包含A2A/A2B抑制剂、PD-1/PD-L1抑制剂和抗CD73抗体的组合疗法

技术领域

本文公开了包含A2A/A2B抑制剂、PD-1/PD-L1抑制剂、抗CD73抗体的组合疗法，以及使用所述组合疗法来治疗病症(诸如癌症)的方法。

背景技术

分化簇73(CD73)为糖基磷脂酰肌醇(GPI)连接的膜蛋白，其催化细胞外单磷酸腺苷(AMP)转化为腺苷。其作为同二聚体发挥功能，并且可脱落并作为循环中的可溶性蛋白质具有活性。CD73除其酶功能外，其还为细胞粘附分子且在调控白细胞运输方面起作用。已知CD73水平因组织损伤或低氧条件而上调，并且多种实体瘤具有升高的CD73水平。肿瘤内的CD73上调有助于富含腺苷的肿瘤微环境，其具有多种促肿瘤和免疫抑制效应。

腺苷为细胞外信号传导分子，其可通过许多免疫细胞类型调节免疫反应。腺苷首次由Drury和

腺苷在多种其他生理功能中起重要作用。其在连接至三个磷酸基团时参与核酸的合成；其形成细胞能量系统的必需组分ATP。腺苷可通过酶分解细胞外ATP来产生，或者也可通过穿过受损质膜从损伤的神经元和神经胶质细胞释放(Tautenhahn,M.等人Neuropharmacology,2012,62,1756-1766)。在外周和中枢神经系统中，腺苷通过位于细胞膜上的特定受体上的作用产生多种药理学效应(Matsumoto,T.等人Pharmacol.Res.,2012,65,81-90)。已描述了产生细胞外腺苷的替代途径。这些途径包括通过CD38、CD203a和CD73的协同作用从烟酰胺二核苷酸(NAD)而非ATP产生腺苷。腺苷的非CD73依赖性产生也可通过其他磷酸酯(诸如碱性磷酸酶或前列腺特异性磷酸酶)来进行。

在人类中存在腺苷受体的四种已知亚型，包括A1、A2A、A2B和A3受体。A1和A2A为高亲和力受体，而A2B和A3为低亲和力受体。腺苷及其激动剂可经由这些受体中的一者或多者起作用并且可调节腺苷酸环化酶的活性，所述酶负责增加环状AMP(cAMP)。不同受体对这种酶具有差异刺激性和抑制性效应。增加cAMP的细胞内浓度可抑制免疫细胞和炎症细胞的活性(Livingston,M.等人，Inflamm.Res.,2004,53,171-178)。

A2A腺苷受体可在外周和CNS中进行信号传导，其中激动剂被探究作为抗炎症药物并且拮抗剂被探究用于神经变性疾病(Carlsson,J.等人,J.Med.Chem.,2010,53,3748-3755)。在大多数细胞类型中，A2A亚型抑制细胞内钙水平，而A2B加强细胞内钙水平。A2A受体通常似乎抑制免疫细胞的炎症反应(Borrmann,T.等人,J.Med.Chem.,2009,52(13),3994-4006)。

A2B受体在胃肠道、膀胱、肺中和肥大细胞上高表达(Antonioli,L.等人,NatureReviews Cancer,2013,13,842-857)。尽管A2B受体在结构上与A2A受体密切相关且能够活化腺苷酸环化酶，但其功能不同。已假设，这种亚型可利用除腺苷酸环化酶外的信号转导系统(Livingston,M.等人,Inflamm.Res.,2004,53,171-178)。在所有腺苷受体中，A2B腺苷受体为低亲和力受体，认为其在生理条件下保持沉默且由于细胞外腺苷水平增加而活化(Ryzhov,S.等人,Neoplasia,2008,10,987-995)。A2B腺苷受体的活化可分别通过活化Gs和Gq蛋白来刺激腺苷酸环化酶和磷脂酶C。也已经描述了与促分裂原活化蛋白激酶的偶联(Borrmann,T.等人,J.Med.Chem.,2009,52(13),3994-4006)。

在免疫系统中，腺苷信号传导的接合可为保护组织免于过度免疫反应的关键调控机制。腺苷可通过许多免疫细胞类型负调节免疫反应，所述免疫细胞类型包括T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞、肥大细胞和骨髓源性抑制细胞(Allard,B.等人CurrentOpinion in Pharmacology,2016,29,7-16)。

在肿瘤中，此途径由肿瘤微环境劫持并且破坏免疫系统的抗肿瘤能力，从而促进癌症进展。在肿瘤微环境中，腺苷主要从细胞外ATP通过两种外核苷酸酶CD39和CD73产生。多种细胞类型可通过表达CD39和CD73产生腺苷。肿瘤细胞、T效应细胞、T调控细胞、肿瘤相关巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSC)、内皮细胞、癌症相关纤维母细胞(CAF)和间充质基质/干细胞(MSC)为这种情况。另外，低氧和炎症为肿瘤微环境常见的疾患，其诱导CD39和CD73的表达，从而增加腺苷产生。因此，实体瘤中的腺苷水平高于正常生理条件。

A2A主要在淋巴源性细胞(包括T效应细胞、T调控细胞和自然杀伤(NK)细胞)上表达。阻断A2A受体可防止使T细胞暂时失活的下游免疫抑制信号。A2B受体主要在单核细胞源性细胞(包括树突细胞、肿瘤相关巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSC)和间充质基质/干细胞(MSC))上表达。阻断临床前模型中的A2B受体可抑制肿瘤生长，阻断转移，并且增加肿瘤抗原的呈递。

根据ADORA2A/ADORA2B(A2A/A2B)阻断的安全性概况，A2A和A2B受体基因敲除(KO)小鼠皆为活的，显示无生长异常且为可育的(Allard,B.等人Current Opinion inPharmacology,2016,29,7-16)。A2A KO小鼠仅在用脂多糖(LPS)激发时展示增加的促炎性细胞因子水平且在基线时无炎症的证据(Antonioli,L.等人,Nature Reviews Cancer,2013,13,842-857)。A2B KO小鼠展现正常的血小板、红细胞和白细胞计数，但基线时的炎症(诸如TNF-α和IL-6))增加(Antonioli,L.等人,Nature Reviews Cancer,2013,13,842-857)。在LPS处理后检测到TNF-α和IL-6产生的进一步增加。A2B KO小鼠还展现介导炎症以及白细胞粘附/滚动的血管粘附分子增加；肥大细胞活化增强；对IgE介导的过敏反应的敏感性增加和低氧下的血管渗漏和嗜中性粒细胞流入量增加(Antonioli,L.等人,NatureReviews Cancer,2013,13,842-857)。

一些癌症患者具有较差的长期预后和/或对本领域中常用的一种或多种类型的治疗具有抗性。因此，在这种难以治疗的患者群体中，仍需要具有增加的功效和改善的安全性概况的癌症有效疗法。

发明内容

本申请尤其提供一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂；和

(iii)人CD73抑制剂。

本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂；和

(ii)人CD73抑制剂。

附图说明

图1示出使用实施例1中所述的治疗，携带人乳腺腺癌肿瘤MDA-MB-231的人源化鼠类宿主中的肿瘤生长抑制(TGI)。

图2示出使用实施例1中所述的治疗，携带人乳腺腺癌肿瘤MDA-MB-231的人源化鼠类宿主的存活分析。

具体实施方式

本申请提供治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂；和

(iii)人CD73抑制剂。

本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂；和

(ii)人CD73抑制剂。

A2A/A2B腺苷受体抑制剂

腺苷途径为保护组织免于过度免疫反应的关键免疫抑制途径(Antonioli,L.等人Nature Review Cancer.2013,13,842-857；Inflamm.Res.2004,53：171-178；Allard等人,Current Opinion in Pharmacology2016,29:7)。腺苷的免疫抑制活性通过两种G-蛋白偶联受体(GPCR)(称为A2A和A2B)来介导；发现两种受体在许多免疫细胞类型(包括T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞、肥大细胞和骨髓源性抑制细胞)上表达(SaudiPharmaceutical Journal.2013,21:245；Frontiers in Immunology.2019,10:925；J ClinInvest.2017,127(3):929；Neoplasia.2008,10：987；Neoplasia.2013,15:1400)。由于在肿瘤微环境中观察到高水平的腺苷产生，已报道，免疫系统的抗肿瘤能力受抑制，从而产生癌症进展。

人A2A腺苷受体蛋白(GenBank登录号NP_001265428)的示例性氨基酸序列为：

MPIMGSSVYITVELAIAVLAILGNVLVCWAVWLNSNLQNVTNYFVVSLAAADIAVGVLAIPFAITISTGFCAACHGCLFIACFVLVLTQSSIFSLLAIAIDRYIAIRIPLRYNGLVTGTRAKGIIAICWVLSFAIGLTPMLGWNNCGQPKEGKNHSQGCGEGQVACLFEDVVPMNYMVYFNFFACVLVPLLLMLGVYLRIFLAARRQLKQMESQPLPGERARSTLQKEVHAAKSLAIIVGLFALCWLPLHIINCFTFFCPDCSHAPLWLMYLAIVLSHTNSVVNPFIYAYRIREFRQTFRKIIRSHVLRQQEPFKAAGTSARVLAAHGSDGEQVSLRLNGHPPGVWANGSAPHPERRPNGYALGLVSGGSAQESQGNTGLPDVELLSHELKGVCPEPPGLDDPLAQDGAGVS(SEQ ID NO:94)。

人A2B腺苷受体蛋白(GenBank登录号NP_000667)的示例性氨基酸序列为：

MLLETQDALYVALELVIAALSVAGNVLVCAAVGTANTLQTPTNYFLVSLAAADVAVGLFAIPFAITISLGFCTDFYGCLFLACFVLVLTQSSIFSLLAVAVDRYLAICVPLRYKSLVTGTRARGVIAVLWVLAFGIGLTPFLGWNSKDSATNNCTEPWDGTTNESCCLVKCLFENVVPMSYMVYFNFFGCVLPPLLIMLVIYIKIFLVACRQLQRTELMDHSRTTLQREIHAAKSLAMIVGIFALCWLPVHAVNCVTLFQPAQGKNKPKWAMNMAILLSHANSVVNPIVYAYRNRDFRYTFHKIISRYLLCQADVKSGNGQAGVQPALGVGL(SEQ ID NO:95)。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为选自表1的化合物或其药学上可接受的盐。

表1.

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

Cy

Cy

R

R

每个R

每个R

在式(I)化合物的一些实施方案中，Cy

在式(I)化合物的一些实施方案中，R

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物1)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物2)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-2H-四唑-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物3A)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物3B)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物4)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(2-((5-(1H-吡唑-1-基)-2H-四唑-2-基)甲基)-5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物21A)。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐为3-(2-((5-(1H-吡唑-1-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物21B)。

式(I)化合物的合成和表征可参见WO2019/168847和US 62/891,685，其两者均特此以引用的方式整体并入。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为式(II)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

R

Cy

L为C

Cy

每个R

每个R

每个R

每个R

每个R

在一些实施方案中，式(II)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物5)。

在一些实施方案中，式(II)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物6)。

在一些实施方案中，式(II)化合物或其药学上可接受的盐为5-氨基-7-(3-氰基-2-氟苯基)-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物7)。

在一些实施方案中，式(II)化合物或其药学上可接受的盐为3-(5-氨基-2-((2-氟-6-(((1-甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)氨基)甲基)苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物8)。

式(II)化合物的合成和表征可参见WO2019/222677，其特此以引用的方式整体并入。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为式(III)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

Cy

R

每个R

R

每个R

每个R

在一些实施方案中，式(III)化合物或其药学上可接受的盐为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物9)。

在一些实施方案中，式(III)化合物或其药学上可接受的盐为3-(8-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物10)。

在一些实施方案中，式(III)化合物或其药学上可接受的盐为3-(8-氨基-2-(氨基(2,6-二氟苯基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物11)。

在一些实施方案中，式(III)化合物或其药学上可接受的盐为3-(8-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物12)。

式(III)化合物的合成和表征可参见PCT/US2019/040496，其特此以引用的方式整体并入。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为式(IV)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

Cy

Cy

每个R

R

每个R

在一些实施方案中，式(IV)化合物或其药学上可接受的盐为3-(4-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物13)。

在一些实施方案中，式(IV)化合物或其药学上可接受的盐为3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物14)。

在一些实施方案中，式(IV)化合物或其药学上可接受的盐为3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-7-(吡啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物15)。

在一些实施方案中，式(IV)化合物或其药学上可接受的盐为3-(4-氨基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)-2-氟苯甲腈或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物16)。

式(IV)化合物的合成和表征可参见US 62/798,180，其特此以引用的方式整体并入。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂为式(V)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

R

R

R

R

R

每个R

每个R

R

每个R

每个R

在一些实施方案中，式(V)化合物或其药学上可接受的盐为7-(1-((5-氯吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物17)。

在一些实施方案中，式(V)化合物或其药学上可接受的盐为3-甲基-7-(1-((5-甲基吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物18)。

在一些实施方案中，式(V)化合物或其药学上可接受的盐为3-甲基-9-戊基-7-(1-(噻吩并[3,2-b]吡啶-6-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物19)。

在一些实施方案中，式(V)化合物或其药学上可接受的盐为7-(1-((2-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐(参见表1的化合物20)。

式(V)化合物的合成和表征可参见US-2019-0337957，其特此以引用的方式整体并入。

可用于本文所述方法中的其他A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为本领域中已知。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为CPI-444(在本文中也称为“化合物B”；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-[[6-[[(3S)-氧戊环-3-基]氧基甲基]吡啶-2-基]甲基]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺)。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为AB928(3-[2-氨基-6-[1-[[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基]三唑-4-基]嘧啶-4-基]-2-甲基苯甲腈)。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为AZD4635(6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺)。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为NIR-178(5-溴-2,6-二(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺)。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为EOS100850。

在一些情况下，A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂为美国专利申请公布第2019/0292188号中所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，所述美国专利申请公布以引用的方式整体并入本文中。

如本文所用，“约”在提及可测量值(诸如量、剂量、持续时间和诸如此类)时意欲涵盖±10％的变化形式。在某些实施方案中，“约”可包括从指定值±5％、±1％或±0.1％的变化形式和其间的任何变化形式，因为此类变化形式适于实施所公开的方法。

在一些实施方案中，本文所公开的化合物为化合物的(S)-对映异构体或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物为化合物的(R)-对映异构体或其药学上可接受的盐。

应进一步了解，本发明为清楚起见而在单独实施方案的上下文中描述的某些特征也可在单一实施方案中以组合提供。相反，本发明为简便起见在单一实施方案的上下文中描述的各种特征也可单独或以任何适合子组合提供。

术语“n元”(其中n为整数)通常描述部分中成环原子的数量，其中成环原子的数量为n。举例而言，哌啶基为6元杂环烷基环的实例，吡唑基为5元杂芳基环的实例，吡啶基为6元杂芳基环的实例，并且1,2,3,4-四氢-萘为10元环烷基的实例。

如本文所用，短语“”任选取代的意指未经取代或经取代。取代基独立地选择，并且取代可处于任一化学可及位置。如本文所用，术语“取代的”意指，将氢原子移除且被取代基替代。单个二价取代基(例如氧代基)可替代两个氢原子。应理解，给定原子处的取代受化合价的限制。

如本文所用，短语“每个‘变量’”独立地选自意指实质上与其中“‘变量’在每次出现时”选自相同。

在整个定义中，术语“C

如本文所用，单独使用或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用，单独使用或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用，单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”是指芳族烃基，其可为单环或多环(例如具有2个、3个或4个稠合环)。术语“C

如本文所用的“卤基”或“卤素”是指F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，卤基为F、Cl或Br。在一些实施方案中，卤基为F或Cl。在一些实施方案中，卤基为F。在一些实施方案中，卤基为Cl。

如本文所用，单独使用或与其他术语组合使用的术语“C

如本文所用的“环烷基”是指非芳族环烃，包括环化烷基和烯基。环烷基可包括单环或多环(例如具有2个稠合环)基团、螺环和桥接环(例如桥接双环烷基)。环烷基的成环碳原子可任选地被氧代基或硫离子基(例如C(O)或C(S))取代。环烷基的定义还包括具有稠合至环烷基环(即与其具有共享键)的一个或多个芳族环的部分，例如环戊烷、环己烷和诸如此类的苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族环的环烷基可通过任一成环原子(包括稠合芳族环的成环原子)连接。环烷基可具有3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个成环碳(即C

如本文所用的“杂芳基”是指具有至少一个选自N、O、S和B的杂原子环成员的单环或多环(例如具有2个稠合环)芳族杂环。在一些实施方案中，杂芳基环具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O、S和B的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基部分中的任一成环N可为N-氧化物。在一些实施方案中，杂芳基为具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O、S和B的杂原子环成员的5-10元单环或双环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基为具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子环成员的5-10元单环或双环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基为具有1或2个独立地选自N、O、S和B的杂原子环成员的5-6元单环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基为具有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子环成员的5-6元单环杂芳基。在一些实施方案中，杂芳基含有3至10个、4至10个、5至10个、5至7个、3至7个或5至6个成环原子。在一些实施方案中，杂芳基具有1至4个成环杂原子、1至3个成环杂原子、1至2个成环杂原子或1个成环杂原子。当杂芳基含有多于一个杂原子环成员时，杂原子可相同或不同。实例杂芳基包括但不限于噻吩基(或苯硫基)、呋喃基(furyl或furanyl)、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基、1,3,4-噁二唑基和1,2-二氢-1,2-氮杂硼杂苯、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、唑基、三唑基、噻二唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并苯硫基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基、咪唑并[1,2-b]噻唑基、嘌呤基、三嗪基、噻吩并[3,2-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、1,5-萘啶基、1H-吡唑并[4,3-b]吡啶基、三唑并[4,3-a]吡啶基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吲唑基和诸如此类。

如本文所用，“杂环烷基”是指具有至少一个非芳族环(饱和或部分不饱和环)的单环或多环杂环，其中杂环烷基的一个或多个成环碳原子被选自N、O、S和B的杂原子替代，并且其中杂环烷基的成环碳原子和杂原子可任选地被一个或多个氧代基或硫离子基(例如C(O)、S(O)、C(S)或S(O)

杂环烷基的定义还包括具有稠合至非芳族杂环(即与其具有共享键)的一个或多个芳族环的部分，例如哌啶、吗啉、氮杂卓等的苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族环的杂环烷基可通过任一成环原子(包括稠合芳族环的成环原子)连接。

在一些实施方案中，杂环烷基含有3至10个成环原子、4至10个成环原子、3至7个成环原子或5至6个成环原子。在一些实施方案中，杂环烷基具有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1或2个独立地选自N、O、S和B的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环4-6元杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O、S和B的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环或双环5-10元杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环或双环5至10元杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基为具有1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子且具有一个或多个氧化环成员的单环5至6元杂环烷基。

实例杂环烷基包括吡咯烷-2-酮(或2-氧代吡咯烷基)、1,3-异噁唑烷-2-酮、吡喃基、四氢吡喃、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉、苯并氮杂卓、氮杂双环[3.1.0]己烷基、二氮杂双环[3.1.0]己烷基、氧代双环[2.1.1]己烷基、氮杂双环[2.2.1]庚烷基、二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、氮杂双环[3.1.1]庚烷基、二氮杂双环[3.1.1]庚烷基、氮杂双环[3.2.1]辛烷基、二氮杂双环[3.2.1]辛烷基、氧代双环[2.2.2]辛烷基、氮杂双环[2.2.2]辛烷基、氮杂金刚烷基、二氮杂金刚烷基、氧代-金刚烷基、氮杂螺[3.3]庚烷基、二氮杂螺[3.3]庚烷基、氧代-氮杂螺[3.3]庚烷基、氮杂螺[3.4]辛烷基、二氮杂螺[3.4]辛烷基、氧代-氮杂螺[3.4]辛烷基、氮杂螺[2.5]辛烷基、二氮杂螺[2.5]辛烷基、氮杂螺[4.4]壬烷基、二氮杂螺[4.4]壬烷基、氧代-氮杂螺[4.4]壬烷基、氮杂螺[4.5]癸烷基、二氮杂螺[4.5]癸烷基、二氮杂螺[4.4]壬烷基、氧代-二氮杂螺[4.4]壬烷基、氧代-二氢哒嗪基、氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基、氧代六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、3-氧代哌嗪基、氧代-吡咯烷基、氧代-吡啶基和诸如此类。举例而言，杂环烷基包括以下基团(具或不具N-甲基取代)：

如本文所用的“C

如本文所用的“C

如本文所用的“杂芳基-C

如本文所用的“杂环烷基-C

在某些地方，定义或实施方案是指特定环(例如氮杂环丁烷环、吡啶环等)。除非另有指示，否则这些环可连接至任一环成员，条件为不超过原子的化合价。举例而言，氮杂环丁烷环可连接至环的任一位置，而吡啶-3-基环连接在3-位置。

如本文所用，术语“氧代基”是指作为二价取代基的氧原子(即＝O)，在连接至碳时形成羰基(例如C＝O或C(O))，或在连接至氮或硫杂原子时形成亚硝基、亚磺酰基或磺酰基。

如本文所用，术语“独立地选自”意指，变量或取代基的每次出现在每次出现时独立地选自适用列表。

本文所述的化合物可为不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另有指示，否则意欲涵盖所有立体异构体，例如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代碳原子的本公开化合物可以光学活性或外消旋形式分离。从光学无活性起始材料制备光学活性形式的方法为本领域中已知，诸如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃的许多几何异构体、C＝N双键和诸如此类也可存在于本文所述的化合物中，并且本发明涵盖所有此类稳定异构体。描述本公开化合物的顺式和反式几何异构体且可将其分离为异构体的混合物或单独异构形式。在一些实施方案中，化合物具有(R)-构型。在一些实施方案中，化合物具有(S)-构型。本文所提供的式(例如式(I)、式(II)等)包括化合物的立体异构体。

化合物的外消旋混合物的拆分可通过本领域中已知的多种方法中的任一种来实施。实例方法包括使用手性拆分酸分段重结晶，所述手性拆分酸为光学活性成盐有机酸。适用于分段重结晶方法的拆分剂为例如光学活性酸，诸如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸(诸如β-樟脑磺酸)的D和L形式。适用于分段结晶方法的其他拆分剂包括α-甲基苄基胺的立体异构纯形式(例如，S和R形式或非対映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷和诸如此类。

外消旋混合物的拆分也可通过在填充有光学活性拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来实施。适合洗脱溶剂组成可由本领域技术人员确定。

本文所提供的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式源自单键与相邻双键的调换以及质子的伴随迁移。互变异构形式包括质子转移互变异构体，其为具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。实例质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对和其中质子可占据杂环系统的两个或更多个位置的环状形式，例如1H-和3H-咪唑、1H-、2H-和4H-1,2,4-三唑、1H-和2H-异吲哚、2-羟基吡啶和2-吡啶酮以及1H-和2H-吡唑。互变异构形式可呈平衡状态或通过适当取代在空间上锁定成一种形式。

所有化合物及其药学上可接受的盐可与其他物质(诸如水和溶剂，例如水合物和溶剂合物)在一起发现或者可分离。

在一些实施方案中，化合物的制备可涉及添加酸或碱以影响例如所需反应的催化或盐形式(酸加成盐)的形成。

在一些实施方案中，本文所提供的化合物或其盐实质上为分离的。“实质上分离”意指化合物至少部分或实质上与形成或检测到其的环境分离。部分分离可包括例如富集本文所提供化合物的组合物。实质性分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本文所提供化合物或其盐的组合物。用于分离化合物及其盐的方法为本领域中的常规方法。

如本文所用，术语“化合物”意欲包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。除非另有说明，否则在本文中根据名称或结构鉴别为一种特定互变异构形式的化合物意欲包括其他互变异构形式。

短语“药学上可接受的”在本文中用于指在合理医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症且与合理益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂量形式。

本申请还包括本文所述化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸或碱部分转化成其盐形式来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的矿物酸或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱盐或有机盐；和诸如此类。本公开的药学上可接受的盐包括例如由无毒无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本公开的药学上可接受的盐可通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，非水性介质如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(ACN)为优选的。适合盐的列表参见Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal ofPharmaceutical Science,66,2(1977)，所述文献中每一者以引用的方式整体并入本文中。

本文所述的化合物(包括其盐)可使用已知的有机合成技术来制备并且可根据多种可能的合成途径中的任一者来合成。

用于制备本文所述的化合物的反应可在可容易地由有机合成领域的技术人员选择的适合溶剂中实施。在实施反应时的温度(例如可介于溶剂冰点至溶剂沸点范围内的温度)下，适合溶剂实质上可不与起始材料(反应物)、中间体或产物反应。给定反应可在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中实施。取决于具体反应步骤，可由本领域技术人员选择适于具体反应步骤的溶剂。

本文所述的化合物的制备可涉及各个化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可容易地确定对保护和脱保护的需要和适当保护基团的选择。保护基团的化学可参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,Wiley&Sons,Inc.,New York(1999)，其以引用的方式整体并入本文中。

可根据本领域中已知的任何适合方法来监测反应。举例而言，可通过光谱法(诸如核磁共振光谱(例如，

本文所述的化合物可调节多种G-蛋白偶联受体(GPCR)中的一者或多者(包括例如A2A/A2B)的活性。术语“调节”欲指增加或降低A2A/A2B家族的一个或多个成员的活性的能力。因此，本文所述的化合物可用于通过使A2A/A2B与本文所述化合物或组合物中的任何一者或多者接触来调节A2A/A2B的方法中。在一些实施方案中，本发明的化合物可用作A2A和A2B中的一者或两者的抑制剂。在其他实施方案中，本文所述的化合物可用于通过施用调节量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来调节需要调节受体的个体中的A2A/A2B活性。在一些实施方案中，调节为抑制。

鉴于癌细胞生长和存活受多种信号传导途径的影响，本发明可用于治疗特征在于抗药性突变体的疾病状态。另外，可组合使用不同的GPCR抑制剂，所述抑制剂在调节其活性的GPCR中展现不同的偏好。这种方法可通过靶向多种信号传导途径而证实在治疗疾病状态中高度有效，减小在细胞中产生抗药性的可能性，并降低疾病治疗的毒性。

本发明化合物所结合和/或调节(例如抑制)的GPCR包括A2A/A2B家族的任一成员。

在一些实施方案中，使用多于一种本文所述的化合物来抑制一种GPCR(例如A2A)的活性。

在一些实施方案中，使用多于一种本文所述的化合物来抑制多于一种GPCR(例如至少两种GPCR，例如A2A和A2B)。

在一些实施方案中，一种或多种化合物与另一GPCR拮抗剂组合使用来抑制一种GPCR(例如A2A或A2B)的活性。

本文所述的A2A/A2B抑制剂可具有选择性。“选择性”意指，与至少一种其他GPCR相比，化合物分别以较大的亲和力或效力结合或抑制GPCR。在一些实施方案中，本文所述的化合物为A2A或A2B的选择性抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的化合物为A2A(例如相对于A2B)的选择性抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的化合物为A2B(例如相对于A2A)的选择性抑制剂。在一些实施方案中，选择性可为至少约2倍、5倍、10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1000倍。选择性可通过本领域中的常规方法来测量。在一些实施方案中，选择性可在针对每一GPCR的生物化学亲和力下测试。在一些实施方案中，本文所述的化合物的选择性可通过与特定A2A/A2B GPCR活性相关的细胞测定来确定。

