Nav1.7单克隆抗体

技术领域

本发明涉及新的Nav1.7单克隆抗体或其抗体片段。更详细地，涉及与Nav1.7特异性结合的抗体或其抗体片段。进一步详细地，涉及选择性抑制Nav1.7的单克隆抗体或其抗体片段或含有其的医药组合物或Nav1.7检测用试剂盒。

背景技术

Nav1.7是基因SCN9A编码的电位依赖性钠离子通道，主要在末梢神经中表达(非专利文献1)。Nav1.7包括A、B、C和D这4个结构域，分别包含6个跨膜蛋白质螺旋(S1、S2、S3、S4、S5和S6)以及3个细胞外亲水性环E1、E2和E3。

已知Nav1.7敲除小鼠中炎症性疼痛变小(非专利文献2)，已经确认，作为低分子化合物的Nav1.7抑制剂对红斑肢痛症(非专利文献3)、三叉神经痛(非专利文献4)等显示效果。

此外，专利文献1～7等中报道了对痛(疼痛)、痒(瘙痒)有效果的Nav1.7单克隆抗体。专利文献1～3中记载了与结构域C的E3细胞外区域结合的抗体。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2011/051350

专利文献2：US8734798

专利文献3：US8986954

专利文献4：US9266953

专利文献5：WO2014/159595

专利文献6：WO2015/032916

专利文献7：WO2015/035173

非专利文献

非专利文献1：美国科学院院刊(PNAS)(1997)94：1527－1532非专利文献2：美国科学院院刊(PNAS)(2004)101：12706－12711

非专利文献3：疼痛(Pain)(2012)153(1)：80－85

非专利文献4：柳叶刀(THE LANCET NEUROLOGY)(2017)16(4)：291－300

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于，提供能够作为疼痛、瘙痒等的治疗药品使用的新的Nav1.7单克隆抗体或其抗体片段。

用于解决课题的方法

本发明人等进行了深入研究，结果，发现了与Nav1.7的结构域C的E3细胞外区域特异性结合、选择性抑制Nav1.7的单克隆抗体。进一步还发现，本发明的单克隆抗体具有镇痛作用或瘙痒抑制作用。

即，本发明涉及以下方面。

(1－1)一种与Nav1.7结合的单克隆抗体或其抗体片段，包含a1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号27的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号28的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号29的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号35的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号50的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的12H4、h12H4、h12H4－2和h12H4－3的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

包括下述序列的重链可变区：

b1－1)包含序列编号3的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号4的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号5的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3、

b1－2)包含序列编号15的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号16的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号17的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3、

b1－3)包含序列编号15的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号24的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号25的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3、或

b1－4)包含序列编号21的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号22的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号17的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号35的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号36的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的3B2、3B2/15C8、15C8、29G3或28B5/15C8的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

c1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号7的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号8的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号9的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号38的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号39的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号40的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的5E12的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

d1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号11的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号12的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号13的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号38的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号42的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号40的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的7B9的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

e1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号15的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号19的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号17的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号45的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号36的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的15H6的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

包括下述序列的重链可变区：

f1－1)包含序列编号21的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号22的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号17的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3、或

f1－2)包含序列编号3的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号4的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号5的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号35的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号47的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的28B5或3B2/28B5的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

g1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号31的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号32的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号29的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号35的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号50的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；或(即包含实施例的22D3的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)

h1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号56：G－Y－Y－Xaa4－H(这里，Xaa4为M或I)的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号57：L－I－I－P－Y－Xaa5－G－Xaa6－Xaa7－F－Y－N－Xaa8－K－F－Xaa9－G(这里，Xaa5为S或N、Xaa6为D或E、Xaa7为T或I、Xaa8为Q或P、Xaa9为K或R)的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号58：A－Xaa10－V－S－Y－A－M－D－Y(这里，Xaa10为E或D)的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号54：K－V－S－N－R－Xaa1－S(这里，Xaa1为F或I)的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号55：S－Q－S－Xaa2－H－V－P－Xaa3－T(这里，Xaa2为T或I、Xaa3为F或W)的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含具有实施例3记载的多个抗体的共通序列的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)。

(1－2)根据(1－1)所述的抗体或其抗体片段，包含

包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号27的氨基酸序列中10位以外的位置中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号28的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号29的氨基酸序列中2和6位以外的位置中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR1、

包含序列编号35的氨基酸序列中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR2和

包含序列编号50的氨基酸序列中5位以外的位置中可有1个或2个氨基酸的缺失、替换、插入和/或添加的氨基酸序列的CDR3；

(即包含必须有实施例6记载的h12H4中的重要序列的CDR或其突变体的重链可变区和轻链可变区)。

(2)根据(1－1)或(1－2)所述的抗体或其抗体片段，包含a1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号27的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号28的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号29的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号35的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号50的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的12H4、h12H4、h12H4－2和h12H4－3的CDR的重链可变区和轻链可变区)

