一种构树组织培养的培养基及制备方法

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，尤其是涉及一种构树组织培养的培养基及制备方法。

背景技术

本发明采用的构树，桑科，构属，别称：楮树、构桃树、沙纸树，其生长速度快，适应能力强，在我国及东南亚国家分布广泛。由于其叶和嫩枝蛋白质含量高，是畜禽饲料的好原料，且以构树为原料制作的饲料，能明显改善畜禽肉食品的品质，其枝杆和皮是造纸的好原料，因此，近年来人工培育构树苗，大面积种植构树，发展构树产业就受到政府、企业及农户的高度重视与关注。想要获得大量构树种苗，采用组织培养的技术方法育苗是短时间内大量获得构树种苗的最佳方法。然而现今构树组培育苗所采用的培养基多为标准的植物组培培养基，即MS培养基，或在MS培养基的基础上对维生素、微量元素、生长调节物质的用量进行适当的调整。但MS培养基不可能与构树组织和细胞发育所需营养完全一致，因此在组培育苗实践中所表现出来的结果是：培养瓶中的幼芽分裂速度慢，易于发黄；转入继代苗培养时生长不旺盛，甚至萎缩至死；既使进入营养杯练苗培养阶段，由于营养不足、不全，幼苗先天发育健全，导致成活率较低(30-60％)，严重的甚至全部死亡，这对于育苗企业和种植企业来说是实实在在的损失。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种构树组织培养的培养基，该培养基可以加速原生代构树组培苗生根快，牙苗裂植快，继代苗生长速度快，进入练苗阶段苗木健壮，根系发达，成活率高达90％以上，对自然界光照、温度、湿度变化的适应性强。

本发明的第二目的在于提供一种上述构树组织培养的培养基的制备方法，该方法操作简单、成本低。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种构树组织培养的培养基，所述培养基由MS培养基和构树的嫩叶提取液按照(10-20):1的体积比混合而成。

本发明的培养基由MS培养基与组培相对应的构树品种的嫩叶提取液组成，MS培养基是国内外通用的植物组培培养基，国内外市场均有出售，一般无须自行配置。构树的嫩叶提取液中含有丰富的构树组织和细胞分裂及发育所需的全营养物质，包括20多种氨基酸和钙、磷、钾、钠、铁、锰、锌、钼、铜、钴等微量元素，以及B族维生素、VC、生物素、泛酸钙、肌醇等多种维生素，而且这些天然营养物质的平衡度远高于人工配制的MS培养基，这对于弥补植物组培MS培养基营养不足，和解决MS培养基营养平衡度不高的缺陷具有意想不到的效果，可以加速原生代构树组培苗生根快，牙苗裂植快，继代苗生长速度快，进入练苗阶段苗木健壮，根系发达，成活率高达90％以上，对自然界光照、温度、湿度变化的适应性强。

优选地，所述MS培养基和构树的嫩叶提取液按照15:1的体积比混合而成。发明人经过大量的实践得到，MS培养基和构树的嫩叶提取液按照15:1的体积比进行配比后，得到的构树组织培养的培养基的育苗效果最佳。

优选地，所述嫩叶提取液的嫩叶采用离构树枝顶端5片内的嫩叶，因为嫩叶所含有的利于植物细胞的营养素最丰富，比如生物素的含量是一年生老树叶子的5-10倍。

除此之外，本发明还提供了上述构树组织培养的培养基的制备方法，包括如下步骤：

将MS培养基和构树的嫩叶提取液按比例搅拌混合均匀，得到所述的构树组织培养的培养基。

优选地，所述MS培养基在120℃恒温灭菌15-25分钟后和嫩叶提取液按比例搅拌混合均匀。

优选地，所述嫩叶提取液的制备方法包括如下步骤：

(1)、将构树嫩叶漂洗后浸入双氧水中、浸泡、漂洗、沥干、切碎、破碎成浆状；

(2)、再经除渣、除菌、消毒后得到所述的嫩叶提取液。

优选地，所述步骤(1)中的浸泡时间为30-60分钟。

优选地，所述步骤(1)中双氧水的浓度为0.5％。

优选地，所述步骤(2)中采用过滤机过滤进行除菌，所述过滤机的滤芯孔径小于100nm。

优选地，所述步骤(2)中采用巴氏消毒，所述巴氏消毒的温度为80-85℃，消毒时间为20-30分钟。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、可以加速原生代构树组培苗生根快，初生根需时间为4-5天，平均提前3-5天。

