含三氮唑的核输出蛋白抑制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求于2021年08月06日向中华人民共和国国家知识产权局提交的第202110900308.1号中国发明专利申请的权益和优先权，在此将其全部内容以援引的方式整体并入本文中。

技术领域

本申请属于药物化学领域，提供了一种含三氮唑的核输出蛋白抑制剂及其制备方法，并涉及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

背景技术

核输出蛋白-1(exportin-1(也称为CRM-1和XPO-1)已成为一种关键的“载体”蛋白，用于将一些关键的生长调节蛋白和肿瘤抑制因子从真核细胞的细胞核转运到细胞质。当输出蛋白-1的外排变得异常高时(例如，由于过度表达的XPO-1产生)，这些核调节因子的耗尽可触发各种各样的疾病。

XPO1是转运肿瘤抑制因子(例如p53、p27、FOXO1、IkB)的唯一核输出因子，并且它在各种实体瘤和血液系统恶性肿瘤(例如GBM、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌、AML、MM、CLL和NHL)中过表达。在此，XPO1致癌的主要要点是XPO1蛋白在多种类型的癌细胞中过表达，并且与增殖的细胞周期相关联，耗尽了细胞核中的肿瘤抑制蛋白(例如p53、p27、FOXO1、IkB)，这允许了癌细胞的生长(例如M.L.Crochiere等人，Oncotarget v.7，第1863-1877页(2015))。通常，选择性核输出抑制因子(Selective Inhibitor of Nuclear Export，SINE)化合物是一类小分子，它们通过与Exportin 1(XPO1，也称为CRM1(染色体维持蛋白1))的货物结合口袋中的第528位半胱氨酸(Cys528)共价结合而抑制货物蛋白(cargo protein)的核输出，并发挥抗增殖作用。XPO1与细胞核中活化的小G-蛋白Ran(Ran-GTP)之间的相互作用促进了与货物蛋白的结合，该货物蛋白包含被称为核输出信号(nuclear export signal，NES)的疏水性残基的短氨基酸序列。

根据临床前结果，许多炎症、神经退行性疾病和自身免疫性疾病也涉及类似的病理。因此，例如糖皮质激素是广泛使用的抗炎和免疫调节药物，其疗效/作用机制主要是基于恢复足够的类固醇激活的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor，GR)来干扰转录因子如NF-κB在细胞核中的过度活性。

如今，虽然抑制由过量XPO-1外排引起的疾病的药物已经被美国FDA证明具有临床疗效，但许多疾病仍迫切需要新的药物治疗。

发明详述

一方面，本申请提供了一种式I化合物、其药学上可接受的盐、或其立体异构体：

其中，

R

X

R

L

L

Cy选自C

R

R

n选自0、1、2或3。

在一些实施方案中，所述片段

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，所述X

在一些实施方案中，L

在一些实施方案中，所述L

在一些实施方案中，所述L

在一些实施方案中，所述L

在一些实施方案中，所述L

在一些实施方案中，在L

在一些具体实施方案中，在L

在一些实施方案中，所述Cy选自C

在一些实施方案中，所述Cy选自C

在一些实施方案中，所述Cy选自C

在一些实施方案中，所述Cy选自C

在一些实施方案中，所述杂环烷基、杂环烯基或杂芳基，其中杂原子选自N、O或S；在一些实施方案中，杂原子的个数选自1、2、3、4、5或6个；在一些实施方案中，杂原子的个数选自1、2、3或4个；在一些实施方案中，杂原子的个数选自1、2或3个；在一些实施方案中，杂原子的个数选自1或2个。

在一些实施方案中，所述Cy选自环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氧六环基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基，所述环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氧六环基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基任选地被一个或多个R

在一些实施方案中，所述Cy选自环丙基、环戊基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氧六环基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、三唑基、四唑基或嘧啶基，所述环丙基、环戊基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氧六环基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、三唑基、四唑基或嘧啶基任选地被一个或多个R

在一些实施方案中，所述Cy选自

在一些实施方案中，所述Cy选自

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述Cy选自

在一些实施方案中，所述Cy选自

在一些实施方案中，所述-L

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述-L

在另外一些实施方案中，所述-L

在一些实施方案中，所述R

在另外一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述R

在一些实施方案中，所述n选自0或1；

在一些具体实施方案中，所述n选自0。

在一些实施方案中，所述式I化合物、其药学上可接受的盐、或其立体异构体选自式I-1化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体：

