具有降糖作用的药物组合物

技术领域

本申请属于生物医药领域，具体涉及一种具有降糖作用的药物组合物。

背景技术

糖尿病(diabetes)是一种以高血糖为特征的慢性代谢紊乱疾病，患者长期的高血糖会引起血管损害、功能和代谢障碍，产生多种急、慢性并发症。据统计，我国糖尿病患者已经超过1.1亿，且患病人数还在逐年递增，且逐渐呈现年轻化趋势。糖尿病的危害巨大，伴随糖尿病产生的糖尿病并发症也对患者的健康和生命构成巨大威胁。

现阶段治疗糖尿病的药物主要包括磺酰脲类、格列奈类、双胍类及胰岛素等，这些药物均存在不同程度的不良反应，如引发低血糖、胃肠道不适、肥胖等。因此，从天然植物中开发安全、有效并具有降糖降脂活性的天然产物作为辅助降血糖、降血脂手段，是目前防治糖尿病、高脂血症的发展新动向，成为国内外研究的热点。

大量研究表明微量金属元素与糖尿病的预防和治疗密切相关，糖尿病患者体内存在着微量金属元素代谢混乱。其中微量元素铬、锌、钒是人体必须的金属元素，是许多蛋白酶的活性中心，在葡萄糖的代谢过程中起着重要的作用，经研究表明这些金属离子的化合物具有抗糖尿病的作用。2004年，Kim与Shindea等通过吡啶甲酸铬对糖尿病大鼠的研究表明吡啶甲酸铬可以显著的改善糖尿病大鼠的糖、脂代谢，降低糖耐量。Anderson等对180例2型糖尿病人分别补充高低剂量吡啶甲酸铬，结果表明患者的血糖、胰岛素、糖化血红蛋白与胆固醇均显著降低。Chen等对833例糖尿病患者为期10个月的调查表明，补充吡啶甲酸铬后血糖均显著降低，并且尿频、口渴与疲劳等临床症状均有改善。

人参为五加科多年生草本植物，属名贵中药材，被誉为“百草之王”。人参皂苷Rb1是人参总皂苷中负责降血糖作用的最主要成分(YANG C Y,WANG J,ZHAO Y,et al.Anti-diabetic effects of Panax notoginseng saponins and its major anti-hyperglycemic components[J].Ethnopharmacol,2010,130(2):231-236.)。

苦瓜(momordica charantia L.)为葫芦科一年生植物，具有袪暑涤热、明目、解毒功能，主治暑热烦渴、消渴、赤眼疼痛、痢疾、疮痈肿毒。苦瓜皂苷L(momordicoside L)是存在于苦瓜根、茎和果实中的葫芦烷型三萜类化合物，是控制苦瓜苦味的主要活性成分之一。有研究表明苦瓜皂苷L可抑制α-淀粉酶和β-葡萄糖苷酶的活性，具有良好的抗炎和降糖作用(PERERA W H，SHIVANAGOUDRA S R，

知母为百合科植物知母(Anemarrhenaas-phodeloidesBge)的干燥根茎，味苦，性寒，归肺、胃、肾经。具有清热泻火、滋阴润燥、止渴除烦等功效。知母的化学成分主要有甾体皂苷、双苯吡酮类、黄酮类、木脂素类、多糖类、有机酸类及微量元素等，而皂苷类是其主要成分之一，约占知母根茎的6％。研究表明，知母皂苷BII能明显降低四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的血糖水平。

但是，关于各种具有降糖作用的化合物之间的协同作用基本没有研究。

发明内容

鉴于现有技术中存在的上述技术问题本发明的目的在于，提供一种具有协同降糖作用的降糖药物组合物。

发明人针对各种具有降糖作用的化合物之间的协同作用进行了深入研究，结果发现：1.一定剂量的吡啶甲酸铬和人参皂苷Rb1的组合物具有协同增效的降低空腹血糖的作用；2.一定剂量的知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的组合物具有协同增效的改善糖耐量的作用，从而完成了本发明。