PD-1/PD-L1抑制剂

免疫系统在控制和根除疾病(诸如癌症)方面起重要作用。然而，癌细胞通常形成逃避或抑制免疫系统以有利于其生长的策略。一种这样的机制为改变在免疫细胞上表达的共刺激和共抑制分子的表达(Postow等人,J.Clinical Oncology 2015,1-9)。阻断抑制性免疫检查点(诸如PD-1)的信号传导已证实为有前景且有效的治疗方式。

程序性死亡-1(“PD-1”，也称为“CD279”)为广泛地负调控免疫反应的扩展的CD28/CTLA-4T细胞调控因子家族的大约31kD的I型膜蛋白成员(Ishida,Y.等人(1992)EMBOJ.11:3887-3895；美国专利公布第2007/0202100号；美国专利公布第2008/0311117号；和美国专利公布第2009/00110667号；美国专利第6,808,710号；美国专利第7,101,550号；美国专利第7,488,802号；美国专利第7,635,757；和美国专利第7,722,868号；PCT公布第WO 01/14557号)。

PD-1在活化的T细胞、B细胞和单核细胞上表达(Agata,Y.等人(1996)Int.Immunol.8(5):765-772；Yamazaki,T.等人(2002)J.Immunol.169:5538-5545)，并且以低水平在自然杀伤(NK)T细胞中表达(Nishimura,H.等人(2000)J.Exp.Med.191:891-898；Martin-Orozco,N.等人(2007)Semin.Cancer Biol.17(4):288-298)。

PD-1的细胞外区域由单一免疫球蛋白(Ig)V结构域组成，所述免疫球蛋白(Ig)V结构域与CTLA-4中的等效结构域具有23％同一性(Martin-Orozco,N.等人(2007)Semin.Cancer Biol.17(4):288-298)。细胞外IgV结构域之后为跨膜区和细胞内尾。细胞内尾含有位于基于免疫受体酪氨酸的抑制基序和基于免疫受体酪氨酸的开关基序中的两个磷酸化位点，这表明PD-1负调控TCR信号(Ishida,Y.等人(1992)EMBO J.11:3887-3895；Blank,C.等人(2006)Immunol.Immunother.56(5):739-745)。

PD-1通过结合至B7-H1和B7-DC来介导其对免疫系统的抑制(Flies,D.B.等人(2007)J.Immunother.30(3):251-260；美国专利第6,803,192号；美国专利第7,794,710号；美国专利申请公布第2005/0059051号；美国专利申请公布第2009/0055944号；美国专利申请公布第2009/0274666号；美国专利申请公布第2009/0313687号；PCT公布第WO 01/39722号；PCT公布第WO 02/086083号)。

人PD-1蛋白(Genbank登录号NP_005009)的氨基酸序列为：MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL(SEQ ID NO:1)。

PD-1具有两种配体，即PD-L1和PD-L2(Parry等人,Mol Cell Biol2005,9543-9553；Latchman等人,Nat Immunol 2001,2,261-268)，并且其表达模式有所不同。PD-L1蛋白在巨噬细胞和树突细胞上响应于脂多糖和GM-CSF处理而上调，并且在T细胞和B细胞上在T细胞受体和B细胞受体信号传导时上调。PD-L1也在几乎所有的肿瘤细胞上高表达，并且所述表达在IFN-γ处理后进一步增加(Iwai等人,PNAS 2002,99(19):12293-7；Blank等人,Cancer Res 2004,64(3):1140-5)。实际上，已显示，肿瘤PD-L1表达状态在多个肿瘤类型中具有预后作用(Wang等人,Eur J Surg Oncol 2015；Huang等人,Oncol Rep 2015；Sabatier等人,Oncotarget 2015,6(7)：5449-5464)。相反，PD-L2表达更受限并且主要由树突细胞表达(Nakae等人,J Immunol 2006,177:566-73)。PD-1与其T细胞上的配体PD-L1和PD-L2的连接递送抑制IL-2和IFN-γ产生以及在T细胞受体活化时诱导的细胞增殖的信号(Carter等人,Eur J Immunol 2002,32(3):634-43；Freeman等人,JExp Med 2000,192(7):1027-34)。所述机制涉及募集SHP-2或SHP-1磷酸酶以抑制T细胞受体信号传导，诸如Syk和Lck磷酸化(Sharpe等人,Nat Immunol 2007,8,239-245)。PD-1信号传导轴的活化还减弱PKC-θ活化环磷酸化，其为活化NF-кB和AP1途径和细胞因子产生(诸如IL-2、IFN-γ和TNF)所必需的(Sharpe等人,Nat Immunol 2007,8,239-245；Carter等人,Eur J Immunol 2002,32(3):634-43；Freeman等人,J Exp Med 2000,192(7):1027-34)。

来自临床前动物研究的若干条证据表明，PD-1及其配体负调控免疫反应。已显示，PD-1缺陷性小鼠发展狼疮样肾小球性肾炎和扩张型心肌病(Nishimura等人,Immunity1999,11:141-151；Nishimura等人,Science 2001,291:319-322)。使用LCMV慢性感染模型已显示，PD-1/PD-L1相互作用抑制病毒特异性CD8 T细胞的活化、扩增和效应功能的获得(Barber等人,Nature 2006,439,682-7)。总之，这些数据支持阻断PD-1介导的抑制性信号传导级联以强化或“拯救”T细胞反应的治疗方法的开发。因此，需要阻断PD-1/PD-L1蛋白/蛋白相互作用、且由此治疗受试者癌症的新方法。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为选自以下的化合物：纳武单抗(

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂选自如WO 2018/119266中所公开的化合物，诸如例如

(S)-1-((7-氯-2-(2'-氯-3'-(5-(((2-羟基乙基)氨基)甲基)吡啶甲酰胺基)-2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)哌啶-2-甲酸或其药学上可接受的盐；

(S)-1-((7-氯-2-(3'-(7-氯-5-(((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)苯并[d]噁唑-2-基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(S)-1-((2-(2'-氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-2-甲基联苯-3-基)-7-氰基苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(2,2'-二甲基-3'-(4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(5-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[3,4-d]噻唑-2-基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

1-((7-氰基-2-(3'-(5-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[3,4-d]噻唑-2-基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)哌啶-4-甲酸或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐。(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸的合成和表征公开于WO 2018/119266中，其特此以引用的方式整体并入本文中。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂选自：

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸氢溴酸盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸草酸盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸盐酸盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸L-酒石酸盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸丙二酸盐；和

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸磷酸盐。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂选自WO 2018/119224中所公开的化合物，诸如例如

(S)-1-((2-(2'-氯-3'-(1,5-二甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-2-甲基联苯-3-基)-7-氰基苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((2-(2'-氯-3'-(6-异丙基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)-2-甲基联苯-3-基)-7-氰基苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(S)-N-(2-氯-3'-(5-(2-羟基丙基)-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-2'-甲基联苯-3-基)-5-异丙基-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐；

顺式-4-((2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)甲基)环己烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

反式-4-(2-(2-((2,2'-二氯-3'-(5-(2-羟基乙基)-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)环己烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

反式-4-(2-(2-((2-氯-2'-甲基-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)环己烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；和

顺式-4-((2-(2-氯-3'-(5-(2-(乙基(甲基)氨基)乙酰基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[3,4-d]噻唑-2-基)-2'-甲基联苯-3-基氨甲酰基)-1-甲基-6,7-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5(4H)-基)甲基)环己烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂选自WO 2019/191707中所公开的化合物，诸如例如

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(7-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲基吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)哌啶-4-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(7-(((S)-1-羟基丙-2-基氨基)甲基)-2-甲基吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(2-(二氟甲基)-7-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)哌啶-4-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(2-(二氟甲基)-7-((3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)-N,N-二甲基哌啶-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐；

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(2-环丙基-7-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-6-甲基-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂选自WO 2019/217821中所公开的化合物，诸如例如

4-(2-(2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

4-(2-(2-((3'-(5-((1H-吡唑-3-基)甲基)-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

(R)-4-(2-(2-((2,2'-二氯-3'-(5-(2-羟基丙基)-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)或其药学上可接受的盐；

4-(2-(2-((2-氯-2'-甲基-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；

4-(2-(2-((2,2'-二甲基-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐；和

4-(2-(2-((3'-(5-(反式-4-羧基-4-甲基环己基)-1-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3-基)氨甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为人源化抗体。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为派姆单抗。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为纳武单抗。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为阿特珠单抗。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段为人源化抗体。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为瑞弗利单抗(即MGA-012)。

瑞弗利单抗为结合至人PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。参见美国专利第10,577,422号中的hPD-1mAb 7(1.2)，所述专利以引用的方式整体并入本文中。成熟瑞弗利单抗重链和轻链的氨基酸序列显示于下文中。可变重链(VH)结构域和可变轻链(VL)结构域的互补决定区(CDR)1、2和3以成熟VL和VH序列的N至C末端的顺序显示且加下划线并加粗。由下文所列出的成熟重链(SEQ ID NO:2)和成熟轻链(SEQ ID NO:3)组成的抗体被称为瑞弗利单抗。

成熟瑞弗利单抗重链(HC)

成熟瑞弗利单抗轻链(LC)

瑞弗利单抗的可变重链(VH)结构域具有以下氨基酸序列：

瑞弗利单抗的可变轻链(VL)结构域具有以下氨基酸序列：

下文列出瑞弗利单抗的VH CDR的氨基酸序列：

VH CDR1：SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2：VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；

VH CDR3：EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)

下文列出瑞弗利单抗的VL CDR的氨基酸序列：

VL CDR1：RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2：AASNQGS(SEQ ID NO:10)；和

VL CDR3：QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2包含氨基酸序列VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2包含氨基酸序列AASNQGS(SEQ ID NO:10)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)。

抗CD73抗体

CD73(也称为“5′-核苷酸酶”和“胞外-5′-核苷酸酶”)为作为通过GPI键联结合至质膜外面的同二聚体发挥功能的二聚体酶(EC:3.1.3.5)。CD73可脱落且作为循环中的可溶性蛋白质具有活性。CD73催化细胞外AMP转化为腺苷。CD73酶活性要求底物以开放的CD73构象结合。在底物结合后，CD73经历从开放至封闭构象的大构象变化，以将AMP转化为腺苷(参见例如Knapp等人,2012,Structure,20(12):2161-73)。CD73也作为细胞粘附分子发挥功能且在调控白细胞运输方面起作用。

CD73酶活性在癌症的促进和转移中起作用(参见例如Stagg和Smyth,2010,Oncogene,29:5346-5358；Salmi和Jalkanen,2012,OncoImmunology,1:247-248,2012；Stagg,2012,OncoImmunology,1:217-218；Zhang,2012,OncoImmunology,167-70)。CD73在癌细胞中过表达会损害适应性抗肿瘤免疫反应，从而增强肿瘤生长和转移(参见例如

成熟人CD73蛋白的示例性氨基酸序列(GenBank登录号NP_002517的氨基酸27-549)为：

WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRIKFS(SEQ ID NO:70)。

成熟鼠类CD73蛋白的示例性氨基酸序列(GenBank登录号NP_035981的氨基酸29-551)为：

WELTILHTNDVHSRLEQTSDDSTKCLNASLCVGGVARLFTKVQQIRKEEPNVLFLDAGDQYQGTIWFTVYKGLEVAHFMNILGYDAMALGNHEFDNGVEGLIDPLLRNVKFPILSANIKARGPLAHQISGLFLPSKVLSVGGEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEISALQPEVDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDIVVGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGRQVPVVQAYAFGKYLGYLKVEFDDKGNVITSYGNPILLNSSIPEDATIKADINQWRIKLDNYSTQELGRTIVYLDGSTQTCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHPDEMFWNHVSMCIVNGGGIRSPIDEKNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDINRKPWNRVVQLEVLCTKCRVPIYEPLEMDKVYKVTLPSYLANGGDGFQMIKDELLKHDSGDQDISVVSEYISKMKVVYPAVEGRIKFS(SEQ ID NO:71)。

成熟食蟹猴CD73蛋白的示例性氨基酸序列为：

WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNVNKIIALGHSGFETDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHADEMFWNHVSMCILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEIYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRIKFS(SEQ ID NO:72)。

本公开提供抗CD73抗体，所述抗体可与A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病，例如癌症。本公开进一步提供抗CD73抗体，所述抗体可与PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病，例如癌症。这些抗CD73抗体可结合人CD73。

在一些情况下，这些抗体结合人CD73和食蟹猴CD73。在一些情况下，这些抗体结合人CD73和食蟹猴CD73且不结合鼠类CD73。此类抗CD73抗体包括抗CD73单克隆抗体CL25及其人源化形式HzCL25(即抗体Y)的序列，所述人源化形式以高亲和力结合至人和食蟹猴CD73，并且与小鼠CD73具有无法检测的结合。

在一些情况下，这些抗体结合人CD73、食蟹猴CD73和鼠类CD73。此类抗CD73抗体包括人抗CD73单克隆抗体3-F03的序列，其以高亲和力结合至人、食蟹猴和鼠类CD73中每一者的开放构象。

抗体HzCL25(即抗体Y)

抗体HzCL25为人源化IgG1/κ单克隆抗体，所述抗体在重链恒定区的位置天冬酰胺-297(N297，根据EU编号)处具有丙氨酸以降低效应功能。其以高亲和力(K

HzCL25从鼠类CL25抗体的嵌合形式构建。

下表2显示根据IMGT编号的HzCL25 CDR的氨基酸序列。下表2还显示HzCL25成熟VH、VL、重链和轻链的氨基酸序列。

表2.HzCL25 CDR、VH、VL、重链和轻链的氨基酸序列

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抗CD73抗体可涵盖HzCL25的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL CDR 1、VL CDR2和VL CDR3。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有HzCL25的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表2)的VH。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表2)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有HzCL25的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表2)的VH，和含有HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表2)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体可在HzCL25的六个CDR中的一者或多者(即1者、2者、3者、4者、5者或6者)内具有例如1个、2个或3个取代。在一些情况下，抗体(i)抑制细胞CD73(例如与同型对照相比，细胞CD73活性降低至少10％；至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％)；和/或(ii)抑制可溶性CD73(例如与同型对照相比，可溶性CD73活性降低至少10％；至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％)；和/或(iii)以高亲和力(例如K

在某些实施方案中，抗CD73抗体包含与HzCL25的VH(即SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有HzCL25的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3(即分别为SEQ ID NO：16-18中所示的氨基酸序列)的VH，其中VH包含与HzCL25的VH(即SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含与HzCL25的重链(即SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含重链，所述重链包含含有HzCL25的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3(即分别为SEQ ID NO：16-18中所示的氨基酸序列)的VH，其中VH包含与HzCL25的VH(即SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中重链包含与HzCL25的重链(即SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含与HzCL25的VL(即SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(即分别为SEQ ID NO：19-21中所示的氨基酸序列)的VL，其中VL包含与HzCL25的VL(即SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含与HzCL25的轻链(即SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含轻链，所述轻链包含含有HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3(即分别为SEQ ID NO：19-21中所示的氨基酸序列)的VL，其中VL包含与HzCL25的VL(即SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中轻链包含与HzCL25的轻链(即SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)与HzCL25的VH(即SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)与HzCL25的VL(即SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)包含HzCL25的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(即分别为SEQ ID NO：16-18中所示的氨基酸序列)的VH，其中VH包含与HzCL25的VH(即SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)包含HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(即分别为SEQ ID NO：19-21中所示的氨基酸序列)的VL，其中VL包含与HzCL25的VL(即SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含：包含SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的VH，和(ii)包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)与HzCL25的重链(即SEQID NO:24中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)与HzCL25的轻链(即SEQ IDNO:25中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)重链，所述重链包含含有HzCL25的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(即分别为SEQ ID NO：16-18中所示的氨基酸序列)的VH，其中重链包含与HzCL25的重链(即SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含含有HzCL25的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(即分别为SEQ ID NO：19-21中所示的氨基酸序列)的VL，其中轻链包含与HzCL25的轻链(即SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)包含SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列的重链，和(ii)包含SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列的轻链。

HzCL25的CD73结合表位处于氨基酸序列TKVQQIRRAEPNVL(SEQ ID NO:76)(即SEQID NO:70中所示的氨基酸序列的氨基酸40-53)内。本公开的特征在于结合至序列TKVQQIRRAEPNVL(SEQ ID NO:76)内的CD73的抗体。本公开的特征在于与HzCL25结合至相同表位的抗体。本公开的特征还在于竞争性抑制HzCL25与人CD73的结合的抗体。

在一些实施方案中，HzCL25的VH连接至包含CH1结构域和铰链区的重链恒定区。在一些实施方案中，HzCL25的VH连接至包含CH3结构域的重链恒定区。在一些实施方案中，CH3结构域缺少C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在一些实施方案中，CH3结构域含有C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在某些实施方案中，HzCL25的VH连接至重链恒定区，所述重链恒定区包含人IgG1的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方案中，人IgG1的CH3结构域缺少C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在一些实施方案中，人IgG1的CH3结构域含有C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在某些实施方案中，这种抗体在重链恒定区中含有增加抗体稳定性的一个或多个额外突变。在某些实施方案中，重链恒定区包括修饰抗体性质(例如减少Fc受体结合、增加或减少抗体糖基化、减少与C1q结合)的取代。在某些实施方案中，重链恒定区包括重链恒定区的位置天冬酰胺-297(N297，根据EU编号)处的丙氨酸以降低效应功能。

在某些实施方案中，抗CD73抗体为IgG抗体。在一个实施方案中，抗体为IgG1抗体。在一个实施方案中，抗体为IgG4抗体。在另一实施方案中，抗体为IgG2抗体。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区相对于野生型重链恒定区缺少一个或多个赖氨酸(K)氨基酸残基。举例而言，在某些实施方案中，抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区缺少重链恒定区的CH3结构域的C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。

抗体3-F03

抗体3-F03为人IgG1/κ单克隆抗体，其重链恒定区的位置天冬酰胺-297(N297，根据EU编号)处具有丙氨酸以降低效应功能。3-F03以高亲和力(K

下表3显示根据IMGT编号的3-F03 CDR的氨基酸序列。下表3还显示3-F03成熟VH、VL、重链和轻链的氨基酸序列。

表3.3-F03 CDR、VH和VL的氨基酸序列

本文还描述3-F03的变体。3-F03_411与3-F03同一，只是3-F03_411重链(i)含有在3-F03中缺少的N末端谷氨酸盐(E)，和(ii)不包括存在于3-F03中的C末端赖氨酸。下表4显示3-F03_411成熟VH、VL、重链和轻链的氨基酸序列。3-F03_413与3-F03_411同一，只是其在VH Kabat位置H53(SEQ ID NO:60的位置54)处含有谷氨酸盐(E)而非天冬氨酸(D)。下表5显示根据IMGT、Chothia、AbM、Kabat和Contact编号的3-F03_413CDR的氨基酸序列。下表5还显示3-F03_413成熟VH、VL、重链和轻链的氨基酸序列。

表4. 3-F03_411HC和LC的氨基酸序列

表5. 3-F03_413CDR、VH、VL、HC、LC的氨基酸序列

抗CD73抗体可涵盖3-F03或3-F03_413的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3)的VH。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表3)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3)的VH，和含有3-F03的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表3)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03_413的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表5)的VH。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表5)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有3-F03_413的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表5)的VH，和含有3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表5)的VL。在一些情况下，抗CD73抗体可在3-F03或3-F03_413的六个CDR中的一者或多者(即1者、2者、3者、4者、5者或6者)内具有例如1个、2个或3个取代。在一些情况下，所述抗体(i)抑制细胞CD73(例如与同型对照相比，细胞CD73活性降低至少10％；至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％)；和/或(ii)抑制可溶性CD73(例如与同型对照相比，可溶性CD73活性降低至少10％；至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％)；和/或(iii)以高亲和力(例如K

在某些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_413的VH(即分别为SEQID NO:62或63中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有3-F03_411的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34-36中所示的氨基酸序列)的VH，其中VH包含与3-F03_411的VH(即SEQ IDNO:62中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有3-F03_413的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ IDNO：34、40和36中所示的氨基酸序列)的VH，其中VH包含与3-F03_411的VH(即SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQID NO:62中所示的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_F13的重链(即分别为SEQ ID NO:30或33中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含重链，所述重链包含含有3-F03_411的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34-36中所示的氨基酸序列)的VH，其中重链包含与3-F03_411的重链(即SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含重链，所述重链包含含有3-F03_413的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34、40和36中所示的氨基酸序列)的VH，其中重链包含与3-F03_413的重链(即SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的重链。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_413的VL(即SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含含有3-F03_411或3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)的VL，其中VL包含与3-F03_411或3-F03_413的VL(即SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_413的轻链(即SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含轻链，所述轻链包含含有3-F03_411或3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)的VL，其中轻链包含与3-F03_411或3-F03_413的轻链(即SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_413的VH(即分别为SEQ ID NO:62或63中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和与3-F03_411或3-F03_413的VL(即SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)VH，所述VH包含3-F03_411的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34-36中所示的氨基酸序列)，其中VH包含与3-F03的VH(即SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)VL，所述VL包含3-F03_411的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)，其中VL包含与3-F03的VL(即SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)VH，所述VH包含3-F03_413的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34、40和36中所示的氨基酸序列)，其中VH包含与3-F03_413的VH(即SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)VL，所述VL包含3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)，其中VL包含与3-F03_413的VL(即SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)VH，所述VH包含SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；和(ii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)VH，所述VH包含SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列；和(ii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含与3-F03_411或3-F03_413的重链(即SEQ ID NO:30或33中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和与3-F03_411或3-F03_413的轻链(即SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)重链，所述重链包含含有3-F03_411的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34-36中所示的氨基酸序列)的VH，其中重链包含与3-F03_411的重链(即SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含含有3-F03_411的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见表3，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)的VL，其中轻链包含与3-F03的轻链(即SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)重链，所述重链包含含有3-F03_413的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：34、40和36中所示的氨基酸序列)的VH，其中重链包含与3-F03的重链(即SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含含有3-F03_413的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3(参见表5，例如根据IMGT定义，即分别为SEQ ID NO：37-39中所示的氨基酸序列)的VL，其中轻链包含与3-F03_413的轻链(即SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列)具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)重链，所述重链包含SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD73抗体包含：(i)重链，所述重链包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列；和(ii)轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列。

3-F03(及其变体，例如3-F03_411和3-F03_413)的CD73结合表位含有AAVLPFGGTFDLVQ(SEQ ID NO:78)(即SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的氨基酸386-399)和ILPNFLANGGDGFQMIKDEL(SEQ ID NO:79)(即SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列的氨基酸470-489)。本公开的特征在于结合至AAVLPFGGTFDLVQ(SEQ ID NO:78)和ILPNFLANGGDGFQMIKDEL(SEQ ID NO:79)内的CD73表位的抗体。本公开的特征在于与3-F03(或其变体，例如3-F03_411或3-F03_413)结合至相同表位的抗体。本公开的特征还在于竞争性抑制3-F03(或其变体，例如3-F03_411或3-F03_413)与人CD73的结合的抗体。

在一些实施方案中，3-F03(或其变体，例如3-F03_411或3-F03_413)的VH连接至包含CH1结构域和铰链区的重链恒定区。在一些实施方案中，3-F03(或其变体，例如3-F03_411或3-F03_413)的VH连接至包含CH3结构域的重链恒定区。在一些实施方案中，CH3结构域缺少C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在一些实施方案中，CH3结构域含有C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在某些实施方案中，3-F03(或其变体，例如3-F03_411或3-F03_413)的VH连接至重链恒定区，所述重链恒定区包含人IgG1的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方案中，人IgG1的CH3结构域缺少C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在一些实施方案中，人IgG1的CH3结构域含有C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。在某些实施方案中，所述抗体在重链恒定区中含有增加抗体稳定性的一个或多个额外突变。在某些实施方案中，重链恒定区包括修饰抗体性质(例如减少Fc受体结合、增加或减少抗体糖基化、减少与C1q结合)的取代。在某些实施方案中，重链恒定区包括重链恒定区的位置天冬酰胺-297(N297，根据EU编号)处的丙氨酸(A)以降低效应功能。

在某些实施方案中，抗CD73抗体为IgG抗体。在一个实施方案中，抗体为IgG1抗体。在一个实施方案中，抗体为IgG4抗体。在另一实施方案中，抗体为IgG2抗体。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区相对于野生型重链恒定区缺少一个或多个赖氨酸(K)氨基酸残基。举例而言，在某些实施方案中，抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区缺少重链恒定区的CH3结构域的C末端赖氨酸(K)氨基酸残基。

另外的抗CD73抗体和抑制剂

本公开提供另外的抗CD73抗体和CD73抑制剂，其可与A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂组合使用来治疗疾病，例如癌症。本公开进一步提供另外的抗CD73抗体和CD73抑制剂，其可与A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂组合和/或与PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病，例如癌症。本公开进一步提供另外的抗CD73抗体和CD73抑制剂，其可与PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病，例如癌症。

在本文所述的方法中，可与A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂组合使用的其他抗CD73抗体为本领域中已知。在本文所述的方法中，可与A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂组合和/或与PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病的其他抗CD73抗体为本领域中已知。在本文所述的方法中，可与PD-1/PD-L1抑制剂组合使用来治疗疾病的其他抗CD73抗体为本领域中已知。参见，例如美国专利第9,090,697号、美国专利第9,388,249号、美国专利第9,605,080号、美国专利第9,938,356、美国专利第10,100,129号和美国专利第10,287,362号，美国专利申请公布第2004/0142342号、美国专利申请公布第2007/0009518号、美国专利申请公布第2011/0300136号、美国专利申请公布第2018/0009899号、美国专利申请公布第2018/0030144号、美国专利申请公布第2018/0237536号、美国专利申请公布第2018/0264107号、美国专利申请公布第2019/0031766号、美国专利申请公布第2019/0225703号、美国专利申请公布第2019/0077873号和美国专利申请公布第2019/0256598号，以及国际专利申请公布第WO 2004/079013号、国际专利申请公布第WO 2011/089004号、国际专利申请公布第WO2014/153424号、国际专利申请公布第WO 2017/100670号、国际专利申请公布第WO 2001/080884号、国际专利申请公布第WO 2018/110555号、国际专利申请公布第WO 2018/137598号、国际专利申请公布第WO 2018/187512号、国际专利申请公布第WO 2018/215535号、国际专利申请公布第WO 2018/237173号、国际专利申请公布第WO 2019/170131号、国际专利申请公布第WO 2019/173692号和国际专利申请公布第WO 2019/173291号，所述专利中每一者以引用的方式整体并入本文中。

在一些情况下，抗CD73抗体包含VH，所述VH包含含有氨基酸序列EIQLQQSGPELVKPGASVKVSCKASGYAFTSYNMYWVKQ SHGKSLEWIGYIDPYNGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHL NSLTSEDSAVYYCARGYGNYKAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:100)的VH的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3；和VL，所述VL包含含有氨基酸序列DAVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKA SQSVTNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGT DFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:101)的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的VL。在一些情况下，抗CD73抗体为11E1(参见美国专利申请公布第2018/0237536号，其以引用的方式整体并入本文中)。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列的重链。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列的轻链。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列的重链和SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列的轻链。

