧化铝层析柱为中性氧化铝层析柱或酸性氧化铝层析柱。

选用中性氧化铝、酸性氧化铝柱层析将常春藤苷C与α常春藤苷有效分离，且吸附量、解析率均比较高。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤苷C洗脱液结晶的温度为4℃～10℃。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤苷C洗脱液结晶的时间为8h～24h。

通过控制结晶的温度和时间，使常春藤苷C充分结晶，提高其产率。

根据本发明的一些实施方式，所述常春藤苷C洗脱液结晶，包括以下步骤：

将所述常春藤苷C洗脱液减压浓缩至饱和，在4℃～10℃下结晶8h～24h后，收集固相，干燥得常春藤苷C提取物。

根据本发明的一些实施方式，所述α-常春藤苷洗脱液结晶的温度为4℃～10℃。

根据本发明的一些实施方式，所述α-常春藤苷洗脱液结晶的时间为8h～24h。

通过控制结晶的温度和时间，使α-常春藤苷充分结晶，提高其产率。

根据本发明的一些实施方式，所述α-常春藤苷洗脱液结晶，包括以下步骤：

将所述α-常春藤苷洗脱液减压浓缩至饱和，在4℃～10℃下结晶8h～24h后，收集固相，洗涤，干燥得α-常春藤苷提取物。

根据本发明的一些实施方式，所述洗涤的洗涤剂为水。

根据本发明的一些实施方式，所述洗涤的次数为1次～2次。

本发明中所指饱和为恰好析出晶体的状态。

附图说明

图1为本发明实施例3中制得的常春藤苷C提取物的高效液相色谱检测图。

图2为本发明实施例3中制得的α-常春藤苷提取物的高效液相色谱检测图。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本发明实施方式中选用的常春藤叶干原料中常春藤苷C的质量含量为5.34％，α-常春藤苷的质量含量为2.16％。

本发明实施方式中常春藤苷C和α-常春藤苷的含量通过高效液相色谱检测得到。

常春藤苷C的液相色谱检测条件如下：

色谱柱：WONDASILTMC18柱(250mm(长度)×4.6mm(内径)，5μm(填料粒径))；

流速：1mL/min；

检测波长：203nm；

进样量：10μL；

灵敏度：2.000AUFS；

流动相：乙腈和水体积比为28：72；

柱温：25℃。

α-常春藤苷的液相色谱检测条件如下：

色谱柱：WONDASILTMC18柱(250mm(长度)×4.6mm(内径)，5μm(填料粒径))。

流速：0.8mL/min；

检测波长：203nm；

进样量：10μL；

灵敏度：2.000AUFS；

流动相：乙腈和质量分数为0.1％磷酸水溶液的体积比为45：55；

柱温：25℃。

实施例1

本实施例为一种常春藤提取物的制备方法，由以下步骤组成：

S1、超声辅助提取：

将常春藤叶干原料，破碎至40目，加入15倍质量的助提剂溶液，在45℃下超声辅助连续逆流提取30min；固液分离；收集液相，得超声提取液(常春藤甙C与α-常春藤苷含量之和为53.97％)。

助提剂溶液中助提剂的质量分数为0.3‰。

助提剂由吐温20(CAS号为：9005-64-5)与羟丙基壳聚糖(上海士锋生物科技有限公司，取代度≥80％；CAS号为：104673-29-2)组成，吐温20与羟丙基壳聚糖的质量比为2.5：1。

助提剂溶液的pH为8.5(25℃下pH；通过加入氢氧化钠调节得到)。

超声辅助的条件如下：低频率间歇式超声，超声时间为5s/5min(即每超声5min，则停止超声5s)，超声频率为20kHz。

S2、柱层析：

将步骤S1中所得超声提取液减压浓缩(固体质量浓度为12％±3％)，再加入乙醇，并控制乙醇的体积浓度为30％，固液分离；收集液相，制得减压浓缩液；

将减压浓缩液过中性氧化铝柱层析，依次使用0.25BV水、2BV体积分数为50％乙醇水溶液、2BV体积分数为70％酸性乙醇水溶液(pH为5，采用质量浓度为35％的盐酸调节)洗脱，洗脱流速为1BV/h；

收集50％乙醇水溶液洗脱液，得常春藤苷C粗提取液；

收集70％酸性乙醇水溶液洗脱液，得α-常春藤苷粗提取物；

S3、结晶：

将步骤S2所得的常春藤苷C粗提取液减压浓缩至刚好析出，4℃冷藏放置8h，析出晶体，固液分离，晶体干燥得常春藤苷C提取物；

将步骤S2所得的α-常春藤苷粗提取物减压浓缩至刚好有析出，4℃冷藏放置8h，析出结晶，固液分离，晶体用水淋洗2次后干燥得α-常春藤苷提取物。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.71％，收率为84.17％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为98.41％，收率为82.00％。

实施例2

本实施例为一种常春藤提取物的制备方法，由以下步骤组成：

S1、超声辅助提取：

将常春藤叶干原料，破碎至60目，加入20倍质量的助提剂溶液，在60℃下超声辅助连续逆流提取45min；固液分离；收集液相，得超声提取液(常春藤甙C与α-常春藤苷含量之和为52.79％)。