即，本发明包括：

1.一种具有降低空腹血糖作用的降糖组合物(降糖组合物A)，其包含吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1以及药学上可接受的载体，其中，所述吡啶甲酸铬与人参皂苷Rb1的重量比为1:1～3。

2.根据项1所述的降糖组合物，其中，所述吡啶甲酸铬与人参皂苷Rb1的重量比为1:1～2.5。

3.根据项1所述的降糖组合物，其中，所述吡啶甲酸铬与人参皂苷Rb1为唯一降糖活性成分。

4.根据项1所述的降糖组合物在制备用于预防或治疗糖尿病的药物中的用途。

5.一种具有改善糖耐量作用的降糖组合物(降糖组合物B)，其包含知母皂苷B II、苦瓜皂苷L以及药学上可接受的载体，其中，所述知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的重量比为1:1.5～4。

6.根据项5所述的降糖组合物，其中，所述知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的重量比为1:2～3。

7.根据项5所述的降糖组合物，其中，所述知母皂苷B II、苦瓜皂苷L为唯一降糖活性成分。

8.根据项5所述的降糖组合物在制备用于预防或治疗糖尿病的药物中的用途。

9.一种具有降糖作用的药物组合物(降糖药物组合物)，其包含项1～3中任一项所述的降糖组合物和项5～7中任一项所述的降糖组合物。

在该具有降糖作用的药物组合物中，吡啶甲酸铬、人参皂苷、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L可以是唯一的降糖活性成分。

10.根据项9所述的具有降糖作用的药物组合物在制备用于预防或治疗糖尿病的药物中的用途。

11.一种预防或治疗糖尿病的方法，其包括给对象施用预防或治疗有效量的项1～3中任一项所述的降糖组合物、项5～7中任一项所述的降脂组合物、和/或项9所述的具有降糖作用的药物组合物的步骤。这里，所述对象可以是人。

在本说明书中，所述糖尿病是指二型糖尿病。

在本发明中，对组合物或药物的剂型没有特殊限制，例如可以是口服剂型或注射剂型。所述口服剂型可以是液体剂型，也可以是固体剂型。所述口服剂型可以为例如硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、压片、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液；所述注射剂型可以为例如溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。组合物或药物中可包含辅料或其它药学可接受的载体。所述辅料可以为例如透明质酸钠、海藻酸钠、壳聚糖或者胶原蛋白中的一种或几种。

发明效果

上述降糖组合物A中，一定剂量的吡啶甲酸铬和人参皂苷Rb1的组合具有协同增效的降低空腹血糖的作用，可有效控制对象的空腹血糖；上述降糖组合物B中，一定剂量的知母皂苷B II和苦瓜皂苷L的组合物具有协同增效的改善糖耐量的作用，可有效控制对象的餐后血糖；降糖药物组合物既能够协同增效地降低空腹血糖，又能够协同增效地改善糖耐量，因此能够同时有效控制对象的空腹血糖和餐后血糖，从而预防和/或治疗对象的糖尿病。

附图说明

图1为糖尿病小鼠经吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1&苦瓜皂苷L&知母皂苷B II组合物治疗后肝脏组织H&E染色后的形态学图片(放大倍数：200×)。

图2为糖尿病小鼠经吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1&苦瓜皂苷L&知母皂苷B II组合物治疗后胰腺组织H&E染色后的形态学图片(放大倍数：200×)。

下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。在无冲突的情况下，本说明书中的科学术语具有本领域技术人员通常理解的含义，如有冲突应以本说明书中的定义为准。

