用于评估生化过滤器适合性的方法、检测内毒素存在的方法、从过滤器中洗出内毒素的方法

本申请为基于2019年4月26日提交的申请号为201980028426.9的原申请所提出的分案申请。

相关文献的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119主张于2018年5月2日提交的美国临时专利申请No.62/665,721的优先权，其公开内容以引用方式全文并入于此。

技术领域

本公开一般涉及过滤筛选系统和方法，并且具体地涉及通过筛选过滤器是否存在毒素例如内毒素，和/或清洗过滤器中的内毒素来改进过程的方法和系统的实施例。

背景技术

细菌内毒素的控制在生物制剂药物生产和制造中是重要的，因为内毒素可引起患者的并发症(例如，引发免疫反应、引起败血症和/或败血性休克等)。内毒素可以包括在革兰氏阴性细菌的外膜成分中发现的脂多糖糖(LPS)，其可以在例如细胞生长、细胞分解或细胞死亡期间释放。LPS包括脂质成分即脂质A(其可能引起内毒素毒性)、寡糖核心和杂元多糖链(O-抗原)。O-抗原包括重复的寡糖，其可随细菌菌株和/或血清型而变化。LPS由于其脂质尾部而为疏水性，并且在弱酸性至碱性pH下具有净负电。LPS中疏水性和带负电特性的组合可以经由各种交互作用模式，使LPS结合许多不同类型的分子。

生物药物产品的制备可包括各种过滤过程。在某些情况下，过滤过程可包括使用天然来源的原料(例如，含有纤维素纤维、硅藻土(DE)和/或电荷修饰树脂的过滤器)。例如，可用于从细胞培养液中去除细胞碎片和胶体的收集型深层过滤器可包括来自植物、动物和矿物沉积物的材料。这些过滤器有可能将内毒素引入生物制剂制备过程。天然来源的原料(诸如这些过滤器)的供货商和/或销售商可以执行调节和/或减少其产品内的内毒素的过程。供货商和/或销售商还可以提供内毒素规格及其产品(例如，确认其产品中最大可接受或可容忍的内毒素量或浓度)。然而，这些规格可能不精确，并且在某些情况下，天然来源的原料的内毒素规格可能与这些材料(例如，制造生物药物的需求)的使用者的要求(例如，较不严格)不同。

生物药物产品制造商和/或分销商可以使用天然来源的原料(例如，具有天然来源成分的过滤器)来制备生物制剂，并且可以具有其自己的既定的过程来检测和/或去除生物制药产品中的内毒素。例如，监管要求(由诸如美国食品和药物管理局的监管机构提供)可能包括在其管辖范围内分发的药品必须符合的规范。此外，药物产品的制造商过程中控制(IPC)可能包括其他标准和协议，以确保满足和/或超越法规要求。例如，制造商的IPC可能要求测试每批次所制备的配制药物中的内毒素的存在和/或量，并丢弃遭污染的批次。虽然这些协议改善了药物产品的安全性，但是在制造过程的后期发现内毒素污染，可能不利地导致大量配制的药物和/或活性成分损失。

本文公开的系统和方法可以改善药物产品制造方法和系统的效率和/或生产率，并且可以解决上述的一个以上的问题。

发明内容

本公开的实施例可涉及用于评估多个过滤器用于生物纯化过程中的适合性的方法，该多个过滤器中的每一个包括天然来源的材料。该方法可包括：从多个过滤器中选择过滤器；使一定体积的缓冲溶液通过所选择的过滤器，其中当根据ASTM D1125测试时，该缓冲溶液在25℃具有至少约40mS/cm的电导率；执行测定以检测该缓冲溶液中内毒素的存在；基于测定的结果评估多个过滤器用于细胞培养过程中的适合性；以及以周期性的时间间隔重复选择、通过、执行和评估步骤。在一些实施例中，评估步骤可包括若缓冲溶液中的内毒素量低于已定阈值则允许多个过滤器中的至少一个用于生物纯化过程中，或者若缓冲溶液中的内毒素量高于已定阈值则拒绝多个过滤器用于生物纯化过程中。

本公开的一些实施方案可包括用于检测内毒素的存在的方法。该方法可包括使天然来源的材料与缓冲溶液接触，其中该天然来源的材料包括纤维素，且其中当根据ASTMD1125测试时，该缓冲溶液于25℃具有至少约40mS/cm的电导率；以及对缓冲溶液执行测定以检测该缓冲溶液中的内毒素。