助提剂溶液中助提剂的质量分数为0.6‰。

助提剂由吐温20(CAS号为：9005-64-5)与羟丙基壳聚糖(上海士锋生物科技有限公司，取代度≥80％；CAS号为：104673-29-2)组成，吐温20与羟丙基壳聚糖的质量比为6：1。

助提剂溶液的pH为7.5(25℃下pH；通过加入碳酸氢钠调节得到)。

超声辅助的条件如下：低频率间歇式超声，超声时间为10s/5min(即每超声5min，则停止超声10s)，超声频率为25kHz。

S2、柱层析：

将步骤S1中所得超声提取液减压浓缩(固体质量浓度为12％±3％)，再加入乙醇，并控制乙醇的体积浓度为40％，固液分离；收集液相，制得减压浓缩液；

将减压浓缩液过酸性氧化铝柱层析，依次使用0.5BV水、2.5BV体积分数为60％乙醇水溶液、3BV体积分数为80％酸性乙醇水溶液(pH为6，采用质量浓度为35％的盐酸调节)洗脱，洗脱流速为1.5BV/h；

收集60％乙醇水溶液洗脱液，得常春藤苷C粗提取液；

收集80％酸性乙醇水溶液洗脱液，得α-常春藤苷粗提取物；

S3、结晶：

将步骤S2所得的常春藤苷C粗提取液减压浓缩至刚好析出，10℃冷藏放置24h，析出晶体，固液分离，晶体干燥得常春藤苷C提取物；

将步骤S2所得的α-常春藤苷粗提取物减压浓缩至刚好有析出，10℃冷藏放置24h，析出结晶，固液分离，晶体用水淋洗1次后干燥得α-常春藤苷提取物。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.59％，收率为84.80％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为98.20％，收率为82.82％。

实施例3

本实施例为一种常春藤提取物的制备方法，由以下步骤组成：

S1、超声辅助提取：

将常春藤叶干原料，破碎至60目，加入18倍质量的助提剂溶液，在55℃下超声辅助连续逆流提取40min；固液分离；收集液相，得超声提取液(常春藤甙C与α-常春藤苷含量之和为53.07％)。

助提剂溶液中助提剂的质量分数为0.4‰。

助提剂由吐温20(CAS号为：9005-64-5)与羟丙基壳聚糖(上海士锋生物科技有限公司，取代度≥80％；CAS号为：104673-29-2)组成，吐温20与羟丙基壳聚糖的质量比为4：1。

助提剂溶液的pH为8.0(25℃下pH；通过加入氢氧化钾调节得到)。

超声辅助的条件如下：低频率间歇式超声，超声时间为8s/5min(即每超声5min，则停止超声8s)，超声频率为20kHz。

S2、柱层析：

将步骤S1中所得超声提取液减压浓缩(固体质量浓度为12％±3％)，再加入乙醇，并控制乙醇的体积浓度为40％，固液分离；收集液相，制得减压浓缩液；

将减压浓缩液过中性氧化铝柱层析，依次使用0.25BV水、2BV体积分数为60％乙醇水溶液、2BV体积分数为80％酸性乙醇水溶液(pH为5.5，采用质量浓度为50％的硫酸溶液调节)洗脱，洗脱流速为1BV/h；

收集60％乙醇水溶液洗脱液，得常春藤苷C粗提取液；

收集80％酸性乙醇水溶液洗脱液，得α-常春藤苷粗提取物；

S3、结晶：

将步骤S2所得的常春藤苷C粗提取液减压浓缩至刚好析出，6℃冷藏放置14h，析出晶体，固液分离，晶体干燥得常春藤苷C提取物；

将步骤S2所得的α-常春藤苷粗提取物减压浓缩至刚好有析出，6℃冷藏放置14h，析出结晶，固液分离，晶体用水淋洗1次后干燥得α-常春藤苷提取物。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.46％，收率为83.45％；检测图谱见图1(保留时间为15.233min)。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为98.39％，收率为81.90％；检测图谱见图2(保留时间为25.178min)。

对比例1

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中助提剂溶液等量替换为氢氧化钾溶液(pH为8.0)。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为86.76％，收率为69.17％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为81.16％，收率为60.04％。

对比例2

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中助提剂溶液中替换为吐温20溶液(质量分数为0.4‰；pH为8.0，通过加入氢氧化钾调节得到)。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为86.93％，收率为74.44％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为81.42％，收率为69.89％。

对比例3

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中超声辅助提取替换为如下操作：

在55℃下连续逆流提取40min。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为89.73％，收率为74.64％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为83.94％，收率为71.17％。

对比例4

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中中性氧化铝柱替换为大孔树脂HP 20。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为85.49％，收率为68.01％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为81.61％，收率为66.62％。

对比例5

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中助提剂溶液中助提剂的质量分数调整为0.8‰。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为88.89％，收率为74.03％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为83.11％，收率为71.25％。