在一些情况下，抗CD73抗体包含VH，所述VH包含含有氨基酸序列EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAYSWVRQA PGKGLEWVSAISGSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS LRAEDTAVYYCARLGYGRVDEWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO:96)的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；和VL，所述VL包含含有氨基酸序列QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSLSNIGRNPV NWYQQLPGTAPKLLIYLDNLRLSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQ SEDEADYYCATWDDSHPGWTFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:97)的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列的VL。在一些情况下，抗CD73抗体为Medi9447(参见美国专利第10,287,362号，其以引用的方式整体并入本文中)。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列的轻链。在一些情况下，抗CD73抗体包含含有SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列的重链和SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列的轻链。

在一些情况下，CD73抑制剂为CPI-006(Corvus；参见美国专利申请公布第US2018/0009899 A1号和国际专利申请公布第WO 2017/100670Al号，所述专利申请公布中每一者以引用的方式整体并入本文中)。

在一些情况下，CD73抑制剂为CB-708SM(Calithera)。

在一些情况下，CD73抑制剂为AB680(Arcus)。

在一些情况下，CD73抑制剂为BMS-986179(BMS)。

抗体片段

在一些情况下，抗CD73抗体为抗体片段。本文所述的抗体的片段(例如Fab、Fab′、F(ab′)

可替代地，抗体片段可重组产生。举例而言，可构建编码目标抗体片段的核酸，将其引入表达载体中，并在适合宿主细胞中表达。参见例如Co,M.S.等人,J.Immunol.,152:2968-2976(1994)；Better,M.和Horwitz,A.H.,Methods in Enzymology,178:476-496(1989)；Plueckthun,A.和Skerra,A.,Methods in Enzymology,178:476-496(1989)；Lamoyi,E.,Methods in Enzymology,121:652-663(1989)；Rousseaux,J.等人,Methods inEnzymology,(1989)121:663-669(1989)；和Bird,R.E.等人,TIBTECH,9:132-137(1991))。抗体片段可在大肠杆菌(E.coli)中表达且从其分泌，因此允许容易地产生大量所述片段。抗体片段可从抗体噬菌体文库分离。可替代地，Fab′-SH片段可直接从大肠杆菌回收且化学偶联以形成F(ab)

微型抗体

在一些情况下，抗CD73抗体为微型抗体。抗CD73抗体的微型抗体包括双价抗体、单链(scFv)和单链(Fv)

“双价抗体”为通过基因融合构建的二价微型抗体(参见例如，Holliger,P.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,90:6444-6448(1993)；EP 404,097；WO 93/11161)。双价抗体为由两条多肽链构成的二聚体。双价抗体的每一多肽链的VL和VH结构域通过接头结合。构成接头的氨基酸残基的数量可介于2至12个残基之间(例如3-10个残基或5个或约5个残基)。双价抗体中多肽的接头通常因太短而使VL和VH无法彼此结合。因此，在同一多肽链中编码的VL和VH无法形成单链可变区片段，而是与不同单链可变区片段形成二聚体。因此，双价抗体具有两个抗原结合位点。

scFv为通过用接头连接VH和VL获得的单链多肽抗体(参见例如Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,85:5879-5883(1988)；和Plickthun,“The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies”第113卷,Resenburg和Moore编辑,Springer Verlag,New York,第269-315页(1994))。待连接的VH和VL的顺序不受特定限制，并且其可以任一顺序排列。排列的实例包括：[VH]接头[VL]；或[VL]接头[VH]。scFv中的重链可变结构域和轻链可变结构域可衍生自本文所述的任何抗CD73抗体。scFv中的H链V区和L链V区可衍生自本文所述的任何抗PD-1抗体或其抗原结合片段。

sc(Fv)

双特异性抗体

在一些情况下，抗CD73抗体为双特异性抗体。双特异性抗体为对至少两种不同的表位具有结合特异性的抗体。示例性双特异性抗体可结合至CD73蛋白的两种不同的表位。其他此类抗体可组合CD73结合位点与另一蛋白质的结合位点。示例性双特异性抗体可结合至PD-1蛋白的两种不同的表位。其他此类抗体可组合PD-1结合位点与另一蛋白质的结合位点。双特异性抗体可制备为全长抗体或其低分子量形式(例如F(ab’)

全长双特异性抗体的传统产生为基于两条免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两条链具有不同的特异性(Millstein等人,Nature,305:537-539(1983))。在不同方法中，具有所需结合特异性的抗体可变结构域融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。将编码免疫球蛋白重链融合物和(如果需要)免疫球蛋白轻链的DNA插入单独表达载体中，并且共转染至适合宿主细胞中。这提供调整三种多肽片段的比例的较大灵活性。然而，在至少两条多肽链的等比率表达产生高产量时，可将两条或所有三条多肽链的编码序列插入单一表达载体中。

根据美国专利第5,731,168号中所述的另一方法，抗体分子对之间的界面可经工程化以最大化从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比。优选界面包含CH3结构域的至少一部分。在这种方法中，第一抗体分子界面的一条或多条小氨基酸侧链被较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替代。通过用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替代大氨基酸侧链在第二抗体分子的界面上产生大小与大侧链相同或相似的补偿性“空腔”。这提供增加异二聚体相对于其他不期望末端产物(诸如同二聚体)的产率的机制。

双特异性抗体包括交联或“异源缀合物”抗体。举例而言，异源缀合物中的一种抗体可偶联至抗生物素蛋白，另一抗体可偶联至生物素。异源缀合物抗体可使用任何方便的交联方法来制得。

“双价抗体”技术提供用于制造双特异性抗体片段的替代机制。所述片段包含通过接头连接至VL的VH，所述接头因太短而不允许在同一链上的两个结构域之间配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一片段的互补VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。

多价抗体

在一些情况下，抗CD73抗体为多价抗体。表达抗体所结合的抗原的细胞对多价抗体的内化(和/或分解代谢)可快于二价抗体。本文所述的抗体可为具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(例如四价抗体)，其可容易地通过编码抗体多肽链的核酸的重组表达来产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。示例性二聚化结构域包含Fc区或铰链区(或由其组成)。多价抗体可包含三个至约八个(例如四个)抗原结合位点(或由其组成)。多价抗体任选地包含至少一条多肽链(例如至少两条多肽链)，其中多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，多肽链可包含VD1-(X1)

缀合抗体

在一些情况下，抗CD73抗体为缀合抗体。本文所公开的抗体可为结合至多种分子的缀合抗体，所述分子包括大分子物质，诸如聚合物(例如聚乙二醇(PEG)、经PEG修饰的聚乙烯亚胺(PEI)(PEI-PEG)、聚谷氨酸(PGA)(N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物)、透明质酸、放射性材料(例如

在一个实施方案中，为改善抗CD73抗体的细胞毒性作用且因此改善其治疗有效性，使抗体与高毒性物质缀合，包括放射性同位素和细胞毒性剂。在一个实施方案中，为改善抗PD-1抗体的细胞毒性作用且因此改善其治疗有效性，使抗体与高毒性物质缀合，包括放射性同位素和细胞毒性剂。这些缀合物可将毒性负载选择性递送至靶位点(即表达抗体所识别抗原的细胞)，同时避开抗体不识别的细胞。为最小化毒性，通常基于具有短血清半衰期的分子来工程化缀合物(因此，使用鼠类序列以及IgG3或IgG4同型)。

在某些实施方案中，抗CD73抗体用将其在循环中(例如在血液、血清或其他组织中)的稳定和/或保留改善例如至少1.5倍、2倍、5倍、10倍或50倍的部分修饰。举例而言，抗CD73抗体可与聚合物(例如实质上非抗原性聚合物，诸如聚环氧烷或聚氧化乙烯)缔合(例如缀合)。在某些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段用将其在循环中(例如在血液、血清或其他组织中)的稳定和/或保留改善例如至少1.5倍、2倍、5倍、10倍或50倍的部分修饰。举例而言，抗PD-1抗体或其抗原结合片段可与聚合物(例如实质上非抗原性聚合物，诸如聚环氧烷或聚氧化乙烯)缔合(例如缀合)。适合聚合物将实质上根据重量而变化。可使用数均分子量介于约200至约35,000道尔顿(或约1,000至约15,000和2,000至约12,500)范围内的聚合物。举例而言，抗CD73抗体、抗PD-1抗体或其抗原结合片段可缀合至水可溶性聚合物，例如亲水性聚乙烯基聚合物，例如聚乙烯基醇或聚乙烯基吡咯烷酮。此类聚合物的实例包括聚环氧烷均聚物，诸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物，条件为维持嵌段共聚物的水溶解度。另外有用的聚合物包括聚氧化烯，诸如聚氧乙烯、聚氧丙烯以及聚氧乙烯与聚氧丙烯的嵌段共聚物；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆(carbomer)；和支链或非支链多糖。

上述缀合抗体可分别通过对本文所述的抗体或其较低分子量形式实施化学修饰来制备。用于修饰抗体的方法为本领域中所熟知(例如US 5,057,313和US 5,156,840)。

多核苷酸、表达载体和细胞

本公开还提供编码本文所述的抗CD73抗体或其部分(例如VH、VL、HC或LC)的多核苷酸和载体。本公开的多核苷酸可呈RNA形式或呈DNA形式。在一些情况下，多核苷酸为DNA。在一些情况下，多核苷酸为互补DNA(cDNA)。在一些情况下，多核苷酸为RNA。

在一些情况下，多核苷酸编码VH，所述VH包含本文所述的任何抗体的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3(参见例如表3、表4和表6)。在一些情况下，多核苷酸编码VL，所述VL包含本文所述的任何抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见例如表3、表4和表6)。在一些情况下，多核苷酸编码重链，所述重链包含含有本文所述的任何抗体的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3(参见例如表3、表4和表6)的VH。在一些情况下，多核苷酸编码轻链，所述轻链包含含有本文所述的任何抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见例如表3、表4和表6)的VL。在一些情况下，多核苷酸可操作地连接至启动子。

在一些情况下，多核苷酸包含：(i)编码第一多肽的第一核酸序列，其中所述第一多肽包含含有本文所述的任何抗体的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见例如表3、表4和表6)的VH；和(ii)编码第二多肽的第二核酸序列，其中所述第二多肽包含含有本文所述的任何抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见例如表3、表4和表6)的VL。在一些情况下，多核苷酸包含：(i)编码第一多肽的第一核酸序列，其中所述第一多肽包含重链，所述重链包含含有本文所述的任何抗体的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(参见例如表3、表4和表6)的VH；和(ii)编码第二多肽的第二核酸序列，其中所述第二多肽包含轻链，所述轻链包含含有本文所述的任何抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(参见例如表3、表4和表6)的VL。在一些情况下，第一核酸可操作地连接至第一启动子且第二核酸可操作地连接至第二启动子。

在一些情况下，多核苷酸编码CL25或其变体(例如其人源化形式，例如HzCL25)的VH。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含相对于SEQ ID NO:22、26和82-84中的任一个中所示的氨基酸序列具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个)氨基酸取代、添加和/或缺失的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码包含SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列的多肽。在一些情况下，多核苷酸可操作地连接至启动子。

在一些情况下，多核苷酸编码CL25或其变体(例如其人源化形式，例如HzCL25)的VL。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含相对于SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个)氨基酸取代、添加和/或缺失的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的多肽。在一些情况下，多核苷酸可操作地连接至启动子。

在一些情况下，多核苷酸编码3-F03或其变体(例如3-F03_411或3-F03_413)的VH。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:62或63中所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含相对于SEQ ID NO:62或63中所示的氨基酸序列具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个)氨基酸取代、添加和/或缺失的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码包含SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列的多肽。在一些情况下，多核苷酸编码包含SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的多肽。在一些情况下，多核苷酸可操作地连接至启动子。

在一些情况下，多核苷酸编码3-F03或其变体(例如3-F03_411或3-F03_413)的VL。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码多肽，所述多肽包含相对于SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个)氨基酸取代、添加和/或缺失的氨基酸序列。在一些情况下，多核苷酸编码包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列的多肽。在一些情况下，多核苷酸可操作地连接至启动子。

在一些实施方案中，本文所述的多核苷酸为分离的。

本文还提供编码本文所述的抗CD73抗体或其部分(例如VH、VL、HC和/或LC)的表达载体。本文还提供包含一个或多个本文所述的多核苷酸的表达载体。多种类型的表达载体为本领域中已知且描述于本文中(例如参见本文的部分“产生抗体的方法”)。

本文还提供包含本文所述的抗CD73抗体的细胞。本文还提供包含一个或多个本文所述的多核苷酸的细胞。本文还提供包含一种或多种本文所述的表达载体的细胞。多种类型的细胞为本领域中已知且描述于本文中(例如参见本文的部分“产生抗体的方法”)。

具有改变的糖基化的抗CD73抗体

不同糖型可显著影响治疗剂的性质，包括药物动力学、药效动力学、受体相互作用和组织特异性靶向(Graddis等人,2002,Curr Pharm Biotechnol.3：285-297)。具体而言，对于抗体，除抗体的效应功能(例如与诱导CDC的补体复合物C1的结合和与负责调节ADCC途径的FcγR受体的结合)外，寡糖结构可影响与蛋白酶抗性相关的性质、由FcRn受体介导的抗体血清半衰期、吞噬作用和抗体反馈(Nose和Wigzell,1983；Leatherbarrow和Dwek,1983；Leatherbarrow等人,1985；Walker等人,1989；Carter等人,1992,PNAS,89：4285-4289)。

因此，调节抗体效应功能的另一方法包括改变抗体恒定区的糖基化。改变的糖基化包括例如减少或增加糖基化残基数、改变糖基化残基的模式或位置以及改变糖结构。在人IgG上发现的寡糖影响其效应功能的程度(Raju,T.S.BioProcess International 2003年4月.44-53)；人IgG寡糖的微观不均一性可影响生物功能，诸如CDC和ADCC、与各种Fc受体的结合和与Clq蛋白的结合(Wright A.和Morrison SL.TIBTECH 1997,15 26-32；Shields等人,J Biol Chem.2001276(9):6591-604；Shields等人,J Biol Chem.2002；277(30):26733-40；Shinkawa等人,J Biol Chem.2003 278(5):3466-73；Umana等人,NatBiotechnol.1999年2月；17(2)：176-80)。举例而言，IgG结合C1q和活化补体级联的能力可取决于位于两个CH2结构域之间的碳水化合物部分(其通常锚定于Asn297处)的存在、不存在或修饰而定(Ward和Ghetie,Therapeutic Immunology 2:77-94(1995)。因此，在一些情况下，抗CD73抗体相对于野生型恒定区含有Asn297Ala取代。

含Fc的多肽(例如抗体，诸如IgG抗体)中的糖基化位点可通过标准技术来鉴别。糖基化位点的鉴别可为实验性的或基于序列分析或建模数据。已描述共有基序，即由各种糖基转移酶识别的氨基酸序列。举例而言，N-连接糖基化基序的共有基序通常为NXT或NXS，其中X可为除脯氨酸外的任何氨基酸。还已描述用于定位潜在糖基化基序的若干算法。因此，为鉴别抗体或含Fc片段内的潜在糖基化位点，例如通过使用公共数据库(诸如由生物序列分析中心(Center for Biological Sequence Analysis)提供的网站)来检查抗体的序列(参见用于预测N-连接糖基化位点的NetNGlyc服务和用于预测O-连接糖基化位点的NetOGlyc服务)。

体内研究已确认无糖基抗体的效应功能降低。举例而言，无糖基抗CD8抗体无法清除小鼠中带有CD8的细胞(Isaacs,1992J.Immunol.148：3062)且无糖基抗CD3抗体不会诱导小鼠或人类中的细胞因子释放综合征(Boyd,1995见上文；Friend,1999Transplantation68:1632)。抗CD73抗体的无糖基化形式也具有降低的效应功能。

重要的是，尽管去除CH2结构域中的聚糖似乎对效应功能具有显著效应，但抗体的其他功能和物理性质保持不变。特定而言，已显示去除聚糖对血清半衰期和与抗原的结合具有极小至无效应(Nose,1983，见上文；Tao,1989见上文；Dorai,1991见上文；Hand,1992见上文；Hobbs,1992Mol.Immunol.29:949)。

本发明的抗CD73抗体可经修饰或改变以引发增加或减小的效应功能(与第二CD73特异性抗体相比)。用于改变抗体的糖基化位点的方法描述于例如US 6,350,861和US 5,714,350、WO 05/18572和WO 05/03175中；这些方法可用于产生具有改变的、减少的或无糖基化的本发明的抗CD73抗体。

产生抗体的方法

抗CD73抗体

抗体可在细菌或真核细胞中产生。一些抗体(例如Fab)可在细菌细胞(例如，大肠杆菌细胞)中产生。抗体也可在真核细胞(诸如经转化细胞系(例如CHO、293E、COS))中产生。另外，抗体(例如scFv)可在酵母细胞(例如毕赤酵母(Pichia)(参见例如Powers等人,JImmunol Methods.251:123-35(2001))、汉逊酵母(Hanseula)或酵母菌属(Saccharomyces))中表达。为产生目标抗体，构建编码抗体的多核苷酸，将其引入表达载体中，且然后在适合宿主细胞中表达。使用标准分子生物学技术来制备重组表达载体，转染宿主细胞，选择转化体，培养宿主细胞并回收抗体。

如果待在细菌细胞(例如，大肠杆菌)中表达抗体，则表达载体应具有允许载体在细菌细胞中扩增的特征。另外，当使用大肠杆菌(诸如JM109、DH5α、HB101或XL1-Blue)作为宿主时，载体必须具有启动子，例如lacZ启动子(Ward等人,341:544-546(1989)、araB启动子(Better等人,Science,240:1041-1043(1988))或可允许在大肠杆菌中有效表达的T7启动子。此类载体的实例包括例如M13系列载体、pUC系列载体、pBR322、pBluescript、pCR-Script、pGEX-5X-1(Pharmacia)、“QIA表达系统”(QIAGEN)、pEGFP和pET(当使用此表达载体时，宿主优选为表达T7 RNA聚合酶的BL21)。表达载体可含有用于抗体分泌的信号序列。为在大肠杆菌的周质中产生，可使用pelB信号序列(Lei等人,J.Bacteriol.,169:4379(1987))作为用于抗体分泌的信号序列。对于细菌表达，可使用氯化钙方法或电穿孔方法将表达载体引入细菌细胞中。

如果待在动物细胞(诸如CHO、COS和NIH3T3细胞)中表达抗体，则表达载体包括在这些细胞中表达所需的启动子，例如SV40启动子(Mulligan等人,Nature,277:108(1979))、MMLV-LTR启动子、EF1α启动子(Mizushima等人,Nucleic Acids Res.,18:5322(1990))或CMV启动子。除编码免疫球蛋白或其结构域的核酸序列外，重组表达载体可携带其他序列，诸如调控载体在宿主细胞中的复制的序列(例如复制起点)和选择性标记基因。选择性标记基因促进其中已引入载体的宿主细胞的选择(参见例如美国专利第4,399,216号、美国专利第4,634,665号和美国专利第5,179,017号)。举例而言，选择性标记基因通常赋予其中已引入载体的宿主细胞对药物(诸如G418、潮霉素(hygromycin)或氨甲喋呤(methotrexate))的抗性。具有选择性标记物的载体的实例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV和pOP13。

在一个实施方案中，抗体在哺乳动物细胞中产生。用于表达抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr

在用于抗体表达的示例性系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗CD73抗体(例如CL25、HzCL25、3-F03、3-F03_411或3-F03_413)的抗体重链和抗体轻链的重组表达载体引入dhfr

抗体也可通过转基因动物来产生。举例而言，美国专利第5,849,992号描述在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建包括乳特异性启动子和编码目标抗体的核酸和分泌信号序列的转基因。由此类转基因哺乳动物的雌性产生的乳包括其中分泌的目标抗体。抗体可从乳纯化，或对于一些应用直接使用。还提供包含一种或多种本文所述的核酸的动物。

本公开的抗体可从宿主细胞的内部或外部(诸如培养基)分离且纯化为实质上纯且均质的抗体。通常用于抗体纯化的分离和纯化方法可用于分离和纯化抗体，并且并不限于任何特定方法。可通过适当地选择和组合例如柱色谱、过滤、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂萃取、蒸馏、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦、透析和重结晶来分离和纯化抗体。色谱包括例如亲和色谱、离子交换色谱、疏水色谱、凝胶过滤、反相色谱和吸附色谱(Strategies for Protein Purification and Characterization:A Laboratory CourseManual.Daniel R.Marshak等人编辑,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1996)。色谱可使用液相色谱(诸如HPLC和FPLC)来实施。用于亲和色谱的柱包括蛋白质A柱和蛋白质G柱。使用蛋白质A柱的柱的实例包括Hyper D、POROS和Sepharose FF(GE HealthcareBiosciences)。本公开还包括使用这些纯化方法高度纯化的抗体。

抗PD-1抗体

抗PD-1抗体(诸如瑞弗利单抗)可例如通过制备和表达编码所列举氨基酸序列的合成基因或通过突变人种系基因以提供编码所列举氨基酸序列的基因来制得。另外，此抗体和其他抗PD-1抗体可例如使用以下方法中的一种或多种来获得。

人源化抗体可通过用来自人Fv可变区的等效序列替代不直接参与抗原结合的Fv可变区序列来产生。用于产生人源化抗体的一般方法提供于Morrison,S.L.,Science,229:1202-1207(1985),Oi等人,BioTechniques,4:214(1986)和US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；和US 6,407,213中。那些方法包括分离、操纵和表达编码重链或轻链中至少一者的免疫球蛋白Fv可变区的全部或一部分的核酸序列。这种核酸的来源为本领域技术人员所熟知且例如可从产生如上文所述针对预定靶标的抗体的杂交瘤、从种系免疫球蛋白基因或从合成构建体获得。然后可将编码人源化抗体的重组DNA克隆至适当表达载体中。

例如，人种系序列描述于Tomlinson,I.A.等人,J.Mol.Biol.,227:776-798(1992)；Cook,G.P.等人,Immunol.Today,16：237-242(1995)；Chothia,D.等人,J.Mol.Bio.227:799-817(1992)；和Tomlinson等人,EMBO J.,14:4628-4638(1995)。V BASE目录提供人免疫球蛋白可变区序列的综合目录(由Tomlinson,I.A.等人MRC Centre forProtein Engineering,Cambridge,UK编译)。这些序列可用作例如框架区和CDR的人序列的来源。还可使用例如如美国专利第6,300,064号中所述的共有人框架区。

还可使用用于人源化抗体的其他方法。举例而言，其他方法可解释抗体的三维结构、三维靠近结合决定簇的框架位置和免疫原性肽序列。参见例如WO 90/07861；美国专利第5,693,762号；美国专利第5,693,761号；美国专利第5,585,089号；美国专利第5,530,101号；和美国专利第6,407,213号；Tempest等人(1991)Biotechnology9:266-271。另一方法称为“人工程化”且描述于例如U.S.2005-008625中。

抗体可包括人Fc区，例如野生型Fc区或包括一个或多个改变的Fc区。在一个实施方案中，恒定区经改变(例如经突变)以改变抗体的性质(例如增加或减小以下中的一者或多者：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。举例而言，人IgG1恒定区可在一个或多个残基(例如残基234和237(基于Kabat编号)中的一者或多者)处发生突变。抗体可在重链的CH2区中具有降低或改变效应功能(例如Fc受体结合和补体活化)的突变。举例而言，抗体可具有突变，诸如美国专利第5,624,821号和美国专利第5,648,260号中所述的那些突变。抗体还可具有稳定免疫球蛋白的两条重链之间的二硫键的突变，诸如如本领域中所公开的IgG4铰链区中的突变(例如Angal等人(1993)Mol.Immunol.30:105-08)。还参见例如U.S.2005-0037000。

抗PD-1抗体可呈抗PD-1抗体的全长抗体形式或呈低分子量形式(例如生物活性抗体片段或微型抗体)，例如Fab、Fab’、F(ab’)

本文提供组合物，所述组合物包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段及其一种或多种酸性变体的混合物，例如，其中酸性变体的量小于约80％、70％、60％、60％、50％、40％、30％、30％、20％、10％、5％或1％。还提供组合物，所述组合物包含含有至少一个脱酰胺位点的抗PD-1抗体或其抗原结合片段，其中组合物的pH为约5.0至约6.5，使得例如至少约90％的抗PD-1抗体并非脱酰胺的(即小于约10％的抗体为脱酰胺的)。在某些实施方案中，小于约5％、3％、2％或1％的抗体为脱酰胺的。pH可为5.0至6.0，诸如5.5或6.0。在某些实施方案中，组合物的pH为5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。

“酸性变体”为目标多肽的变体，其比所述目标多肽酸性更强(例如如通过阳离子交换色谱所测定)。酸性变体的实例为脱酰胺变体。

多肽分子的“脱酰胺”变体为其中原始多肽的一个或多个天冬酰胺残基已转化成天冬氨酸，即中性酰胺侧链已转化成具有整体酸性特征的残基的多肽。

如本文用于提及包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段的组合物的术语“混合物”意指存在所需抗PD-1抗体或其抗原结合片段及其一种或多种酸性变体。酸性变体可主要包含脱酰胺的抗PD-1抗体和少量其他酸性变体。

在某些实施方案中，经突变以消除脱酰胺的抗体的结合亲和力(K

给药和施用

本文所述的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可通过多种方法施用于受试者，例如有需要的受试者，例如人受试者。在一些情况下，抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂通过相同途径施用于受试者。在一些情况下，抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂通过相同途径施用于受试者。在一些情况下，抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂通过不同途径施用于受试者。在一些情况下，抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂通过不同途径施用于受试者。对于许多应用，施用途径为以下中的一者：静脉内注射或输注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜内(IP)或肌内注射。还可使用关节内递送。还可使用其他胃肠外施用模式。此类模式的实例包括：动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内以及硬膜外和胸骨内注射。在一些情况下，施用可为口服。

抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂的施用途径和/或模式还可针对个别情况进行调整，例如通过监测受试者，例如使用断层摄影成像，例如以使肿瘤可视化。抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂的施用途径和/或模式还可针对个别情况进行调整，例如通过监测受试者，例如使用断层摄影成像，例如以使肿瘤可视化。

抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂中的每一者可以固定剂量或以mg/kg患者体重剂量来施用。举例而言，在双重组合治疗中，抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂中的每一者可以固定剂量或以mg/kg患者体重剂量来施用。剂量还可经选择以减少或避免产生针对抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和/或PD-1/PD-L1抑制剂的抗体。剂量方案经调整以提供所需反应，例如治疗反应或组合治疗效应。通常，可使用多个剂量的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂以向受试者提供生物可利用量的剂。举例而言，可施用在以下范围内的剂量：0.1-100mg/kg、0.5-100mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、0.5-20mg/kg、0.1-10mg/kg或1-10mg/kg。还可使用其他剂量。

在一些实施方案中，抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和/或PD-1/PD-L1抑制剂同时施用。在一些实施方案中，抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂同时施用。

在一些实施方案中，抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和/或PD-1/PD-L1抑制剂依序施用。在一些实施方案中，抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂依序施用。

如本文所用的剂量单位形式或“固定剂量”或“均一剂量”是指适于作为单位剂量供待治疗受试者使用的物理离散单位；每一单位含有经计算以与所需药物载体一起和任选地与另一剂一起产生所需治疗效应的预定量的活性化合物。可给予单一或多个剂量。可替代地或另外，抗体和/或抑制剂可经由连续输注来施用。示例性固定剂量包括375mg、500mg和750mg。