在本说明书中，吡啶甲酸铬是指下述化学式1所述的化合物。

【化学式1】

在本说明书中，人参皂苷Rb1是指下述化学式2所述的化合物。

【化学式2】

在本说明书中，苦瓜皂苷L是指下述化学式3所述的化合物。

【化学式3】

在本说明书中，知母皂苷B II是指下述化学式4所述的化合物。

【化学式4】

发明人发现，将吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L按本发明限定的比例范围进行组合，能够充分发挥各组分的降糖作用，成药性很强。另外，本发明吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1复配使用以及苦瓜皂苷L、知母皂苷B II复配使用在降糖方面表现出显著的协同增效(CI值小于1、优选CI值小于0.7)，而且还表现出低毒性特点。发明人还发现，如果所述组合物中吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的含量不在本发明限定的比例范围内，则不具有协同增效作用。从协同增效作用显著的角度考虑(CI值小于0.7)，所述组合物中，所述吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的重量比为优选为1:(1～3):1:(2～3):，更优选为1:2.5:1:3。

所述吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的纯度可以是95％～100％，例如可以是98％或99％。

所述吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的含量均可以采用HPLC法测定。所述降糖组合物中，可以包含其它降糖活性成分，也可以不包含其它降糖成分(即以吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷BII、苦瓜皂苷L作为唯一降糖活性成分)。

所述降糖组合物可以包含药学上可接受的载体，例如辅料。对于本发明的组合物中的辅料，没有特殊限制，例如可以使用本技术领域通常用于药品或保健品的辅料。具体地，所述辅料为低聚果糖、木糖醇、甘露醇、黄原胶等。

对所述降糖组合物的剂型没有特殊限制，例如可以是口服剂型或注射剂型。所述口服剂型可以是液体剂型，也可以是固体剂型。所述口服剂型可以为例如硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、压片、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液；所述注射剂型可以为例如溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。

制备口服用液体制剂时，可以在向主要中加入适当的甜味剂、着色剂、矫味剂，按照常规方式制成不同规格的饮品或口服液剂型。制备口服用固体制剂时，可以在向主药中加入赋形剂以及视需要而定的粘合剂、崩解剂、滑润剂、着色剂、矫味剂等后，按照常规方法制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、胶囊剂等。

另外，作为稳定剂，可列举例如亚硫酸钠、偏亚硫酸钠等；作为防腐剂，可列举例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。

实施例

下面给出的实施例，是为了便于理解本发明，并不以任何方式限定本发明的权利要求的范围。

实施例1吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1以及吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1组合物对II型糖尿病小鼠空腹血糖的治疗作用

1.1糖尿病小鼠模型的建立

健康雌性、SPF级5～6周龄的C57BL/6小鼠(体重18±2g)250只，购买于西安市西安交通大学医学部实验动物中心。小鼠适应性饲养7d左右，随机分为两组，一组10只，给予基础饲料，作为空白对照组；一组240只，给予高脂高糖饲料。6周后，高脂高糖饮食组禁食不禁水12h后，腹腔注射STZ(柠檬酸缓冲液配制)30mg/kg，每天一次，连续注射5天，建立糖尿病模型。将小鼠禁食(不禁水)12h，每只小鼠尾尖取血，测定空腹血糖值。筛选血糖值在11.1～25.0mmol/L的小鼠为糖尿病模型小鼠，用于后续实验。

1.2分组及给药

将造模成功的糖尿病小鼠随机分为对照组、模型组、吡啶甲酸铬组、人参皂苷Rb1组(分别包括人参皂苷Rb1 20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、10mg/kg)、吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1组合物组，每组10只小鼠，各组灌胃体积均为10mL/kg〃BW，其中，吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1组合物组的制备方法如下：将吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1按照重量比为1:1、1:2.5、1:0.5、1:10混合均匀，称作组合物1(20mg/kg吡啶甲酸铬+20mg/kg人参皂苷Rb1，分别配制2mg/mL的吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1即得，以下组合物制备方式同此)、组合物2(20mg/kg吡啶甲酸铬+50mg/kg人参皂苷Rb1)、组合物3(20mg/kg吡啶甲酸铬+100mg/kg人参皂苷Rb1)、组合物4(20mg/kg吡啶甲酸铬+10mg/kg人参皂苷Rb1)，模型组和对照组给予等剂量生理盐水灌胃，连续灌胃30d。