其中，L

在一些实施方案中，本申请包含上述定义的变量及其实施方案，以及它们的任意组合。

本申请提供以下化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体：

另一方面，本申请还提供药物组合物，其包含本申请的上述化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本申请的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

另一方面，本申请还提供一种治疗XPO-1相关各种疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的本申请的上述化合物其药学上可接受的盐或其药物组合物。

另一方面，本申请还提供了本申请的上述化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备治疗XPO-1相关各种疾病的药物中的用途。

另一方面，本申请还提供了本申请的上述化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在治疗XPO-1相关各种疾病中的用途。

另一方面，本申请还提供了一种治疗XPO-1相关各种疾病的本申请的上述化合物、其药学上可接受的盐、或其药物组合物。

在一些实施方案中，所述XPO-1相关各种疾病选自肿瘤；在一些实施方案中，所述XPO-1相关各种疾病选自白血病或淋巴瘤。

技术效果

本申请的化合物对Jurkat细胞和OCI-LY10细胞具有良好的抗增殖活性，且具有较强的抑制XPO-1作用。

除此之外，本申请的化合物具有良好的安全性和药物代谢动力学性质，展现出成药前景。

定义

除非另有说明，本申请中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

本申请中的某些结构单元或者基团中的共价键未与具体的原子连接时，表示该共价键可以与该结构单元或者基团中的任意原子连接，只要不违背价键连接规则。

术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。

术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH

本文中的“一个或多个”指一个至十个以内的整数。例如“一个或多个”指一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个；或者，“一个或多个”指一个、两个、三个、四个、五个或六个；或者，“一个或多个”指一个、两个或三个。

本文中的C

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被2个R所取代，则每个R都有独立的选项。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH

当其中一个变量选自共价键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L’-Z中L’代表共价键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基的键交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元

术语“烷基”是指通式为C

术语“烷氧基”指-O-烷基。

术语“环烷基”指完全饱和的并且可以以呈单环、桥环或螺环存在的碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。环烷基非限制性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基、二环[1.1.1]戊-1-基等。例如，C

术语“杂环烷基”是指完全饱和的并且可以以单环、桥环(包括并环)或螺环存在的环状基团。除非另有指示，该杂环通常为含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至7元环。3元杂环烷基的实例包括但不限于环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基，4元杂环烷基的非限制性实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基，5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基，6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基，7元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基。优选为具有5或6个环原子的单环杂环烷基。

术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如，芳基可以具有6-20个碳原子，6-14个碳原子或6-12个碳原子。芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氢化萘等。

术语“杂芳基”是指单环或稠合多环体系，其中含有至少一个选自N、O、S的环原子，其余环原子为C，并且具有至少一个芳香环。优选的杂芳基具有单个5至8元环，或包含6至14个，尤其是6至10个环原子的多个稠合环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、三唑基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等。

术语“环烯基”是指不完全饱和的并且可以以呈单环、桥环或螺环存在的非芳族碳环。除非另有指示，该碳环通常为4至8元环。环烯基的非限制性实例包括但不限于环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基等。

术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：

(i)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；

(ii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。

术语“预防”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时。

术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。

术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。

术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。

本申请的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本申请的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分，其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。

本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为

某些同位素标记的本申请化合物(例如用

此外，用较重同位素(诸如氘(即

本申请化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本申请的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。

本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。

在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。

药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。

本申请化合物的治疗剂量可根据例如以下而定：治疗的具体用途、给予化合物的方式、患者的健康和状态，以及签处方医师的判断。本申请化合物在药用组合物中的比例或浓度可不固定，取决于多种因素，它们包括剂量、化学特性(例如疏水性)和给药途径。例如可通过含约0.1～10％w/v该化合物的生理缓冲水溶液提供本申请化合物，用于肠胃外给药。某些典型剂量范围为约1μg/kg～约1g/kg体重/日。在某些实施方案中，剂量范围为约0.01mg/kg～约100mg/kg体重/日。剂量很可能取决于此类变量，如疾病或病症的种类和发展程度、具体患者的一般健康状态、所选择的化合物的相对生物学效力、赋形剂制剂及其给药途径。可通过由体外或动物模型试验系统导出的剂量-反应曲线外推，得到有效剂量。

本申请的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本申请的实施例。

本申请具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本申请的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本申请的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

本领域合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本申请中的氨基)选择合适的保护基，例如，可参考Greene's Protective Groups in OrganicSynthesis(4th Ed).Hoboken,New Jersey:John Wiley&Sons,Inc.