在一些实施例中，该方法可包括在使天然来源的材料与缓冲溶液接触后，使天然来源的材料与细胞培养液接触。在一些实施例中，缓冲溶液配置为破坏内毒素和天然来源的材料之间的静电作用或疏水作用之一。在一些实施例中，该缓冲溶液可包括三(羟甲基)氨基甲烷、磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸或精氨酸中的一种。使天然来源的材料与缓冲溶液接触的步骤可包括使至少25L/m

本公开的进一步的实施例可包括用于确定用于内毒素检测过程的缓冲溶液的适合性的方法。该方法可包括使缓冲溶液通过一个过滤器批次的第一过滤器，该过滤器批次包括多个包含天然来源的材料的过滤器，其中缓冲溶液配置为破坏内毒素和第一过滤器之间的静电相互作用或疏水相互作用之一；测定缓冲溶液以检测存在于该缓冲溶液中的内毒素的量；使细胞培养液通过该过滤器批次的第二过滤器；测定细胞培养液以检测存在于细胞培养液中的内毒素的量；以及比较缓冲溶液中所检测到的内毒素的量与细胞培养液中所检测到的内毒素的量。

在一些实施例中，天然来源的材料可包括纤维素、硅藻土或其组合。在一些实施例中，测定细胞培养液包括测定澄清的细胞培养液池。进而，例如该方法可包括基于细胞培养液中所检测到的内毒素的量确定内毒素的阈值量；以及如果在缓冲溶液中所检测到的内毒素的量高于阈值，则允许缓冲溶液用于内毒素检测过程。

本公开的进一步的实施例可包括从包含天然来源的材料的过滤器中洗出内毒素的方法。该方法可包括使至少25L/m

在一些实施例中，该方法可包括使缓冲溶液通过过滤器后，使一定体积的细胞培养液通过过滤器。在一些示例性实施例中，缓冲溶液包含浓度约10mM的磷酸钠。

附图说明

包含在本说明书中并构成其一部分的附图示出了示例性实施例，并且与描述一起用于解释所公开的实施例的原理。在附图中：

图1以流程图的形式描绘了根据本公开的用于评估多个过滤器用于生物纯化过程中的适合性的示例性过程。

图2以流程图的形式描绘了用于确定用于根据本公开的内毒素检测过程中的缓冲溶液的适合性的示例性过程。

图3描绘了如实施例1所述的注射用水(WFI)及各种缓冲液冲洗过滤器的过程中内毒素回收的图表。

图4描绘了用如实施例2中所述的磷酸钠缓冲液冲洗过滤器的过程中内毒素回收的图表。

具体实施方式

本公开涉及药物产品制造和纯化过程的改善，以及与药物产品制造和纯化过程相关的过程中控制的改善。特别地，本公开涉及过滤系统，以及用于检测含有天然来源的材料的过滤器中的毒素和/或从含有天然来源的材料的过滤器中去除毒素的方法和系统。

虽然本公开是涉及内毒素的检测或控制而撰写，但本公开的系统和方法可适用于存在过滤材料或其他原料中的其他可浸出物，例如beta-葡聚糖。

含有天然来源的材料的过滤器，例如一些收集型深层过滤器，可能对生物药物制造过程造成风险。例如，此种过滤器可以在收获单元的操作期间将内毒素引入过程中。控制深层过滤器中的内毒素水平可具有挑战性，如上所述，它们的成分通常来自可含有毒素的植物、动物和/或矿物沉积物。使用包含天然来源的材料的过滤器制备的配方药物可被测试内毒素的存在，但是，如前文所述，在药物产品开发的后期检测内毒素可能不利地导致药物物质批次或活性成分的昂贵损失。在一些情况下，可以使用例如哺乳动物细胞培养液(CCF)的洗涤来筛选和/或清洁深层过滤器。CCF可为有效的内毒素筛选工具。例如，因为CCF是包含具有一范围性电荷和疏水性的分子的复合体混合物，所以CCF能够结合并萃取来自深层过滤器的各种污染物。然而，单个深层过滤器需要大量CCF(例如，至少约100L/m

本文描述了使用缓冲溶液开发的内毒素筛选过程，该缓冲溶液可在置换深层过滤器中的内毒素存在方面作为CCF的代用品，反过来说，可污染所获得的澄清收获池。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域中具有一般技能者所通常理解的含义相同的含义。材料、方法和实例仅是说明性的而非限制性的。本领域中的普通技术人员将理解，所公开的材料、方法和实施例的常规变化是可能的，无需过多的实验。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献都经由引用整体并入。如果发生冲突，以本说明书包括定义为准。