包括下述序列的重链可变区：

b1－1)包含序列编号3的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号4的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号5的氨基酸序列的CDR3、

b1－2)包含序列编号15的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号16的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号17的氨基酸序列的CDR3、或

b1－3)包含序列编号15的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号24的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号25的氨基酸序列的CDR3、或

b1－4)包含序列编号21的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号22的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号17的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号35的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号36的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的3B2、3B2/15C8、15C8、29G3或28B5/15C8的CDR的重链可变区和轻链可变区)

c1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号7的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号8的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号9的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号38的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号39的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号40的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的5E12的CDR的重链可变区和轻链可变区)

d1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号11的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号12的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号13的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号38的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号42的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号40的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的7B9的CDR的重链可变区和轻链可变区)

e1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号15的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号19的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号17的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号45的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号36的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的15H6的CDR的重链可变区和轻链可变区)

包括下述序列的重链可变区：

f1－1)包含序列编号21的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号22的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号17的氨基酸序列的CDR3、或

f1－2)包含序列编号3的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号4的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号5的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号35的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号47的氨基酸序列的CDR3；

(即包含实施例的28B5或3B2/28B5的CDR的重链可变区和轻链可变区)

g1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号31的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号32的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号29的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号35的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号50的氨基酸序列的CDR3；或

(即包含实施例的22D3的CDR的重链可变区和轻链可变区)

h1)包括下述序列的重链可变区：

包含序列编号56的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号57的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号58的氨基酸序列的CDR3，

以及包括下述序列的轻链可变区：

包含序列编号34的氨基酸序列的CDR1、包含序列编号54的氨基酸序列的CDR2和包含序列编号55的氨基酸序列的CDR3；

(即包含具有实施例3记载的多个抗体的共通序列的CDR的重链可变区和轻链可变区)。

(3)根据(1－1)或(1－2)所述的抗体或其抗体片段，包含

a2)包含序列编号52、59或60的氨基酸序列或与序列编号52、59或60的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号53或61的氨基酸序列或与序列编号53或61的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

b2)包含序列编号26的氨基酸序列或与序列编号26的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号49的氨基酸序列或与序列编号49的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

c2)包含序列编号23的氨基酸序列或与序列编号23的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号48的氨基酸序列或与序列编号48的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

d2)包含序列编号2的氨基酸序列或与序列编号2的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号33的氨基酸序列或与序列编号33的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

e2)包含序列编号6的氨基酸序列或与序列编号6的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号37的氨基酸序列或与序列编号37的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

f2)包含序列编号10的氨基酸序列或与序列编号10的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号41的氨基酸序列或与序列编号41的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

g2)包含序列编号14的氨基酸序列或与序列编号14的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号43的氨基酸序列或与序列编号43的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

h2)包含序列编号18的氨基酸序列或与序列编号18的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号44的氨基酸序列或与序列编号44的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

i2)包含序列编号20的氨基酸序列或与序列编号20的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号46的氨基酸序列或与序列编号46的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

j2)包含序列编号30的氨基酸序列或与序列编号30的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号51的氨基酸序列或与序列编号51的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

k2)包含序列编号2的氨基酸序列或与序列编号2的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号46的氨基酸序列或与序列编号46的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；

l2)包含序列编号2的氨基酸序列或与序列编号2的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号43的氨基酸序列或与序列编号43的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区；或

m2)包含序列编号20的氨基酸序列或与序列编号20的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号43的氨基酸序列或与序列编号43的氨基酸序列同一性95％以上的氨基酸序列的轻链可变区。

作为具体例子，可列举实施例的表1记载的抗体。

(4)根据(3)所述的抗体或其抗体片段，包括

a2－1)包含序列编号52的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号53的氨基酸序列的轻链可变区；

a2－2)包含序列编号59的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号53的氨基酸序列的轻链可变区；或

a2－3)包含序列编号60的氨基酸序列的重链可变区和

包含序列编号61的氨基酸序列的轻链可变区。

(5)根据(1)～(4)中任一项所述的抗体或其抗体片段，进一步包括

包含序列编号62或63的氨基酸序列的重链恒定区和

包含序列编号64的氨基酸序列的轻链恒定区。

作为(4)和(5)的具体例子，可列举实施例的表2记载的抗体。

(6)一种医药组合物，其含有(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的抗体或其抗体片段。

(7)根据(6)所述的医药组合物，其为疼痛和/或瘙痒的治疗剂和/或预防剂。

(8)一种聚核苷酸，

其编码(3)或(4)所述的抗体的重链可变区，

可进一步编码(5)所述的抗体的重链恒定区。

(9)一种聚核苷酸，

其编码(3)或(4)所述的抗体的轻链可变区，

可进一步编码(5)所述的抗体的轻链恒定区。

(10)一种表达载体，其包含(8)或(9)所述的聚核苷酸。

(11)一种聚核苷酸，其编码(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的抗体或抗体片段。

(12)根据(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的抗体或抗体片段，抗体片段为Fab、Fab’、F(ab')

(13)一种Nav1.7相关疾病的预防或治疗方法，包括用(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的单克隆抗体或其抗体片段进行给药。

(14)根据(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的单克隆抗体或其抗体片段，其用于制造Nav1.7相关疾病的治疗或预防剂。

(15)根据(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的单克隆抗体或其抗体片段，其用于Nav1.7相关疾病的治疗或预防。

