一种用于抗流感病毒的药物组合物

技术领域

本发明涉及药物组合物领域，具体涉及一种用于抗流感病毒的药物组合物。

背景技术

返魂草颗粒为菊科千里光属返魂草（SenecionisCannabifoliiHerba, SCH）水提取物制得的中成药。含有黄酮类化合物、酚酸类化合物、生物碱类化合物。具有清热祛痰，镇咳平喘的功能，临床用于肺内感染，慢性支气管炎，喘息性支气管炎，急性呼吸道感染等。文献报道返魂草具有抗流感病毒的作用。

现有的以返魂草为主要原料的制剂，有肺宁颗粒、肺宁滴丸以及肺宁分散片等，通常均具有一定的清热祛痰、止咳的作用，主要用于缓解慢性支气管炎咳嗽等症状，近年来，针对此类药剂的研究也日益增多。相关研究，如文献：高小明, 张颖, 王迪,等. 肺宁片对感冒后咳嗽患者血清Th1/Th2细胞因子影响[J]. 辽宁中医药大学学报, 2016.重点研究了肺宁片对感冒后咳嗽患者血清Th1/Th2细胞因子的影响。文献：侯宝. 肺宁颗粒二次开发[D]. 吉林大学, 2012. 则采用高效液相色谱（HPLC）法分别对返魂草中酚酸类成分以绿原酸计、黄酮类化合物以槲皮素计进行定量分析。为开发新一代肺宁颗粒、优化制剂提取工艺提供了科学依据。

如专利：CN101278958A（国别：中国；公开日：2008.10.8）公开了一种具有清热解毒，消炎止痛，用于治疗流行性感冒、咽喉炎、肺炎等疾病的药物，以中药返魂草为原料，与作为基质的可药用载体一起制备而成，该药物具有快速释药，快速显效，价格低廉的特点。再如专利CN101278959A（国别：中国；公开日：2008.10.8）公开了一种与上述专利相近的肺宁分散片及制备方法，相关分散片同样也具有用于治疗流行性感冒、咽喉炎、肺炎等疾病的作用。另外，专利CN109646473A（国别：中国；公开日：2019.4.19）以及CN103417593A（国别：中国；公开日：2013.12.4）等均开展了相关药剂的研究。但目前的相关制剂的研究重点在于工艺的优化开发，或与其他辅料或原料药的配合使用，较少进行相关功效性成分的深入研究，或进一步开发的药剂存在功效性差、安全性低，以及对于流感病毒针对性不强等各类问题。

针对此类问题，寻找一种功效性更为优异，对流感病毒针对性强且安全的组合物用于防治流感病毒感染十分必要。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种用于抗流感病毒的药物组合物，该组合物功效性更为优异，对流感病毒针对性强且安全，能够有效防治流感病毒感染。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种组合物，原料包括：绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、返魂草多糖。

进一步地，所述组合物，按重量份数计，原料包括：0.18-0.25份绿原酸、0.01-0.02份咖啡酸、0.1-0.2份金丝桃苷、0.01-0.02份原儿茶酸、0.15-0.2份对羟基苯乙酸、8-9.5份返魂草多糖。

优选地，所述组合物，按重量份数计，原料包括：0.2份绿原酸、0.015份咖啡酸、0.16份金丝桃苷、0.01份原儿茶酸、0.18份对羟基苯乙酸、9份返魂草多糖。

进一步地，所述绿原酸、金丝桃苷和返魂草多糖的重量比范围为0.18~0.25:0.1~0.2:8~9.5。优选为0.2:0.16:9。

进一步地，本发明还提供了上述组合物的制备方法，包括以下步骤：将绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、返魂草多糖混合即得。

进一步地，所述组合物还包括异槲皮苷、对羟基苯甲酸。

优选地，所述组合物按重量份数计，还包括：异槲皮苷0.005-0.009份，对羟基苯甲酸0.001-0.005份。进一步优选为异槲皮苷0.007份，对羟基苯甲酸0.003份。

进一步地，本发明还提供了上述组合物的制备方法，包括以下步骤：将绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、返魂草多糖、异槲皮苷、对羟基苯甲酸混合即得。

进一步地，本发明提供的上述的组合物可用来制备抗流感病毒的药物。

进一步地，所述流感病毒为甲型流感病毒H1N1。

进一步地，本发明还提供了一种用于抗流感病毒的药物，包括：上述组合物和医学上可用的辅料；所述辅料包括但不限于粘合剂。

进一步地，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、膏剂、液体剂、丸剂或混悬剂。

优选地，所述剂型为颗粒剂。

本发明所取得的技术效果是：

1.本发明在返魂草的基础上，开展进一步的深入研究，通过返魂草中各类有效提取成分的搭配，制备得到了一种用于抗流感病毒的药物组合物，该组合物对流感病毒存在一定作用关系，能够起到高效抗流感病毒的作用，能够用于如肺宁颗粒等相关药剂的制备。

2.本发明在研究中发现，返魂草中的部分活性成分之间存在协同作用，如绿原酸、金丝桃苷和返魂草多糖，同时部分成分进一步搭配异槲皮苷、对羟基苯甲酸共同使用，最终制得的组合物也有更为优异的抗流感病毒的作用功效。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，因此对其来源不做具体限定。

表1本发明中实施例1-6的组合物组成及配比

表2本发明中对比例1-4的组合物组成及配比

实施例1-3以及对比例1-4的制备方法包括以下步骤：将配方用量的绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、返魂草多糖混合即得（对比例4进行原料的替换后按相同步骤进行制备）。