如本文所使用的术语“包括”、“包含”或其任何其他变形，旨在涵盖非排他性的包含，使得包括元件列表的过程、方法、物品或装置不只包括那些元件，还可以包括未明确列出的或固有的过程、方法，物品或装置的其他组件。术语“示例性”是用于“实例”而非“理想的”。对于这样的术语，并且对于术语“例如”及“诸如”及其对等语法等，除非另有明确说明，否则应理解为用语“并且没有限制”。如本文所用，术语“约”和符号“

如本文所用，术语“抗体”包括完整抗体(例如，完整抗原结合分子)以及完整抗体分子的抗原结合片段。完整抗体可包括例如任何同型的抗体(IgA、IgD、IgG、IgE、IgM等)和任何亚型(例如IgG1、2、3或4)。完整抗体可具有例如至少约100kDa的分子量，诸如至少约110kDa、约120kDa、约130kDa、约140kDa或约150kDa。抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等如本文所用的术语，包括任何天然存在的、可由酵素获得的、合成的或特异性结合抗原以形成复合物的经基因工程的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段，可以例如从使用任何合适的标准技术(诸如蛋白水解消化)或涉及DNA编码抗体可变域和可选的恒定域的操作及表达的重组基因工程技术，从完整的抗体分子衍生。此种DNA是已知的和/或容易从例如商业来源、DNA库(包括例如噬菌体-抗体库)获得，或可以被合成。DNA可以化学地或通过使用分子生物学技术来进行定序和操作，例如，将一个以上的可变和/或恒定域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。

抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；及(vii)最小辨识单元，其由仿真抗体的高度变异区(例如，分离的互补判定区(CDR)，诸如CDR3肽)的氨基酸残基或约束性FR3-CDR3-FR4肽组成。其他经遗传工程改造的分子，如域特异性抗体、单域抗体、域删除抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、二聚抗体、三聚抗体、四聚抗体、微型抗体、纳米抗体(例如一价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块免疫药物(SMIPs)和鲨鱼可变IgNAR域，也均包含在本文所用的“抗原结合片段”表达内。

如本文所用，术语“生物”可指在诸如细胞的生命系统中产生的大分子(例如，具有大于30kDa的尺寸)。生物制剂可包括蛋白质(例如，抗体)、核酸、大分子糖等。与可具有明确定义的化学结构的小分子不同，生物制剂可能具有高度复杂的结构，不能通过实验室方法轻易地定量。因此，可希望在生物制剂的制造中实现纯度、一致性和质量，以确保生物质量，特别是当用于医疗用途时。

如本文所用，术语“过滤器”可指用于制备含有蛋白质的药物产品诸如细胞培养澄清物、蛋白质分离物等的一个以上阶段的过滤器。过滤器可以包括一个以上天然来源的和/或合成的材料，诸如塑料或其他聚合物、金属、树脂，矿物质等。虽然本公开大部分是在筛选含有天然来源的内毒素材料的过滤器的背景下提供的，但是在生物制备过程中使用这种过滤器之前，预期本文公开的系统和方法可以应用于多种过滤器。

如本文所用，术语“深层过滤器”(也称为“收集型深层过滤器”)可以指一个过滤器或包含一种或多种天然来源的材料，例如纤维素纤维、硅藻土(DE)和/或电荷修饰树脂的过滤器。由这些和/或其他材料中的一种以上制成的多层过滤介质片可以堆栈以形成深层过滤器。在制备生物制剂期间，深层过滤器可用于例如细胞培养物如哺乳类中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养物的澄清物。在某些情况下，深层过滤器的制造可在严格的微生物控制环境中进行。深层过滤器可被配置为过滤或分离各种类型的粒子。例如，一些深层过滤器可以设计成具有正电荷，以便更好地促进在生物纯化过程中去除带负电荷的物质，例如细胞碎片、宿主细胞DNA和/或宿主细胞蛋白质。作为一例，深层过滤器可包括纤维素纸浆基质层及电荷修饰树脂层。

如本文所用，术语“药物产品”可以指配制药物物质的体积，该药物物质被分配到初次包装成分中，用于包装、运输、递送和/或给患者施用。药物产品可包括一种以上的活性成分或药物，包括如生物制剂。

如本文所用，术语“活性成分”或“药物”可以指小分子、肽或多肽，诸如抗体。在一些实施例中，例如，术语“药物”或“活性成分”可指血管内皮生长因子(VEGF)衍生物。在其他方面，术语“药物”或“活性成分”可以指阿柏西普，其描述于美国专利7,070,959、7,303,746、7,303,747、7,306,799、7,374,757、7,374,758、7,531,173、7,608,261、7,972,598、8,029,791、8,092,803、8,343,737和8,647,842中的一个或多个中，其各自经由引用整体并入本文。