(16)根据(13)所述的方法或者(14)或(15)所述的抗体或其抗体片段，Nav1.7相关疾病为疼痛和/或瘙痒。

(17)一种Nav1.7检测用试剂盒，其含有(1－1)、(1－2)、(2)～(5)中任一项所述的单克隆抗体或其抗体片段。

发明效果

本发明的单克隆抗体或抗体片段与Nav1.7特异性结合，因而能够为了检测生物试样中的Nav1.7而使用。进一步，本发明的单克隆抗体或抗体片段具有选择性抑制Nav1.7的活性，因而含有本发明的单克隆抗体或抗体片段的医药组合物作为医药品、特别是用于Nav1.7相关疾病的治疗或预防的医药是非常有用的。

附图说明

图1为15C8的重链(序列编号14)、15H6的重链(序列编号18)、28B5的重链(序列编号20)和29G3的重链(序列编号23)的Kabat编号和比对结果

图2为15C8的轻链(序列编号43)、15H6的轻链(序列编号44)、28B5的轻链(序列编号46)和29G3的轻链(序列编号48)的Kabat编号和比对结果

图3为h12H4的重链(序列编号52、图3A)和轻链(序列编号53、图3B)的Kabat编号

图4为脚掌局部给药对坐骨神经部分结扎模型的药效的评价

图5为静脉内给药对坐骨神经部分结扎模型的药效的评价

具体实施方式

除非特殊指明，否则，本说明书中使用的术语均使用本领域通常使用的意思。

本发明中，可以利用本领域公知的抗体制作方法。可列举例如免疫化学实践(布莱克韦尔科学出版社)(Immunochemistry in Practice，Blackwell ScientificPubliations)中记载的方法等。

此外，还可以利用本领域公知的基因操作方法。可列举例如分子克隆实验室手册第四版(冷泉港实验室出版社)(Molecular Cloning，A Laboratory Manual，ForthEdition，Cold Spring Harbor Laboratory Press)(2012)、基础实验技术最新方案(最新方案)(Current Protocols Essential Laboratory Techniques，Current Protocols)(2012)中记载的方法等。

人Nav1.7是由基因SCN9A编码的氨基酸形成的蛋白质(UniProtKB/Swiss－Prot：Q15858)。

本发明的单克隆抗体或抗体片段是具有本说明书中记载的CDR或重链可变区/轻链可变区的单克隆抗体或该抗体的片段。该抗体或抗体片段可以来自免疫球蛋白分子的任意一类(例如IgG、IgE、IgM、IgD或IgA)或亚类，例如可以从包括小鼠、大鼠、鲨鱼、兔、猪、仓鼠、骆驼、羊驼、山羊或人的任意物种获得。作为该抗体或抗体片段，优选为人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体的抗体片段。

本发明中“单克隆抗体的抗体片段”的意思是，作为本发明的单克隆抗体的一部分、与该单克隆抗体同样地与Nav1.7特异性结合、选择性抑制Nav1.7的片段。

具体地，可以列举与人Nav1.7特异性结合的Fab(fragment of antigenbinding)、Fab’、F(ab’)

Fab是，将在IgG的铰链区域使两条H链交联的2个二硫键(S－S键)上部的肽部分用木瓜蛋白酶分解而得的、由H链N末端侧的约一半和整个L链构成的、分子量约5万的具有抗原结合活性的抗体片段。本发明中使用的Fab可以通过将本发明的单克隆抗体用木瓜蛋白酶处理来获得。此外，也可以通过下述方法制造Fab：将编码本发明的单克隆抗体的Fab的DNA插入细胞用表达载体，通过将该载体导入细胞进行表达。

Fab’是将F(ab’)

F(ab’)

scFv是将一条VH和一条VL用适当的连接肽(以下表述为P)连接的VH－P－VL或VL－P－VH多肽，是具有抗原活性的抗体片段。本发明中使用的scFv所含的VH和VL只要是本发明的单克隆抗体的部分即可。本发明中使用的scFv可以通过下述方法来制造：使用编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA构建scFv表达载体，通过导入大肠杆菌、酵母或动物细胞进行表达。

dsFv是指使VH和VL中各1个氨基酸残基替换为半胱氨酸残基的多肽介由S－S键结合而成的物质。替换为半胱氨酸残基的氨基酸残基可以按照Reiter等所示方法(蛋白质工程(Protein Engineering)，7、697(1994))基于抗体的立体结构预测来选择。本发明中使用的dsFv所含的VH或VL只要是本发明的单克隆抗体的部分即可。本发明中使用的dsFv可以通过下述方法来制造：使用编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA，插入到适当的表达载体，构建dsFv表达载体，将该表达载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞进行表达。

Diabody是抗原结合特异性相同或不同的scFv形成二聚体的抗体片段，是具有对相同抗原的二价抗原结合活性或对不同抗原的2种特异性抗原结合活性的抗体片段。例如，与本发明的单克隆抗体特异性反应的二价Diabody可以通过下述方法来制造：使用编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA，构建编码具有3～10个残基的连接肽的scFv的DNA，将该DNA插入到细胞用表达载体，通过将该表达载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞来表达Diabody。

