一种氚标记截短侧耳素及其合成方法

技术领域

本发明涉及截短侧耳素放射性标记技术领域，具体涉及一种氚标记截短侧耳素及其合成方法。

背景技术

放射性示踪技术是美国食品药品监管局(FDA)和国际兽药注册协调会(VICH)推荐的研究药物在动物机内吸收、分布、转化和排泄(ADME)的主要手段。在抗生素的非临床研究阶段，代谢、排泄研究是确定药物在靶动物中最高残留限量的重要部分，决定着残留靶组织与残留标识物。

放射性示踪技术具有灵敏度高、干扰少、操作简便等优点，研究兽药在动物体内代谢时可对标记药物及其代谢物进行定位、定量分析，得到各代谢物在不同组织中的分布与消除规律，进而得到药物在动物体内的残留靶组织和残留标示物。

截短侧耳素类药物始于上世纪九十年代，对革兰氏阳性菌和支原体具有良好的抗菌活性。截短侧耳素类药物用途广泛，泰妙菌素和沃尼妙林作为兽用药用于防治由病原微生物引起的猪痢疾、支原体肺炎等疾病，但在动物体内的代谢研究并不详细。近几年该类药物在人医上的进展取得重大突破，其中瑞他莫林主要用于治疗人体外局部皮肤感染所引起的短期脓疱疹或由葡萄球菌和链状球菌引起的伤口感染。来法莫林用于治疗社区获得性细菌性肺炎专用药，且拥有不劣于莫西沙星临床疗效。

此外，药物在动物体内的代谢研究是评价药物安全性的重要部分，当某药物代谢产物仅在人体中出现而在受试动物种属中不存在，或者某种代谢产物在人体的暴露比例水平高于采用母体药物的暴露比例水平时，需进行该代谢产物的非临床安全性评价。为获得以上数据，国际上推荐采用放射性示踪技术研究药物在受试动物中的代谢过程，但截短侧耳素类药物的同位素标记路线并没有详细报道，限制了截短侧耳素类药物的开发与应用。因此有必要研发一种在截短侧耳素类药物母环结构进行同位素(氚)标记的方法，为该类药物在动物体上的代谢研究提供了解决办法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种氚标记截短侧耳素的合成方法。

本发明是这样实现的：

本发明提供一种氚标记截短侧耳素的合成方法，包括侧耳素末端烯键在臭氧和二甲基硫醚的作用下形成醛基，醛基通过与(1-重氮-2-氧代-丙醇)-膦酸二甲酯反应形成炔键，炔键在惰性催化剂的作用下与氚气发生选择性加成反应，得到氚标记截短侧耳素。

进一步地，合成路线如下：

进一步地，具体步骤如下：

第一步、截短侧耳素1溶于有机溶剂，在低温环境下，加入臭氧使烯键形成环氧化物，用氮气去除过量臭氧后，加入二甲硫醚，随后环氧化合物发生水解生成醛基化合物，经萃取和干燥后得到中间体2；

第二步、中间体2在碱性条件下，醛基与(1-重氮-2-氧代-丙醇)-膦酸二甲酯发生增碳反应，经提取、浓缩和重结晶，得到末端炔键的中间体3；

第三步、中间体3的炔键在惰性催化剂的作用下与氚气发生选择性的加成反应，经液相制备后冻干得到目标产物4。

进一步地，所述有机溶剂为二氯甲烷、甲醇或乙醇。

进一步地，第一步中，所述低温环境为-60℃～-70℃。

进一步地，第二步中，碱性环境所用试剂为C(碳酸钾)。

进一步地，第三步中，所述惰性催化剂为5％Pd/CaCO

本发明提供根据上述方法合成得到的氚标记截短侧耳素。

本发明还提供该氚标记截短侧耳素类所制的氚标记截短侧耳素类药物在动物体内代谢研究中的应用。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明填补了国内截短侧耳素类药物同位素标记路线的空缺，为该类药物在动物体内的代谢研究提供了解决方案；

2、本发明所制得的标记物结构稳定，提高了该类药物代谢研究的准确度与科学性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为本发明实施例中提供的化合物1的核磁共振NMR氢谱图；

图2为本发明实施例中提供的中间体3的核磁共振NMR氢谱图；

图3为本发明实施例中提供的中间体3的质谱信息图；

图4为本发明实施例中提供的氚标记截短侧耳素化学纯度图；

图5为本发明实施例中提供的氚标记截短侧耳素放化纯度图；

图6(A)为本发明实施例中提供的氚标记截短侧耳素化学纯度稳定性；

图6(B)为本发明实施例中提供的氚标记截短侧耳素放化纯度稳定性。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明合成氚标记截短侧耳素的具体步骤如下：

第一步：

取化合物1截短侧耳素10g(淡黄色，26.42mmoL)，溶于200mL二氯甲烷中，冷却至-70℃。在相同的温度下，加入臭氧，直到溶液由淡黄色变成蓝色(30分钟)，并控制温度处于-60℃至-70℃。当溶液变成蓝色后，混合物再加入臭氧，持续2-5分钟。然后，将蓝色溶液再次加入N