在一些方面，术语“药物”或“活性成分”可以指抗体。在一些方面，术语“药物”或“活性成分”可以指阿利库单抗，描述于美国专利申请公开号2014/0356371和2014/035670中，其各自经由引用整体并入。另一方面，术语“药物”或“活性成分”可以指沙利鲁单抗，描述于美国专利申请公开号2016/0152717、2014/0302053及2013/0149310中，其各自经由引用整体并入本文。另一方面，术语“药物”或“活性成分”可以指度匹鲁单抗，描述于美国专利申请公开号2014/0356372中，其经由引用整体并入本文。另一方面，术语“药物”或“活性成分”可以指由依伏库单抗、贝伐单抗、兰尼单抗、托珠单抗、赛妥珠单抗、依那西普、阿达木单抗、阿巴西普、英夫利昔单抗、利妥昔单抗、阿那白滞素、曲妥珠单抗、聚乙二醇非格司亭、干扰素beta-1a、甘精胰岛素“rDNA来源”注射剂、阿法依泊汀、阿法达贝泊汀、非格司亭及戈利木单抗(golimumab)组成的组中的一种或多种。

如本文所用，术语“原料”可以指药物产品制造中涉及的材料或成分(例如起始材料、过滤器、试剂、溶剂等)。术语“天然来源的材料”可以指来自植物、动物或矿物沉积物的材料或成分。并且，如本文所用，术语“天然来源的材料”可以指完全或部分来自植物、动物或矿物沉积物的原料。例如，一些收集型深层过滤器和深度过滤介质可以是天然来源的原料，因为它们可以包括源自植物、动物或矿物沉积物的材料(例如，纤维素纤维、硅藻土等)。天然来源的原料由于其天然来源的可变性，随着时间的推移，质量和/或含量可能会有所不同。天然来源的原料可包括由天然来源衍生，经历一种或多种物理过程，诸如研磨、碾磨、切割、编织等的材料。

如上所述，存在改善生物纯化和制备过程的需要，特别是关于由于例如在纯化和制备过程中于深层过滤器中使用的天然来源的材料而可能存在的内毒素。本文公开的系统和方法可以允许在生物制备过程中使用过滤器之前筛选用于内毒素的过滤器和/或大量过滤器(例如深层过滤器)，从而能够在这些过滤器中的内毒素污染批量配制的药物产品之前，去除或清洁具有不需要的量的内毒素的过滤器。

现在将详细参考下面描述并在附图中示出的本公开的示例性实施例。只要有可能，在整个附图中将使用相同的符号来表示相同或相似的部分。

图1和2以流程图的形式描绘了根据本公开的一些方面的过程。虽然下面分别地描述它们，但是本文描述的一个过程的细节可以适用于本文描述的一个或多个其他过程，反之亦然。图1和图2中描述的过程仅仅是示例性的，并且对于本领域普通技术人员显而易见的是，可以重复或省略来自这些过程的步骤。所描绘的步骤可以按顺序或不按顺序执行，并且可以同时执行一个或多个步骤。此外，向这些过程添加更多步骤可能属于本领域普通技术人员的能力范围内。

图1以流程图的形式描绘了根据本公开的用于评估多个过滤器使用在生物纯化过程中的适合性的示例性过程100。根据步骤102，可以用合适的液体预润洗来自多个过滤器的过滤器。根据步骤103，可以从已经通过过滤器的液体获取(例如，获得或取回)润洗样品。根据步骤104，可以使缓冲溶液通过过滤器。根据步骤105，可以从已经通过过滤器的溶液中获取溶液样品。根据步骤106，可以例如使用与步骤102相同类型或另一种合适的液体，对过滤器进行后润洗。根据步骤107，可以从已经通过过滤器的液体中获取后润洗样品。根据步骤108，可以测定通过过滤器(每个步骤102、104和/或106)的被获取的液体样品(每个步骤103、105和/或107)是否存在内毒素。可以按照接收的顺序分别测定每个样品，或者可以同时分析多个样品。