包含CDR的肽的构成包含VH或VL的CDR中至少1个区域以上。多个CDR可以直接或介由适当的连接肽而结合。本发明中使用的包含CDR的肽可以通过下述方法来制造：使用编码本发明的单克隆抗体的VH和VL的cDNA，构建编码CDR的DNA，将该DNA插入到动物细胞用表达载体，通过将该载体导入大肠杆菌、酵母或动物细胞进行表达。此外，包含CDR的肽也可以通过Fmoc法(氟烯基甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等化学合成方法来制造。

本发明的单克隆抗体或抗体片段的特征在于与Nav1.7特异性结合。以下记录Nav1.7特异性结合能力测定步骤的一例。

特异性结合可以以至少约1×10

本发明的单克隆抗体或抗体片段的特征在于抑制Nav1.7。以下记录Nav1.7抑制能力测定步骤的一例。

将克隆有编码Nav1.7的DNA的pcDNA3.1(英杰公司制)转染至FreeStyle 293细胞(Thermo Fisher Scientific公司制)，从而构建Nav1.7稳定表达细胞。通过使用该细胞，利用以下所示方法实施手动膜片钳，能够评价抗体的Nav1.7特异性抑制。将聚L-赖氨酸包被的玻璃片排列在35mm平皿中，接种悬浮于含有10％FBS的DMEM(SIGMA公司制)的Nav1.7稳定表达细胞(4×104cells/dish)。接种第二天，将玻璃片移入测定室，形成全细胞，以0.1Hz施加－70mV固定、10msec的矩形波进行抗体处理，在抗体处理前和处理后(＞2min处理)进行测定。

本发明的单克隆抗体可以使用本说明书中记载的CDR或重链可变区/轻链可变区通过本领域的常规方法来制作。

本发明的单克隆抗体也包括人源化单克隆抗体。人源化抗体在人体内的抗原性降低，因此在出于治疗目的等对人进行给药的情况下是有用的。人源化单克隆抗体是将人以外的哺乳动物、例如小鼠抗体的互补决定区(CDR，complementarity determining region)移植至人抗体的构架区(FR，framework region)而得的抗体。因此，人源化单克隆抗体的FR是来源于人的抗体。适当的FR抗原参照Kabat E.A.等的文献来选择。作为这种情况下的FR，CDR选择形成良好的抗原结合部位的区域。也可以根据需要，以重构的人源化抗体的CDR形成适当的抗原结合部位的方式对抗体可变区FR的氨基酸进行替换(Sato、K.等,CancerRes.1993年，第53卷第851页)。替换的FR的氨基酸的比例为整个FR区域的0～15％、优选为0～5％。

需说明的是，本发明的人源化单克隆抗体使用人抗体的恒定区。作为优选的人抗体恒定区，作为重链，可列举Cγ，例如可以使用Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4，作为轻链，可以使用Cκ、Cλ。此外，为了改善抗体或其产生的稳定性，可以对人抗体的C区域进行修饰。人源化时使用的人抗体可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等任何同型人抗体，本发明中优选使用IgG，进一步优选为IgG1或IgG4。

本发明的人源化单克隆抗体在重链恒定区的C末端添加或不添加赖氨酸均可。优选的是，具有序列编号64的氨基酸序列的轻链恒定区和序列编号62或63的氨基酸序列的重链恒定区，序列编号62或63的C末端添加或不添加赖氨酸均可。

人源化单克隆抗体可以通过一般的制造方法来制作(例如参照下述实施例4、WO95/14041号公报、WO96/02576号公报等)。具体地，首先，通过PCR法，由以末端部具有重叠部分的方式制作的数个寡核苷酸，合成编码以连接小鼠抗体的CDR和人抗体的FR的方式设计的可变区的DNA序列(参照WO98/13388号公报)。使得到的DNA与编码人抗体的恒定区的DNA连接，然后组入表达载体。或者，也可以使编码抗体的可变区的DNA组入包含抗体的恒定区的DNA的表达载体。为了制造本发明中使用的抗体，将抗体基因以基于表达控制区域例如增强子/启动子的控制进行表达的方式组入表达载体。然后，可以用该表达载体转化宿主细胞，对抗体进行表达。

作为上述基因转化体的宿主细胞，可列举例如COS细胞、CHO细胞等脊椎动物细胞、原核细胞、酵母等。基因转化体可以按照本领域技术人员公知的方法进行培养，通过该培养，在基因转化体细胞内或细胞外产生本发明的单克隆抗体。作为该培养中使用的培养基，可以根据采用的宿主细胞选择惯用的各种培养基，例如是COS细胞的情况下，可以使用根据需要在RPMI－1640培养基、Dalbeco改良伊格尔最低必需培养基(DMEM)等培养基中添加了胎牛血清(FBS)等血清成分的培养基。培养该基因转化体时的培养温度只要是不会使细胞内的蛋白质合成能力显著降低的温度即可，优选在32～42℃、最优选在37℃进行培养是理想的。此外，还可以根据需要在含有1～10％(v/v)二氧化碳气体的空气中进行培养。