在一些实施方案中，本申请的式I化合物可以由有机合成领域技术人员参考以下路线来制备：

其中，X

本申请采用下述缩略词：

DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DABCO代表三亚乙基二胺；THF代表四氢呋喃；Pd(dppf)Cl

为清楚起见，进一步用实施例来阐述本申请，但是实施例并非限制本申请的范围。本申请所使用的所有试剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。

具体实施方式

制备例1：

(1)化合物A的制备方法:

将丙炔酸(30.0g)分散于异丙醇(120.0mL)中，将(121.6g)三氟化硼乙醚滴入体系中，20-25℃搅拌30分钟，升高温度至90℃搅拌2小时，反应完毕，将反应液倒入600.0mL水中，用二氯甲烷(200.0mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物A(27.0g)，直接投下一步。

(2)化合物B的制备方法:

将化合物A(27.0g)分散于三氟乙酸(190.0mL)中，20-25℃搅拌10分钟，加入碘化钠(36.1g)，升温至110℃反应4小时，反应完毕，将反应液倒入2.0L水中，二氯甲烷(500.0mL*2)萃取，合并有机相，依次用碳酸氢钠、亚硫酸氢钠、氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机相、减压浓缩至无液体流出，得到化合物B(48.0g)，直接投下一步。

(3)化合物C的制备方法:

将3,5-双三氟甲基苯腈(50.0g)、硫氢化钠(23.4g)、无水氯化镁(19.9g)分散于DMF(250.0mL)中，20-25℃搅拌3小时，反应完全。将反应液倒入1.25L冰水中，乙酸乙酯萃取(250.0mL*3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相(1.5L*3)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得到化合物C(57.4g)，直接投下一步。

(4)化合物D的制备方法:

将化合物C(57.4g)分散于DMF(400.0mL)中，向体系中滴加水合肼(20.9g)，滴毕，20-25℃搅拌1小时，再向体系中滴加甲酸(342.0mL)，滴加完毕升温至90℃回流反应2小时，反应完毕。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(4.0L)中，用碳酸氢钠调节pH＝6-7，乙酸乙酯(500.0mL*3)萃取，饱和食盐水洗涤有机相(2.0L)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，加入石油醚(100.0mL*3)洗涤，抽滤得化合物D(42.6g)。

ESI-MS:m/z＝282.08[M+H]

(5)化合物E的制备方法:

将化合物D(10.0g)分散于DMF(100.0mL)中，加入DABCO(7.9g)，20-25℃搅拌30分钟后，降温至0-10℃，滴加化合物B(12.8g)，滴毕，20-25℃搅拌1.5小时，反应完毕。将反应液倒入500.0mL水中，乙酸乙酯(200.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析得化合物E(6.0g)。

ESI-MS:m/z＝394.21[M+H]

(6)化合物F的制备方法:

将化合物E(5.0g)分散于二氯甲烷(30.0mL)中，降温至0℃，滴加液溴(4.0g)，15分钟内滴加完毕，缓慢升至室温搅拌6小时，反应完毕。将反应混合物倒入至30.0mL冰水中，并用二氯甲烷(30.0mL*3)萃取，合并有机相，用饱和亚硫酸氢钠溶液(30.0mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物F(7.0g)，直接投下一步。

ESI-MS:m/z＝553.87[M+H]

(7)化合物G的制备方法:

将化合物F(7.0g)分散于THF(30.0mL)中，降温至0℃滴加三乙胺(2.6g)，加毕，缓慢升至室温反应12小时。反应完毕。加入20.0mL水稀释反应液，并用乙酸乙酯(30.0mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得化合物G(3.4g)。ESI-MS:m/z＝472.09[M+H]

实施例1：

(1)化合物A-1的制备方法：

将5-溴-2-氯嘧啶(0.30g)、1-叔丁氧羰基哌嗪(0.43g)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.77mL)，加入NMP(10.0mL)中，于100℃反应2h，反应完毕；向反应液加入50.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*2)萃取，合并有机相，用柠檬酸水溶液(0.1M，20.0mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-1(1.55mmol)，直接投下一步。

ESI-MS:m/z＝343.08[M+H]

(2)化合物C-1的制备方法:

将体化合物A-1(0.30g)、联硼酸频那醇酯(0.26g)、Pd(dppf)Cl

ESI-MS:m/z＝656.10[M+H]