根据步骤102，可以预润洗来自多个过滤器的过滤器。多个过滤器可为任何可能含有内毒素的过滤器组。例如，多个过滤器可为已经在相似的时间或地点制造或者使用类似的材料或材料来源之批量、批次或其他组过滤器。在一些实施例中，多个过滤器的共同来源、制造时间和/或制造地点可以藉由例如批号或其他识别信息来识别。在进一步的实施例中，多个过滤器可以由过滤器制造商、供货商或分销商作为一组识别、出售或运输。在一些实施例中，多个过滤器中的每一个可包括天然来源的材料。在一些实施例中，过滤器可为收集型深层过滤器。

来自多个过滤器的过滤器可以是来自多个过滤器的代表性过滤器。在一些实施例中，可以从多个过滤器中随机选择过滤器。在一些实施例中，可以根据过程100的步骤评估来自多个过滤器的一个以上的过滤器。例如，可以通过过程100的步骤评估来自多个过滤器的两个、三个、四个或五个或更多个过滤器。在一些实施例中，可以从多个过滤器中选择数个过滤器，以便获得多个过滤器的代表性样本。

可以用任何合适的润洗液对来自多个过滤器的过滤器进行预润洗。润洗可包括例如将过滤器安装在适当的过滤装置中并使过滤器与一定体积的液体接触。例如，收集型深层过滤器可被安装在收获深度装置中，并且一定体积的润洗液可以通过收集型深层过滤器。润洗液可以是能够从过滤器中去除松散颗粒、碎屑和/或其他污染物的任何合适的液体。在一些实施例中，润洗液可为或包含纯净水，例如注射用水(WFI)。

可以使用任何合适体积的润洗液来预润洗过滤器。在一些实施例中，润洗液的体积可以基于过滤器的尺寸(例如横截面尺寸和长度)和/或孔隙率，以及足以从过滤器去除松散颗粒的估计液体体积而确定。例如，可以基于过滤器的表面积(例如，L/m

根据步骤103，可以获取(例如取回或获得)润洗样品。润洗样品可包含例如一定体积的已用于预润洗过滤器的润洗液。例如，在包括使润洗液通过过滤器的预润洗过滤器的实施例中，润洗样品可以从已经通过过滤器的润洗液中获取。在过滤器已被安装在装置(例如收获深度过滤装置)中的一些实施例中，润洗样品可通过装置的出口获取。

润洗样品可以是适于测定内毒素的存在或量的任何体积的润洗液。例如，如果过程100的步骤108包括执行LAL测定(例如，LAL动态浊度测定(KTA))，则润洗样品可包含至少适于执行该测定量的润洗液。

在一些实施例中，根据步骤103，可以例如在预润洗步骤期间周期地获取多个润洗样品。例如，可以获取2、3、4、5或6种不同的润洗样品。例如，在预润洗步骤包括至少约60L/m

根据步骤104，可以使缓冲溶液通过过滤器。在不打算受理论约束的情况下，据信某些缓冲溶液可具有物理和/或化学性质，允许缓冲溶液破坏过滤器与可结合或以其他方式结合到过滤器中的内毒素之间的相互作用。

例如，带负电荷的内毒素可以经由静电相互作用与带正电荷的过滤器基材结合。因此，缓冲溶液可具有导电性或适于破坏至少一部分内毒素与过滤器之间的静电相互作用的另一性质，从而允许以缓冲溶液洗去内毒素。在不打算受理论约束的情况下，缓冲溶液中的阴离子可以与内毒素结合，例如，从过滤介质中置换内毒素，并允许以缓冲溶液从过滤介质中去除内毒素。在一些实施例中，例如，合适的缓冲溶液可具有至少约5mS/cm、至少约10mS/cm、至少约15mS/cm、至少约20mS/cm、至少约25mS/cm、至少约30mS/cm、至少约35mS/cm、至少约40mS/cm、至少约45mS/cm、至少约50mS/cm、至少约55mS/cm、或至少约60mS/cm的电导率，诸如约20mS/cm至约60mS/cm、约30mS/cm至约55mS/cm、约30mS/cm至约40mS/cm、或约40mS/cm至约50mS/cm电导率。

作为另一个实例，缓冲溶液可具有物理和/或化学特性，允许缓冲溶液破坏内毒素和过滤器之间的静力相互作用。在一些实施例中，缓冲溶液可包含单价盐和/或二价盐。例如，缓冲溶液可包括例如氯化钠。在一些实施例中，缓冲溶液可包含钾、镁或钙离子。在一些实施例中，缓冲溶液可表现出大致均匀的亲水性/亲脂性平衡。在一些实施例中，缓冲溶液可包含三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、磷酸盐(例如磷酸钠)、柠檬酸盐、组氨酸、精氨酸或其混合物。缓冲溶液的示例性pH可以为约5.5至约8.8、例如约5.5至约6.0、约6.0至约8.0、或约6.5至约7.5。