实施例4-6的制备方法包括以下步骤：将配方用量的绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、返魂草多糖、异槲皮苷、对羟基苯甲酸混合即得。

应用实施例1

颗粒剂：将实施例1制得的组合物与辅料（包括但不限于粘合剂）混合后，制粒、干燥、整粒、分级，即得颗粒剂。

应用实施例2

颗粒剂：将实施例3制得的组合物与辅料（包括但不限于粘合剂）混合后，制粒、干燥、整粒、分级，即得颗粒剂。

一、材料和方法

1.实验材料

1.1试验药物

肺宁颗粒：由吉林华康药业股份有限公司提供（国药准字Z22021801，批号220301）。

对比例1-4、实施例1-6按上述配置，由吉林华康药业股份有限公司提供。

1.2动物、细胞及病毒株

（1）BALB/c小鼠，SPF 级，购买自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物生产合格证号：SCXK（吉）-2020-0002。

（2）动物饲养及实验均在吉林大学基础医学院实验动物中心进行，全部过程符合动物伦理审查要求，动物饲喂普通维持饲料，自由饮食水。

（3）非洲绿猴肾细胞（Vero)，由吉林大学基础医学院冻存。

（4）病毒毒株：甲型流感病毒H1N1，购于ATCC，吉林大学基础医学院冻存。

1.3试剂

白介素6（IL-6）检测试剂盒、肿瘤坏死因子α（TNF-α）检测试剂盒和白介素-10（IL-10）检测试剂盒均购于上海酶联生物科技有限公司。

2.方法

2.1实验动物分组和给药

（1）将BALB/c小鼠随机分为：空白组、模型组、肺宁颗粒组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、实施例1-高剂量组、实施例1-中剂量组、实施例1-低剂量组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组，每组6只，记录小鼠体重。小鼠经10%戊巴比妥钠麻醉后，正常组以0.05mL生理盐水滴鼻，其余各组小鼠以0.05mL H1N1流感病毒液滴鼻进行感染，建立流感模型。

（2）分组同上，除正常组外，其余各组小鼠经鼻滴入H1N1病毒液进行100倍的TCID

2.2检测小鼠血清细胞因子含量

取小鼠血清，采用白介素6（IL-6）检测试剂盒检测各组小鼠血清中的炎症因子IL-6的含量。

2.3各组药物Vero细胞的毒性实验

各组药物溶于100mL 37℃预热的细胞维持液中，分别用0.45μm和0.22μm的无菌滤头过滤溶解好的药液待用。按浓度梯度将母液分别稀释至浓度为40 mg/mL、30 mg/mL、20mg/mL、10 mg/mL、5 mg/mL、1 mg/mL和0.1 mg/mL的稀释液与母液共8个浓度的药液待用。将对数生长期细胞并接种于96孔板（1×10

2.4各组药物体外抗流感病毒作用

将1×10

2.5检测Vero细胞的各种炎症因子含量

各实例分别取3组样本测细胞上清，采用白介素6（IL-6）检测试剂盒、肿瘤坏死因子α（TNF-α）检测试剂盒和白介素-10（IL-10）检测试剂盒检测各组中的炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10含量。

3.统计学分析

本研究中的全部实验数据采用Graphpad PrismV6.0进行统计分析实验结果以x（平均值±s（标准差）表示；首先检测数据的方差齐性及正态分布情况，然后应用t检验进行分析。P<0.05显示具有统计学差异，P<0.01显示统计学差异显著。

二、结果

1.各组药物对H1N1感染小鼠的保护作用

表3小鼠的最终体重变化

注：*表示与模型组比较有显著性差异即P<0.05，**为极显著差异即P<0.01；#表示与肺宁颗粒组比较有显著性差异即P<0.05，##为极显著差异即P<0.01。

表4 IL-6炎症因子的表达水平变化

注：*表示与模型组比较有显著性差异即

2.各组药物体外抗病毒作用

各组药物最大无毒浓度如下表所示：

表5各组药物最大无毒浓度

结果如表6所示，“+”表示有毒，“-”表示无毒。

表6 各组药物对细胞的毒性

表7 各组药物对流感病毒致细胞病变作用的影响（CPE）（n=5）

注：细胞病变按6级标准判断：-表示细胞生长正常，无病变出现；1表示细胞胞病变少于整个单层的10％；2表示细胞病变约占整个单层细胞的25％以下；3表示细胞病变约占整个单层细胞的50％以下；4表示细胞病变约占整个单层细胞的75％以下；+表示细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。

表8病毒感染后体外IL-6炎症因子的表达水平变化

注：*表示与模型组比较有显著性差异即P<0.05，**为极显著差异即P<0.01；#表示与肺宁颗粒组比较有显著性差异即P<0.05，##为极显著差异即P<0.01。

表9 病毒感染后体外TNF-α炎症因子的表达水平变化

注：*表示与模型组比较有显著性差异即

表10 病毒感染后体外IL-10炎症因子的表达水平变化

注：*表示与模型组比较有显著性差异即

三、结论

本发明的组合物对体内和体外均有较好的抗甲型流感病毒H1N1的作用，其可能的机制是促进抑制炎症的细胞因子IL-10的表达来减缓病毒诱导的炎症反应（IL-6和TNF-α的水平降低），总体来看，其中实施例效果优于对比例和肺宁颗粒组，实施例1高、中、低剂量优于实施例2-3，以实施例1高剂量最优；而对比例和肺宁颗粒效果相当。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。