(3)化合物D-1的制备方法:

将化合物C-1(106.0mg)溶于四氢呋喃(3.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，滴加氢氧化钠(9.6mg)水(3.0mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，反应完全；减压蒸去四氢呋喃，用12.0M盐酸调节pH＝5-6，加入10.0mL水，二氯甲烷(20.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-1，无需进一步提纯，直接用于下一步反应。

ESI-MS:m/z＝614.21[M+H]

(4)化合物E-1的制备方法:

将化合物D-1(0.16mmol)溶于四氢呋喃(5.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(32.0mg)、氯甲酸异丁酯(39.0mg)，0-10℃反应30min后向反应体系中滴加氨水(34.0mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，合并有机层，蒸干得化合物E-1(100.0mg)。ESI-MS:m/z＝613.22[M+H]

(5)实施例1的制备方法:

将化合物E-1(100.0mg)溶于二氯甲烷(5.0mL)，加入三氟乙酸(1.0mL)，20-25℃反应16h，反应完全。将反应液倒入20.0mL水中，用碳酸氢钠调节pH＝7-8，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例1(45.0mg)。ESI-MS:m/z＝513.25[M+H]

实施例2：

(1)化合物A-2的制备方法：

将5-溴-2-氯嘧啶(0.30g)、N-甲基哌嗪(0.23g)、甲烷磺酸(0.31mL)，加入NMP(10.0mL)中，于100℃反应2h，反应完毕；向反应液加入50.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*2)萃取，合并有机相，用柠檬酸水溶液(0.1M，20.0mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-2(415.0mg)。ESI-MS:m/z＝257.10[M+H]

(2)化合物C-2的制备方法:

将体化合物A-2(415.0mg)、联硼酸频那醇酯(490.0mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物D-2的制备方法:

将化合物C-2(207.0mg)溶于四氢呋喃(3.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，滴加氢氧化钠(21.8mg)水(3.0mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，反应完全；减压蒸去四氢呋喃，用12.0M盐酸调节pH＝5-6，加入10.0mL水，二氯甲烷(20.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-2，无需进一步提纯，直接用于下一步反应。

ESI-MS:m/z＝528.31[M+H]

(4)实施例2的制备方法:

将化合物D-2(0.36mmol)溶于四氢呋喃(5.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(31.0mg)、氯甲酸异丁酯(38.0mg)，0-10℃反应30min后向反应体系中滴加氨水(32.0mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例2(70.0mg)。ESI-MS:m/z＝528.27[M+H]

实施例3：

(1)化合物A-3的制备方法：

将5-溴-2-氯嘧啶(1.0g)、N-(2-氨乙基)吡咯烷(0.87g)、DIPEA(2.56mL)，加入NMP(15.0mL)中，于100℃反应2h，反应完毕；向反应液加入80.0mL水，乙酸乙酯(30.0mL*2)萃取，合并有机相，用柠檬酸水溶液(0.1M，20.0mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-3(1.2g)。ESI-MS:m/z＝271.09[M+H]

(2)化合物C-3的制备方法:

将体化合物A-3(988mg)、联硼酸频那醇酯(1.046g)、Pd(dppf)Cl

ESI-MS:m/z＝584.33[M+H]

(3)化合物D-3的制备方法:

将化合物C-3(557.0mg)溶于四氢呋喃(5.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，滴加氢氧化钠(57.0mg)水(5.0mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，反应完全；减压蒸去四氢呋喃，用12.0M盐酸调节pH＝5-6，加入10.0mL水，二氯甲烷(20.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-3，无需进一步提纯，直接用于下一步反应。

ESI-MS:m/z＝542.28[M+H]

(4)实施例3的制备方法:

将化合物D-3(0.32mmol)溶于四氢呋喃(5.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(32.0mg)、氯甲酸异丁酯(39.0mg)，0-10℃反应30min后向反应体系中滴加氨水(33.0mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例3(20.0mg)。ESI-MS:m/z＝541.29[M+H]

实施例4：

(1)化合物A-4的制备方法：

将5-溴-2-氯嘧啶(1.0g)、4-(2-氨乙基)吗啉(1.01g)、DIPEA(2.56mL)，加入NMP(15.0mL)中，于100℃反应2h，反应完毕；向反应液加入80.0mL水，乙酸乙酯(30.0mL*2)萃取，合并有机相，用柠檬酸水溶液(0.1M，20.0mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-4(1.1g)。ESI-MS:m/z＝287.14[M+H]