含有通过上述操作在基因转化体的细胞内或细胞外产生的本发明的单克隆抗体的级分可以通过利用该蛋白质的物理性质、化学性质等的各种公知的分离操作方法进行分离、纯化。作为该方法，具体地，例如可以采用通常的利用蛋白质沉淀剂的处理、超滤、分子筛色谱(凝胶过滤)、吸附色谱、离子交换色谱、亲和色谱、高效液相色谱(HPLC)等各种色谱、透析法和它们的组合等。通过该方法，能够容易地以高收率、高纯度制造本发明的单克隆抗体。

本发明的单克隆抗体或其活性片段可以进一步用聚乙二醇(PEG)、放射性物质、毒素等各种分子进行修饰。抗体的修饰方法可以利用本领域公知的方法。

此外，本发明的单克隆抗体可以在其N末端或C末端融合其他蛋白质(ClinicalCancer Research，2004，10，1274－1281)。本领域技术人员可以适当选择融合的蛋白质。

含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物(本发明的医药组合物)可以口服地或非口服地进行全身或局部给药。作为非口服给药，例如可以选择点滴等静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内给药、吸入等。

本发明的医药组合物作为用于Nav1.7相关疾病的治疗和/或预防的医药是非常有用的。

Nav1.7相关疾病可列举疼痛、瘙痒、神经源性炎症、咳嗽等。

作为“疼痛”，可列举急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、炎症性疼痛、关节炎、骨关节炎、偏头痛、群发头痛综合征、三叉神经痛、疱疹性神经痛、全身性神经痛、神经退行性疾病、运动障碍、神经内分泌障碍、失调症、败血症、内脏痛、急性痛风、疱疹后神经痛、糖尿病性神经障碍、坐骨神经痛、背痛、头部或颈部疼痛、剧烈疼痛或难治性疼痛、突发性疼痛、手术后疼痛、遗传性红痛症、牙疼、鼻炎、癌痛、膀胱障碍等。

作为“瘙痒”，可列举急性瘙痒、慢性瘙痒、组胺依赖性瘙痒、非组胺依赖性瘙痒等。

“神经源性炎症”可以伴随喘息、关节炎、湿疹、头痛、偏头痛、或干癣、或者上述症状的组合。

“咳嗽”可列举病理性或慢性咳嗽。

本发明的医药组合物的有效给药量从一次每1kg体重0.01mg至100mg的范围选择。或者，可以每个患者选择5～5000mg、优选为10～500mg的给药量。但含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物不受这些给药量的限制。此外，给药时间可以根据患者的年龄、症状适当选择。本发明的医药组合物也可以是根据给药途径同时含有医药上允许的载体、添加物的组合物。作为这样的载体和添加物的例子，可列举水、医药上允许的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、精氨酸钠、水溶性葡聚糖、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、酪蛋白、双甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、允许作为医药添加物的表面活性剂等。使用的添加物根据剂型从上述物质中适当选择或组合选择，但不限定为这些物质。

本发明包括编码本发明的单克隆抗体的重链可变区和/或轻链可变区的聚核苷酸。编码本发明的单克隆抗体的重链可变区的聚核苷酸可进一步编码重链恒定区。编码本发明的单克隆抗体的轻链可变区的聚核苷酸可进一步编码轻链恒定区。此外，本发明包括包含这些聚核苷酸中的至少1种的表达载体。

该聚核苷酸只要编码本发明的单克隆抗体的重链可变区或轻链可变区即可，没有特别限定，是多个脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)等由核苷酸形成的聚合物。也可以含有天然以外的碱基。本发明的聚核苷酸可以为了通过基因工程方法制造抗体而使用。此外也可以为了筛选具有与本发明的单克隆抗体同等功能的抗体而作为探针使用。即，可以使用编码本发明的单克隆抗体的聚核苷酸或其一部分作为探针，通过杂交、基因扩增技术(例如PCR)等技术，能够获得与该聚核苷酸在严格条件下杂交且编码具有与本发明的单克隆抗体同等活性的抗体的DNA。这样的DNA也包括在本发明的聚核苷酸中。

杂交技术(Sambrook，J等，分子克隆第二版，9.47－9.58，冷泉港实验室出版社，1989)是本领域技术人员熟知的技术。作为杂交的条件，可列举例如低严格性条件。低严格性条件是杂交后的洗涤中例如42℃、0.1×SSC、0.1％SDS的条件，优选为50℃、0.1×SSC、0.1％SDS的条件。作为更优选的杂交条件，可列举高严格性条件。高严格性条件例如是65℃、5×SSC和0.1％SDS的条件。这些条件中，可以期待温度越高越能够有效获得具有相似性的聚核苷酸。但作为影响杂交严格性的要素，可以考虑温度、盐浓度等多个要素，本领域技术人员可以通过适当选择这些要素来实现同样的严格性。

通过这些杂交技术、基因扩增技术得到的聚核苷酸编码的与本发明的单克隆抗体功能上同等的抗体通常与这些抗体在氨基酸序列中具有高相似性。本发明的单克隆抗体中也包括功能上与本发明的单克隆抗体同等且与该抗体的氨基酸序列具有高相似性的抗体。高相似性在氨基酸水平上通常是指至少75％以上的同一性、优选为85％以上的同一性、进一步优选为95％以上的同一性。多肽相似性的确定可按照文献(Wilbur，W.J.和Lipman，D.J.美国科学院院刊USA(1983)80，726－730)记载的算法。

