一种具有抗肿瘤活性的笔罗子果实的提取物及其制备方法与应用
文献发布时间:2024-04-18 19:58:21
技术领域
本发明属于抗肿瘤技术领域,具体涉及抗肿瘤活性的笔罗子果实的提取物及其制备方法。
背景技术
清风藤科笔罗子为常绿小乔木,高约10米。树干笔直,皮灰褐色;嫩枝粗壮,密生锈色柔毛。单叶互生,革质,倒披针形或椭圆形,长8~25厘米,宽3~5厘米,先端尖或钝,基部楔形,全缘或上部疏生锯齿,上面嫩时有毛,下面有锈色绒毛,侧脉在背面显明;叶柄长2.5~3厘米,有短毛。圆锥花序顶生,有锈色柔毛;花小,白色;萼片5;花瓣5;雄蕊5。核果近球形,基部倾斜,径5~8毫米,萼宿存。花期5~6月,果期8月。
笔罗子以根皮、果实等入药,秋季果实成熟时采收,晒干。生于海拔1500m以下的山坡、溪边、林缘或阔叶杂木林中及灌木丛内。分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、贵州、云南等地。根皮:酸,平。解毒,利水,消肿。主治水肿腹胀,无名肿毒,蛇咬伤。果实:苦;平。解表,止咳。主感冒;咳嗽
目前还没有笔罗子果实抗肿瘤作用相关研究的文献报道。本发明对笔罗子果实进行抗肿瘤活性研究,开发其新的临床用途。
发明内容
发明目的:本发明目的是对笔罗子果实不同提取方法的产物进行抗肿瘤活性筛选研究,开发其新的抗肿瘤用途。
技术方案:为了实现以上目的,本发明采取的技术方案为:
一种具有抗肿瘤活性的笔罗子果实的提取物,该提取物是通过下方法制备得到:
取笔罗子果实,粉碎,然后采用超临界CO
作为优选方案,以上所述的具有抗肿瘤活性的笔罗子果实的提取物,所述的超临界CO2流体萃取条件为:控制二氧化碳流量20~30L/h,萃取压力为20~40MPa,萃取温度为40~65℃,萃取时间为1~3小时;分离釜Ⅰ的压力为2~6MPa,温度为30~45℃;分离釜Ⅱ的压力为3~6MPa,温度为30~40℃。
作为优选方案,以上所述的具有抗肿瘤活性的笔罗子果实的提取物,超临界CO
本发明所述的笔罗子果实的提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。特别用于抗骨髓瘤、食管癌、宫颈癌、肝癌、肺癌中的应用。
一种抗肿瘤的药物制剂,将笔罗子果实的提取物与药学上可接受的载体制备而成。所述的药物制剂的剂型包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液或注射液。
一种抗肿瘤的药物,它包括本发明制备得到的笔罗子果实的提取物。
有益效果:本发明相比现有技术的优点是:
本发明采用最佳的超临界CO
本发明笔罗子果实的提取物为天然产物,不良反应低,毒副作用小,可制成各种剂型方便临床服用,为笔罗子果实开发了新的临床用途。
附图说明
图1为笔罗子果实超临界CO
图2为笔罗子果实乙醇提取物对不同肿瘤细胞的抑制作用IC
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明,但不以此限定本发明。
实施例1超临界CO
本发明为了进一步筛选出最佳的萃取工艺,对萃取温度、萃取时间、萃取压力、二氧化碳流量等重要因素进行考察。
1、萃取压力对萃取得率的影响
本发明筛选了50℃,萃取2小时,二氧化碳流量30L/h,不同萃取压力对笔罗子果实萃取得率的影响,具体实验结果如表1所示。
表1不同萃取压力对笔罗子果实萃取得率的影响结果
由表1的实验结果表明,笔罗子果实萃取物得率随萃取压力15~40MPa升高而增加,当压力到达30MPa时萃取率基本达到最高,考虑仪器设备安全可靠性,选择萃取压力为30MPa。
2、萃取温度对萃取得率的影响
本发明筛选了30MPa,萃取2小时,二氧化碳流量30L/h,不同萃取温度对笔罗子果实萃取得率的影响,具体实验结果如表2所示。
表2不同萃取温度对萃取得率的影响
由表2的实验结果表明,当温度达到55℃后,萃取物得率最高,温度继续升高,萃取得率反而有降低趋势,说明高温对笔罗子果实不耐热产物有一定影响,因此优选萃取温度为55℃。
3、萃取时间对萃取得率的影响
本发明筛选30MPa,55℃条件下,二氧化碳流量30L/h,不同萃取时间对笔罗子果实萃取得率的影响,具体实验结果如表3所示。
表3不同萃取时间对萃取得率的影响
由表3的实验结果表明,随着时间延长,萃取得率逐渐升高,当萃取时间为2小时后,萃取物得率达较高值,考虑经济成本和提取效率,因此优选萃取时间为2小时。
4、二氧化碳流量对萃取得率的影响
本发明筛选萃取压力30MPa,萃取温度55℃和萃取时间为2小时条件下,不同二氧化碳流量对笔罗子果实萃取得率的影响,具体实验结果如表4所示。
表4不同萃取时间对萃取得率的影响
由表4的实验结果表明,随着二氧化碳流量升高,萃取得率先逐渐升高后降低,考虑经济成本,因此二氧化碳流量选择20L/h。
通过以上各因素的筛选实验,本发明提供的笔罗子果实超临界CO
本发明经过筛选得到最佳的超临界CO
实施例2
笔罗子果实提取物的制备:取笔罗子果实,粉碎过40目筛,置于超临界萃取装置(南通华安HA221-40-48型超临界萃取装置)进行萃取,超临界CO
实施例3
笔罗子果实提取物的制备:取笔罗子果实,粉碎过40目筛,依次加入10倍量、8倍量、8倍量的95%乙醇连续回流提取3次,每次1小时,合并3次提取液,减压浓缩,得到笔罗子果实乙醇提取物。
实施例4体外抗肿瘤活性的实验
1、实验材料
肿瘤细胞株:多发性骨髓瘤(MM)细胞株ARP-1细胞、人食管癌细胞株Ec109、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株SMMC-7721,肺腺癌细胞株A549。
受试药物:实施例2制备得到的笔罗子果实超临界CO
96孔板购自Costar公司;RMPI1640培养基购自Gibco公司;DMEM培养基购自Gibco公司;噻唑蓝MTT购自Amresco公司。新生牛血清购自杭州四季青公司。
以下实施例所使用的实验仪器如下:
实验仪器:BIO-RAD伯乐680酶标仪。
2、实验方法
本发明采用改良MTT法,将多发性骨髓瘤MM细胞株ARP-1、人食管癌细胞株Ec109、人宫颈癌Hela、人肝癌SMMC-7721,肺腺癌细胞株A549用胰酶进行消化、计数、制成浓度为5×10
将96孔板中每孔加入100μl细胞悬液,每组设置3个复孔,用非完全培养基分别稀释受试药物至所需的不同梯度浓度,每孔加入100μL相应的含药培养基,同时设立不加药的阴性对照组,在37℃,5%CO
表1对肿瘤细胞的抑制作用(IC
由以上表1的实验结果表明,相比乙醇提取物,采用本发明超临界CO
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