第二步：

取10.0g(15.77mmoL)第一步的淡黄色固体产物和3.92g(20.50mmoL)(1-重氮-2-氧代-丙醇)-膦酸二甲酯，溶于132mL甲醇中，溶解后向上述溶液中加入4.36g(31.54mmoL)碳酸钾。将上述混合溶液于20℃-25℃搅拌14-16h。TLC(PE:EA＝1:1,KMnO4，二硝基苯肼)显示起始物质被消耗。将反应液用乙酸乙酯(30mL)洗涤、过滤、收集滤液并浓缩得到黄色胶状物。将上述物质用乙酸乙酯(500mL)溶解，并加水(150mL)萃取，将水相用乙酸乙酯(100mL)提取，合并有机相，利用无水硫酸钠进行干燥。浓缩得到淡黄色胶状物，将固体与正己烷/丙酮＝30:1(50mL)的混合溶液混合，收集滤渣并用己烷(10毫升)洗涤，冻干滤渣后得到中间体3白色粉末3.80g，将上述固体加入到乙酸乙酯中进行重结晶，冷却后过滤，收集滤渣进行烘干得到白色固体2.2g(5.54mmoL,产率35.13％，纯度96％)；

第三步：

取2g(5mmoL)第二步的白色固体，溶解至40mL乙醇中，加入100mg惰性催化剂(5％Pd/CaCO

表1

实施例2

本发明合成氚标记截短侧耳素的具体步骤如下：

第一步：

取化合物1截短侧耳素10g(淡黄色，26.42mmoL)，溶于200mL乙酸乙酯中，冷却至-50℃。在相同的温度下，加入臭氧，直到溶液由淡黄色变成蓝色，并控制温度处于-50℃至-600℃。当溶液变成蓝色后，再次加入N

第二步：

取10.0g(15.77mmoL)第一步的淡黄色固体产物和3.92g(20.50mmoL)(1-重氮-2-氧代-丙醇)-膦酸二甲酯，溶于130mL乙醇中，溶解后向上述溶液中加入3.3g(31.5mmoL)碳酸钠。将上述混合溶液于20℃-25℃搅拌6-8h。TLC(PE:EA＝1:1,KMnO4，二硝基苯肼)显示起始物质被消耗。将反应液用二氯甲烷(30mL)洗涤、过滤、收集滤液并浓缩得到黄色胶状物。将上述物质用二氯甲烷(500mL)溶解，并加水(150mL)萃取，将水相用二氯甲烷(100mL)提取，合并有机相，利用无水硫酸钠进行干燥。浓缩得到淡黄色胶状物，将固体与正己烷/丙酮＝30:1(50mL)的混合溶液混合，收集滤渣并用己烷(10毫升)洗涤，冻干滤渣后得到中间体3，将上述固体加入到乙酸异丙酯中进行重结晶，冷却后过滤，收集滤渣进行烘干得到白色固体。

第三步：

取2g(5mmoL)第二步的白色粉末样产物，溶解至40mL乙醇中，加入150mg惰性催化剂(5％Pd/CaCO

试验例

对化合物1(截短侧耳素)和中间体3进行NMR核磁共振分析，对中间体3进行质谱分析，从图1～3可以看出，化合物3末端具有明显的炔键结构，化合物1末端的烯键经过反应还原成炔键，最后再利用氚气在炔键上的选择性加成反应完成氚同位素对截短侧耳素的标记。

对实施例1所制得的氚标记截短侧耳素的化学纯度、放化纯度、比活度以及稳定性进行测定：

氚标记截短侧耳素的化学纯度分析：

对得到的氚标记截短侧耳素进行高效液相色谱检测，同时设置溶剂空白，采用面积归一化法计算氚标记截短侧耳素的化学纯度，结果见图4，显示其化学纯度高于98％。(相色谱检测条件为：色谱柱XDB-C18；流动相：磷酸盐缓冲液:乙腈:甲醇:纯水＝5:4:2:1；等度洗脱20min；检测波长210nm；流速1.0mL/min)。

氚标记截短侧耳素的放化纯度分析：

通过LSC对每分钟内收集到的色谱柱末端进行总放射性值检测，结果见图5，通过面积归一法计算得到氚标记沃尼妙林的放化纯度高于97％。

氚标记截短侧耳素的比活度分析：

利用LSC和液相检测放射性值为492314dpm时其对应的化学含量为0.00801μg。其一定体积内的放射性值与化学质量比值即为比活度，本次研究计算得到的比活度为28.07Ci/g。

氚标记截短侧耳素稳定性分析

在12月的保存时期内，氚标记截短侧耳素的化学纯度与放化纯度结果见图6。由结果可知，6个月内氚标记截短侧耳素的化学纯度和放化纯度均达在97％以上，12个月内其化学纯度和放化纯度分别维持在96％和95％以上。表明合成的氚标截短侧耳素在-20℃条件下能保持良好的稳定性。

本发明合成的氚标记截短侧耳素的纯度高，放射性示踪性能好，放化纯度高于97％，比活度为28.07Ci/g，填补了国内侧耳素类药物同位素标记路线的空缺，能够对截短侧耳素类药物在动物体内的代谢研究起到很好的帮助作用，所合成的氚标记截短侧耳素结构稳定，也提高了该类药物代谢研究的准确度与科学性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。