本发明的单克隆抗体或其抗体片段与Nav1.7特异性结合，因此可以为了检测生物试样中的Nav1.7而使用。作为生物试样，可列举血液、血浆、血清、尿、脏器、组织、骨髓、淋巴结等。因此，含有本发明的单克隆抗体的试剂盒可以用作Nav1.7检测用试剂盒。该试剂盒含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段，可以进一步含有标记二抗、标记检测所需底物、载体、洗涤缓冲液、试样稀释液、酶底物、反应终止液、作为纯化的标准物质的Nav1.7蛋白质、使用说明书等。

实施例

以下，列举本发明的实施例进一步详细地对本发明进行说明，但本发明不受这些实施例的限定。

实施例1：Nav1.7抗体的制备

以相当于人Nav1.7(UniProtKB/Swiss－Prot：Q15858)的结构域C、E3细胞外环C端区域的肽(1418－SVNVDKQPKYEYSL(序列编号1)－1431；hCE3C肽)为抗原来筛选。

合成在hCE3C肽N端带有Cys残基的肽(Cys－SVNVDKQPKYEYSL(序列编号1)，Cys－hCE3C)(东丽株式会社制)，与马来酰亚胺化giant keyhole limpets血蓝蛋白(马来酰亚胺化KLH，Thermo Scientific公司制)结合，制备免疫原。用该肽－KLH复合体与弗氏完全佐剂一起免疫A/J Jms Slc雌性小鼠。然后，与弗氏不完全佐剂一起追加4次免疫。

终免疫3天后将脾脏摘下，用PEG法使脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞(p3×6363－Ag8.，东京肿瘤研究所)融合，用含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸甙的培养基进行选择。使用培养上清，通过使用免疫原肽的ELISA法，建立产生结合抗体的杂交瘤。

实施例2：抗体序列的确定

利用建立的克隆杂交瘤细胞，按照常规方法确定抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列(表1)。

[表1]

实施例3：抗体序列的比对

对于15C8、15H6、28B5和29G3的重链和轻链的氨基酸序列，实施使用抗体序列分析软件abYsis的Kabat编号和使用基因分析软件GENETIX的比对(图1、2)。结果，15C8、15H6、28B5和29G3的氨基酸序列是如下所述类似的序列。

轻链的CDR1由序列编号34的16个氨基酸构成。

轻链的CDR2由K－V－S－N－R－Xaa1－S(这里，Xaa1为F或I：序列编号54)7个氨基酸构成。

轻链的CDR3由S－Q－S－Xaa2－H－V－P－Xaa3－T(这里，Xaa2为T或I，Xaa3为F或W：序列编号55)9个氨基酸构成。

重链的CDR1由G－Y－Y－Xaa4－H(这里，Xaa4为M或I：序列编号56)5个氨基酸构成。

重链的CDR2由L－I－I－P－Y－Xaa5－G－Xaa6－Xaa7－F－Y－N－Xaa8－K－F－Xaa9－G(这里，Xaa5为S或N，Xaa6为D或E，Xaa7为T或I，Xaa8为Q或P，Xaa9为K或R：序列编号57)17个氨基酸构成。

重链的CDR3由A－Xaa10－V－S－Y－A－M－D－Y(这里，Xaa10为E或D：序列编号58)9个氨基酸构成。

实施例4：抗体的人源化

通过下述方法对12H4实施人源化。用序列分析软件Absis对与小鼠抗体氨基酸序列的重链和轻链的V基因区域序列类似的人生殖系统受体序列进行检索、选择。此外对于J链区域，用IMGT(http：//www.imgt.org/)检索与小鼠抗体DNA序列相似性高的序列，作为人骨架序列。对于该人构架序列，移植通过Kabat编号(Wu，T.T.和Kabat，E.A.，JExp.Med.Aug1；132(2)：211－50.(1970))定义的小鼠抗体重链CDR1、CDR2、CDR3和小鼠抗体轻链CDR1、CDR2、CDR3，从而设计表2的人源化抗体序列。其中，h12H4、h12H4－2、h12H4－3的恒定区中，重链使用hIgG4Pro(序列编号62)或hIgG1(序列编号63)，轻链使用hIgK(序列编号64)。

人源化12H4(h12H4)、在其他人生殖系统受体序列中移植了CDR的人源化序列h12H4－2和h12H4－3在实施例5记载的方法中对免疫原肽(Cys－CE3C)显示出与小鼠抗体同等的亲和性。

[表2]

实施例5：亲和性评价

通过以下所示竞争ELISA法测定对免疫原肽(Cys－hCE3C)的亲和性。

在抗小鼠IgG抗体固相化板上加入得到的小鼠抗体的稀释液，室温结合3小时。用ELISA用洗涤缓冲液洗涤3次后，添加生物素标记的免疫原肽和Streptavidin－HRP(PIERCE公司制)。与此同时，添加未标记的免疫原肽的稀释系列，4℃过夜反应。用ELISA洗涤液洗涤3次后，添加TMB－Substrate Chromogen(赛默飞世尔科技公司制)进行显色，然后用等量的0.05N硫酸使反应停止，测定450nm的吸光度。将生物素标记肽的信号减弱至二分之一的未标记肽的浓度作为亲和性(IC50)。结果如表3所示，对免疫原肽显示出强的亲和性。

