一种尿素检测试剂盒

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种尿素检测试剂盒。

背景技术

尿素是人体内氨基酸分解代谢的最终产物之一。血中尿素来源于肝脏，通过肾脏随尿排出体外。各种肾脏类、肝脏类疾病可通过检测血中尿素的含量来辅助诊断。

目前，血中尿素的检测主要采用脲酶-谷氨酸脱氢酶法，该诊断试剂直接应用生化仪可检测血清中尿素含量，具有快速、精准的优势。

反应原理：尿素在脲酶的作用下产生铵离子，铵离子、α-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅰ在谷氨酸脱氢酶催化下产生谷氨酸和氧化型辅酶Ⅰ，在340nm处测定还原型辅酶Ⅰ吸光度的下降速率，与样本中尿素含量呈正比。谷氨酸脱氢酶的活性直接影响反应结果，使用过程中谷氨酸脱氢酶活性的降低会导致试剂性能下降，影响检测结果。

发明内容

针对以上技术问题，本发明旨在提供了一种检测性能稳定的尿素检测试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种尿素检测试剂盒，该试剂盒包括试剂1、试剂2以及校准品、质控品，其中所述试剂1主要成分有：Tris-琥珀酸缓冲液(pH9.6),α-酮戊二酸，谷氨酸脱氢酶(GLDH)，谷氨酸脱氢酶(GLDH)变构激活剂，还原型辅酶I(NADH)，所述试剂2主要成分有三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.8)，α-酮戊二酸，尿素酶，牛血清白蛋白(BSA)。

进一步地，所述试剂1中：Tris-琥珀酸缓冲液(pH9.6)浓度100-200mmol/L，α-酮戊二酸浓度5.0-10.0mmol/L，谷氨酸脱氢酶(GLDH)浓度0.5-3.0KU/L，还原型辅酶I(NADH)浓度0.1-0.5mmol/L。

进一步地，所述试剂1中Tris-琥珀酸缓冲液(pH9.6)最佳选择浓度115mmol/L,α-酮戊二酸最佳选择浓度8mmol/L，谷氨酸脱氢酶(GLDH)最佳选择浓度0.8KU/L，还原型辅酶I(NADH)最佳选择浓度0.35mmol/L。

进一步地，所述试剂2中：三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.8)浓度：40-150mmol/L，α-酮戊二酸浓度：5-15mmol/L，尿素酶(URH)浓度：20-50KU/L，牛血清白蛋白(BSA)浓度：0.8-1.5g/L。

进一步地，所述试剂2中：三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.8)最佳选择浓度115mmol/L，α-酮戊二酸最佳选择浓度8mmol/L，尿素酶(URH)最佳选择浓度40KU/L，牛血清白蛋白(BSA)最佳选择浓度1g/L。

进一步地，所述谷氨酸脱氢酶(GLDH)变构激活剂为二磷酸腺苷(ADP)、鸟嘌呤二核苷酸磷酸(GDP)中的一种或两种。

进一步地，所述谷氨酸脱氢酶(GLDH)变构激活剂的浓度为0.1mg/L-5mg/L。

本试剂盒用于检测人血清中尿素量，试剂盒2℃～8℃避光保存，有效期为18个月；试剂开瓶后在2℃～8℃避光保存，60天内试剂的准确度和精密度优于不添加稳定剂。

本发明有益效果：

1.试剂1中添加谷氨酸脱氢酶激活剂，有效提高试剂的性能指标。试剂在开盖60天内的检测准确度和精密度性能优于对照组。

具体实施方式

下面通过实施例下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1

本发明提供一种尿素检测试剂盒，其主要成分如下：

试验条件：反应温度37℃，检测波长340nm，试剂样本比R1：R2：S＝150:50:5。

准确度：采用相对偏差计算，用浓度值4.57mmol/L的有证参考物质对试剂盒进行测定，重复测定3次，计算相对偏差。

M-测试结果均值；T-有证参考物质标示值。

精密度：用高值、低值质控品重复测试10次，计算SD和CV值。

根据行标YY/T1201-2013尿素氮检测试剂盒要求准确度相对偏差应不大于±15％；精密度不大于5.0％。

试剂用校准品定标后，在0、10天、20天、30天、40天、50天、60天分别测定准确度和精密度，结果如下。

准确度

精密度

试验结果表明：试剂在开盖60天时间内，实施例1的准确度优于对照组，60天实施例1准确度偏差为1.09％、对照组偏差为5.18％，数据均在行标要求范围，但对照组偏差大于实施例1。60天实施例1精密度测值分别为1.53％、1.34％。对照组精密度测值分别为5.60％、3.76％。对照组大于实施例1，且对照组测低值质控CV值超出行标规定值。

实施例2

本发明提供一种尿素检测试剂盒，其主要成分如下：

试验条件同实施例1，试剂用校准品定标后，在0、10天、20天、30天、40天、50天、60天分别测定实施例2和不添加ADP的对照组的准确度和精密度。试验结果：准确度和精密度随开盖时间增长而增大。准确度：数据均在行标要求范围，60天时实施例2准确度偏差为1.03％、对照组偏差为5.37％，实施例2准确度、精密度均优于对照组。精密度：60天实施例1精密度测值分别为1.47％、1.45％。对照组精密度测值分别为5.76％、3.94％，对照组大于实施例2，且对照组测低值质控CV值超出行标值。

实施例3

本发明提供一种尿素检测试剂盒，其主要成分如下：

试验条件同实施例1，试剂用校准品定标后，在0、10天、20天、30天、40天、50天、60天分别测定实施例3和不添加GDP的对照组的准确度和精密度。试验结果：准确度和精密度随开盖时间增长而增大。准确度：数据均在行标范围，60天时实施例2准确度偏差为1.23％、对照组偏差为5.17％，实施例3准确度、精密度均优于对照组。精密度：60天实施例1精密度测值分别为1.52％、1.37％。对照组精密度测值分别为5.61％、3.69％。对照组大于实施例3，且对照组测定低值质控CV值超出行标值。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。