A2A/A2B腺苷受体抑制剂

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约0.1mg至约1000mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约1mg至约500mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约5mg至约250mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约10mg至约100mg的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以选自以下的剂量施用于受试者：基于游离碱约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg、约240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg、约505mg、约510mg、约515mg、约520mg、约525mg、约530mg、约535mg、约540mg、约545mg、约550mg、约555mg、约560mg、约565mg、约570mg、约575mg、约580mg、约585mg、约590mg、约595mg、约600mg、约605mg、约610mg、约615mg、约620mg、约625mg、约630mg、约635mg、约640mg、约645mg、约650mg、约655mg、约660mg、约665mg、约670mg、约675mg、约680mg、约685mg、约690mg、约695mg、约700mg、约705mg、约710mg、约715mg、约720mg、约725mg、约730mg、约735mg、约740mg、约745mg、约750mg、约755mg、约760mg、约765mg、约770mg、约775mg、约780mg、约785mg、约790mg、约795mg、约800mg、约805mg、约810mg、约815mg、约820mg、约825mg、约830mg、约835mg、约840mg、约845mg、约850mg、约855mg、约860mg、约865mg、约870mg、约875mg、约880mg、约885mg、约890mg、约895mg、约900mg、约905mg、约910mg、约915mg、约920mg、约925mg、约930mg、约935mg、约940mg、约945mg、约950mg、约955mg、约960mg、约965mg、约970mg、约975mg、约980mg、约985mg、约990mg、约995mg和约1000mg。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约0.1mg至约500mg范围内的剂量或其间的任一剂量值施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约1mg至约100mg范围内的剂量或其间的任一剂量值施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂以基于游离碱约0.1mg至约500mg的剂量施用于受试者，其中A2A/A2B抑制剂每天一次或每隔一天施用。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐为每天一次、每隔一天、每周一次或其间的任何时间间隔施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐每天一次施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐每隔一天施用于受试者。在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐每周一次施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约1mg至约50mg QD的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约1mg至约50mg BID的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约10mg QD的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约10mg BID的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约40mg QD的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐以约40mg BID的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一剂量施用。在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一口服剂量施用。

在一些实施方案中，所提供的方法包括施用第一剂量的如本文所定义的A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐和第二剂量的所述A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐，其中第二剂量大于第一剂量(即，所述方法包括A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐(诸如化合物9)的剂量递增)。

在一些实施方案中，当A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐与PD-1/PD-L1抑制剂和抗CD73抗体或其抗原结合片段组合施用于受试者时，所述方法包括A2A/A2B抑制剂或其药学上可接受的盐的剂量递增。

在一些实施方案中，当所述化合物9与PD-1/PD-L1抑制剂(例如瑞弗利单抗)组合和与抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如抗体Y)组合施用于受试者时，所述方法包括化合物9的剂量递增。

PD-1/PD-L1抑制剂

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约0.1mg至约1000mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约1mg至约500mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约5mg至约250mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约10mg至约100mg的剂量施用于受试者。

组合物可包含约1mg/mL至100mg/mL、或约10mg/mL至100mg/mL、或约50mg/mL至250mg/mL、或约100mg/mL至150mg/mL、或约100mg/mL至250mg/mL的PD-1/PD-L1抑制剂(例如抗PD-1抗体或其抗原结合片段)。

PD-1/PD-L1抑制剂(例如抗PD-1抗体或其抗原结合片段)剂量可在例如足以涵盖至少2个剂量、3个剂量、5个剂量、10个剂量或更多个剂量的一段时间(治疗期)内，以周期性间隔(例如每天一次或两次、或每周约1至4次、或优选每周、每两周(biweekly、every twoweeks)、每三周、每月)施用例如介于约1至12周之间，优选介于2至8周之间，更优选介于约3至7周之间，并且甚至更优选约4周、5周或6周。可能影响有效治疗受试者所需的剂量和时间的因素包括例如疾病或病症的严重程度、制剂、递送途径、先前治疗、受试者的一般健康状况和/或年龄和所存在的其他疾病。另外，用治疗有效量的化合物治疗受试者可包括单一治疗或优选可包括一系列治疗。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以选自以下的剂量施用于受试者：基于游离碱约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg、约240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg、约505mg、约510mg、约515mg、约520mg、约525mg、约530mg、约535mg、约540mg、约545mg、约550mg、约555mg、约560mg、约565mg、约570mg、约575mg、约580mg、约585mg、约590mg、约595mg、约600mg、约605mg、约610mg、约615mg、约620mg、约625mg、约630mg、约635mg、约640mg、约645mg、约650mg、约655mg、约660mg、约665mg、约670mg、约675mg、约680mg、约685mg、约690mg、约695mg、约700mg、约705mg、约710mg、约715mg、约720mg、约725mg、约730mg、约735mg、约740mg、约745mg、约750mg、约755mg、约760mg、约765mg、约770mg、约775mg、约780mg、约785mg、约790mg、约795mg、约800mg、约805mg、约810mg、约815mg、约820mg、约825mg、约830mg、约835mg、约840mg、约845mg、约850mg、约855mg、约860mg、约865mg、约870mg、约875mg、约880mg、约885mg、约890mg、约895mg、约900mg、约905mg、约910mg、约915mg、约920mg、约925mg、约930mg、约935mg、约940mg、约945mg、约950mg、约955mg、约960mg、约965mg、约970mg、约975mg、约980mg、约985mg、约990mg、约995mg和约1000mg。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约0.1mg至约500mg范围内的剂量或其间的任一剂量值施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以基于游离碱约1mg至约100mg范围内的剂量或其间的任一剂量值施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以约1mg/kg至约10mg/kg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以约200mg至约1000mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为以约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg、约400mg、约425mg、约450mg、约475mg、约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg、约750mg、约775mg、约800mg、约825mg、约850mg、约875mg、约900mg、约925mg、约950mg、约975mg或约1000mg的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每天一次、每隔一天、每周一次或其间的任何时间间隔施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每天一次施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每隔一天施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每周一次施用于受试者。

在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一剂量施用。在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一口服剂量施用。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每两周、每三周或每四周施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂每月或每季度施用于受试者。在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂通过静脉内施用施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以1mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以3mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以3mg/kg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以10mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以10mg/kg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以200mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以250mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以375mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以500mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂以750mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂为瑞弗利单抗。在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约250mg至约850mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约375mg至约850mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约450mg至约850mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约500mg至约750mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约500mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗系以约750mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗每四周施用于受试者。在一些实施方案中，瑞弗利单抗通过静脉内施用施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以1mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以3mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以3mg/kg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以10mg/kg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以10mg/kg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以200mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以250mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以375mg Q3W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以500mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以750mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，瑞弗利单抗以约100mg至约1000mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，所提供的方法包括施用第一剂量的如本文所定义的PD-1/PD-L1抑制剂和第二剂量的PD-1/PD-L1抑制剂，其中第二剂量大于第一剂量(即，所述方法包括PD-1/PD-L1抑制剂(诸如瑞弗利单抗)的剂量递增)。

在一些实施方案中，当PD-1/PD-L1抑制剂为与A2A和/或A2B抑制剂组合和/或与抗CD73抗体或其抗原结合片段组合施用于受试者时，所述方法包括PD-1/PD-L1抑制剂的剂量递增。

在一些实施方案中，当PD-1/PD-L1抑制剂与抗CD73抗体或其抗原结合片段组合施用于受试者时，所述方法包括PD-1/PD-L1抑制剂的剂量递增。

在一些实施方案中，当所述瑞弗利单抗与A2A和/或A2B抑制剂组合和/或与抗CD73抗体或其抗原结合片段组合施用于受试者时，所述方法包括瑞弗利单抗的剂量递增。

在一些实施方案中，当所述瑞弗利单抗与抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如抗体Y)组合施用于受试者时，所述方法包括瑞弗利单抗的剂量递增。

抗CD73抗体

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以约0.1mg至约1000mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以约0.1mg至约500mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以约0.1mg至约100mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以约1mg至约100mg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以约50mg至约100mg的剂量施用于受试者。

组合物可包含约1mg/mL至100mg/mL、或约10mg/mL至100mg/mL、或约50mg/mL至250mg/mL、或约100mg/mL至150mg/mL、或约100mg/mL至250mg/mL的抗CD73抗体(例如抗CD73抗体或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，组合物包含50mg/mL的抗CD73抗体(例如抗CD73抗体或其抗原结合片段)。

抗CD73抗体剂量可在例如足以涵盖至少2个剂量、3个剂量、5个剂量、10个剂量或更多个剂量的一段时间(治疗期)内，以周期性间隔(例如每天一次或两次、或每周约1至4次、或优选每周、每两周(biweekly、every two weeks)、每三周、每月)施用例如介于约1至12周之间，优选介于约2至8周之间，更优选介于约3至7周之间，并且甚至更优选约4周、5周或6周。可能影响有效治疗受试者所需的剂量和时间的因素包括例如疾病或病症的严重程度、制剂、递送途径、先前治疗、受试者的一般健康状况和/或年龄和所存在的其他疾病。另外，用治疗有效量的化合物治疗受试者可包括单一治疗或优选可包括一系列治疗。

在一些实施方案中，PD-1/PD-L1抑制剂或其药学上可接受的盐以选自以下的剂量施用于受试者：约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg、约240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg、约505mg、约510mg、约515mg、约520mg、约525mg、约530mg、约535mg、约540mg、约545mg、约550mg、约555mg、约560mg、约565mg、约570mg、约575mg、约580mg、约585mg、约590mg、约595mg、约600mg、约605mg、约610mg、约615mg、约620mg、约625mg、约630mg、约635mg、约640mg、约645mg、约650mg、约655mg、约660mg、约665mg、约670mg、约675mg、约680mg、约685mg、约690mg、约695mg、约700mg、约705mg、约710mg、约715mg、约720mg、约725mg、约730mg、约735mg、约740mg、约745mg、约750mg、约755mg、约760mg、约765mg、约770mg、约775mg、约780mg、约785mg、约790mg、约795mg、约800mg、约805mg、约810mg、约815mg、约820mg、约825mg、约830mg、约835mg、约840mg、约845mg、约850mg、约855mg、约860mg、约865mg、约870mg、约875mg、约880mg、约885mg、约890mg、约895mg、约900mg、约905mg、约910mg、约915mg、约920mg、约925mg、约930mg、约935mg、约940mg、约945mg、约950mg、约955mg、约960mg、约965mg、约970mg、约975mg、约980mg、约985mg、约990mg、约995mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg或约1500mg。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每天一次、每隔一天、每周一次或其间的任何时间间隔施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每天一次施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每隔一天施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每周一次施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每两周、每三周或每四周施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段每月或每季度施用于受试者。在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段通过静脉内施用施用于受试者。

在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一剂量施用。在一些实施方案中，每一剂量作为每天一次单一静脉内剂量施用。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以70mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以100mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以250mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以500mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以750mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以1500mg Q2W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以70mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以100mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以250mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以500mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以750mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合片段以1500mg Q4W的剂量施用于受试者。

在一些实施方案中，所提供的方法包括施用第一剂量的如本文所定义的抗CD73抗体或其抗原结合片段和第二剂量的抗CD73抗体或其抗原结合片段，其中第二剂量大于第一剂量(即，所述方法包括抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如抗体Y)的剂量递增)。

在一些实施方案中，当抗CD73抗体或其抗原结合片段与A2A和/或A2B抑制剂组合和/或与PD-1/PD-L1抑制剂组合施用于受试者时，所述方法包括抗CD73抗体或其抗原结合片段的剂量递增。

在一些实施方案中，当抗CD73抗体或其抗原结合片段与PD-1/PD-L1抑制剂组合施用于受试者时，所述方法包括抗CD73抗体或其抗原结合片段的剂量递增。

在一些实施方案中，当所述抗体Y与A2A和/或A2B抑制剂组合和/或与PD-1/PD-L1抑制剂组合施用于受试者时，所述方法包括抗体Y的剂量递增。

在一些实施方案中，当所述抗体Y与PD-1/PD-L1抑制剂组合施用于受试者时，所述方法包括抗体Y的剂量递增。

使用方法

本公开的抗CD73抗体可调节CD73的活性。因此，本文所述的抗CD73抗体可用于通过使CD73与本文所述的抗体或其组合物中的任一者或多者接触来抑制CD73的方法中。本公开的A2A和/或A2B抑制剂可调节A2A和/或A2B腺苷受体的活性。因此，本文所述的A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂、盐或立体异构体可用于通过使A2A和/或A2B腺苷受体分别与本文所述A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂或其组合物中的任一者或多者接触来抑制A2A和/或A2B腺苷受体的方法中。同样，本公开的PD-1/PD-L1抑制剂可调节PD-1/PD-L1的活性。因此，本文所述的PD-1/PD-L1抑制剂、盐或立体异构体可用于通过使PD-1/PD-L1分别与本文所述的PD-1/PD-L1抑制剂或其组合物中的任一者或多者接触来抑制PD-1/PD-L1的方法中。在一些实施方案中，接触为体内。在一些实施方案中，接触为离体或体外。

本公开的另一方面涉及治疗个体(例如患者)的CD73、A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1相关的疾病或病症的方法，所述方法通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的抗CD73抗体或其药物组合物、治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂或其药物组合物和治疗有效量的一种或多种本公开的PD-1/PD-L1抑制剂或其药物组合物来进行。

本公开的另一方面涉及治疗个体(例如患者)的CD73和/或PD-1/PD-L1相关的疾病或病症的方法，所述方法通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的抗CD73抗体或其药物组合物和治疗有效量的一种或多种本公开的PD-1/PD-L1抑制剂或其药物组合物来进行。

CD73相关的疾病或病症可包括与CD73的表达或活性(包括过表达和/或异常活性水平)直接或间接相关的任何疾病、病症或疾患。A2A和/或A2B腺苷受体相关的疾病或病症可包括与A2A和/或A2B腺苷受体的表达或活性(包括过表达和/或异常活性水平)直接或间接相关的任何疾病、病症或疾患。PD-1/PD-L1相关的疾病或病症可包括与PD-1/PD-L1-的表达或活性(包括过表达和/或异常活性水平)直接或间接相关的任何疾病、病症或疾患。

CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1相关的疾病或病症可包括与CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1和/或PD-L1的表达或活性(包括CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1和/或PD-L1的过表达和/或异常活性水平)直接或间接相关的任何疾病、病症或疾患。

本公开的另一方面涉及治疗受试者(例如患者)的疾病或病症(例如癌症)的方法，所述方法通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的抗CD73抗体或其药物组合物和治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂或其药物组合物和治疗有效量或剂量的一种或多种本公开的PD-1/PD-L1抑制剂或其药物组合物来进行，其中疾病或病症具有高腺苷特征。确定疾病或病症具有高腺苷特征的方法为本领域中已知。例如，可使用一组所定义腺苷反应性基因来实施肿瘤组织的基因表达分析。

本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可协同作用例如来治疗疾病或病症，例如癌症。举例而言，在双重组合治疗中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可协同作用例如来治疗疾病或病症，例如癌症。因此，本文所述的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合用于抑制CD73、A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1的方法中，所述方法通过使CD73与本文所述的抗CD73抗体或其组合物中的任一者或多者接触、使A2A和/或A2B腺苷受体与本文所述的A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂或其组合物中的任一者或多者接触和使PD-1/PD-L1与本文所述的PD-1/PD-L1抑制剂或其组合物中的任一者或多者接触来进行。在一些实施方案中，本文所述的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合用于抑制CD73和/或PD-1/PD-L1的方法中，所述方法通过使CD73与本文所述的抗CD73抗体或其组合物中的任一者或多者接触和使PD-1/PD-L1与本文所述的PD-1/PD-L1抑制剂或其组合物中的任一者或多者接触来进行。

本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可用于组合治疗与CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1的活性相关的疾病，包括例如癌症、炎症性疾病、心血管疾病、神经变性疾病、免疫调节病症、中枢神经系统疾病和糖尿病。本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可用于组合治疗与CD73和/或PD-1/PD-L1的活性相关的疾病，包括例如癌症、炎症性疾病、心血管疾病、神经变性疾病、免疫调节病症、中枢神经系统疾病和糖尿病。

基于CD73、A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1在多种免疫抑制机制中的重要作用，组合疗法可加强免疫系统以抑制肿瘤进展。抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗(任选地进一步与其他疗法组合)膀胱癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC)、肺转移)、黑素瘤(例如转移性黑素瘤)、乳腺癌(例如乳腺癌)、子宫颈癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、食管癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、甲状腺癌、肝癌(例如肝细胞癌)、子宫癌、头颈癌(例如头颈部鳞状细胞癌)和肾细胞癌。

可使用本公开的治疗方法和方案治疗的癌症的实例包括但不限于骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睪丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌(carcinoma of the endometrium)、子宫内膜癌(endometrialcancer)、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)赘瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的癌症)和所述癌症的组合。本公开的方法还可用于治疗转移性癌症，尤其表达PD-L1的转移性癌症。

在一些实施方案中，可用本公开的方法治疗的癌症包括黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、结肠癌、肺癌(例如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、鳞状细胞头颈癌、尿路上皮癌(例如膀胱)和具有高微卫星不稳定性(MSI高)的癌症。另外，本公开包括可使用本公开的方法抑制其生长的难治性或复发性恶性肿瘤。

在一些实施方案中，可使用本公开的方法治疗的癌症包括但不限于实体瘤(例如前列腺癌、结肠癌、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、神经胶质母细胞瘤、肉瘤、膀胱癌等)、血液癌(例如淋巴瘤、白血病(诸如急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML))、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(包括再发性或难治性NHL和复发性滤泡性NHL)、霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤)和所述癌症的组合。

在一些实施方案中，可使用本公开的方法治疗的癌症包括但不限于胆道癌、胆管癌、三阴性乳腺癌、横纹肌肉瘤、小细胞肺癌、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、尤文氏肉瘤(Ewing’ssarcoma)、脑癌、脑瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、基底细胞癌、软骨肉瘤、上皮样肉瘤、眼癌、输卵管癌、胃肠癌、胃肠基质瘤、毛细胞白血病、肠癌、胰岛细胞癌、口腔癌、口癌、喉癌(throat cancer)、喉癌(laryngeal cancer)、唇癌、间皮瘤、颈癌、鼻腔癌、眼癌、眼黑素瘤、盆腔癌、直肠癌、肾细胞癌、唾液腺癌、窦癌、脊柱癌、舌癌、管状癌、输尿管癌和尿道癌。

在一些实施方案中，癌症选自肺癌(例如非小细胞肺癌)、黑素瘤、胰腺癌、乳腺癌(例如乳腺癌)、前列腺癌、肝癌、结肠癌、子宫内膜癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、头颈癌、甲状腺癌、肾癌、胃癌和肉瘤。在一些实施方案中，癌症选自急性淋巴母细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、慢性骨髓性白血病、骨髓纤维化、原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症/特发性血小板增多症后骨髓纤维化、特发性血小板增多症后骨髓纤维化和真性红细胞增多症后骨髓纤维化。在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、子宫内膜癌、肺癌、肾细胞癌、尿路上皮癌、膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)和胰腺癌。

在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌或肺转移)、黑素瘤(例如转移性黑素瘤)、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、子宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、食管癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、甲状腺癌、肝癌、子宫癌、头颈癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肛门癌、胆道癌、口腔癌、非黑素瘤皮肤癌和梅克尔细胞癌(Merkel call carcinoma)。

在一些实施方案中，前列腺癌为转移性去势抗性前列腺癌(mCRPC)。

在一些实施方案中，结肠直肠癌为结肠直肠癌(CRC)。

在一些实施方案中，疾病或病症为肺癌(例如非小细胞肺癌)、黑素瘤、胰腺癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、结肠癌、子宫内膜癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、肾癌、胃癌或肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤为阿金氏瘤(Askin's tumor)、葡萄状肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性血管内皮瘤、恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、血管肉瘤(angiosarcoma)、叶状囊性肉瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、硬纤维瘤、促结缔组织增生性小圆细胞瘤、上皮样肉瘤、骨外软骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纤维肉瘤、胃肠基质瘤(GIST)、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤(hemangiosarcoma)、卡波济氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(MPNST)、神经纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤或未分化多形性肉瘤。

在一些实施方案中，疾病或病症为头颈癌(例如头颈部鳞状细胞癌)、结肠直肠癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC))、黑素瘤、卵巢癌、膀胱癌、肝癌(例如肝细胞癌)或肾细胞癌。

在一些实施方案中，癌症为间皮瘤或腺癌。在一些实施方案中，疾病或病症为间皮瘤。在一些实施方案中，癌症为腺癌。

MDSC(骨髓源性抑制细胞)为来自骨髓谱系(起源自骨髓干细胞的细胞家族)的一组非均质免疫细胞。由于造血作用发生变化，所以MDSC在病理情况(诸如慢性感染和癌症)下强烈扩增。MDSC与其他骨髓细胞类型的不同之处在于，其具有强免疫抑制活性而非免疫刺激性质。与其他骨髓性细胞类似，MDSC与其他免疫细胞类型(包括T细胞、树突细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞)相互作用以调控其功能。在一些实施方案中，本文所述的化合物等可用于与具有高MDSC浸润的癌组织(例如肿瘤，包括具有高基底水平的巨噬细胞和/或MDSC浸润的实体瘤)相关的方法中。在一些实施方案中，本文所述的组合疗法可用于与具有表达PD-1或PD-L1的肿瘤或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的癌组织(例如肿瘤)相关的方法中。

在一些实施方案中，癌症为头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胃食管癌(例如胃食管结合部癌)、肛门癌、肝癌或胰腺癌。

在一些实施方案中，癌症为头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌或胰腺癌。

在一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)、胰腺导管腺癌(PDAC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)或肛管鳞状癌(SCAC)。

在一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)或胰腺癌。

在一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、结肠直肠癌(例如结肠癌)、黑素瘤、卵巢癌、膀胱癌、肾细胞癌、肝癌或肝细胞癌。

在一些实施方案中，癌症为头颈癌。

在一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)。

在一些实施方案中，癌症为肺癌。

在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在一些实施方案中，癌症为卵巢癌。

在一些实施方案中，癌症为前列腺癌。

在一些实施方案中，癌症为去势抗性前列腺癌(CRPC)。

在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。

在一些实施方案中，癌症为三阴性乳腺癌(TNBC)。

在一些实施方案中，癌症为膀胱癌。

在一些实施方案中，癌症为结肠直肠癌。

在一些实施方案中，癌症为转移性结肠直肠癌(mCRC)。

在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。

在一些实施方案中，癌症为胃癌。

在一些实施方案中，癌症为胃食管癌。

在一些实施方案中，癌症为胃胃食管结合部(GEJ)癌。

在一些实施方案中，癌症为肝细胞癌(HCC)。

在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。

在一些实施方案中，癌症为肛管鳞状癌(SCAC)。

在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺癌)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌、肾细胞癌和梅克尔细胞癌。

在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌和梅克尔细胞癌。

在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、子宫内膜癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、结肠直肠癌、卵巢癌、肝癌或肾细胞癌。

在一些实施方案中，癌症选自黑素瘤、子宫内膜癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌)、胰腺癌和结肠癌。

在一些实施方案中，癌症选自子宫内膜癌、肛门癌和胆道癌。

在一些实施方案中，癌症为在肿瘤微环境中展示高腺苷水平的肿瘤。这些肿瘤可根据基因表达特征来富集，或根据CD73和/或其他碱性磷酸酶(包括组织非特异性碱性磷酸酶(即TNAP和PAP))的高表达水平来富集。

在一些实施方案中，癌症为结肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑素瘤。在一些实施方案中，癌症为子宫内膜癌。在一些实施方案中，子宫内膜癌为子宫内膜样腺癌。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，肺癌选自非小细胞肺癌和小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为肾细胞癌。在一些实施方案中，癌症为尿路上皮癌。在一些实施方案中，癌症为膀胱癌。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为乳腺腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌为胰腺导管腺癌。在一些实施方案中，癌症为肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤选自阿金氏瘤、葡萄状肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性血管内皮瘤、恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、血管肉瘤、叶状囊性肉瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、硬纤维瘤、促结缔组织增生性小圆细胞瘤、上皮样肉瘤、骨外软骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纤维肉瘤、胃肠基质瘤(GIST)、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、卡波济氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(MPNST)、神经纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤和未分化多形性肉瘤。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗肺炎症，包括博来霉素(bleomycin)诱发的肺纤维化和与腺苷脱胺酶缺乏相关的损伤。在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗肺炎症，包括博来霉素诱发的肺纤维化和与腺苷脱胺酶缺乏相关的损伤。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗炎症性疾病，诸如过敏反应(例如CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1依赖性过敏反应)和其他CD73和/或A2A和/或A2B腺苷受体和/或PD-1/PD-L1免疫反应。可通过本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂的组合治疗的其他炎症性疾病包括呼吸障碍、败血症、再灌注损伤和血栓形成。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗炎症性疾病，诸如过敏反应(例如CD73和/或PD-1/PD-L1依赖性过敏反应)和其他CD73和/或PD-1/PD-L1免疫反应。可通过本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂的组合治疗的其他炎症性疾病包括呼吸障碍、败血症、再灌注损伤和血栓形成。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗心血管疾病，诸如冠状动脉疾病(心肌梗塞、心绞痛、心脏衰竭)、脑血管疾病(中风、短暂性脑缺血发作)、外周动脉疾病以及主动脉粥样硬化和动脉瘤。动脉粥样硬化为许多类型的心血管疾病的潜在病原因素。动脉粥样硬化开始于青春期伴有脂肪斑纹，其在成年进展成斑块且最终导致血栓形成事件，所述事件引起血管闭塞，从而导致临床上显著的发病率和死亡率。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗心血管疾病，诸如冠状动脉疾病(心肌梗塞、心绞痛、心脏衰竭)、脑血管疾病(中风、短暂性脑缺血发作)、外周动脉疾病以及主动脉粥样硬化和动脉瘤。动脉粥样硬化为许多类型的心血管疾病的潜在病原因素。动脉粥样硬化开始于青春期伴有脂肪斑纹，其在成年进展成斑块且最终导致血栓形成事件，所述事件引起血管闭塞，从而导致临床上显著的发病率和死亡率。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗运动活动障碍；由纹状黑质多巴胺系统变性引起的缺陷；帕金森氏病(Parkinson’sdisease)；和抑郁症的一些动机性症状。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗运动活动障碍；由纹状黑质多巴胺系统变性引起的缺陷；帕金森氏病；和抑郁症的一些动机性症状。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗糖尿病和相关病症，诸如胰岛素抗性。糖尿病影响腺苷的产生以及刺激IL-6和CRP产生的A2B腺苷受体(A2BR)的表达、胰岛素抗性和A2BR基因单核苷酸多态性(ADORA2B SNP)与炎症性标记物之间的关联。糖尿病中A2BR信号传导增加可部分地通过升高促炎介质来增加胰岛素抗性。选择性CD73抑制剂可用于治疗胰岛素抗性。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来治疗糖尿病和相关病症，诸如胰岛素抗性。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌、肾细胞癌和梅克尔细胞癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2包含氨基酸序列VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2包含氨基酸序列AASNQGS(SEQ ID NO:10)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)的方法，所述方法包括向受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2包含氨基酸序列VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2包含氨基酸序列AASNQGS(SEQ ID NO:10)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌、肾细胞癌和梅克尔细胞癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为瑞弗利单抗；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)的方法，所述方法包括向受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为瑞弗利单抗；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌、肾细胞癌和梅克尔细胞癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、子宫内膜癌、肾癌、口腔癌、头颈癌、肝癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非黑素瘤皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、甲状腺癌、肾细胞癌和梅克尔细胞癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的乳腺癌(例如乳腺腺癌肿瘤)的方法，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)A2A/A2B抑制剂，其为3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈或其药学上可接受的盐；