1.3指标检测

给药前和给药后4周测定小鼠的空腹血糖，具体操作如下：动物禁食(不禁水)12h，尾静脉采血检测葡萄糖水平即为空腹血糖。

同时计算相互作用指数CI＝AB/(A×B)，T为实验组的血糖值(需扣除空白对照组血糖值)，C为模型对照组的血糖值(需扣除空白对照组血糖值)，AB为联用组的T/C值，A、B为人参皂苷单独作用组的T/C值(若两种人参皂苷联用时，则公式变成CI＝AB/(A×B))。CI＜1时，表明联用有协同作用，CI≤0.7时，协同作用明显。

1.4结果

各组小鼠给药前初始体重无明显差异，灌胃4周后，正常组小鼠体重稳定增加，模型组小鼠体重较正常组显著降低。各给药组小鼠体重与模型组基本相当，药物本身不会造成小鼠体重明显下降，说明各组合物本身的安全性良好。

上述吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1及组合物1-4对糖尿病小鼠空腹血糖的治疗作用如表1所示。

表1吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1及组合物对小鼠空腹血糖的治疗作用

表2吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1以及组合物对糖尿病空腹血糖值的T/C及CI值

由上述实施例1的结果可知，与吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1单独使用相比，本发明的组合物1、组合物2能够显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖值，2种组合物对糖尿病小鼠的空腹血糖治疗作用联合指数均小于1。其中，组合物2对糖尿病小鼠空腹血糖的治疗作用的联用指数均小于0.7，表明吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1在1:2.5重量比联用对空腹血糖的治疗协同作用极显著。组合物1对空腹血糖的联用指数均小于1，表明吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1＝1:1对空腹血糖的治疗具有协同作用。

实施例2苦瓜皂苷L、知母皂苷B II和组合物对II型糖尿病小鼠的糖耐量的影响

糖尿病小鼠模型的建立如实施例1所示。

2.1分组及给药

将造模成功的糖尿病小鼠随机分为对照组、模型组、知母皂苷BII(40mg/kg)、苦瓜皂苷L(40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg、200mg/kg)以及苦瓜皂苷L&知母皂苷B II组合物，每组各10只小鼠。各组灌胃体积均为10mL/kg·BW。将知母皂苷B II、苦瓜皂苷L按照1:1、1:2、1:3、1:5、混合均匀，称作组合物5(40mg/kg知母皂苷B II+40mg/kg苦瓜皂苷L)(配制知母皂苷B II 4mg/mL、苦瓜皂苷L 4mg/mL即得，以下组合物制备方式以此类推)、组合物6(40mg/kg知母皂苷B II+80mg/kg苦瓜皂苷L)、组合物7(40mg/kg知母皂苷B II+120mg/kg苦瓜皂苷L)、组合物8(40mg/kg知母皂苷B II+200mg/kg苦瓜皂苷L)、模型组和空白对照组给予等剂量生理盐水灌胃，连续灌胃30d。

2.3指标检测

给药4周以后，小鼠禁食不禁水12h后，各组小鼠按2g/kg剂量灌胃50％葡萄糖溶液，尾静脉取血进行糖耐量试验(OGTT)。分别测定各组小鼠在灌胃葡萄糖溶液后第0、30、120min的血糖水平，并计算曲线下面积(AUC)。血糖曲线下面积S(mmol/L)＝(a+4b+3c)/4，其中a、b和c分别为灌胃葡萄糖溶液0、30和120min后的血糖值。

2.4结果

上述知母皂苷B II、苦瓜皂苷L和组合物对糖尿病小鼠糖耐量的影响如表3所示。组合物5-8对糖尿病小鼠血糖的联合用药指数结果如表4所示。

表4知母皂苷B II、苦瓜皂苷L和组合物对小鼠糖耐量的影响(x±s，n＝10)