与步骤102一样，可以使任何合适体积的缓冲溶液通过过滤器。在一些实施例中，缓冲溶液的体积可以基于过滤器的尺寸和/或在引入缓冲溶液之前使用的预润洗润洗液的体积和/或类型来确定。在一些实施例中，至少约20L/m

根据步骤105，可以获取缓冲溶液的样品。这可以以任何合适的方法执行，例如关于步骤103描述的任何方法。根据步骤106，可以对过滤器进行后润洗。后润洗可以任何合适的方法进行，例如关于步骤102描述的任何方法。与步骤102同样地，后润洗液可为或包括例如WFI。

根据步骤107，可以获取后润洗样品。这可以以任何合适的方法执行，例如关于步骤103和105描述的任何方法。

根据步骤108，可以测定通过过滤器的被获取的液体样品中内毒素的存在。如前文所述，在整个过程100中获取的样品可具有足够的体积来测定内毒素的存在。在一些实施例中，测定可以仅测试内毒素的存在(或不存在)。在进一步的实施例中，内毒素的存在和量皆可以确定。现在已知或未来开发的任何合适的测定皆可用于确定内毒素的存在和/或量。例如，可以使用LAL测定(或基于LAL的测定)、荧光测定或重组因子C测定。在一些实施例中，使用LAL KTA。在一些实施例中，可以使用具有beta-葡聚糖阻断剂的LAL KTA。

在一些实施例中，与预润洗液、缓冲溶液和后润洗液的一个或多个样品相反，对于内毒素的存在，可仅获取和/或测定缓冲溶液和后润洗液的一个或多个样品。在一些实施例中，对于内毒素的存在，可仅获取和/或测定缓冲溶液的一个或多个样品。

在某些方面，此处所公开的系统和方法可用于重复定期筛选过滤器。例如，过程100能够以定期或不定期的间隔实施，例如当从新供货商接收多个过滤器、新批次或批量被制造、和/或包括新的天然来源材料的过滤器被制造时。在一些实施例中，例如，过程100的一部分(或全部)可使用不同的多个过滤器于每周、每两周、每月或每季重复。

在某些方面，本文公开的系统和方法可以与警报或动作系统一起实施。例如，通过过滤器的缓冲溶液样品中超过已定阈值的内毒素的检测可以触发警报。警报可以是，例如，作为与筛选过程期间的数据收集相关联的计算机过程的一部分实现的数字警报，或者可以是通过对来自测定的数据的视觉判读而触发的模拟警报。警报可以包括建议的行动进程，例如筛选从相同的多个过滤器中选择的附加过滤器来作为已经过筛选的过滤器。例如，由于通过使用来自多个过滤器的第一过滤器执行步骤102～108而触发的警报，可以使用来自多个过滤器的一个或多个附加过滤器重复过程100的步骤102～108。

附加地或可替代地，通过过滤器的缓冲溶液样品中超过已定阈值的内毒素的检测可以触发更剧烈的动作，例如清洁、破坏或丢弃过滤器，或清洁、破坏或丢弃与过滤器相关联的多个过滤器。在某些方面，清洁过滤器或与过滤器相关联的多个过滤器可包括使一定体积的缓冲溶液通过过滤器或多个过滤器。在其他方面，清洁过滤器或多个过滤器可包括使一定体积的细胞培养液通过过滤器或多个过滤器，然后丢弃该体积的细胞培养液。在某些方面，本文的过程可以包括生成或保持使用过程100执行的过滤器筛选的记录。

可以仅基于测定样品中内毒素的存在来触发警报和/或动作，或者可以基于测定样品中预定的阈值量的内毒素来触发警报和/或动作。这样的阈值量(或量)可取决于多种因素，例如正在制造的药物产品类型、正在被过滤的活性成分、制造商内部的规定、或制造商或分销商外部的规定(例如，国家或国际规定)。例如，在一些实施例中，警报可以由至少约0.05EU/mL、至少约0.07EU/mL、至少约0.09EU/mL、至少约0.10EU/mL、至少约0.12EU/mL、至少约0.14EU/mL、至少约0.15EU/mL、至少约0.18EU/mL、至少约0.20EU/mL、至少约0.25EU/mL、至少约0.30EU/mL、至少约0.32EU/mL、或至少约0.34EU/mL的内毒素量触发。作为另一个实例，在一些实施例中，可以通过大于触发警报所需的内毒素量触发动作，例如至少约0.05EU/mL、至少约0.08EU/mL、至少约0.1EU/mL、至少约0.15EU/mL、至少约0.20EU/mL、至少约0.25EU/mL、至少约0.28EU/mL、至少约0.30EU/mL、至少约0.35EU/mL、至少约0.40EU/mL、至少约0.45EU/mL、至少约0.5EU/mL、至少约0.8EU/mL、至少约0.85EU/mL、或至少约0.90EU/mL。