(ii)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(iii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胃食管结合部癌、肛门癌、肝癌或胰腺癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2包含氨基酸序列VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2包含氨基酸序列AASNQGS(SEQ ID NO:10)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)、胰腺导管腺癌(PDAC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)和肛管鳞状癌(SCAC)，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列SYWMN(SEQ ID NO:6)；

VH CDR2包含氨基酸序列VIHPSDSETWLDQKFKD(SEQ ID NO:7)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列EHYGTSPFAY(SEQ ID NO:8)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列RASESVDNYGMSFMNW(SEQ ID NO:9)；

VL CDR2包含氨基酸序列AASNQGS(SEQ ID NO:10)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSKEVPYT(SEQ ID NO:11)；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ IDNO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胃食管结合部癌、肛门癌、肝癌和胰腺癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为瑞弗利单抗；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)和胰腺癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为瑞弗利单抗；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌和胰腺癌，所述方法包括向受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)、胰腺导管腺癌(PDAC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)和肛管鳞状癌(SCAC)，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其中结合至人CD73的抗体：

(a)包含含有VH互补决定区(CDR)1、VH CDR2和VH CDR3的可变重链(VH)结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GYTFTSYG(SEQ ID NO:16)；

VH CDR2包含氨基酸序列IYPGSGNT(SEQ ID NO:17)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ARYDYLGSSYGFDY(SEQ ID NO:18)；并且

包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的可变轻链(VL)结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QDVSTA(SEQ ID NO:19)；

VL CDR2包含氨基酸序列SAS(SEQ ID NO:20)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQHYNTPYT(SEQ ID NO:21)；

(b)在SEQ ID NO:70的氨基酸40-53内的表位处结合至人CD73；

(c)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；

(d)包含含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的VH结构域，其中：

VH CDR1包含氨基酸序列GFTFSSYD(SEQ ID NO:34)；

VH CDR2包含氨基酸序列MSYDGSNK(SEQ ID NO:35)或MSYEGSNK(SEQ ID NO:40)；并且

VH CDR3包含氨基酸序列ATEIAAKGDY(SEQ ID NO:36)；并且

其中抗体包含含有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的VL结构域，其中：

VL CDR1包含氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:37)；

VL CDR2包含氨基酸序列AAS(SEQ ID NO:38)；并且

VL CDR3包含氨基酸序列QQSYSTPH(SEQ ID NO:39)；

(e)在SEQ ID NO:70的氨基酸386-399和470-489内的表位处结合至人CD73；

(f)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链；或

(g)结合至人CD73并且与具有以下的抗体竞争结合至人CD73：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，本申请进一步提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胃食管结合部癌、肛门癌、肝癌和胰腺癌，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在一些实施方案中，本申请提供治疗受试者的癌症的方法，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、去势抗性前列腺癌(CRPC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、膀胱癌、转移性结肠直肠癌(mCRC)、胰腺导管腺癌(PDAC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)和肛管鳞状癌(SCAC)，所述方法包括向所述受试者施用：

(i)PD-1/PD-L1抑制剂，其为(R)-1-((7-氰基-2-(3'-(3-(((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-1,7-萘啶-8-基氨基)-2,2'-二甲基联苯-3-基)苯并[d]噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-3-甲酸或其药学上可接受的盐；和

(ii)结合至人CD73的抗体，其为抗体Y。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌或胰腺癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、结肠直肠癌、黑素瘤、卵巢癌、膀胱癌、肾细胞癌或肝细胞癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为头颈癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为头颈部鳞状细胞癌(SCCNH)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为肺癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为卵巢癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为前列腺癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为去势抗性前列腺癌(CRPC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为乳腺癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为三阴性乳腺癌(TNBC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为膀胱癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为结肠直肠癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为转移性结肠直肠癌(mCRC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为胰腺癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为胃癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为胃食管癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为胃/胃食管结合部(GEJ)癌。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为肝细胞癌(HCC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。

在施用PD-1/PD-L1抑制剂和结合至人CD73的抗体的一些实施方案中，癌症为肛管鳞状癌(SCAC)。

如本文所用，术语“接触”是指将体外系统或体内系统中的所指示部分放在一起。举例而言，使A2A/A2B与本文所述的化合物“接触”包括将本发明的化合物施用于具有A2A/A2B的个体或患者(诸如人)，以及例如将本文所述的化合物引入含有含A2A/A2B的细胞或经纯化制剂的样品中。

术语“个体”或“患者”或“受试者”可互换使用且是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、山羊或灵长类动物，并且最优选人(即人受试者)。

如本文所用，短语“治疗有效量”是指引发研究者、兽医、医师或其他临床医师所寻求的组织、系统、动物、个体或人的生物或医学反应的活性化合物或药剂的量。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下中的一者或多者：(1)抑制疾病；例如，抑制正在经历或展示疾病、疾患或病症的病状或症状的个体的疾病、疾患或病症(即，阻止病状和/或症状的进一步发展)；和(2)改善疾病；例如，改善正在经历或展示疾病、疾患或病症的病状或症状的个体的疾病、疾患或病症(即，逆转病状和/或症状)，诸如减轻疾病的严重程度。

如本文所用，“QD”意指每天一次施用于受试者的剂量。“QOD”意指每隔一天一次施用于受试者的剂量。“QW”意指每周一次施用于受试者的剂量。“Q2W”意指每隔一周一次施用于受试者的剂量。“Q3W”意指每三周一次施用于受试者的剂量。“Q4W”意指每四周一次施用于受试者的剂量。

在一些实施方案中，本公开的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可组合使用来预防或降低发展本文所提及的任一疾病的风险；例如预防或降低可能易患疾病、疾患或病症、但尚未经历或展示疾病的病状或症状的个体发展疾病、疾患或病症的风险。

药物组合物和制剂

本文所述的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂可配制为药物组合物用于施用于受试者，例如来治疗本文所述的病症。在一些情况下，药物组合物包含抗CD73抗体作为单一剂。在一些情况下，药物组合物包含A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂作为单一剂。

在一些情况下，药物组合物包含PD-1/PD-L1抑制剂作为单一剂。在一些情况下，药物组合物包含本文所述的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂中的一者或多者。在一些情况下，药物组合物包含本文所述的抗CD73抗体和PD-1/PD-L1抑制剂中的一者或多者。

当作为药物使用时，本公开的化合物可以药物组合物形式施用。这些组合物可以制药领域中所熟知的方式制备且可通过多种途径施用，这取决于局部或全身性治疗是否所需以及待治疗的区域而定。施用可为局部(包括经皮、表皮、眼部和粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺(例如通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)、口服或胃肠外。胃肠外施用包括静脉内施用、动脉内施用、皮下施用、腹膜内施用、肌内施用或注射或输注；或颅内施用，例如鞘内施用或心室内施用。胃肠外施用可呈单一浓注剂量形式，或者可例如通过连续灌注泵来进行。用于局部施用的药物组合物和制剂可包括经皮贴片、软膏剂、洗剂、乳霜、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规药物载体、水性、粉末或油性基底、增稠剂和诸如此类可为必需或合意的。

药物组合物可包括“治疗有效量”的本文所述的剂。此类有效量可基于所施用剂的效应或使用多于一种剂时各剂的组合效应来确定。剂的治疗有效量也可根据诸如以下的因素变化：个体的疾病状态、年龄、性别和体重，和化合物引发个体中的所需反应(例如改善至少一种病症参数或改善病症的至少一种症状)的能力。治疗有效量还为其中组合物的治疗有益效应超过任何毒性或有害效应的量。

通常，药物组合物包括药学上可接受的载体。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和延迟吸收剂和生理学上相容的类似载体。组合物可包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐(参见例如Berge,S.M.等人(1977)J.Pharm.Sci.66:1-19)。

药物制剂为充分建立的技术，并且进一步描述于例如Gennaro(编辑),Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Lippincott,Williams和Wilkins(2000)(ISBN：0683306472)；Ansel等人,Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems,第7版,Lippincott Williams&Wilkins Publishers(1999)(ISBN：0683305727)；和Kibbe(编辑),Handbook of Pharmaceutical Excipients AmericanPharmaceutical Association,第3版.(2000)(ISBN：091733096X)中。

药物组合物可呈多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散液或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式可取决于预期施用模式和治疗应用而定。通常，本文所述的剂的组合物呈可注射或可输注溶液的形式。

组合物可配制为溶液、微乳液、分散液、脂质体或适于以高浓度稳定储存的其他有序结构。无菌可注射溶液可通过将所需量的本文所述的剂与上文所列举的一种成分或成分的组合(根据需要)一起并入适当溶剂中、然后无菌过滤来制备。通常，分散液通过将本文所述的剂并入含有碱性分散介质和来自上文所列举成分的所需其他成分的无菌媒介物中来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选制备方法为真空干燥和冷冻干燥，产生本文所述的剂加来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需成分的粉末。可例如通过使用包衣(诸如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度和通过使用表面活性剂来维持溶液的适当流动性。可注射组合物的延长吸收可通过将延迟吸收的剂(例如单硬脂酸盐和明胶)并入组合物中来达成。

本公开还包括药物组合物，所述药物组合物含有本公开的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)的组合。在一些实施方案中，组合物适于局部施用。在制造本公开的组合物中，通常将一种或多种活性成分与赋形剂混合，用赋形剂稀释或封装于呈例如胶囊、药囊、纸或其他容器形式的这种载体内。当赋形剂用作稀释剂时，其可为用作活性成分的媒介物、载体或介质的固体、半固体或液体材料。因此，组合物可呈以下形式：片剂、丸剂、粉末、糖锭剂、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如至多10重量％活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉末。

在制备制剂中，可将一种或多种活性成分研磨以在与其他成分合并之前提供适当粒度。如果活性化合物为实质上不溶的，则可将其研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物为实质上水溶性的，则可通过研磨来调整粒度以提供制剂中实质上均匀的分布，例如约40目。

本公开的化合物可使用已知研磨程序(诸如湿式研磨)来研磨以获得适用于片剂形成和其他制剂类型的粒度。本公开化合物的精细(纳米颗粒)制剂可通过本领域中已知的方法制备，例如参见国际申请第WO 2002/000196号。

适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包括：润滑剂，诸如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，诸如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。本公开的组合物可经配制以在通过采用本领域中已知的程序施用于患者后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。

组合物可以单位剂型配制。术语“单位剂型”是指适合作为人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散单位，各单位含有经计算以与适合药物赋形剂一起产生所需治疗效应的预定量的活性材料。

为制备固体组合物(诸如片剂)，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本公开化合物的均质混合物的预配制组合物。当提及这些预配制组合物为均质时，活性成分通常均匀分散于整个组合物中，以使得组合物可容易地细分成同样有效的单位剂型，诸如片剂、丸剂和胶囊。这种固体预制剂则细分成上文所述类型的单位剂型。

本公开的片剂或丸剂可经包衣或以其他方式化合以提供提供延长作用优点的剂型。举例而言，片剂或丸剂可包含内剂量和外剂量组分，后者呈前者上的包膜形式。两种组分可通过肠溶层分开，所述肠溶层用于抵抗胃中的崩解并允许内部组分完整地通入十二指肠中或延迟释放。可将多种材料用于此类肠溶层或包衣，此类材料包括多种聚合酸和聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素的材料的混合物。

其中可并入本公开的化合物和组合物以口服或通过注射施用的液体形式包括水溶液，适合地调味糖浆、水性或油性悬浮液和调味乳液以及可食用油(诸如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)以及酏剂和类似药物媒介物。

用于吸入或吹入的组合物包括药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液以及粉末。液体或固体组合物可含有如上文所述的适合的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物为通过口服或鼻呼吸途径施用用于局部或全身效应。组合物可通过使用惰性气体来雾化。雾化溶液可直接从雾化装置呼吸或雾化装置可连接至面罩、帐篷或间歇正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可从以适当方式递送制剂的装置口服或经鼻施用。

局部制剂可含有一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏剂可含有水和一种或多种选自例如以下的疏水性载体：液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林(white Vaseline)和诸如此类。乳霜的载体组合物可基于水与甘油和一种或多种其他组分(例如甘油单硬脂酸酯、PEG-甘油单硬脂酸酯和鲸蜡基硬脂基醇)的组合。凝胶可使用异丙醇和水、适合地与其他组分(诸如例如甘油、羟乙基纤维素和诸如此类)的组合配制。在一些实施方案中，局部制剂含有至少约0.1wt％、至少约0.25wt％、至少约0.5wt％、至少约1wt％、至少约2wt％或至少约5wt％的本公开化合物。局部制剂可适合地包装在例如100g管中，所述管任选地与用于治疗所选适应症(例如银屑病或其他皮肤疾患)的说明书相关联。

施用于患者的化合物或组合物的量将取决于所施用物、施用的目的(诸如预防或治疗)、患者的状态、施用方式和诸如此类而变化。在治疗应用中，组合物可以足以治愈或至少部分地阻止疾病及其并发症的症状的量施用于已患有疾病的患者。有效剂量将取决于所治疗的疾病状况以及主治临床医师根据诸如疾病的严重程度、患者的年龄、体重和一般状况和诸如此类的因素作出的判断而定。

施用于患者的组合物可呈上文所述的药物组合物的形式。这些组合物可通过常规灭菌技术灭菌，或者可经无菌过滤。水溶液可封装以原样使用，或冻干，冻干制剂在施用之前与无菌水性载体合并。化合物制剂的pH通常将介于3与11之间，更优选介于5至9之间且最优选介于7至8之间。应理解，使用前述赋形剂、载体或稳定剂中的某一者将形成药物盐。

本公开化合物的治疗剂量可根据例如进行治疗的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康状况和疾患以及处方医师的判断而变化。药物组合物中本公开化合物的比例或浓度可取决于多种因素而变化，所述因素包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径。举例而言，本公开的化合物可以含有约0.1％至约10％w/v的化合物的生理缓冲水溶液提供用于胃肠外施用。

本公开的组合物可进一步包括一种或多种另外的药剂，诸如化学治疗剂、类固醇、抗炎症化合物或免疫抑制剂，其实例列于本文中。

在某些实施方案中，抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和/或PD-1/PD-L1抑制剂可与将保护化合物免于快速释放的载体(诸如受控释放制剂，包括植入物和微囊封递送系统)一起制备。可使用生物可降解的生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备此类制剂的方法已获得专利或众所周知。参见例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson编辑,Marcel Dekker,Inc.,New York(1978)。

经标记化合物和测定方法

本公开进一步包括经同位素标记的本公开化合物。“经同位素”或“经放射性标记的”化合物为本公开的化合物，其中一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现(即天然)的原子质量或质量数的原子替代或取代。可并入本公开化合物中的适合放射性核素包括但不限于

本文所呈现化合物的一个或多个构成原子可被天然或非天然丰度的原子的同位素替代或取代。在一些实施方案中，化合物包括至少一个氘原子。在一些实施方案中，化合物包括两个或更多个氘原子。在一些实施方案中，化合物包括1-2个、1-3个、1-4个、1-5个或1-6个氘原子。在一些实施方案中，化合物中的所有氢原子可被氘原子替代或取代。

在一些实施方案中，连接至本文所述的化合物的碳原子的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个氢原子任选地被氘原子替代。

将同位素纳入有机化合物中的合成方法为本领域中已知(Deuterium Labelingin Organic Chemistry,Alan F.Thomas(New York,N.Y.,Appleton-Century-Crofts,1971；The Renaissance of H/D Exchange,Jens Atzrodt,Volker Derdau,Thorsten Fey和Jochen Zimmermann,Angew.Chem.Int.Ed.2007,7744-7765；The Organic Chemistry ofIsotopic Labelling,James R.Hanson,Royal Society of Chemistry,2011)。经同位素标记的化合物可用于各种研究，诸如NMR光谱、代谢实验和/或测定。

用较重同位素(诸如氘)取代可提供源自更大代谢稳定性的某些治疗优点，例如延长的体内半衰期或降低的剂量要求，并且因此在一些情况下可能为优选的(参见例如A.Kerekes等人J.Med.Chem.2011,54,201-210；R.Xu等人J.LabelCompd.Radiopharm.2015,58,308-312)。具体而言，在一个或多个代谢位点处取代可提供一个或多个治疗优点。

并入本发明的经放射性标记的化合物中的放射性核素将取决于所述经放射性标记的化合物的具体应用而定。举例而言，对于体外A2A/A2B标记和竞争测定，并入

应理解，“经放射性标记”或“经标记化合物”为已并入至少一种放射性核素的化合物。在一些实施方案中，放射性核素选自由以下组成的组：

本公开可进一步包括将放射性同位素并入本公开的化合物中的合成方法。将放射性同位素并入有机化合物中的合成方法为本领域中所熟知，并且本领域普通技术人员将容易地意识到适用于本公开化合物的方法。

本公开的标记剂可用于筛选测定中以鉴别/评估剂。举例而言，新合成或鉴别的经标记剂(即测试剂)结合腺苷受体、CD73或PD-1/PD-L1的能力可通过追踪标记而监测其分别与腺苷受体、CD73或PD-1/PD-L1接触时的浓度变化来评估。举例而言，可评估测试剂(经标记)减少已知结合至腺苷受体、CD73或PD-1/PD-L1的另一剂(即标准剂)的结合的能力。因此，测试剂与标准剂竞争性结合至腺苷受体、CD73或PD-1/PD-L1的能力直接与其结合亲和力相关联。相反，在一些其他筛选测定中，标准剂经标记且测试剂未经标记。因此，监测经标记标准剂的浓度以评估标准剂与测试剂之间的竞争，并且由此确定测试剂的相对结合亲和力。

因此，本公开的另一方面涉及本公开的经标记剂(即经标记的抗CD73抗体、A2A和/或A2B腺苷受体抑制剂和PD-1/PD-L1抑制剂)(经放射性标记、经荧光标记等)，其将不仅可用于成像技术中，并且还可用于体外和体内测定中，用于定位和定量组织样品(包括人)中的CD73、A2A和/或A2B和/或PD-1/PD-L1受体，以及用于通过抑制经标记化合物的结合来鉴别CD73、A2A和/或A2B和/或PD-1/PD-L1拮抗剂。取代本公开化合物的一个或多个原子也可用于产生差异ADME(吸附、分布、代谢和排泄)。因此，本公开包括含有此类经标记或经取代化合物的腺苷受体(例如A2A和/或A2B)测定。

药盒

本公开还包括可用于例如治疗或预防本文所述的疾病或病症的药物药盒，所述药盒包括一个或多个含有药物组合物的容器，所述药物组合物包含治疗有效量的一种或多种本公开的化合物/抗体。此类药盒可进一步包括(如果需要)各种常规药物药盒组分中的一者或多者，例如含有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外容器等，如本领域技术人员将容易地明了。指示待施用组分的量、施用指南和/或混合组分的指南的呈插页或呈标记形式的说明书也可包括在药盒中。

将借助于具体实施例更详细地描述本发明。提供以下实施例用于说明性目的，并且并不意欲以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可经改变或修改以产生基本上相同的结果的多个非关键参数。应进一步了解，本发明为清楚起见而在单独实施方案的上下文中描述的某些特征也可在单一实施方案中以组合提供。相反，本发明为简便起见在单一实施方案的上下文中描述的各种特征也可单独或以任何适合子组合提供。

除本文所述的修改外，本领域技术人员根据前面的描述将明了本发明的各种修改。此类修改也意欲落在所附权利要求书的范围内。本公开中所引用的每一参考文献(包括所有专利、专利申请和出版物)以引用的方式整体并入本文中。

实施例

下文系本发明实践的实例。其不应理解为以任何方式限制本发明的范围。

实施例1.抗体Y与瑞弗利单抗和化合物9的组合的抗肿瘤功效。

在携带人乳腺腺癌肿瘤MDA-MB-231(CD73的高表达者)的人源化鼠类宿主中分析抗CD73抗体(抗体Y)作为单一剂和与A2A/A2B小分子受体拮抗剂(化合物9(3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈，参见表1))和/或抗PD-1抗体(瑞弗利单抗)的组合的抗肿瘤功效，并建立PD-1/PD-L1阻断的反应者。向雌性人CD34+重建小鼠(29周龄；Jackson Laboratory,BarHarbor,ME)的经剃毛左侧腹上皮下接种3x10

1)媒介物和IgG同型对照；

2)瑞弗利单抗；

3)抗体Y；

4)化合物9；

5)瑞弗利单抗+抗体Y；

6)瑞弗利单抗+化合物9；

7)抗体Y+化合物9；和

8)瑞弗利单抗+抗体Y+化合物9。

在第7天开始给药，并且持续28天，直至第35天。在给药结束后继续对动物进行个别追踪至肿瘤体积大于或等于小鼠体重的10％时实现的研究的人道终点。

截至第35天停止给药时，所有组合都已抑制肿瘤生长，优于其组分单一剂和媒介物。在第47天(即一些动物在其终点离开研究前最后一天)分析整个研究的肿瘤生长抑制(TGI)，其定义为(1-治疗组体积)/对照组体积)x 100。使用非参数后测试(Kruskal-Wallis)确定显著性。数据汇总于表A和图1中。

表A.

对小鼠进行追踪至其第90天的终点，用于存活分析。与抗体Y的所有组合都促进存活期大于媒介物的存活期，其中与中值存活期为60天的对照组相比，与瑞弗利单抗组合的中值存活期为62天，与化合物9组合的中值存活期为74天，并且与瑞弗利单抗、化合物9和抗体Y组合的中值存活期为72天，如图2中所显示。此数据展示，与使用单一剂治疗相比，用抗体Y阻断CD73并用化合物9阻断A2A/A2B受体提供改善的疾病控制和死亡率。另外，使用抗体Y、化合物9和瑞弗利单抗的三重组合出现肿瘤生长的最佳控制。

实施例2.在患有晚期实体瘤的参与者中抗体Y作为单一疗法或与免疫疗法的组合的1期、开放标记、多中心研究

I.目标

这为人(FIH)中首次开放标记、非随机化、多中心、剂量递增和剂量扩展1期研究，以确定在患有特定晚期实体瘤(包括头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)和指定胃肠(GI)恶性肿瘤)的参与者中，抗体Y在单独给予或与化合物9和/或瑞弗利单抗组合给予时的安全性、耐受性、药物动力学(PK)、药效动力学和初步功效。将选择患有CD8 T细胞阳性肿瘤的参与者，因为这些肿瘤更可能对免疫疗法有反应。

II.总体设计

1a期将由使用混合设计每一治疗组的剂量递增组成。这将允许评估在患有晚期实体瘤(在初始剂量递增队列后限于CD8 T细胞阳性晚期SCCHN或指定GI恶性肿瘤，在本文中定义为结肠直肠癌(CRC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)、胰腺导管腺癌(PDAC)或肛管鳞状癌(SCAC))的参与者中，以下研究治疗的安全性和耐受性：

·

·

·

·

在其中患有晚期实体瘤的参与者将入选的每一治疗组中的初始剂量递增队列后，入选将限于针对患有CD8 T细胞阳性晚期SCCHN或指定GI恶性肿瘤的参与者的后续剂量递增队列中(即，应用与1b期相同的纳入标准)，并且治疗前和治疗时活检将成为强制性的。这可发生在开放入选至第二剂量水平之前或此后的任一时间，并且将基于新出现的PK数据(即靶标介导的药物处置(TMDD)饱和)。

1b期为剂量扩展期，以更好地表征在总计大约120名可评估参与者中，在单一疗法和每一组合疗法的推荐扩展剂量(RDE)下，抗体Y作为单一疗法或与瑞弗利单抗和/或化合物9组合的安全性、耐受性、PK、药效动力学效应和初步肿瘤活性。1b期参与者将限于患有所选CD8 T细胞阳性晚期或转移性SCCHN或指定GI恶性肿瘤(在本文中定义为结肠直肠癌(CRC)、胃/胃食管结合部(GEJ)癌、肝细胞癌(HCC)、胰腺导管腺癌(PDAC)或肛管鳞状癌(SCAC))的那些参与者。

·TGA(抗体Y单一疗法)

-SCCHN：10名参与者

-指定GI恶性肿瘤：10名参与者

·TGB1(抗体Y+瑞弗利单抗)

-SCCHN：10名参与者

-指定GI恶性肿瘤：10名参与者

·TGB2(抗体Y+化合物9)

-SCCHN：20名参与者

-指定GI恶性肿瘤：20名参与者

·TGC(抗体Y+瑞弗利单抗+化合物9)

-SCCHN：20名参与者

-指定GI恶性肿瘤：20名参与者

研究将包括确定合格性的28天筛选时段、长达2年的治疗时段、治疗结束(EOT)访视以及30天和90天安全性随访。对于因疾病进展外的原因中断研究治疗的参与者，将在随访期中继续评价其疾病状态，并且应在前12个月继续每8周一次进行肿瘤评价，并且然后此后每12周进行一次，直至开始新抗癌疗法、疾病进展、死亡、撤回同意书或研究结束，以先发生者为准。

将在基线时实施肿瘤评价，并且随后由现场研究者根据实体瘤反应评估标准(RECIST)v1.1在治疗第一年每8周一次和此后每12周一次进行审查。实体瘤免疫反应评估标准(iRECIST)指南可用于因放射学进行性疾病(PD)而中断研究治疗的决定。

将从参与者签署知情同意书的时间直至90天安全性随访来评估安全性。还将由安全审查委员会(Safety Review Committee)定期审查安全性数据。

将从所有参与者收集强制性治疗前和治疗时活检，如上文所述的1a期剂量递增中每一治疗组的早期剂量水平的参与者除外。如果无法获得足够的治疗时肿瘤组织，则将允许参与者继续进行研究。

·在1a期中，在已获得的可评估成对活检样本不足的情况下，至多额外6名参与者可入选剂量水平。

·在1b期中，目的为在每一队列内获得至少10个可评估成对活检样本。如果在参与者初始入选后尚未获得10个可评估成对样本，则至多额外6名参与者可入选队列(即SCCHN或指定GI恶性肿瘤)。

CD8 T细胞阳性肿瘤为所有参与者进入研究所必需(1a期剂量递增中每一治疗组的早期剂量水平的那些参与者除外)。将分析从所有参与者收集的强制性治疗前活检的CD8+T细胞淋巴细胞的存在作为预筛选的一部分。预筛选允许在28天筛选时段外和在签署研究的主要知情同意书(ICF)之前实施患有CD8 T细胞阳性肿瘤的参与者的预选择。将要求参与者签署特定预筛选同意书；然而，在预筛选同意书下将不会实施其他方案评价。

具有可用存档组织的1a期和1b期TGA参与者可提交存档组织用于此预筛选分析；然而，将要求合格参与者在筛选时段期间经受新鲜活检用于生物标志物分析。筛选期间的这些新鲜活检为获得评估CD73酶活性所需的冷冻组织样品所必需。

将使用在研究中收集的成对肿瘤活检来证实抗体Y(在新鲜成对活检样本上)的药效动力学活性，评估肿瘤和肿瘤微环境(TME)的变化，鉴别潜在生物标志物，和开发并评估腺苷调控的基因表达特征。

III.1a期-剂量递增

将使用开放标记混合设计来评价在患有晚期实体瘤(在初始剂量递增队列后限于CD8 T细胞阳性晚期SCCHN或指定GI恶性肿瘤(CRC、GEJ癌、HCC、PDAC或SCAC))的参与者中，TGA和组合治疗组TGB1、TGB2和TGC的安全性和耐受性并鉴别其RDE。每一治疗组的细节参见相关后续子部分。

剂量递增将起始于TGA。开放入选TGB1、TGB2和TGC的剂量递增队列的决定将基于观察到的抗体Y的安全性、耐受性、临床活性、PK和药效动力学。

指导剂量递增的混合统计设计

混合设计为经修改的毒性概率区间设计和剂量-毒性模型的混合，并且其具有3个步骤。

步骤1

表B.