(2)化合物C-4的制备方法:

将体化合物A-4(744.0mg)、联硼酸频那醇酯(790.0mg)、Pd(dppf)Cl

ESI-MS:m/z＝600.29[M+H]

(3)化合物D-4的制备方法:

将化合物C-4(784.0mg)溶于四氢呋喃(10.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，滴加氢氧化钠(78.8mg)水(10.0mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，反应完全；减压蒸去四氢呋喃，用12.0M盐酸调节pH＝5-6，加入10.0mL水，二氯甲烷(20.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-4，无需进一步提纯，直接用于下一步反应。

ESI-MS:m/z＝558.34[M+H]

(4)实施例4的制备方法:

将化合物D-4(0.33mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(22.0mg)、氯甲酸异丁酯(27.0mg)，0-10℃反应30min后向反应体系中滴加氨水(23.0mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例4(20.0mg)。ESI-MS:m/z＝557.33[M+H]

实施例5：

(1)化合物A-5的制备方法：

将5-溴-2-氯嘧啶(1.0g)、(R)-3-氨基四氢呋喃(0.96g)、DIPEA(2.0g)，加入NMP(10.0mL)中，于100℃反应2h，反应完毕；向反应液加入80.0mL水，乙酸乙酯(30.0mL*2)萃取，合并有机相，用柠檬酸水溶液(0.1M，20.0mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-5(1.2g)。ESI-MS:m/z＝245.01[M+H]

(2)化合物C-5的制备方法:

将化合物A-5(420.0mg)、联硼酸频那醇酯(481.0mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物D-5的制备方法:

将化合物C-5(160.0mg)溶于四氢呋喃(6.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，滴加氢氧化钠(17.2mg)水(6.0mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，反应完全；减压蒸去四氢呋喃，用12.0M盐酸调节pH＝5-6，加入10.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-5，无需进一步提纯，直接用于下一步反应。

ESI-MS:m/z＝515.34[M+H]

(4)实施例5的制备方法:

将化合物D-5(0.288mmol)溶于四氢呋喃(6.0mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(58.0mg)、氯甲酸异丁酯(70.0mg)，0-10℃反应30min后向反应体系中滴加氨水(242.0mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15.0mL水，乙酸乙酯(20.0mL*3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝1/0-50/1)纯化得实施例5(120.0mg)。ESI-MS:m/z＝514.42[M+H]

实施例6：

(1)化合物A-6的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g)、4-氨基四氢吡喃(0.6g)、DIPEA(2.7g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-6。

(2)化合物B-6的制备方法:

将化合物A-6(1.3g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(2.6g)、乙酸钾(2.0g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-6的制备方法:

将化合物G(350.0mg)、化合物B-6(271.5mg)分散于1,4-二氧六环中(10.0mL)，加入乙酸钾(218.2mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-6的制备方法:

将化合物C-6(120.0mg)溶于四氢呋喃(2.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(40.0mg)和水(1.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-6，直接用于下一步反应。

(5)实施例6的制备方法:

将化合物D-6(150.0mg)分散于四氢呋喃(5.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(57.5mg)、氯甲酸异丁酯(69.7mg)，搅拌40分钟，滴加氨水(0.5mL)反应20分钟，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例6(10.0mg)。ESI-MS:m/z＝528.29[M+H]

实施例7：

(1)化合物A-7的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g)、(R)-(1,4-二氧六环-2-基)甲胺盐酸盐(0.8g)、DIPEA(2.7g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-7。

(2)化合物B-7的制备方法:

将化合物A-7(1.4g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(2.6g)、乙酸钾(2.0g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-7的制备方法:

将化合物G(500.0mg)、化合物B-7(408.0mg)分散于1,4-二氧六环中(12.0mL)，加入乙酸钾(312.0mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-7的制备方法:

将化合物C-7(150.0mg)溶于四氢呋喃(15.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(16.0mg)和水(15.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-7，直接用于下一步反应。

(5)实施例7的制备方法:

将化合物D-7(120.0mg)分散于四氢呋喃(5.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(44.6mg)、氯甲酸异丁酯(60.2mg)，搅拌40分钟，滴加氨水(46.3mg)反应20分钟，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例7。ESI-MS:m/z＝544.26[M+H]

实施例8：

(1)化合物A-8的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2.0g)、乙醇胺(0.8g)、DIPEA(5.4g)，加入到NMP(35.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-8。