[表3]

实施例6：对于人源化12H4的结合重要的氨基酸的确定

使用抗体序列分析软件abYsis对人源化12H4(h12H4)实施Kabat编号和CDR的定义。将其结果示于图3A、3B。此外，制作在对应于CDR的氨基酸中导入了点突变的突变体，通过实施例5中记载的方法算出其亲和性。此时，作为未标记肽，使用去掉了免疫原肽的N端Cys的肽(SVNVDKQPKYEYSL，序列编号1)，作为对于该肽的亲和性算出。将轻链的结果示于表4，将重链的结果示于表5。结果，如果将轻链的Q90、V94的氨基酸替换为其他氨基酸，则对于该肽的亲和性消失。表4中，n.d.的意思是not detectable(无法检测)。由此，轻链的Q90、V94被认为对结合而言是特别重要的氨基酸。此外，如果将轻链的N28、重链的M99的氨基酸替换为其他氨基酸，则亲和性下降10倍以上。由此，轻链的N28、重链的M99被认为对于结合而言是重要的氨基酸。

[表4]

[表5]

实施例7：药效评价

(7－1)大鼠坐骨神经部分结扎模型(Partial Sciatic Nerve Ligation模型)的制作

将大鼠用异氟烷麻醉，剃掉左脚的毛。切开大腿上部的皮肤，剖开肌肉，使坐骨神经露出。将坐骨神经的大约一半用尼龙丝紧紧结扎，将肌肉和皮肤缝合。以此作为手术侧。对于右脚，进行除了坐骨神经结扎以外的同样的处理，作为假手术侧。

(7－2)通过脚掌局部给药的药效评价

使用(7－1)中制作的大鼠，手术2周后，利用analgesiometer(Randall Selitto法)评价对机械痛觉过敏的镇痛作用。手术2周后，利用analgesiometer，以每1秒增加16g刺激压力的方式压迫大鼠后肢，将大鼠表现出逃避行为时的压力作为疼痛阈值。对于左右后肢评价疼痛阈值，作为处理前的疼痛阈值。采用手术侧的疼痛阈值为60～90g且假手术侧的疼痛阈值为100～175g的动物。需说明的是，为了训练动物，在测定处理前的疼痛阈值前实施同样的操作。本发明的抗体是使用PBS以形成300μg/40μL的方式制备的，在动物脚掌给药40μL。给药5分钟后，评价左右后肢的疼痛阈值，作为处理后的疼痛阈值。通过下述方法计算％逆转(reversal)值，评价抗体的镇痛作用。

％逆转值＝(手术侧处理后的疼痛阈值－手术侧处理前的疼痛阈值)/(假手术侧处理前的疼痛阈值－手术侧处理前的疼痛阈值)×100将3B2、15C8、28B5、29G3和12H4的结果示于图4。本发明的抗体通过脚掌给药抑制Nav1.7，对疼痛显示出显著的药效。

(7－3)通过静脉内给药的药效评价

使用(7－1)中制作的大鼠，手术2周后，利用VonFrey纤维丝，评价对于机械性异常性疼痛的作用。将大鼠放入置于金属网上的塑料制笼子中进行驯化。用抗体给药后，从金属网侧用VonFrey纤维丝(0.4～26g)对大鼠的脚掌进行刺激，将大鼠开始表现出逃避行为时纤维丝的压力值作为疼痛阈值。对左右后足评价疼痛阈值，作为处理前的阈值。药效评价中采用手术后的疼痛阈值为0.6～2g且假手术侧的疼痛阈值为8～15g的动物。需说明的是，为了训练动物，在测定处理前的疼痛阈值前实施同样的操作。将本发明的抗体用盐水(saline)以形成50mg/kg的方式进行制备，静脉内给药。给药0.5～72小时后，评价左右后足的疼痛阈值，作为处理后的疼痛阈值。通过下述方法算出％逆转值，作为化合物的镇痛效果进行比较。

％逆转值＝(手术侧处理后的疼痛阈值的对数－手术侧处理前的疼痛阈值的对数)/(假手术侧处理前的疼痛阈值的对数－手术侧处理前的疼痛阈值的对数)

将人源化12H4(h12H4)的结果示于图5。本发明的抗体通过静脉内给药在给药后48小时内对疼痛显示出显著的药效。

产业可利用性

本发明的单克隆抗体或抗体片段可以为了检测生物试样中的Nav1.7而使用。进一步，含有本发明的单克隆抗体或抗体片段的医药组合物作为用于Nav1.7相关疾病的治疗或预防的医药是非常有用的。

序列表

<110> 盐野义制药株式会社

<120> Nav1.7单克隆抗体

<130> 19P00036WO

<160> 64

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCE3C 肽

<400> 1

Ser Val Asn Val Asp Lys Gln Pro Lys Tyr Glu Tyr Ser Leu

1 5 10

<210> 2

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2的重链

<400> 2

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Thr Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr

20 25 30

Val Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VH的CDR1

<400> 3

Trp Tyr Val Met Ser

1 5

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VH的CDR2

<400> 4

Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VH的CDR3

<400> 5

Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 6

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12的重链

<400> 6

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 7

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VH的CDR1

<400> 7

Asp Thr Tyr Met His

1 5

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VH的CDR2

<400> 8

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VH的CDR3

<400> 9

Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 10

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9的重链

<400> 10

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Ile Gln Phe Thr Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9 VH的 CDR1

<400> 11

Asp Thr Tyr Ile His

1 5

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9 VH的CDR2

<400> 12

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 13

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9 VH的CDR3

<400> 13

Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 14

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C8的重链

<400> 14

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C8 VH、15H6 VH和 29G3 VH的CDR1

<400> 15

Gly Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 16

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C8 VH的CDR2

<400> 16

Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C8 VH、 15H6 VH和28B5 VH的CDR3

<400> 17

Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 18

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15H6的重链

<400> 18

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15H6 VH的CDR2

<400> 19

Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 20

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 28B5的重链

<400> 20

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Leu Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 28B5 VH的CDR1

<400> 21

Gly Tyr Tyr Ile His

1 5

<210> 22

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 28B5 VH的CDR2

<400> 22

Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 23

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 29G3的重链

<400> 23

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Asn Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Ala Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 29G3 VH的CDR2

<400> 24

Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 25

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 29G3 VH的CDR3

<400> 25

Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 26

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4 的重链

<400> 26

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Ser Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Glu Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4 VH、 h12H4 VH、h12H4-2 VH 和 h12H4-3 VH的CDR1

<400> 27

Tyr Tyr Tyr Ile Gln

1 5

<210> 28

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4 VH、 h12H4 VH、 h12H4-2 VH 和h12H4-3 VH的CDR2

<400> 28

Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 29

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4 VH、22D3 VH、 h12H4 VH、 h12H4-2 VH 和 h12H4-3 VH的CDR3

<400> 29

Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr

1 5

<210> 30

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 22D3的重链

<400> 30

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 31

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 22D3 VH的CDR1

<400> 31

His Tyr Tyr Ile Gln

1 5

<210> 32

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 22D3 VH的CDR2

<400> 32

Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 33

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2的轻链

<400> 33

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 34

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VK、15C8 VK、15H6 VK、 28B5 VK、29G3 VK、12H4 VK、22D3

VK、h12H4 VK、 h12H4-2 VK 和 h12H4-3 VK的CDR1

<400> 34

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VK、15C8 VK、28B5 VK、29G3 VK、12H4 VK、22D3VK、h12H4

VK、 h12H4-2 VK 和h12H4-3 VK的CDR2

<400> 35

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 36

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3B2 VK、15C8 VK、15H6 VK和29G3 VK的CDR3

<400> 36

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 37

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12的轻链

<400> 37

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Thr

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Arg Ile Lys Arg

100 105

<210> 38

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VK 和7B9 VK的CDR1

<400> 38

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His

1 5 10

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VK 的CDR2

<400> 39

Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 40

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E12 VK 和7B9 VK的CDR3

<400> 40

Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 41

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9 VK的轻链

<400> 41

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Gly Ile Lys Arg

100 105

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7B9 VK的CDR2

<400> 42

Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 43

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C8的轻链

<400> 43

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 44

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15H6的轻链

<400> 44

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Lys Phe Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15H6 VK的CDR2

<400> 45

Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser

1 5

<210> 46

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 28B5的轻链

<400> 46

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Ile His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 47

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 28B5 VK的CDR3

<400> 47

Ser Gln Ser Ile His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 48

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 29G3的轻链

<400> 48

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 49

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4的轻链

<400> 49

Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 50

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 12H4 VK、 h12H4 VK、 h12H4-2 VK和 h12H4-3 VK的CDR3

<400> 50

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 51

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 22D3的轻链

<400> 51

Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 52

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> h12H4的重链

<400> 52

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> h12H4 和h12H4-2的轻链

<400> 53

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr

<210> 54

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VK的CDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa 可以为Ile 或 Phe

<400> 54

Lys Val Ser Asn Arg Xaa Ser

1 5

<210> 55

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VK的CDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa 可以为 Thr或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa 可以为Phe 或Trp

<400> 55

Ser Gln Ser Xaa His Val Pro Xaa Thr

1 5

<210> 56

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH的CDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以为Met或Ile

<400> 56

Gly Tyr Tyr Xaa His

1 5

<210> 57

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH的CDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa 可以为Ser 或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa 可以为 Asp或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以为Thr或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa可以为Gln 或Pro

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> Xaa 可以为Lys 或Arg

<400> 57

Leu Ile Ile Pro Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Phe Tyr Asn Xaa Lys Phe Xaa

1 5 10 15

Gly

<210> 58

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH的CDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以为Glu或Asp

<400> 58

Ala Xaa Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 59

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> h12H4-2的重链

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 60

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> h12H4-3的重链

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 61

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> h12H4-3的轻链

<400> 61

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr

<210> 62

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hIgG4Pro

<400> 62

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 63

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hIgG1

<400> 63

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 64

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hIgK

<400> 64

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

1 5 10 15

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

20 25 30

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

35 40 45

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

50 55 60

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

65 70 75 80

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105