在一些方面，过程100(以及本文公开的其他系统和方法)可以实现为过程中控制系统的一部分，其可以在组织的质量系统的框架内操作以确保内部和/或外部安全要求的一致性和遵守内部和/或外部安全要求。作为这样的过程的一部分，可以实时或接近实时地收集和检查(例如，通过计算机数字地和/或由人工手动地)关于过滤器中内毒素的存在和/或量的数据，允许采取预防和/或校正动作。预防和/或校正动作可以通过例如在筛选期间针对一个或多个样品点超过预定的“动作”水平的内毒素量，或者来自特定来源的过滤器数量未能通过筛选测试(例如，超过在诸如过程100的过程期间检测到的内毒素的预定“动作”或“警报”水平)。预防和/或校正动作可以包括，例如，清洁或丢弃与经筛选的过滤器相关联的多个过滤器、为过滤器批次寻找新的天然来源的材料来源、或者从新的过滤器供货商获得过滤器。

在一些实施例中，可以执行过程100的步骤102、104和106，以例如清洗来自多个过滤器中的一个或多个过滤器。这可以例如作为对来自多个过滤器的一个过滤器中的内毒素检测的响应来完成。

图2以流程图的形式描绘了用于确定根据本公开的内毒素检测过程所使用的缓冲溶液的适合性的示例性过程200。本领域的普通技术人员将理解，该过程的许多变化是合适的。根据步骤202，缓冲溶液可以通过过滤器批次的第一过滤器。根据步骤204，净化水，例如注射用水(WFI)，可以通过第一过滤器。根据步骤206，可以对缓冲溶液和WFI进行内毒素量的检测。根据步骤208，细胞培养液可以在步骤202、204和206的同时、之前或之后通过过滤器批次的第二过滤器。根据步骤210，通过第二过滤器的细胞培养液可被测定内毒素的量。根据步骤212，可以将在缓冲溶液和/或WFI中检测到的内毒素的量(按步骤206)与在细胞培养液中检测到的内毒素的量(按步骤210)进行比较。

根据步骤202，缓冲溶液可以通过过滤器批次的第一过滤器。可以基于缓冲溶液的特性选择缓冲溶液，包括例如可以允许缓冲溶液破坏过滤器与过滤器中的内毒素之间的相互作用的特性。类似地，缓冲溶液的体积可以基于足以从过滤器中去除内毒素的估计或假设的体积来选择。

根据步骤204，净化水，例如注射用水(WFI)，可以通过第一过滤器。与缓冲溶液一样，WFI的体积可以基于足以从过滤器洗出内毒素的估计或假设的体积来选择。在一些实施例中，在将WFI引入过滤器时，可以在WFI和滞留在过滤器中的残留缓冲溶液之间形成电导率梯度。在不打算受理论约束的情况下，据信此种电导率梯度可有助于破坏内毒素与第一过滤器之间的静电相互作用。

根据步骤206，可以测定已经通过过滤器的缓冲溶液和WFI的样品的内毒素的量。可以分别测定每个样品，或者在一些实施例中，可以将样品组合并一起测定。现在已知或未来开发的任何合适的测定可用于确定内毒素的存在和/或量。例如，可以使用LAL测定(或基于LAL的测定)、荧光测定或重组因子C测定。在一些实施例中，使用LAL KTA。

根据步骤208，细胞培养液可以通过过滤器批次的第二过滤器。如前文所述，由于通常存在多种分子，细胞培养液可能能够与内毒素相互作用和/或破坏内毒素和过滤介质之间的键或其他相互作用。在一些实施例中，步骤208中用于第二过滤器的细胞培养液的体积可与步骤202中用于第一过滤器的缓冲溶液的体积和/或用于步骤204的WFI的体积相当。

根据步骤210，可以测定通过第二过滤器的细胞培养液的内毒素的量。用于该步骤的测定类型和测定过程可与步骤206中使用的测定相同。以此种方式，在细胞培养液中检测到的内毒素的量可作为评估缓冲溶液/WFI从作为过滤器批次的代表性过滤器的第一过滤器中去除内毒素的有效性的参考点。