2、芽苗裂殖快，第二根芽苗裂殖并露出培养基表面的时间为10-12天，平均提前5-7天。

3、继代苗生长速度快，幼苗生长到3-4cm、3片小叶时仅需20-25天，由单芽裂殖到6-8株幼苗所需时间为30-35天，比单纯使用标准植物组培MS培养基缩短5-10天。

4、进入练苗阶段苗木健壮，叶片深绿，根系发达，对自然界光照、温度、湿度变化的适应性强，构树组培苗成活率高达90％以上。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

采摘生长茂盛、离枝顶端5片以内的构树嫩叶1000克，先以清水漂洗三次，然后进入无菌室在超净工作台用无菌生理盐水漂洗两次，再在0.5％浓度的双氧水中浸泡30分钟后置于无菌纯水中漂洗两次，取出构树的嫩叶，沥干水份后用无菌刀片将其切碎，再置于已灭菌的高速匀浆机内将构树嫩叶破碎成浆状，再以无菌滤布过滤除渣，滤液再经过滤机过滤，其中，过滤机的滤芯孔径小于100nm，达到彻底除渣除菌的目的，经过滤机过滤所得滤液进行巴氏消毒一次，消毒的温度控制在80℃，时间控制在20分钟，得到的构树的嫩叶提取液备用。

取1000mL MS培养基在120℃恒温灭菌15分钟后，加入100mL构树的嫩叶提取液进行搅拌混合均匀，得到本发明的构树组织培养的培养基。

实施例2

采摘生长茂盛、离枝顶端5片以内的构树嫩叶1000克，先以清水漂洗三次，然后进入无菌室在超净工作台用无菌生理盐水漂洗两次，再在0.5％浓度的双氧水中浸泡60分钟后置于无菌纯水中漂洗两次，取出构树的嫩叶，沥干水份后用无菌刀片将其切碎，再置于已灭菌的高速匀浆机内将构树嫩叶破碎成浆状，再以无菌滤布过滤除渣，滤液再经过滤机过滤，其中，过滤机的滤芯孔径小于100nm，达到彻底除渣除菌的目的，经过滤机过滤所得滤液进行巴氏消毒一次，消毒的温度控制在85℃，时间控制在30分钟，得到的构树的嫩叶提取液备用。

取1000mL MS培养基在120℃恒温灭菌25分钟后，加入50mL构树的嫩叶提取液进行搅拌混合均匀，得到本发明的构树组织培养的培养基。

实施例3

采摘生长茂盛、离枝顶端5片以内的构树嫩叶1000克，先以清水漂洗三次，然后进入无菌室在超净工作台用无菌生理盐水漂洗两次，再在0.5％浓度的双氧水中浸泡45分钟后置于无菌纯水中漂洗两次，取出构树的嫩叶，沥干水份后用无菌刀片将其切碎，再置于已灭菌的高速匀浆机内将构树嫩叶破碎成浆状，再以无菌滤布过滤除渣，滤液再经过滤机过滤，其中，过滤机的滤芯孔径小于100nm，达到彻底除渣除菌的目的，经过滤机过滤所得滤液进行巴氏消毒一次，消毒的温度控制在82℃，时间控制在25分钟，得到的构树的嫩叶提取液备用。

取1000mL MS培养基在120℃恒温灭菌25分钟后，加入75mL构树的嫩叶提取液进行搅拌混合均匀，得到本发明的构树组织培养的培养基。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明。