对比例6

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中助提剂溶液不调pH(助提剂溶液的pH为6.8)。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.18％，收率为80.68％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为98.02％，收率为73.36％。

对比例7

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中助提剂溶液pH调至9。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为89.35％，收率为74.57％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为84.50％，收率为73.04％。

对比例8

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3中超声辅助提取由间歇式超声替换为连续性超声。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为91.61％，收率为72.99％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为86.05％，收率为70.26％。

对比例9

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3柱层析洗脱过程中体积分数为80％的酸性乙醇水溶液(pH为5.5)替换为体积分数为80％的碱性乙醇水溶液(pH＝9，氢氧化钠调节)。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.17％，收率为83.20％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为83.59％，收率为75.24％。

对比例10

本对比例为一种常春藤提取物的制备方法，与实施例3的差异为：

将实施例3柱层析洗脱过程中体积分数为80％的酸性乙醇水溶液(pH为5.5)替换为体积分数为80％乙醇水溶液。

经高效液相色谱检测，常春藤苷C提取物中常春藤苷C的质量分数为98.63％，收率为83.30％。

α-常春藤苷提取物中α-常春藤苷的质量分数为93.29％，收率为65.59％。

对比例1与实施例3的差异在于：不加入表面活性剂和絮凝剂；水溶性差的α-常春藤苷提取率较低，且被提取出的鞣质类等杂质不能被有效去除，导致提取液中有效成分纯度低，从而影响了氧化铝树脂的分离纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例2与实施例3的差异在于：不加入絮凝剂；无絮凝剂协同提取，α-常春藤苷提取率偏低，且被提取的鞣质等杂质无法去除，导致提取液中有效成分纯度低，从而影响了氧化铝树脂的纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例3与实施例3的差异在于：不采用超声辅助提取：有效成分提取率偏低且絮凝效果略差，导致提取液中有效成分纯度偏低，从而影响了氧化铝树脂的分离纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例4与实施例3的差异在于：将氧化铝柱替换为大孔树脂；大孔树脂与氧化铝柱层析分离存在差异主要体现在分离效果，在测试的时候发下大孔树脂对常春藤C和α-常春藤苷无法做到较好分离，其次就是回收率偏低，导致分离获得的提取物纯度偏低，进一步影响到结晶收率。

对比例5与实施例3的差异在于：助提剂质量分数变高；有效成分溶出达到饱和，增大了杂质的溶出，影响提取液中有效成分的纯度，其次起泡严重，增大生产操作难度，已造成损耗，影响收率，由于纯度低，从而影响了氧化铝树脂的分离纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例6与实施例3的差异在于：助提剂溶液不调节pH；由于α-常春藤的水溶性较差，通过调节pH，可有效提高α常春藤苷的提取率，不调PH，影响了有效成分的提取率，对提取液中有效成分影响不大，故目标产物纯度较高，收率偏低。

对比例7与实施例3的差异在于：助提剂溶液的pH过高；影响了絮凝剂的絮凝效果，导致提取液中有效成分的纯度偏低，从而影响了氧化铝树脂的分离纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例8与实施例3的差异在于：采用连续超声处理；间歇式超声辅助，可以提高分子间的碰撞，不仅可以促使絮凝剂与杂质之间的链接作用力的形成，提高絮凝效果，还可以促进有效成分的溶出；超声时间过长，会打破絮凝剂与杂质絮凝的结构，导致絮凝效果变差，导致提取液中有效成分的纯度偏低，从而影响了氧化铝树脂的分离纯化效果与收率，进一步影响了结晶后目标产物的纯度与收率。

对比例9与实施例3的差异在于：将酸性乙醇水溶液替换为碱性乙醇水溶液；杂质易被洗脱下来，影响α-常春藤苷的纯度，进而导致结晶的纯度与收率偏低。

对比例10与实施例3的差异在于：将酸性乙醇水溶液替换为乙醇水溶液。α-常春藤苷不能被洗脱完全，影响α常春藤苷的纯度与收率，进而导致结晶的纯度与收率偏低。

提取过程中温度过高会破坏表面活性剂的结构，影响提取效率，在合适的温度范围内，升高温度可加速有效组分分子的运动速度，加速扩散，增加溶解量。且温度过高，常春藤苷C存在降解现象。

超声时间过长，会打破絮凝剂与杂质絮凝的结构，导致絮凝效果变差，合适的超声辅助，可以提高分子将的碰撞，促使絮凝剂与杂质之间的链接作用力的形成，提高絮凝效果；过高的超声频率会破坏絮凝剂与杂质分子形成的分子结构，降低絮凝效果。

综上所述，本发明的制备方法通过常春藤叶干原料破碎，助提剂-超声辅助连续逆流提取，固液分离；提取液减压浓缩，固液分离，浓缩液过氧化铝柱层析，梯度洗脱；目标段洗脱液减压浓缩结晶获得常春藤苷C和α-常春藤苷提取物。本发明综合利用了常春藤原料中的有效成分，同时制备得到高含量的常春藤苷C和α-常春藤苷提取物(≥98％)，且能实现工业化生产、工艺安全可靠、对环境友好。

上面结合具体实施方式对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。