步骤2

步骤3

在每一剂量水平下需要最少3名可评估参与者。然而，取决于应计率，3名、4名、5名或6名参与者可入选。在每一治疗组中，在剂量递增阶段中可治疗大约30名可评估参与者，并且如果在任一剂量水平下治疗的可评估参与者数量≥9，则可停止剂量递增程序。如果新出现的数据支持最低剂量水平下不可接受的剂量递减(D或DU)，则研究将评估数据以确定是否应考虑较低剂量(或替代时间表)。

当将参与者添加至对“停留(S)”决定有反应的剂量水平中时，对待入选的额外参与者的数量封顶以最小化于可能具有不可接受毒性(在表B中表示为“不可接受剂量(DU))”的剂量的暴露。其次，为确定在剂量水平下还有多少参与者可入选，一人可对当前单元格至标记为DU的第一单元格的对角线方向(向下和向右)上的步长计数。举例而言，如果3名参与者中的1名在给定剂量水平下已经历DLT，则在此剂量水平下应有不超过3名额外参与者入选直至获得额外DLT数据。因为如果所有3名额外参与者经历DLT(即在表B中，6名参与者中的4名具有DLT)，则剂量水平将视为具有不可接受的毒性。

如果在所有提出剂量中未观察到DLT且在最高剂量水平中无明显的功效相关信号，则可使用在较高剂量水平下入选的额外参与者继续剂量递增程序。

在剂量递增程序结束时，将基于前述的剂量-毒性模型(如果其为可行的)或池相邻违规者算法(如果参数剂量-毒性模型为不可行的)来估计所有测试剂量水平下的DLT率。经估计DLT率接近28％的剂量将作为MTD来治疗。然而，在决定转入1b期的剂量之前，将考虑所有可用数据，诸如新出现的安全性、PK、进行性疾病(PD)和其他生物标志物信息。

治疗组A-抗体Y单一疗法

用于剂量递增的入选将起始于在每一28天周期的第1天和第15天以70mg每两周(Q2W)的剂量静脉内(IV)施用的抗体Y单一疗法。DLT评估时段的长度为28天，并且当剂量水平队列中的可评估参与者在开放下一剂量水平队列之前通过28天DLT时段时，将审查安全性和耐受性。提议剂量(70mg Q2W)试图最小化晚期癌症患者于低治疗剂量水平的抗体Y的暴露，同时平衡与非临床药理学和毒理学概况相关的安全性风险。此剂量为根据所有非临床数据的证据权重(WOE)来确定且视为提供可接受的风险-益处概况。

待在本研究中探究的抗体Y的计划剂量水平可包括70mg、250mg、750mg和1500mg，但剂量将基于新出现的数据来选择。大于250mg的剂量将不增加3倍以上。如果安全性、PK或药效动力学数据支持，则可探究中间剂量水平。

在28天DLT观察时段期间，参与者必须已接受经分配用于Q2W给药的水平的2个剂量的抗体Y或经分配用于Q4W给药的水平的1个剂量的抗体Y，或已进行可评估剂量耐受性的DLT。可替代因毒性外的原因视为不可评估的参与者。另外，将在RDE的选择中考虑具有符合DLT定义的迟发性安全性事件的参与者或具有经确定可归因于研究药物的不可耐受的较低级持续毒性(例如2级外周神经病变)的那些参与者。

可基于毒性实施剂量中断和/或修改。在DLT观察时段期间，在未与医学监测者讨论下不应进行剂量修改。如果剂量水平视为具有不可接受的毒性，则入选至所述剂量水平中的所有参与者可将其剂量减小至经确定为可耐受的末次剂量水平。

在任一可耐受剂量水平下可有至多总共6名额外参与者入选以进一步研究安全性、PK和/或药效动力学生物标志物。还将需要出于评价药效动力学生物标志物的目的入选的参与者以提供治疗前和治疗时肿瘤活检并患有SCCHN或指定GI恶性肿瘤。

抗体Y的施用时间表可基于新出现的PK和药效动力学数据从Q2W变成每四周(Q4W)。Q4W给药对于参与者更方便，并且对于接受包括瑞弗利单抗的组合疗法(TGB1和TGC)的参与者，与瑞弗利单抗的Q4W给药较好地吻合。在每一剂量水平下，将首先对1名参与者进行治疗，之后在开始治疗剩余参与者之前为≥24小时的等待时段。

治疗组B1-抗体Y+瑞弗利单抗

瑞弗利单抗在所有剂量水平中以500mg IV Q4W施用。瑞弗利单抗500mg Q4W剂量的选择为基于人首次单一疗法研究的临床PK数据的建模(参见例如clinicaltrials.gov,NCT03059823)，所述研究评估219名参与者中以1mg/kg至10mg/kg Q2W或Q4W范围内的剂量的基于体重的给药和以375mg Q3W、500mg Q4W和750mg Q4W的剂量的平量给药。

一旦宣布TGA中的至少2个剂量水平可耐受或已选择RDE，便可立即开始入选TGB1中。另外，将使用可从研究的TGA获得的PK和药效动力学数据来帮助指导TGB1的起始。开放TGB1的决定将通过医学监测者与研究研究者之间的一致意见作出。为确保组合治疗的安全性，TGB1中的抗体Y起始剂量将比开放TGB1时TGA中抗体Y的最高测试耐受剂量低1个剂量水平或小至少50％(以较高者为准)。

抗体Y可与瑞弗利单抗组合Q2W或Q4W施用。TGB1中抗体Y的剂量递增标准将与用于TGA中的抗体Y单一疗法剂量递增的标准相同；即，大于250mg的剂量将不增加3倍以上，并且可探究中间剂量水平(来自计划剂量水平)。在每一剂量水平下，将首先对1名参与者进行治疗，在开始治疗剩余参与者之前为≥24小时的等待时段。

TGB1剂量递增将遵循与针对TGA所概述相同的混合设计。参与者必须已接受经分配用于Q2W给药的水平的2个剂量的抗体Y或经分配用于Q4W给药的水平的1个剂量的抗体Y和28天DLT观察时段期间的1个剂量的瑞弗利单抗，或已进行可评估剂量耐受性的DLT。另外，将在RDE的选择中考虑具有符合DLT定义的迟发性安全性事件的参与者或具有经确定可归因于研究药物的不可耐受的较低级持续毒性(例如2级外周神经病变)的那些参与者。

可基于毒性实施抗体Y的剂量中断和/或修改。在DLT观察时段期间，在未与医学监测者讨论下不应进行剂量修改。如果剂量水平视为具有不可接受的毒性，则入选至所述剂量水平中的所有参与者可将其剂量减小至经确定为可耐受的末次剂量水平。

根据发起人的判断，在任一可耐受剂量水平下可有至多总共6名额外参与者入选以进一步研究安全性、PK和/或药效动力学生物标志物。还将需要出于评价药效动力学生物标志物的目的入选的参与者以提供治疗前和治疗时肿瘤活检并患有SCCHN或指定GI恶性肿瘤。

治疗组B2-抗体Y+化合物9

一旦宣布TGA中的至少2个剂量水平可耐受或已选择RDE，便可立即开始入选TGB2中。另外，将使用可从研究的TGA获得的PK和药效动力学数据来帮助指导TGB2的起始。开放TGB2的最终决定将通过医学监测者与研究研究者之间的一致意见作出。为确保组合治疗的安全性，以下将适用：

·TGB2中的抗体Y起始剂量将比开放TGB2时TGA中抗体Y的最高测试耐受剂量低1个剂量水平或小至少50％(以较高者为准)。

·TGB2中的化合物9起始剂量将比化合物9作为单一疗法的最高测试耐受剂量或RDE低1个剂量水平或小至少50％(以较高者为准)。

抗体Y可与化合物9组合Q2W或Q4W施用。TGB2中抗体Y的剂量递增标准将与用于TGA中的抗体Y单一疗法剂量递增的标准相同；即，大于250mg的抗体Y剂量将不增加3倍以上，并且可探究中间剂量水平(来自计划剂量水平)。化合物9可与抗体Y组合QD或每天两次(BID)施用。化合物9的剂量增加将永不超过100％(即增加2倍)。在先前化合物9剂量水平下在至少2名参与者中观察到具有与研究治疗相关的合理可能性的≥2级毒性的观察后，化合物9的后续增加在连续化合物9剂量水平中将限于不超过50％。在每一剂量水平下，将首先对1名参与者进行治疗，在开始治疗剩余参与者之前为≥24小时的等待时段。

在TGB2中，可开放平行剂量水平，其中抗体Y在一个剂量水平队列中递增且化合物9在另一剂量水平队列中递增。仅1种研究药物将在剂量水平中递增。因此，抗体Y或化合物9的TGB2剂量递增将遵循与所概述TGA相同的混合设计。

参与者必须已接受经分配用于Q2W给药的水平的2个剂量的抗体Y或经分配用于Q4W给药的水平的1个剂量的抗体Y和在28天DLT观察时段期间分配的水平的至少75％剂量的化合物9(即，用于QD给药的28个剂量中的21个[在BID给药的情况下为56个剂量中的42个])，或具有可评估剂量耐受性的DLT。另外，将在RDE的选择中考虑具有符合DLT定义的迟发性安全性事件的参与者或具有经确定可归因于研究药物的不可耐受的较低级持续毒性(例如2级外周神经病变)的那些参与者。

可基于毒性实施剂量中断和/或修改。在DLT观察时段期间，在未与医学监测者讨论下不应进行剂量修改。如果剂量水平视为具有不可接受的毒性，则入选至所述剂量水平中的所有参与者可将其剂量减小至经确定为可耐受的末次剂量水平。

根据发起人的判断，在任一可耐受剂量水平下可有至多总共6名额外参与者入选以进一步研究安全性、PK和/或药效动力学生物标志物。还将需要出于评价药效动力学生物标志物的目的入选的参与者以提供治疗前和治疗时肿瘤活检并患有SCCHN或指定GI恶性肿瘤。

治疗组C-抗体Y+瑞弗利单抗+化合物9

在研究的剂量递增部分中，抗体Y+化合物9+瑞弗利单抗的三重组合治疗的起始入选可在以下条件中的一者下进行：

·在已宣布至少2个剂量水平的TGB1或TGB2中的一者为可耐受或已选择RDE后；或

·在已宣布此研究中TGA的至少2个剂量水平的抗体Y和至少2个剂量水平的化合物9+瑞弗利单抗为可耐受或已选择RDE后。

将使用可从先前队列和治疗组获得的PK和药效动力学数据来帮助指导TGC的起始。为确保三重组合的安全性，以下将适用：

·当作为单一疗法或与瑞弗利单抗或化合物9组合给予时，抗体Y的起始剂量将定义为比抗体Y的最高测试耐受剂量低1个剂量水平或小至少50％(以较高者为准)(如果抗体Y的耐受剂量在TGB1和TGB2中不同，则三重组合的起始剂量将比双重组合的较低耐受剂量低1个剂量水平或小至少50％)。

·化合物9的起始剂量将定义为比化合物9(当在此研究的TGB2中与抗体Y组合给予时)的最高耐受剂量或化合物9与瑞弗利单抗的最高耐受剂量低1个剂量水平或小至少50％(以较高者为准)。

瑞弗利单抗在所有剂量水平中以500mg IV Q4W施用。抗体Y可与化合物9和瑞弗利单抗组合Q2W或Q4W施用。抗体Y和化合物9的剂量可在此治疗组中递增。仅1种研究药物将在队列内递增，但平行队列可入选。TGC中抗体Y的剂量递增标准将与用于TGA中的抗体Y单一疗法剂量递增的标准相同；即，大于250mg的抗体Y剂量将不增加3倍以上，并且可探究中间剂量水平(来自计划剂量水平)。化合物9可与抗体Y和瑞弗利单抗组合QD或BID施用。TGC中化合物9的剂量递增标准将与针对TGB2的化合物9所述相同；即，连续化合物9剂量水平的剂量增加将高达2倍直至在先前化合物9剂量水平下在至少2名参与者中观察到治疗相关的≥2级毒性。在观察到这种毒性后，后续剂量增加在连续化合物9剂量水平下将限于不超过50％。在每一剂量水平下，将首先对1名参与者进行治疗，在开始治疗剩余参与者之前为≥24小时的等待时段。

可开放平行剂量水平，其中抗体Y在一个剂量水平队列中递增且化合物9在另一剂量水平队列中递增，如针对TGB2所概述。与TGB2一样，研究药物抗体Y或化合物9中的仅1者将在剂量水平中递增。因此，抗体Y或化合物9的TGC剂量递增将遵循与针对TGA所概述相同的混合设计。

参与者必须已接受(a)经分配用于Q2W给药的水平的2个剂量的抗体Y或经分配用于Q4W给药的水平的1个剂量的抗体Y；(b)1个剂量的瑞弗利单抗；和(c)在28天DLT观察时段期间分配的水平的至少75％剂量的化合物9(即，用于QD给药的28个剂量中的21个[在BID给药的情况下为56个剂量中的42个])，或具有可评估剂量耐受性的DLT。另外，将在RDE的选择中考虑具有符合DLT定义的迟发性安全性事件的参与者或具有经确定可归因于研究药物的不可耐受的较低级持续毒性(例如2级外周神经病变)的那些参与者。

可基于毒性实施剂量中断和/或修改。在DLT观察时段期间，在未与医学监测者讨论下不应进行剂量修改。如果剂量水平视为具有不可接受的毒性，则入选至所述剂量水平中的所有参与者可将其剂量减小至经确定为可耐受的末次剂量水平。

在任一可耐受剂量水平下可有至多总共6名额外参与者入选以进一步研究安全性、PK和/或药效动力学生物标志物。还将需要出于评价药效动力学生物标志物的目的入选的参与者以提供治疗前和治疗时肿瘤活检并患有SCCHN或指定GI恶性肿瘤。

推荐扩展剂量(RDE)的定义

抗体Y作为单一疗法和每一组合治疗(TGB1、TGB2和TGC)的RDE将通过评估每一剂量水平队列内来自研究的剂量递增部分的所有可用数据(包括安全性以及PK和药效动力学数据)来确定，用于在研究的剂量扩展部分(1b期)中进一步研究。组合治疗组中抗体Y和化合物9的个别药物剂量水平不应过大，但可等于每一个别药物作为单一疗法的RDE。

IV.1b期-剂量扩展

纳入扩展以进一步探究在1a期中鉴别的单一疗法和每一组合疗法的RDE下，TGA或组合组TGB1、TGB2和TGC的安全性、耐受性、药物动力学、药效动力学效应和初步抗肿瘤活性。

1b期将主要集中在患有以下CD8 T细胞阳性SCCHN和指定GI肿瘤的参与者：CRC、GEJ癌、HCC、PDAC或SCAC，以在这些所选肿瘤类型中在RDE下获得研究治疗的额外数据。当SoC选择用尽时，在后线疗法中对这些群体中的参与者存在高度迫切的医学需求。

已开始入选剂量扩展队列后，如果(1)入选所述队列的前5名参与者中>1名参与者具有可归因于研究治疗的不良事件(AE)≥3级，或(2)入选所述队列的5名或更多名参与者中>40％具有可归因于研究治疗的AE≥3级，则将暂停一个治疗组中特定队列(即SCCHN或指定GI恶性肿瘤)内的参与者的进一步入选。

将暂停一个治疗组中特定队列内的参与者的入选直至发起人、研究者和监管部门(如果适用)确定适当的行动方案。

治疗组A-抗体Y单一疗法

TGA将包括2个肿瘤特异性队列的至多20名参与者：

·SCCHN：10名参与者

·指定GI恶性肿瘤：10名参与者

可基于新出现的数据通过方案修正添加另外(肿瘤特异性)队列。

治疗组B1-抗体Y+瑞弗利单抗

TGB1将包括2个肿瘤特异性队列的至多20名参与者：

·SCCHN：10名参与者

·指定GI恶性肿瘤：10名参与者

可基于新出现的数据通过方案修正添加另外(肿瘤特异性)队列。

治疗组B2-抗体Y+化合物9

TGB2将包括2个肿瘤特异性队列的至多40名参与者：

·SCCHN：20名参与者

·指定GI恶性肿瘤：20名参与者

可基于新出现的数据通过方案修正添加另外(肿瘤特异性)队列。

治疗组C-抗体Y+瑞弗利单抗+化合物9

TGC将包括2个肿瘤特异性队列的至多40名参与者：

·SCCHN：20名参与者

·指定GI恶性肿瘤：20名参与者

可基于新出现的数据通过方案修正添加另外(肿瘤特异性)队列。

辅助疗法

剂量递增(1a期)和剂量扩展(1b期)中的参与者将具有接受瑞弗利单抗或化合物9的辅助治疗的潜能，如下：

·入选至TGA中的参与者可接受化合物9或瑞弗利单抗的辅助治疗

·入选至TGB1中的参与者可接受化合物9的辅助治疗

·入选至TGB2中的参与者可接受瑞弗利单抗的辅助治疗

在至少2个研究治疗周期后在相应治疗组中并在客观反应(即部分反应(PR)或完全反应(CR))或临床益处(即稳定疾病(SD)(例如不符合客观反应标准的肿瘤收缩和无临床症状恶化))不存在下或在疾病进展后，将允许参与者接受辅助疗法。

在1a期中，如果已宣布TGA中的2个剂量水平为可耐受且已宣布在抗体Y的相应剂量下组合的剂量递增可耐受(例如，仅在已宣布TGB1中的抗体Y 250mg Q2W剂量水平可耐受后，接受抗体Y 250mg Q2W的参与者可接受抗体Y 250mg Q2W+瑞弗利单抗)，则仅可给予TGA中的辅助疗法。类似地，1a期中TGB1或TGB2的参与者也可遵循与上文针对TGA所述相同的说明书接受第三剂的辅助治疗以接受三重疗法。

将允许开始单一疗法的1a期和1b期中的参与者仅接受单一辅助治疗(即，其无法接受第二辅助疗法来接受三重疗法)。将分析最初分配的治疗组内参与者的安全性和功效直至起始辅助疗法。开始辅助疗法后，将作为单独组对其进行分析。

V.研究治疗

表C-1.

表C-2.

表C-3.

VI.功效评价

需要使用RECIST v1.1评估对疾病状态进行客观评价(例如Eisenhauer等人Eur.J.Cancer,2009,45:228-247)。将在筛选时实施功效基线评价，并且将在整个研究中实施其他功效评价。

根据RECIST v1.1的肿瘤成像

在整个研究中对参与者应使用相同的成像技术。基线扫描必须为对比剂计算机断层摄影(CT)或磁共振成像(MRI)，存在对比剂过敏或经医学监测员批准的情况除外。当正电子发射断层摄影/CT扫描的CT组件使用更高的能量和更薄的切片时，其经医学监测员批准可能为可接受的。所有参与者都需要胸部、腹部和骨盆的影像。解剖位点(例如头、颈、脑)的额外成像应适用于所研究的恶性肿瘤。

如果有迹象或症状表明参与者患有涉及CNS的疾病，则将在筛选时实施脑的CT或MRI扫描。

筛选期间的基线评价

必须在第一剂量的研究治疗前28天内实施初始肿瘤成像。位点研究团队必须审查研究前报告和影像以根据RECIST v1.1确认参与者患有可测量的疾病。不应选择位于先前照射区域或经受其他局部区域疗法的区域中的肿瘤病灶作为靶病灶。如果靶病灶根据RECIST v1.1视为可测量的且已展示病灶的最短直径增加至少10mm，则具有先前已经照射或经受其他局部区域疗法的单一靶病灶的参与者可入选。另外，推荐不应选择经选择用于活检的肿瘤病灶作为靶病灶。

如果作为常规临床管控的一部分实施的扫描具有诊断质量且在第一剂量的研究治疗前28天内实施，则所述扫描可接受用作筛选扫描。

治疗期间的疾病反应的评价

应在第一剂量的研究治疗后8周实施第一次成像评价且然后在前12个月内每8周(±7天)实施一次。在12个月的研究治疗后，成像频率可减小至每12周(±14天)。如果临床上有指示，则可更频繁地实施成像评价。成像应遵循日历日且不应因开始周期延迟而延迟。

应在初始记载反应后至少4周通过成像确认反应(CR或PR)。

根据iRECIST指南，应在指示临床稳定参与者的疾病进展的第一次扫描后至少4周但不超过8周确认疾病进展。具有未确认疾病进展的参与者可继续进行治疗直至确认进展。

治疗后疾病反应的评价

如果参与者因疾病进展外的原因中断研究治疗，则应在前12个月内以大约每8周(±7天)且此后以每12周(±14天)的方案指定间隔继续成像评价，直至记载疾病进展、开始新抗癌治疗、撤回同意书、死亡或研究结束，以先发生者为准(从治疗结束(EOT)起最长2年)。

VII.药物动力学评价

血液样品收集

将收集血液用于测定抗体Y血清浓度、瑞弗利单抗血清浓度和化合物9血浆浓度。

将使用经验证方法分析所有样品。将从IV输注部位对侧的手臂收集血液样品。如果使用留置导管，则将去除且丢弃导管中的流体，然后收集血液样品用于PK评价。

用于PK评价的血液收集的时间概述于表D(用于TGA和TGB1)以及表E(TGB2和TGC)中。抽出输注前/剂量前PK样品后，参与者将开始研究治疗。剂量前定义为施用研究治疗前30分钟内。

对于入选至TGB2或TGC中的参与者，在进行PK评价访视(在此期间收集剂量前化合物9样品)(根据表E)时，参与者必须在到达访视之前避免服用化合物9且在到达现场前2小时内不应食用任何食物。在剂量前PK取样且随后施用化合物9后，应阻止进食直至施用化合物9后1小时。

将记录抽出PK血液的确切日期和时间以及抽出血液前化合物9研究药物的末次剂量的日期和时间(如果适用)和最近膳食的时间。将指示并提醒TGB2和TGC中的参与者在访视当天(在此期间将收集剂量前化合物9PK样品)保持化合物9的剂量和进食。将指示并提醒参与者提供其化合物9研究药物的先前剂量的日期和时间以及最近食用膳食或点心的日期和时间。

可基于新出现的PK数据来调整血液取样的时间。如果必要，可在研究期间收集并评估另外PK样品(例如，在参与者接受限制药物的情况下或在研究期间出现任何安全性问题或过量剂量的情况下)。

表D.

a

a

抗药物抗体

将在表F中所概述的时间点收集血液用于检测针对抗体Y或瑞弗利单抗(如果适用)的血清抗药物抗体(ADA)。将从IV输注部位对侧的手臂收集血液样品。如果使用留置导管，则将去除且丢弃导管中的流体，然后收集血液样品用于ADA评价。将使用经验证测定检测ADA。将筛选血清样品的与抗体Y或瑞弗利单抗(如果适用)结合的抗体，并且将报告经确认阳性样品的效价。可实施其他分析以验证抗体的稳定性和/或进一步表征免疫原性。

表F.

VIII.纳入标准

参与者仅在所有以下标准都适用时才有资格纳入研究中：

1.能够理解且愿意签署研究的书面ICF。

2.签署ICF时年龄为18岁或以上的男性或女性参与者。

3.必须愿意且能够适应且遵守所有方案要求，包括所有预定访视和方案程序。

4.愿意经受治疗前和治疗时肿瘤活检(核心或切除)。

5.

6.

7.将收集治疗前肿瘤活检作为预筛选的一部分。

8.对于1a期剂量递增中每一治疗组的早期剂量递增队列中的参与者，将不需要活检。

9.基于通过对治疗前肿瘤活检组织实施的免疫组织化学(IHC)评估CD8+T淋巴细胞存在，发现CD8 T细胞阳性肿瘤。将实施如由发起人所定义CD8 T细胞阳性肿瘤的预选择作为预筛选的一部分。对于1a期剂量递增中每一治疗组的早期剂量递增队列中的参与者，不需要CD8 T细胞阳性肿瘤。

10.东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG)行为状态为0或1。

11.根据RECIST v1.1的可测量疾病。如果已在位于先前照射区域或经受其他局部区域疗法的区域中的肿瘤病灶中展示进展，则仅应选择此类病灶作为靶病灶。推荐不应选择经选择用于活检的肿瘤病灶作为靶病灶。

12.

13.

a.患有经组织学或细胞学确认的口腔、口咽、下咽或喉头鳞状细胞癌、未经受具有治愈意图的局部疗法(手术或放射，使用或不使用化学疗法)的参与者。

注意：排除鼻咽癌、唾液腺癌或非鳞状组织癌。

b.参与者应在用已知赋予临床益处的可用疗法(包括抗PD-(L)1疗法(单独或作为组合的一部分))治疗后具有疾病进展，或不耐受标准治疗或标准治疗不合格。不应因不耐受而中断先前抗PD-(L)1疗法。

14.

a.参与者应在用已知赋予临床益处的可用疗法(包括抗PD-(L)1疗法(如果适用))治疗后具有疾病进展，或不耐受标准治疗或为标准治疗不合格的。不应因不耐受而中断先前抗PD-(L)1疗法。

15.