根据步骤212，可以将在缓冲溶液和/或WFI中检测到的内毒素的量与在细胞培养液中检测到的内毒素的量进行比较。与在细胞培养液中检测到的内毒素的量与在缓冲溶液/WFI中检测到的内毒素的量相当，或者与细胞培养液中检测到的相比，在缓冲溶液/WFI中检测到的内毒素的量更大，可表示缓冲溶液是适合用作深层过滤器中的内毒素筛选工具。在一些实施例中，代替细胞培养液，可以在步骤208、210和212中使用具有适合于筛选根据本公开的内毒素过滤器的性质的缓冲溶液。

以下实施例旨在说明本发明，但本质上不是限制性的。应理解，本公开涵盖与前述描述和以下实施例一致的其他方面和实例。

实例1

评估多种缓冲溶液(缓冲液1～4)从深层过滤器中萃取内毒素的能力。基于它们破坏内毒素和深度过滤介质之间的静电和疏水相互作用的可能性来选择被评估的缓冲溶液。缓冲溶液、它们的一些性质以及用于测试缓冲溶液的过滤器，被列于下表1中(“Tris”是指三(羟甲基)氨基甲烷)。

表1.用于深层过滤器的内毒素筛选的候选缓冲液

使用表1中列出的缓冲溶液对两种不同类型的深层过滤器(指定为深层过滤器A和深层过滤器B)进行深层过滤器内毒素筛选。每个深层过滤器进行WFI预润洗阶段，然后是一个阶段，在该阶段中每个深层过滤器由一种缓冲溶液装载和冲洗。每个过滤器中缓冲液的装载和通量对应于大规模生产中所使用的设置(在84L/m

图3描绘了内毒素回收的图表300，如使用LAL KTA对获取的样品所示。横跨图表的虚线水平线表示为筛选的深层过滤器中的收获单元的操作的“警报”和“动作”内毒素限值，并且实线垂直线标识初始的WFI冲洗(面板302)、使用各个缓冲溶液(面板304)的冲洗，和最终的WFI冲洗(面板306)。运行1对应于筛选深层过滤器A中缓冲液1的使用(如上表1中所述)。运行2对应于在筛选深层过滤器B中缓冲液1的使用。运行3对应于筛选深层过滤器A中缓冲液2的使用(如表1中所述)。运行4对应于筛选深层过滤器A中缓冲液3的使用(如表1中所述)。包括缓冲液4的运行没有导致任何可检测的内毒素回收(最小可检测量为0.05EU/mL)，因此未在图上示出。在此基础上，得出结论，即组氨酸/精氨酸的缓冲溶液在去除内毒素方面不如中测试的其他缓冲溶液成功。

结果表示，预先使用初始WFI的润洗通常不会从深层过滤器中去除大量的内毒素。如图3所示，运行1和2在WFI预润洗阶段(特别是运行1)中表现出更高的内毒素检测。假设在该运行中使用的深层过滤器包含可干扰LAL测定的可萃取物。然而，当使用缓冲液1时，从深层过滤器中萃取的内毒素的量显著增加(运行1和2)。如图3所示，早在运行1和2的25L/m

基于这些结果，确定缓冲液1(10mM磷酸钠，0.5M氯化钠)是一种有用的缓冲液，用于筛选一批深层过滤器中内毒素的存在和/或量。

实例2

缓冲液1(10mM磷酸钠，0.5M氯化钠)用于筛选14个深层过滤器批次，以检测内毒素的存在，并确认在蛋白质收获操作期间具有释放内毒素风险的深层过滤器批次。从14个批次中各选取一个深层过滤器进行筛选。选取的14个深层过滤器中的每一个都用体积为约110L/m

图4描绘了于每个所选择的过滤器在每个采样点处的LAL KTA结果的图表400。与图3一样，使用虚线描绘为操作收获装置而指定的“警报”和“动作”内毒素水平。样品点的缺失条表示在该样品点处所选择的过滤器的缓冲液洗液中没有可检测的内毒素。在14个所选择的深层过滤器中，5个过滤器(显示为实心白色长条)在筛选期间的任何样品点都没有表现出内毒素的“警报”水平。剩余的过滤器(显示为条纹长条)在筛选期间至少在一个样品点(或更多)确实表现出内毒素的“警报”水平。结论为，这5个过滤器的过滤器批次可被认为是制造规模的蛋白质收获操作可接受的。

本领域中具有一般技能者将理解，本公开所根据的概念可以容易地用作设计用于实现本公开的若干目的的其他方法和系统的基础。因此，权利要求不应被视为受到上述描述的限制。