表4组合物5-8对糖尿病糖耐量曲线下面积(AUC)T/C及CI值

由上述实施例2的结果可知，与知母皂苷B II、苦瓜皂苷L单独使用相比，本发明的组合物6、组合物7可以有效的改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐量，2种组合物对糖尿病小鼠的空腹血糖治疗作用联合指数均小于1。且通过调整组合物中知母皂苷B、苦瓜皂苷L的重量比，能够取得更佳的改善效果。其中组合物7对糖尿病小鼠糖耐量改善作用的联用指数均小于0.7，表明苦瓜皂苷L、知母皂苷B在1:3重量比联用对改善糖耐量协同作用极显著。组合物6对糖耐量的联用指数均小于1，表明知母皂苷B II:苦瓜皂苷L＝1:2、对糖耐量的改善具有协同作用。组合物5、组合物8对糖尿病小鼠糖耐量改善的联用指数均大于1，表明此2种组合物并不能起到协同增效的作用。

实施例3吡啶甲酸铬&人参皂苷Rb1&苦瓜皂苷L&知母皂苷B II组合物对糖尿病小鼠肝脏、胰腺组织的保护作用

将吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L按照1:2.5：1:3混合均匀制成组合物9，并设置剂量230mg/kg〃BW(分别配制吡啶甲酸铬2mg/mL、人参皂苷Rb1 5mg/mL、知母皂苷B II 4mg/mL、苦瓜皂苷L12mg/mL，混合即得)对小鼠进行灌胃治疗。灌胃体积为10mL/kg〃BW，模型组给予等剂量生理盐水灌胃，连续灌胃30d后处死小鼠，取小鼠肝脏、胰腺，进行HE染色，制作病理切片。

为了评价治疗吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、苦瓜皂苷L、知母皂苷B II组合物对小鼠肝脏形态的影响，通过采用H&E染色法检测各组小鼠肝脏组织形态学改变。如图1所示，正常小鼠的肝细胞排列成线状，辐射到周围中央静脉，肝细胞有分支且互相吻合成网状。相比之下，模型组小鼠肝细胞出现退行性改变，肝细胞轮廓不清，肝小叶失去索状排列。此外，实验结果显示糖尿病小鼠的肝细胞有显著的炎症、肝细胞排列不规则，出现空泡性脂肪变性以及纤维性变化。经组合物9治疗后，糖尿病小鼠肝细胞的退行性变化明显减轻，肝小叶恢复到接近正常状态，炎症，空泡性脂肪变性部分恢复。这说明组合物9可以改善糖尿病小鼠的肝脏脂积累，进而对肝脏起到保护作用。

此外，对胰腺组织的病理组织学分析显示(图2)，正常对照组小鼠的胰岛呈圆形或卵圆形，边界清楚，胰岛细胞排列整齐。而糖尿病小鼠的胰岛结构不规则，边缘不清晰，胰腺细胞排列不规则，并伴有明显的空泡变性。这说明糖尿病小鼠确实出现了胰岛细胞受损现象，然而经过组合物9治疗后，胰岛细胞排列整齐，胰岛结构边缘清晰，没有空泡变性的不良反应，胰岛细胞恢复至接近正常状态。这说明组合物9能够修复胰岛细胞的损伤，使其能够更好地分泌胰岛素发挥降糖功效。这些结果表明组合物9可以对糖尿病小鼠的胰腺损伤起到保护作用。

需要说明的是，在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下，在本说明书中作为某一技术方案的构成部分所描述的任一技术特征或技术特征的组合同样也可以适用于其它技术方案；并且，在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下，作为不同技术方案的构成部分所描述的技术特征之间也可以以任意方式进行组合，来构成其它技术方案。本发明也包含在上述情况下通过组合而得到的技术方案，并且这些技术方案相当于记载在本说明书中。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了说明，但本领域技术人员应该理解的是，这些并非意图对本发明的范围进行限定，本发明的范围应由权利要求书确定。

工业实用性

本发明提供了一种包含吡啶甲酸铬、人参皂苷Rb1、知母皂苷B II、苦瓜皂苷L的协同增效的、具有降糖作用的组合物。