16.愿意基于以下标准避免怀孕或生子：

a.具有生殖潜力的男性参与者必须同意采取适当的预防措施以避免生子(至少有99％的确定性)，并在末次剂量的研究治疗后190天内不捐献精子进行筛选。应将预防怀孕至少99％有效的允许方法告知参与者，并确认其理解。

b.为育龄期妇女(WOCBP)的女性参与者在筛选(血清测试)时和第1天第一剂量(尿测试)前的妊娠测试必须为阴性，并且必须同意采取适当的预防措施以避免怀孕(至少有99％的确定性)，并且在末次剂量的研究治疗后190天内不捐献卵母细胞进行筛选。应将预防怀孕至少99％有效的允许方法告知参与者，并确认其理解。

c.视为没有生育潜力的女性参与者为合格的。

IX.排除标准

如果参与者适用以下标准中的任一者，则从研究排除：

1.临床上显著的心脏病、不稳定型心绞痛、第1周期第1天起6个月内的急性心肌梗塞和纽约心脏病协会(New York Heart Association)III级或IV级充血性心脏衰竭。

2.研究者认为在临床上有意义的心电图(ECG)异常史或存在。对于待入选包括化合物9的队列的参与者，排除经弗氏(Fridericia，QTcF)间隔>450毫秒(ms)校正的筛选QT间隔；在单一QT间隔校正值(QTc)>450ms的情况下，如果3次ECG的平均QTc<450ms，则参与者可入选。

3.已知活动性中枢神经系统(CNS)转移和/或癌性脑膜炎。先前已接受治疗且患有临床上稳定的脑或CNS转移(在第一剂量的研究治疗前至少4周内通过影像无进展证据且任何神经症状已恢复至基线)，无新的或扩大的脑转移或CNS水肿证据，并且在研究治疗前至少7天内未要求使用类固醇的参与者为合格的。

4.患有活动性或非活动性自身免疫性疾病或综合征(例如类风湿性关节炎、中度或重度银屑病、多发性硬化、炎症性肠病)且在过去2年中需要全身性治疗的参与者，或正在接受自身免疫性疾病或炎症性疾病的全身性疗法(即，使用疾病改善剂、皮质类固醇或免疫抑制药物)的参与者。患有白癜风或已消退的儿童期哮喘/特应性、甲状腺功能减退症(激素替代稳定)、受控哮喘、I型糖尿病、格雷夫斯病(Graves'disease)或桥本氏病(Hashimoto'sdisease)的参与者或经医学监测员批准的参与者在符合所有其他合格标准时将为合格的。替代疗法(例如甲状腺素、胰岛素、用于肾上腺或垂体功能不全的生理性皮质类固醇替代疗法)并不视为全身性治疗的形式，并且为允许的。

5.在第一剂量的研究治疗前7天内诊断为免疫缺陷或正在接受慢性全身性类固醇疗法(每日剂量>10mg的泼尼松(prednisone)或等效物)或任何其他形式的免疫抑制疗法。允许使用≤10mg/天的短期类固醇疗程进行程序预防，吸入或经皮类固醇，或全身性皮质类固醇。

6.正在进展或需要积极治疗的已知另外恶性肿瘤，或在第一剂量的研究治疗2年内有其他恶性肿瘤史，但治愈的皮肤基底细胞癌或鳞状细胞癌、浅表性膀胱癌、前列腺上皮内赘瘤、子宫颈原位癌或其他非侵袭性或无痛恶性肿瘤，或参与者在具有治愈意图的治疗后>1年无疾病的癌症除外。

7.在筛选时具有实验室值的参与者定义于表G中。

表G.

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8.在开始研究治疗之前，尚未从先前疗法(包括先前免疫疗法)的毒性效应和/或先前手术干预的并发症恢复至≤1级。患有预期无法消退的稳定慢性疾患(≤2级)(诸如神经病变和脱发)的参与者为例外且可入选。

9.间质性肺病、间质性肺病病史或活动性非感染性肺炎的证据。

10.建议永久中断疗法的先前免疫疗法期间的免疫相关毒性(根据产品标记或共识指南)，或需要强化或延长免疫抑制以进行管控的任何免疫相关毒性，使用替代激素进行良好控制的内分泌病变除外。

11.使用任何腺苷途径靶向药物(例如A2A受体和/或A2B受体拮抗剂、抗CD38、抗CD39、抗CD-73/CD73拮抗剂)的先前治疗。在医学监测员批准后，可允许用化合物9单一疗法治疗的待入选至剂量递增(1a期)中的参与者入选。

12.在第一剂量的研究治疗之前5个半衰期或28天(以较短者为准)内治疗参与者疾病的任一先前化学疗法、生物疗法或靶向疗法。接受地诺单抗(denosumab)的参与者合格地入选。在抗PD-(L)1疗法后无清除时段(然而，在第一剂量的研究治疗之前，必须完成末次先前抗PD-(L)1疗法的至少1个给药周期)。在第一剂量的研究治疗前的28天内的任何先前放射疗法。已接受放射疗法的参与者必须已从所有放射相关的毒性恢复，无需出于此目的使用皮质类固醇，并且未因治疗而出现放射性肺炎。

13.正在经受另一研究药物的治疗，或已在第一剂量的研究治疗前5个半衰期或28天(以较短者为准)内用研究药物治疗。在参与者接受2019年冠状病毒疾病(COVID-19)的迹象或症状的任何治疗的情况下，应联系医学监测员。

14.

15.在第一剂量的研究治疗的30天内接受活病毒疫苗。活疫苗的实例包括但不限于以下疫苗：麻疹、腮腺炎、风疹、水痘/带状疱疹、黄热病、狂犬病、卡介苗和伤寒疫苗。注射用季节性流感疫苗通常为灭活病毒疫苗并允许使用；然而，鼻内流感疫苗为减毒活疫苗并且不允许使用。

16.在第一剂量的研究治疗1周内出现需要胃肠外抗生素、抗病毒药或抗真菌药的感染。

17.入选时已知或疑似严重急性呼吸综合征-冠状病毒-2(SARS-CoV-2)感染。根据研究者的评估，在阴性SARS CoV-2测试和临床恢复后，可重新评价因SARS-CoV-2感染而未通过筛选的参与者的研究合格性(即重复筛选过程)。

18.需要治疗的活动性B型肝炎病毒(HBV)或C型肝炎病毒(HCV)感染。必须无法检测到HBV-DNA和HCV-RNA。患有明显先前HBV感染(定义为B型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性)、HBsAg抗体阳性和抗B型肝炎核心(抗HBc抗体阳性)的参与者合格地用于本研究。对于患有明显先前HBV感染的参与者，应根据研究者的决定考虑HBV预防。通过实施HBV病毒载量和HBsAg血清学测试，每3个周期监测一次HBV再活化。可根据研究者的决定实施额外病毒血清学测试。先前无HBV感染史、已接种HBV疫苗且HBsAg抗体阳性作为先前暴露的唯一证据的参与者可参加本研究。如果无法检测到HCV-RNA水平，则接受并完成意欲根除病毒的C型肝炎治疗的HCV抗体阳性参与者可参加。在HCV-RNA不为标准护理(SoC)一部分的国家，允许将HCV抗体测试用于筛选目的。在这些情况下，将排除HCV抗体阳性参与者。

19.已知HIV(HIV 1/2抗体)史。

20.器官移植史，包括同种异体干细胞移植或CAR-T细胞疗法。

21.已知对研究药物的任何组分或制剂组分有超敏反应或严重反应。

22.对于待入选包括化合物9的队列的参与者：无法吞咽食物或妨碍口服药物施用的任何上胃肠道伴随疾患。

23.正在怀孕或哺乳。

24.研究者认为会干扰充分参与研究的任何疾患，包括研究治疗的施用和参加必需的研究访视；对参与者构成重大风险；或干扰研究数据的解释。

25.对于在法国实施的研究：以下参与者在法国被排除：根据法国公共卫生法典(French Public Health Code)第L.1121-6条的弱势群体和受法律保护或无法根据法国公共卫生法典L.1121-8条表示同意的成人。

X.目标和终点

表H.

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实施例A：A2A/A2B抑制剂的活性

I.A2A

在黑色低体积384孔聚苯乙烯板(Greiner 784076-25)中实施测定，最终体积为10μL。首先将测试化合物连续稀释于DMSO中且将100nL添加至板孔中，然后添加其他反应组分。DMSO的最终浓度为1％。将

II.腺苷A2B受体环状AMP GS测定

将表达人类腺苷A2B受体的稳定转染的HEK-293细胞(Perkin Elmer)维持于含有10％FBS和100μg/mL遗传霉素(Geneticin，Life Technologies)的MEM培养基中。在测定前18至24小时，从培养物去除遗传霉素。使用利用FRET(荧光共振能量转移)技术的cisbiocAMP-GS动态试剂盒来测量细胞中的cAMP累积。将适当浓度的本公开化合物与10000个细胞/孔于白色96孔半区板(Perkin Elmer)中混合，在室温下轻轻振荡30分钟。将12nM的激动剂NECA(R&DTechnologies)添加至每个孔中，在室温下轻轻振荡60分钟。将检测试剂d2标记的cAMP(受体)和抗cAMP穴状化合物(供体)添加至每孔中，在室温下轻轻振荡60分钟。在Pherastar(BMG Labtech)上读取板，计算荧光比665/620且通过使用GraphPad Prism拟合对照％对log化合物浓度曲线来实施EC

表6.A

指示A

指示A

指示A

指示A

实施例A1：3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈的合成

步骤1：3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈

将4,6-二氯嘧啶-2-胺(2.5g，15.2mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(2.02g，13.7mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(1.06g，0.92mmol)和碳酸钠(3.23g，30.5mmol)于1,4-二噁烷(60mL)和水(5mL)中的混合物用氮气脱气，然后将所得混合物在60℃下加热且搅拌两天。冷却至室温(r.t.)后，浓缩混合物，用水稀释，并且用DCM(30mL x 3)萃取。经MgSO

步骤2：2-(吡啶-2-基)乙酰肼

在室温下，将肼(4.15mL，132mmol)添加至2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯(10g，66.2mmol)的乙醇(66mL)溶液中。将混合物在85℃下加热且搅拌4小时，并且然后冷却至室温。在静置后形成白色固体，经由过滤收集所述固体且其未经进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤3：3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在室温下，将2-(吡啶-2-基)乙酰肼(2.62g，17.34mmol)添加至3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈(4.00g，17.34mmol)乙醇(35mL)溶液中。在回流下加热且搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，并浓缩。将所得残余物吸收至N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(20mL)中且在120℃下搅拌7小时。然后将混合物冷却至室温，倾倒至冰上，并且在室温下搅拌1小时。通过过滤收集所得固体，并且吸收至20mL1N HCl溶液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时，过滤，并且通过添加饱和NaHCO

步骤4：3-(5-氨基-8-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在-30℃下，向3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(2g，6.11mmol)于DMF(12mL)中的混合物中逐份添加NBS(1.09g，6.11mmol)。将反应混合物缓慢升温至0℃，产生均质溶液。在0℃下搅拌1小时后，用饱和NaHCO

步骤5：3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将Pd(Ph

实施例A2：3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈的合成

步骤1：2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯

在0℃下，将浓硫酸(1.42mL，27mmol)添加至2,6-二氟扁桃酸(5g，27mmol)的甲醇(45mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩。向所得浆液中添加饱和NaHCO

步骤2：3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

此化合物为使用与针对实施例A1所述相似的程序、在步骤2中用2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯替代2-(吡啶-2-基)乙酸甲酯来制备。通过手性SFC使用PhenomenexLux纤维素-1柱(21.2x 250mm，5μm粒度)分离两种对映异构体，用等梯度流动相CO

实施例A3：3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-2H-四唑-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物3A)和3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物3B)的合成

步骤1：3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在室温下，将2-羟基乙酰肼(2.34g，26.01mmol)添加至3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈(4.00g，17.34mmol)(实施例A1，步骤1)的乙醇(35mL)溶液中。在回流下加热且搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，并浓缩。将所得残余物吸收至N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(20mL)中且在120℃下搅拌7小时。然后将混合物冷却至室温，倾倒至冰上，并且在室温下搅拌1小时。通过过滤收集所得固体，并且吸收至20mL 1N HCl溶液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时，过滤，并且通过添加饱和NaHCO

步骤2：3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在-30℃下，向3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(1.0g，3.76mmol)于DMF(12mL)中的混合物中逐份添加NBS(0.67g，3.76mmol)。将反应混合物缓慢升温至0℃，产生均质溶液。在0℃下搅拌1小时后，用饱和NaHCO

步骤3：3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将四(三苯基膦)钯(0)(0.067g，0.058mmol)添加至4-(三丁基锡基)嘧啶(0.321g，0.869mmol)、3-(5-氨基-8-溴-2-(羟基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(0.20g，0.579mmol)、CsF(0.176g，1.159mmol)和碘化铜(I)(0.022g，0.116mmol)于1,4-二噁烷(5.0mL)中的混合物中。将反应混合物用N

步骤4：3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在室温下，向3-(5-氨基-2-(羟基甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(0.1g，0.290mmol)于乙腈(10ml)中的混合物中添加亚硫酰氯(0.212ml，2.90mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时，浓缩，并且通过快速色谱纯化，用DCM中的0％至5％甲醇洗脱以提供产物。C

步骤5：3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-2H-四唑-2-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物3A)和3-(5-氨基-2-((5-(吡啶-2-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物3B)的混合物

将3-(5-氨基-2-(氯甲基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(10mg，0.028mmol)、2-(1H-四唑-5-基)吡啶(8.1mg，0.055mmol)和Cs

化合物3A：

实施例A4：3-(5-氨基-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈的合成

步骤1：6-氯-N

向2,6-二氯嘧啶-4-胺(5.0g，31mmol)于2-丙醇(31mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(6.4mL，37mmol)和双(4-甲氧基苄基)胺(7.9g，31mmol)。将所得溶液在100℃下搅拌16小时，冷却至室温，用水(100mL)稀释，并且用EtOAc(100mL)萃取。用水和盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，并浓缩以产生粗产物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤2：7-氯-N

在室温下，将异硫氰酰甲酸O-乙酯(3.1mL，26mmol)添加至6-氯-N

步骤3：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(330mg，0.42mmol)添加至(3-氰基苯基)硼酸(460mg，3.2mmol)、7-氯-N

步骤4：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在0℃下，向3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(330mg，0.66mmol)于DMF(1.4mL)中的溶液中缓慢添加NBS(120mg，0.66mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加水(10mL)。通过过滤收集所得固体，并且干燥以获得所需产物。C

步骤5：3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(350mg，0.61mmol)、4-(三丁基锡基)嘧啶(210μL，0.67mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(70mg，0.060mmol)、碘化铜(I)(23mg，0.12mmol)和氟化铯(180mg，1.2mmol)于二噁烷(4.7mL)中的混合物在微波反应器中在140℃下加热且搅拌30分钟。然后将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土塞(用DCM洗涤)过滤，并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化所得材料，用0％-20％MeOH/DCM洗脱以获得所需产物。C

步骤6：3-(5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

在氮下在50℃下，向溴化酮(II)(91mg，0.407mmol)和亚硝酸叔丁酯(0.054ml，0.407mmol)于乙腈(3mL)中的混合物中逐滴添加乙腈(3mL)中的3-(2-氨基-5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(100mg，0.203mmol)。将混合物在50℃下搅拌2小时。冷却至室温后，添加1N NH

步骤7：3-(5-氨基-2-((3-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将氢化钠(60％于矿物油中，3.8mg，0.095mmol)、3-(5-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(20mg，0.032mmol)和(3-甲基吡啶-2-基)甲醇(9.1μL，0.095mmol)于1,4-二噁烷(1mL)中的悬浮液在110℃下在氮气下加热且搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至室温，浓缩，并且添加TFA(1.0mL)。然后将所得混合物在110℃下搅拌30分钟，冷却至室温，用乙腈稀释，过滤且通过制备型LC-MS(pH 2，含TFA的乙腈/水)纯化以获得呈TFA盐的所需产物。C

实施例A5：3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈的合成

步骤1：3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈

将4,6-二氯嘧啶-2-胺(2.5g，15.24mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(2.016g，13.72mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(1.057g，0.915mmol)和碳酸钠(3.23g，30.5mmol)于1,4-二噁烷(60mL)和水(5mL)中的混合物用氮气脱气，然后将所得混合物在60℃下加热两天。冷却至室温(RT)后，浓缩混合物，然后用水稀释，并且用二氯甲烷(DCM，3x 30mL)萃取。经MgSO

步骤2：3-(5-氨基-2-(羟基(苯基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈

将3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈(100mg，0.434mmol)和2-羟基-2-苯基乙酰肼(108mg，0.650mmol)于乙醇(2ml)中的溶液在95℃下加热且搅拌3小时。冷却至室温后，将反应混合物浓缩至干燥，吸收至N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(1mL)中且在120℃下搅拌7小时。将所得混合物冷却至室温，倾倒至冰上，并且搅拌1小时。用DCM将所得悬浮液萃取三次。经MgSO

实施例A6：3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈的合成

步骤1：3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)-2-氟苯甲腈

经20分钟，向3-溴-2-氟苯甲腈(18.3g，91mmol)于冷却至0℃的THF(60mL)中的溶液中添加THF(1.3M)中的i-PrMgCl LiCl络合物(70.4mL，91mmol)。将混合物在0℃下搅拌50分钟，然后在0℃下添加2-MeTHF(1.9M)中的氯化锌(48.1mL，91mmol)。将反应物在室温下搅拌25分钟，此时一次性添加4,6-二氯嘧啶-2-胺(10g，61.0mmol)。将溶液搅拌10分钟。将四(三苯基膦)钯(1.41g，1.22mmol)添加至混合物中且将反应物在室温下搅拌16小时。完成后，将2,4,6-三巯基三嗪硅胶(2g)添加至反应溶液中。将混合物搅拌1小时且过滤。用乙酸乙酯洗涤固体直至所需产物已完全洗脱(如通过LCMS所检测)。用饱和氯化铵溶液和水洗涤滤液。浓缩有机物以提供粗产物。将水添加至粗材料中且通过过滤收集所得沉淀并在氮气流下干燥。粗材料未经额外纯化即使用。C

步骤2：2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯

在0℃下，将浓硫酸(1.4mL，27mmol)添加至2,6-二氟扁桃酸(5.0g，27mmol)的甲醇(45mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩。向所得浆液中添加饱和NaHCO

步骤3：2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酰肼

在室温下，将肼(3.0mL，96mmol)添加至2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯(10.8g，53mmol)的乙醇(90mL)溶液中。将反应混合物在100℃下搅拌2小时，冷却至室温，浓缩，并且未经进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤4：3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈

标题化合物使用与针对实施例A5步骤2所述相似的程序、用3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)-2-氟苯甲腈替代3-(2-氨基-6-氯嘧啶-4-基)苯甲腈、并用2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酰肼替代2-羟基-2-苯基乙酰肼来制备。通过手性SFC使用Phenomenex(R,R)-Whelk-O1柱(21.2x 250mm，5μm粒度)分离两种对映异构体，用等梯度流动相CO

实施例A7：5-氨基-7-(3-氰基-2-氟苯基)-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-甲腈的合成

步骤1：3-(5-氨基-8-溴-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈

此化合物使用与针对实施例A1步骤4所述相似的程序、用3-(5-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈(来自实施例A6)替代3-(5-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈来制备。C

步骤2：5-氨基-7-(3-氰基-2-氟苯基)-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-甲腈

将3-(5-氨基-8-溴-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈(0.12g，0.25mmol)、ZnCN

实施例A8：3-(5-氨基-2-((2-氟-6-(((1-甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)氨基)甲基)苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈的合成

步骤1：2-(2-氟-6-乙烯基苯基)乙酸甲酯

将2-(2-溴-6-氟苯基)乙酸甲酯(6.0g，24mmol)、磷酸钾(15.5g，73mmol)、乙酸钯(II)(0.55g，2.4mmol)和SPhos(1.0g，2.4mmol)中的混合物添加至500mL压力容器中。然后，添加二噁烷(150mL)和水(15mL)中的4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(6.4ml，36mmol)，将反应混合物用N

步骤2：2-(2-氟-6-乙烯基苯基)-2-羟基乙酸甲酯

将2-(2-氟-6-乙烯基苯基)乙酸甲酯(2.5g，12.9mmol)溶解于THF(130mL)中且冷却至-78℃。逐滴添加THF(1.0M)中的LDA(16.7mL，16.7mmol)，并且将所得溶液在-78℃下搅拌30分钟。然后，将9,9-二甲基四氢-4H-4a,7-桥亚甲基苯并[c][1,2]氧杂氮杂环丙烯并[2,3-b]异噻唑3,3-二氧化物(4.7g，20.6mmol)逐滴添加于THF(0.5M)中。在-78℃下保持30分钟后，将反应混合物升温至0℃且搅拌1小时。用饱和NH

步骤3：2-(2-氟-6-乙烯基苯基)-2-羟基乙酰肼

此化合物使用与针对实施例A6步骤3所述相似的程序、用2-(2-氟-6-乙烯基苯基)-2-羟基乙酸甲酯替代2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酸甲酯来制备。C

步骤4：3-(5-氨基-2-((2-氟-6-乙烯基苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈

此化合物使用与针对实施例A6步骤4所述相似的程序、用2-(2-氟-6-乙烯基苯基)-2-羟基乙酰肼替代2-(2,6-二氟苯基)-2-羟基乙酰肼来制备。C

步骤5：3-(5-氨基-2-((2-氟-6-甲酰基苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈

将水中的四氧化锇(4％w/w,0.36mL，0.12mmol)添加至3-(5-氨基-2-((2-氟-6-乙烯基苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈(930mg，2.30mmol)的THF(18mL)和水(4.6mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5分钟，并且然后添加过碘酸钠(2.5g，11.5mmol)。搅拌1小时后，用饱和NaHCO

步骤6：3-(5-氨基-2-((2-氟-6-(((1-甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)氨基)甲基)苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈

将3-氨基-1-甲基吡咯烷-2-酮(63mg，0.55mmol)和3-(5-氨基-2-((2-氟-6-甲酰基苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-氟苯甲腈(150mg，0.37mmol)于1,2-二氯乙烷(1.9mL)中的溶液在40℃下搅拌2小时。然后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(160mg，0.74mmol)且将反应混合物在室温下搅拌16小时。用饱和NaHCO

实施例A9：3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈的合成

步骤1：3-溴-1-(2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯

向3-溴-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯(5.0g，24.3mmol)、3-(2-溴乙酰基)苯甲腈(5.44g，24.3mmol)于DMF(100mL)中的溶液中添加碳酸钾(3.35g，24.3mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌2小时。然后用水和DCM稀释反应混合物。分离有机层，用盐水洗涤，经Na

步骤2：3-(2-溴-8-氧代-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-溴-1-(2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯(10.5g，30.1mmol)溶解于乙酸(100mL)中，并且添加乙酸铵(23.18g，301mmol)。将混合物在110℃下搅拌12小时。冷却至室温后，用水稀释反应混合物。经由过滤收集所得沉淀，用水洗涤，并且在真空下干燥以提供产物(8.4g，88％)。C

步骤3：3-(2-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(2-溴-8-氧代-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(8.4g，26.6mmol)和POCl

步骤4.3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(2-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(8.99g，26.9mmol)、双(4-甲氧基苄基)胺(10.37g，40.3mmol)和DIPEA(9.4mL，53.7mmol)于DMF(134mL)中的混合物在85℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，并且用水稀释。经由过滤收集所得沉淀，并且干燥以提供产物(14.1g，94％)。C

步骤5：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

在-78℃下，向2-甲基吡啶(0.050g，0.540mmol)于THF(0.5mL)中的溶液中添加2.5M正丁基锂(0.216mL，0.540mmol)。将所得溶液在相同温度下搅拌1小时，然后添加2-甲基四氢呋喃中的1.9M氯化锌(0.284mL，0.540mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌10分钟。

将装填有3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(0.15g，0.270mmol)、乙酸钯(1.1mg，4.7μmol)和2'-(二环己基膦基)-N,N,N',N'-四甲基联苯-2,6-二胺(4.1mg，9.5μmol)的微波瓶在高真空下抽空且用氮气回填。然后将THF(2.0mL)和甲苯(0.5mL)添加至反应小瓶中。将混合物冷却至0℃，并且经由注射器缓慢添加从先前步骤制备的锌试剂。然后将反应混合物在60℃下搅拌过夜，冷却至室温，并且分配于乙酸乙酯与饱和NH

步骤6.3-(8-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(110mg，0.194mmol)和TFA(746μL，9.69mmol)的混合物在80℃下搅拌30分钟，冷却至室温，并浓缩。经由制备型LCMS(pH 2)纯化所得残余物以获得白色固体状产物(TFA盐)(57mg，90％)。C

步骤7.3-(8-氨基-5-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

向3-(8-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(TFA盐)(35mg，0.079mmol)于DMF(0.5mL)/DCM(0.5mL)中的溶液中添加NBS(14.1mg，0.079mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌1小时，并浓缩以提供粗产物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤8.3-(8-氨基-5-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(30mg，0.21mmol)、双(频哪醇)二硼(53mg，0.21mmol)、氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)(15.7mg，0.02mmol)(XPhos Pd G2)和乙酸钾(61.7mg，0.63mmol)于1,4-二噁烷(1mL)中的混合物在100℃下搅拌1小时。然后将3-(8-氨基-5-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(10mg，0.025mmol)、碳酸铯(37.6mg，0.116mmol)和水(0.2mL)添加至反应混合物中。将所得混合物在90℃下加热1小时。浓缩混合物且通过制备型LCMS(pH 2，含TFA的乙腈/水)纯化以提供呈TFA盐的所需产物。C

1

实施例A10：3-(8-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈的合成

步骤1：3-溴-1-(2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯

向3-溴-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯(5.0g，24.3mmol)、3-(2-溴乙酰基)苯甲腈(5.44g，24.3mmol)于DMF(100mL)中的溶液中添加碳酸钾(3.35g，24.3mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌2小时。然后用水和DCM稀释反应混合物。分离有机层，用盐水洗涤，经Na

步骤2：3-(2-溴-8-氧代-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-溴-1-(2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酸甲酯(10.5g，30.1mmol)溶解于乙酸(100mL)中，并且添加乙酸铵(23.18g，301mmol)。将混合物在110℃下搅拌12小时。冷却至室温后，用水稀释反应混合物。经由过滤收集所得沉淀，用水洗涤，并且在真空下干燥以提供产物(8.4g，88％)。C

步骤3：3-(2-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(2-溴-8-氧代-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(8.4g，26.6mmol)和POCl

步骤4：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(2-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(8.99g，26.9mmol)、双(4-甲氧基苄基)胺(10.37g，40.3mmol)和DIPEA(9.4mL，53.7mmol)于DMF(134mL)中的混合物在65℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，并且用水稀释。经由过滤收集所得沉淀，并且干燥以提供产物(14.1g，94％)。C

步骤5：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(10.0g，18.0mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(3.88g，25.2mmol)、磷酸钾(9.55g，45.0mmol)和氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)(567mg，0.72mmol)于1,4-二噁烷(200mL)和水(50mL)中的混合物在85℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并且去除大部分1,4-二噁烷。经由过滤收集所得沉淀，用水洗涤且干燥以提供粗产物(9.1g)，其直接用于下一步骤中。C

步骤6.3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

在0℃下，向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(717mg，1.43mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(254mg，1.43mmol)。将所得混合物搅拌4小时，并且直接通过硅胶柱纯化以提供所需产物(780mg，94％)。C

步骤7：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-(嘧啶-4-基)-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(260mg，0.45mmol)、4-(三丁基锡基)嘧啶(215mg，0.58mmol)、氯化锂(28.4mg，0.67mmol)、氯化铜(I)(67mg，0.67mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(52mg，0.045mmol)于THF(5mL)中的混合物在90℃下搅拌45分钟。用水淬灭反应混合物且用二氯甲烷萃取。浓缩合并的有机层且通过硅胶柱纯化以提供所需产物(176mg，67％)。C

步骤8：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-甲酰基-5-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-(嘧啶-4-基)-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(176mg，0.3mmol)、氧化锇(VIII)(3mg于0.3mL水中，0.015mmol)和过碘酸钠(292mg，1.36mmol)于THF/水(1:1，6mL)中的混合物在65℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并且用二氯甲烷萃取。浓缩合并的有机层，并且通过硅胶柱纯化以提供所需产物(130mg，74％)。C

步骤9：3-(8-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

格任亚试剂(Grignard reagent)的制备：在-10℃下，向1,3-二氟-2-碘苯(142mg，0.6mmol)于四氢呋喃(1mL)中的溶液中添加异丙基氯化镁溶液(296μl，2M)。将所得混合物搅拌1小时，并且直接用于下一步骤中。

在-10℃下，向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-甲酰基-5-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(120mg，0.2mmol)于THF(2mL)中的溶液中添加从先前步骤刚刚制备的格任亚试剂。将反应混合物搅拌30分钟，用氯化铵溶液(4mL)淬灭，并且用二氯甲烷萃取。在真空下浓缩合并的有机层。将所得材料溶解于TFA(5mL)中，并且在80℃下搅拌20分钟。然后将反应混合物冷却至室温，浓缩，并且通过添加NaHCO

直接通过硅胶柱纯化粗材料以提供呈外消旋混合物形式的所需产物(60mg，64％)。然后使用手性HPLC使用手性柱(Phenomenex Lux5um纤维素-4，21.2x250 mm)和己烷中的75％EtOH(20mL/min)溶剂系统分离产物。

分离峰2，并且经由制备型LC/MS(pH＝2，含TFA的乙腈/水)进一步纯化以获得呈TFA盐的所需产物。C

1

实施例A11：3-(8-氨基-2-(氨基(2,6-二氟苯基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈的合成

步骤1：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

/>

向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(实施例A10，步骤5；241mg，0.48mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加NBS(84.6mg，0.48mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌1小时，并浓缩以提供粗产物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤2：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-甲酰基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-乙烯基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(174mg，0.3mmol)、氧化锇(VIII)(3mg于0.3mL水中，0.015mmol)和过碘酸钠(292mg，1.36mmol)于THF/水(1:1，6mL)中的混合物在65℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并且用二氯甲烷萃取。浓缩合并的有机层，并且通过硅胶柱纯化以提供所需产物。C

步骤3：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

格任亚试剂的制备：在-10℃下，向1,3-二氟-2-碘苯(142mg，0.6mmol)于四氢呋喃(1mL)中的溶液中添加异丙基氯化镁溶液(296μl，2M)。将所得混合物搅拌1小时，并且直接用于下一步骤中。

在-10℃下，向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-甲酰基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(120mg，0.2mmol)于THF(2mL)中的溶液中添加从先前步骤刚刚制备的格任亚试剂。将反应混合物搅拌30分钟，用氯化铵溶液(4mL)淬灭，并且用二氯甲烷萃取。在真空下浓缩合并的有机层且通过硅胶柱纯化以提供呈外消旋混合物的所需产物。C

步骤4：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

/>

将3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(382mg，0.55mmol)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(137mg，0.65mmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦-(2'-氨基联苯-2-基)(氯)钯(1:1)(17mg，21.6μmol)和Cs

步骤5：3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-(氯(2,6-二氟苯基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

在室温下，向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(201mg，0.29mmol)于2mL二氯甲烷中的溶液中添加亚硫酰氯(105μl，1.435mmol)。将所得混合物搅拌4小时，浓缩且未经任何进一步纯化即用于下一步骤中。C

步骤6：3-(8-氨基-2-(氨基(2,6-二氟苯基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈

向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-(氯(2,6-二氟苯基)甲基)-5-(4-甲基噁唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(40mg，0.084mmol)于1mL DMSO中的溶液中添加氨溶液(1mL)。将混合物使用微波条件在100℃下加热10小时，然后用水稀释且用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤合并的有机层，经MgSO

实施例A12：3-(8-氨基-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-5-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈的合成

/>

向3-(8-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-2-((2,6-二氟苯基)(羟基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-6-基)苯甲腈(实施例A11，步骤3；0.518g，0.638mmol)、2,6-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.346g，1.48mmol)和二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦-(2'-氨基联苯-2-基)(氯)钯(1:1)(0.058g，0.074mmol)于二噁烷(3.0mL)和水(0.60mL)中的溶液中添加磷酸钾(0.472g，2.23mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌1小时。然后用水和DCM稀释反应混合物。分离各层，用DCM萃取水层，并且经MgSO

然后使用手性HPLC使用手性柱(Phenomenex Lux 5um纤维素-2，21.1x250 mm)和己烷中的35％EtOH(20mL/min)溶剂系统分离产物。分离峰2，并且使用制备型LC-MS(pH＝2，含TFA的乙腈/水)进一步纯化以获得呈TFA盐的所需产物。C

实施例A13：3-(4-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈的合成

步骤1.4,6-二氯-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶

在0℃下，将NaNO

步骤2.6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺

将4,6-二氯-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶(600mg，3.17mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.53mL，3.49mmol)和三乙胺(0.53mL，3.81mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在110℃下搅拌3天。在硅胶柱上直接纯化提供所需产物(875mg，86％)。C

步骤3.6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺

在0℃下，向6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(875mg，2.74mmol)、吡啶-2-基甲醇(0.317mL，3.28mmol)和三苯基膦(1436mg，5.47mmol)于DCM(20mL)中的混合物中添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.647mL，3.28mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。在硅胶柱上直接纯化提供所需产物(375mg，33.4％产率)。C

步骤4.3-(4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

向6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(375mg，0.913mmol)和(3-氰基苯基)硼酸(268mg，1.825mmol)于1,4-二噁烷(10mL)和水(1.00mL)中的混合物中添加碳酸铯(595mg，1.825mmol)。将所得混合物用N

步骤5.3-(4-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

将3-(4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(300.3mg，0.629mmol)于TFA(5mL)中的溶液在100℃下搅拌30分钟。在减压下蒸发TFA且然后添加20mL饱和NaHCO

步骤6.3-(4-氨基-7-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

/>

将3-(4-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(175mg，0.535mmol)和1-溴吡咯烷-2,5-二酮(100mg，0.561mmol)于THF(10mL)中的混合物在0℃下搅拌30分钟且然后用饱和NaHCO

步骤7.3-(4-氨基-2-(吡啶-2-基甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

首先将3-(4-氨基-7-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(182mg，0.448mmol)、4-(三丁基锡基)嘧啶(496mg，1.344mmol)和氯化铜(I)(53.2mg，0.538mmol)、氯化锂(22.79mg，0.538mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(51.8mg，0.045mmol)于THF(1mL)中的混合物用N

实施例A14：3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈的合成

步骤1.6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺

在0℃下，向6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(实施例A13，步骤2；1000mg，3.13mmol)、(3-氟吡啶-2-基)甲醇(477mg，3.75mmol)和三苯基膦(1641mg，6.25mmol)于DCM(1.7mL)中的混合物中添加偶氮二甲酸二异丙酯(739μl，3.75mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。在硅胶柱上直接纯化提供所需产物(433mg，32％)。C

步骤2.3-(4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

将碳酸铯(658mg，2.019mmol)添加至6-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(433mg，1.010mmol)和(3-氰基苯基)硼酸(297mg，2.019mmol)于1,4-二噁烷(10.0mL)和水(1.0mL)中的混合物中。将所得混合物用N

步骤3.3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

将3-(4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(357.3mg，0.721mmol)于TFA(5mL)中的溶液在100℃下搅拌1小时。在减压下蒸发TFA，并且然后添加20mL饱和NaHCO

步骤4.3-(4-氨基-7-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

将3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(213mg，0.617mmol)和1-溴吡咯烷-2,5-二酮(220mg，1.234mmol)于THF(5mL)中的混合物在0℃下搅拌1小时。在硅胶上直接纯化提供所需产物(175mg，67％)。C

步骤5.3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-7-(嘧啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈

首先将3-(4-氨基-7-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(220mg，0.519mmol)、4-(三丁基锡基)嘧啶(383mg，1.037mmol)和氯化铜(I)(61.6mg，0.622mmol)、氯化锂(26.4mg，0.622mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(59.9mg，0.052mmol)于THF(1mL)中的混合物用N

实施例A15：3-(4-氨基-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-7-(吡啶-4-基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈的合成

将碳酸铯(46.1mg，0.141mmol)添加至3-(4-氨基-7-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈(30mg，0.071mmol)和吡啶-4-基硼酸(17.38mg，0.141mmol)于1,4-二噁烷(2mL)和水(0.2mL)中的混合物中。将所得混合物用N

实施例A16：3-(4-氨基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)-2-氟苯甲腈的合成

步骤1.3-(4-氨基-7-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)-2-氟苯甲腈

此化合物通过遵循实施例A13的步骤1至步骤6的相似程序、在步骤4中用(3-氰基-2-氟苯基)硼酸替代(3-氰基苯基)硼酸来制备。C

步骤2.3-(4-氨基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)-2-氟苯甲腈

此化合物通过遵循实施例A15中的相似程序、用(1-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸替代吡啶-4-基硼酸、且用3-(4-氨基-7-溴-2-(吡啶-2-基甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)-2-氟苯甲腈替代3-(4-氨基-7-溴-2-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-6-基)苯甲腈来制备。C

实施例A17：7-(1-((5-氯吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮的合成

步骤1：3-(戊基氨基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯

将3-氨基-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(5g，32.4mmol)、戊醛(3.79ml，35.7mmol)和氰基硼氢化钠(2.038g，32.4mmol)在甲醇(64.9ml)中在室温下混合过夜。在减压下浓缩反应混合物。通过快速色谱(己烷中的0％至100％EtOAc)纯化粗残余物以获得所需产物(4.4g，61％)。C

步骤2：3-(3-(乙氧基羰基)-1-戊基硫脲基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯

向小瓶中装填3-(戊基氨基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(4.4g，19.62mmol)、二氯甲烷(39.2ml)和乙氧基羰基异硫氰酸酯(2.78ml，23.54mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水(40ml)淬灭反应混合物，并且分离各层。用二氯甲烷(3x 40mL)萃取水层，并且经MgSO

步骤3：1-戊基-2-硫酮基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮

向微波小瓶中装填3-(3-(乙氧基羰基)-1-戊基硫脲基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(7.31g，20.57mmol)和乙醇钠(21％w/w，8.45ml，22.62mmol)溶液。将小瓶盖上盖子且在微波反应器中在120℃下加热10分钟。添加1M HCl溶液，使反应混合物达到中性pH，并且将固体产物过滤并干燥(3.1g，64％)。C

步骤4：2-亚肼基-1-戊基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮

向小瓶中装填1-戊基-2-硫酮基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮(3.13g，13.19mmol)和肼水合物(20mL)。将反应混合物在100℃下搅拌过夜。过滤所形成的固体且用水洗涤以获得所需产物(2.2g，70％)。C

步骤5：3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

向小瓶中装填(E)-2-亚肼基-1-戊基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮(4.8g，20.40mmol)、一滴三氟乙酸和原乙酸三乙酯(20mL)。将反应混合物加热至110℃并保持3小时。将悬浮液过滤，用己烷洗涤，并且干燥(4.0g，76％)。C

步骤6：3-甲基-9-戊基-6-(苯基磺酰基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

向小瓶中装填3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(来自步骤1)(4g，15.43mmol)、二氯甲烷(40mL)、二甲基氨基吡啶(0.188g，1.543mmol)、三乙胺(3.23ml，23.14mmol)和苯磺酰氯(2.187ml，16.97mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。用水淬灭反应混合物，并且分离各层。用二氯甲烷(3x 40mL)萃取水层，并且经MgSO

步骤7：7-溴-3-甲基-9-戊基-6-(苯基磺酰基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

向小瓶中装填3-甲基-9-戊基-6-(苯基磺酰基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(1g，2.503mmol)、无水THF(30mL)且将混合物冷却至-78℃。逐滴添加二异丙基酰胺锂溶液(1M于己烷/THF中，3.13ml，3.13mmol)。将反应混合物在-78℃下维持1.5小时。将1,2-二溴-1,1,2,2-四氯乙烷(1.223g，3.75mmol)于无水THF(3ml)中的溶液逐滴添加至反应混合物中且将反应混合物在-78℃下再维持1.5小时。用饱和NH

步骤8：3-氯-5-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)吡啶

向小瓶中装填4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.5g，2.58mmol)、3-(溴甲基)-5-氯吡啶氢溴酸盐(0.741g，2.58mmol)、碳酸铯(2.52g，7.73mmol)和DMF(6.44ml)。将反应混合物在60℃下搅拌1小时。用水(10ml)淬灭反应混合物且用二氯甲烷(10ml)稀释。分离各层，并且用二氯甲烷(3x 10mL)萃取水层。经MgSO

步骤9：7-(1-((5-氯吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

向小瓶中装填7-溴-3-甲基-9-戊基-6-(苯基磺酰基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(0.01g，0.021mmol)、3-氯-5-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)吡啶(0.013g，0.042mmol)、氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)(5.00mg，0.006mmol)和磷酸钾(0.016g，0.074mmol)。添加1,4-二噁烷(0.35ml)和水(0.07ml)且将反应混合物用氮气吹扫5分钟，然后在90℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温且添加氢氧化钠(10mg)。将反应混合物在40℃下搅拌60分钟。将反应混合物冷却至室温且用DMF(5ml)稀释。通过制备型HPLC(pH 2，含TFA的乙腈/水)纯化，提供呈TFA盐的产物(2mg，21％)。C

实施例A18：3-甲基-7-(1-((5-甲基吡啶-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮的合成

此化合物使用与针对实施例A17所述相似的程序、在步骤8中使用3-(溴甲基)-5-甲基吡啶替代3-(溴甲基)-5-氯吡啶氢溴酸盐来制备。C

实施例A19：3-甲基-9-戊基-7-(1-(噻吩并[3,2-b]吡啶-6-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮的合成

此化合物使用与针对实施例A17所述相似的程序、在步骤8中使用6-(溴甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶替代3-(溴甲基)-5-氯吡啶氢溴酸盐来制备。C

实施例A20：7-(1-((2-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

步骤1：6-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯

向烧瓶中装填4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(.5g，2.58mmol)、6-(羟基甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(0.339g，1.288mmol)、三苯基膦(0.743g，2.83mmol)和THF(12ml)。将溶液冷却至0℃且逐滴添加DIAD(0.601ml，3.09mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释混合物且用水洗涤，干燥并浓缩。通过柱色谱纯化产物，用己烷/EtOAc(最大EtOAc 60％)洗脱，以提供产物。C

步骤2：7-溴-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

将TBAF(1.0M于THF中)(2.0ml，2.0mmol)添加至7-溴-3-甲基-9-戊基-6-(苯基磺酰基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(0.360g，0.753mmol)于THF(4.0ml)中的溶液中，并且然后将反应物在50℃下搅拌1小时。去除溶剂且通过柱色谱纯化产物，用CH

步骤3：6-((4-(3-甲基-5-氧代-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-7-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯

将7-溴-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(来自实施例A20，步骤2)(0.040g，0.118mmol)、6-((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(0.062g，0.142mmol)、二氯[1,1'-双(二环己基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(Pd-127)(8.94mg，0.012mmol)和氟化铯(0.090g，0.591mmol)于t-BuOH(1.5ml)/水(0.6ml)中的混合物抽真空且用N

步骤4：3-甲基-9-戊基-7-(1-((1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

将TFA(0.5ml，6.49mmol)添加至6-((4-(3-甲基-5-氧代-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-7-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(50.0mg，0.088mmol)于CH

步骤5：7-(1-((2-(2-(二甲基氨基)乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基-9-戊基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮

在室温下，将二甲基甘氨酰氯(3.10mg，0.026mmol)添加至3-甲基-9-戊基-7-(1-((1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-d][1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-5-酮(6.0mg，0.013mmol)和三乙胺(8.89μl，0.064mmol)于CH

实施例A21.3-(2-((5-(1H-吡唑-1-基)-2H-四唑-2-基)甲基)-5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物21A)和3-(2-((5-(1H-吡唑-1-基)-1H-四唑-1-基)甲基)-5-氨基-8-(嘧啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)苯甲腈(化合物21B)

标题化合物的混合物使用与针对实施例A3所述相似的程序、用5-(1H-吡唑-1-基)-1H-四唑替代2-(1H-四唑-5-基)吡啶来制备。通过制备型LC-MS(pH 2，含TFA的乙腈/水)纯化化合物21A以提供呈TFA盐的产物。C

除了本文所述的修改外，本领域技术人员根据前面的描述将明了本发明的各种修改。此类修改还意图落在所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的每一参考文献(包括所有专利、专利申请和出版物)以引用的方式整体并入本文中。

序列表

<110> 因赛特公司

<120> 包含A2A/A2B抑制剂、PD-1/PD-L1抑制剂和抗CD73抗体的组合疗法

<130> 20443-0714WO1

<140>

<141>

<150> 63/131,659

<151> 2020-12-29

<160> 101

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 288

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 1015

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

202530

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

354045

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

505560

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65707580

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

859095

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 2

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 2

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

202530

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe

505560

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 3

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 3

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

202530

Gly Met Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

354045

Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser

505560

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65707580

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys

859095

Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 4

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 4

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

202530

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe

505560

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 5

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

202530

Gly Met Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

354045

Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser

505560

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65707580

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys

859095

Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 6

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 6

Ser Tyr Trp Met Asn

1 5

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 7

Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe Lys

1 5 1015

Asp

<210> 8

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 8

Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 9

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 9

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Met Ser Phe Met Asn Trp

1 5 1015

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 10

Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 11

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 12

<400> 12

000

<210> 13

<400> 13

000

<210> 14

<400> 14

000

<210> 15

<400> 15

000

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 16

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly

1 5

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 17

Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 18

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 18

Ala Arg Tyr Asp Tyr Leu Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 19

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 19

Gln Asp Val Ser Thr Ala

1 5

<210> 20

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 20

Ser Ala Ser

1

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 21

Gln Gln His Tyr Asn Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 22

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 1015

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

202530

Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

505560

Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65707580

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Tyr Asp Tyr Leu Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 23

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65707580

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Thr Pro Tyr

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 1015

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

202530

Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

505560

Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65707580

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Tyr Asp Tyr Leu Gly Ser Ser Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

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210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 25

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 25

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65707580

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Thr Pro Tyr

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

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210

<210> 26

<400> 26

000

<210> 27

<400> 27

000

<210> 28

<400> 28

000

<210> 29

<400> 29

000

<210> 30

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 30

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ala Val Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Glu Ile Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 31

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 31

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

1 5 1015

Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu

202530

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

354045

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

505560

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65707580

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro His Phe

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Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

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Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

130 135 140

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

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Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

165 170 175

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多肽"

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

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Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Glu Ile Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

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Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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1

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Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro His

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<220>

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<400> 59

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

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多肽"

<400> 60

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser

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Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp

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<220>

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多肽"

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Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

1 5 1015

Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu

202530

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

354045

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

505560

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65707580

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro His Phe

859095

Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ala Val Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Glu Ile Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 63

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

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505560

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<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 66

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser

1 5 1015

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp

202530

Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

354045

Val Met Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

505560

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr Leu

65707580

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

859095

Thr Glu Ile Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

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<400> 69

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 70

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Gly Gly Val Ala Arg Leu Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala

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Ile Trp Phe Thr Val Tyr Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn

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Ala Leu Arg Tyr Asp Ala Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn

859095

Gly Val Glu Gly Leu Ile Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro

100 105 110

Ile Leu Ser Ala Asn Ile Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile

115 120 125

Ser Gly Leu Tyr Leu Pro Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val

130 135 140

Val Gly Ile Val Gly Tyr Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn

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Pro Gly Thr Asn Leu Val Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro

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180 185 190

Gly His Ser Gly Phe Glu Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg

195 200 205

Gly Val Asp Val Val Val Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr

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Gly Asn Pro Pro Ser Lys Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile

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Val Thr Ser Asp Asp Gly Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala

245 250 255

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Pro Glu Asp Pro Ser Ile Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys

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Leu Asp Asn Tyr Ser Thr Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu

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325 330 335

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370 375 380

Leu Ala Ala Val Leu Pro Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu

385 390 395 400

Lys Gly Ser Thr Leu Lys Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr

405 410 415

Gly Gln Ser Thr Gly Glu Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val

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<211> 523

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<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 71

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Glu Pro Asn Val Leu Phe Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr

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Ile Trp Phe Thr Val Tyr Lys Gly Leu Glu Val Ala His Phe Met Asn

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Ile Leu Gly Tyr Asp Ala Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn

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Gly Val Glu Gly Leu Ile Asp Pro Leu Leu Arg Asn Val Lys Phe Pro

100 105 110

Ile Leu Ser Ala Asn Ile Lys Ala Arg Gly Pro Leu Ala His Gln Ile

115 120 125

Ser Gly Leu Phe Leu Pro Ser Lys Val Leu Ser Val Gly Gly Glu Val

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Val Gly Ile Val Gly Tyr Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn

145 150 155 160

Pro Gly Thr Asn Leu Val Phe Glu Asp Glu Ile Ser Ala Leu Gln Pro

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Glu Val Asp Lys Leu Lys Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu

180 185 190

Gly His Ser Gly Phe Glu Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg

195 200 205

Gly Val Asp Ile Val Val Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr

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Gly Asn Pro Pro Ser Lys Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile

225 230 235 240

Val Thr Ala Asp Asp Gly Arg Gln Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala

245 250 255

Phe Gly Lys Tyr Leu Gly Tyr Leu Lys Val Glu Phe Asp Asp Lys Gly

260 265 270

Asn Val Ile Thr Ser Tyr Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile

275 280 285

Pro Glu Asp Ala Thr Ile Lys Ala Asp Ile Asn Gln Trp Arg Ile Lys

290 295 300

Leu Asp Asn Tyr Ser Thr Gln Glu Leu Gly Arg Thr Ile Val Tyr Leu

305 310 315 320

Asp Gly Ser Thr Gln Thr Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn

325 330 335

Leu Ile Cys Asp Ala Met Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Pro Asp Glu

340 345 350

Met Phe Trp Asn His Val Ser Met Cys Ile Val Asn Gly Gly Gly Ile

355 360 365

Arg Ser Pro Ile Asp Glu Lys Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn

370 375 380

Leu Ala Ala Val Leu Pro Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu

385 390 395 400

Lys Gly Ser Thr Leu Lys Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr

405 410 415

Gly Gln Ser Thr Gly Glu Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val

420 425 430

Tyr Asp Ile Asn Arg Lys Pro Trp Asn Arg Val Val Gln Leu Glu Val

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Leu Cys Thr Lys Cys Arg Val Pro Ile Tyr Glu Pro Leu Glu Met Asp

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<210> 72

<211> 523

<212> PRT

<213> 猕猴属(Macaca sp.)

<400> 72

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Gln Thr Ser Glu Asp Ser Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met

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Gly Gly Val Ala Arg Leu Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala

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Glu Pro Asn Val Leu Leu Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr

505560

Ile Trp Phe Thr Val Tyr Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn

65707580

Ala Leu Arg Tyr Asp Ala Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn

859095

Gly Val Glu Gly Leu Ile Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro

100 105 110

Ile Leu Ser Ala Asn Ile Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile

115 120 125

Ser Gly Leu Tyr Leu Pro Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val

130 135 140

Val Gly Ile Val Gly Tyr Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn

145 150 155 160

Pro Gly Thr Asn Leu Val Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro

165 170 175

Glu Val Asp Lys Leu Lys Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu

180 185 190

Gly His Ser Gly Phe Glu Thr Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg

195 200 205

Gly Val Asp Val Val Val Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr

210 215 220

Gly Asn Pro Pro Ser Lys Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile

225 230 235 240

Val Thr Ser Asp Asp Gly Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala

245 250 255

Phe Gly Lys Tyr Leu Gly Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly

260 265 270

Asn Val Ile Ser Ser His Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile

275 280 285

Pro Glu Asp Pro Ser Ile Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys

290 295 300

Leu Asp Asn Tyr Ser Thr Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu

305 310 315 320

Asp Gly Ser Ser Gln Ser Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn

325 330 335

Leu Ile Cys Asp Ala Met Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu

340 345 350

Met Phe Trp Asn His Val Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile

355 360 365

Arg Ser Pro Ile Asp Glu Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn

370 375 380

Leu Ala Ala Val Leu Pro Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu

385 390 395 400

Lys Gly Ser Thr Leu Lys Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr

405 410 415

Gly Gln Ser Thr Gly Glu Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val

420 425 430

Tyr Asp Leu Ser Arg Lys Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val

435 440 445

Leu Cys Thr Lys Cys Arg Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp

450 455 460

Glu Ile Tyr Lys Val Ile Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp

465 470 475 480

Gly Phe Gln Met Ile Lys Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp

485 490 495

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 78

Ala Ala Val Leu Pro Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln

1 5 10

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<211> 20

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 79

Ile Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 94

Met Pro Ile Met Gly Ser Ser Val Tyr Ile Thr Val Glu Leu Ala Ile

1 5 1015

Ala Val Leu Ala Ile Leu Gly Asn Val Leu Val Cys Trp Ala Val Trp

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Leu Asn Ser Asn Leu Gln Asn Val Thr Asn Tyr Phe Val Val Ser Leu

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Ala Ala Ala Asp Ile Ala Val Gly Val Leu Ala Ile Pro Phe Ala Ile

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Thr Ile Ser Thr Gly Phe Cys Ala Ala Cys His Gly Cys Leu Phe Ile

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Ala Cys Phe Val Leu Val Leu Thr Gln Ser Ser Ile Phe Ser Leu Leu

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Ala Ile Ala Ile Asp Arg Tyr Ile Ala Ile Arg Ile Pro Leu Arg Tyr

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Asn Gly Leu Val Thr Gly Thr Arg Ala Lys Gly Ile Ile Ala Ile Cys

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Glu Gly Gln Val Ala Cys Leu Phe Glu Asp Val Val Pro Met Asn Tyr

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Leu Leu Ser His Glu Leu Lys Gly Val Cys Pro Glu Pro Pro Gly Leu

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 95

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Ile Ala Ala Leu Ser Val Ala Gly Asn Val Leu Val Cys Ala Ala Val

202530

Gly Thr Ala Asn Thr Leu Gln Thr Pro Thr Asn Tyr Phe Leu Val Ser

354045

Leu Ala Ala Ala Asp Val Ala Val Gly Leu Phe Ala Ile Pro Phe Ala

505560

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Leu Ala Val Ala Val Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Cys Val Pro Leu Arg

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115 120 125

Leu Trp Val Leu Ala Phe Gly Ile Gly Leu Thr Pro Phe Leu Gly Trp

130 135 140

Asn Ser Lys Asp Ser Ala Thr Asn Asn Cys Thr Glu Pro Trp Asp Gly

145 150 155 160

Thr Thr Asn Glu Ser Cys Cys Leu Val Lys Cys Leu Phe Glu Asn Val

165 170 175

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180 185 190

Pro Pro Leu Leu Ile Met Leu Val Ile Tyr Ile Lys Ile Phe Leu Val

195 200 205

Ala Cys Arg Gln Leu Gln Arg Thr Glu Leu Met Asp His Ser Arg Thr

210 215 220

Thr Leu Gln Arg Glu Ile His Ala Ala Lys Ser Leu Ala Met Ile Val

225 230 235 240

Gly Ile Phe Ala Leu Cys Trp Leu Pro Val His Ala Val Asn Cys Val

245 250 255

Thr Leu Phe Gln Pro Ala Gln Gly Lys Asn Lys Pro Lys Trp Ala Met

260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

Ile Ser Arg Tyr Leu Leu Cys Gln Ala Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

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<210> 96

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 96

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115

<210> 97

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 97

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 1015

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Leu Ser Asn Ile Gly Arg Asn

202530

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505560

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 100

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr

202530

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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

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<210> 101

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 101

Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp

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