(2)化合物B-8的制备方法:

将化合物A-8(2.3g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(5.3g)、乙酸钾(4.1g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-8的制备方法:

将化合物G(0.5g)、化合物B-8(0.3g)分散于1,4-二氧六环中(50.0mL)，加入乙酸钾(0.3g)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-8的制备方法:

将化合物C-8(0.6g)溶于四氢呋喃(20.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(0.1g)和水(20.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-8，直接用于下一步反应。

(5)实施例8的制备方法:

将化合物D-8(315.0mg)分散于四氢呋喃(20.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(130.0mg)、氯甲酸异丁酯(176.0mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(135.0mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例8(96mg)。ESI-MS:m/z＝488.26[M+H]

实施例9：

(1)化合物A-9的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2.0g)、N,N-二甲基乙二胺(1.1g)、DIPEA(5.4g)，加入到NMP(35.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-9。

(2)化合物B-9的制备方法:

将化合物A-9(2.5g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(5.3g)、乙酸钾(4.1g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-9的制备方法:

将化合物G(0.5g)、化合物B-8(0.4g)分散于1,4-二氧六环中(20.0mL)，加入乙酸钾(0.3g)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-9的制备方法:

将化合物C-9(450.0mg)溶于四氢呋喃(12.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(70.0mg)和水(12.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-9，直接用于下一步反应。

(5)实施例9的制备方法:

将化合物D-9(318.0mg)分散于四氢呋喃(15.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(125.0mg)、氯甲酸异丁酯(168.0mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(130.0mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例9(30.0mg)。ESI-MS:m/z＝515.29[M+H]

实施例10：

(1)化合物A-10的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2.0g)、3-羟基吡咯烷(1.1g)、DIPEA(5.4g)，加入到NMP(35.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-10。

(2)化合物B-10的制备方法:

将化合物A-10(2.5g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(5.3g)、乙酸钾(4.1g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-10的制备方法:

将化合物G(0.5g)、化合物B-10(0.4g)分散于1,4-二氧六环中(15.0mL)，加入乙酸钾(0.3g)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-10的制备方法:

将化合物C-10(600.0mg)溶于四氢呋喃(20.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(86.0mg)和水(20.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-10，直接用于下一步反应。

(5)化合物10的制备方法:

将化合物D-10(400.0mg)分散于四氢呋喃(30.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(157.0mg)、氯甲酸异丁酯(211.0mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(153.0mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例10(60.0mg)。ESI-MS:m/z＝514.25[M+H]

实施例11：

(1)化合物A-11的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g)、1-Boc-4-氨基哌啶(1.2g)、DIPEA(2.7g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，料反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-11。

(2)化合物B-11的制备方法:

将化合物A-11(1.8g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(2.6g)、乙酸钾(2.0g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-11的制备方法:

将化合物G(500.0mg)、化合物B-11(513.0mg)分散于1,4-二氧六环中(12.0mL)，加入乙酸钾(312.0mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-11的制备方法:

将化合物C-11(360.0mg)溶于四氢呋喃(15.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(32.0mg)和水(15.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-11，直接用于下一步反应。

(5)化合物E-11的制备方法:

将化合物D-11(300.0mg)分散于四氢呋喃(10.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(96.0mg)、氯甲酸异丁酯(130.5mg)，搅拌40分钟，滴加氨水(100.5mg)反应20分钟，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出得化合物E-11。

(6)实施例11的制备方法:

将化合物E-11(120mg)溶于二氯甲烷(10.0mL)，加入三氟乙酸(1.5mL)，20-25℃反应16h，反应完全。将反应液倒入50.0mL水中，蒸干有机层，用碳酸氢钠调节pH＝7-8，乙酸乙酯(50.0mL*3)萃取，合并有机层，蒸干，经制备液相纯化得实施例11(45.0mg)。ESI-MS:m/z＝527.27[M+H]

实施例12：

(1)化合物A-12的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g)、(1-羟甲基环丙基)-叔丁氧羰基氨基(1.2g)、DIPEA(2.7g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-12。

(2)化合物B-12的制备方法:

将化合物A-12(1.8g)分散于1,4-二氧六环(30.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(2.6g)、乙酸钾(2.0g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-12的制备方法:

将化合物G(350.0mg)、化合物B-12(348.0mg)分散于1,4-二氧六环中(12.0mL)，加入乙酸钾(218.2mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-12的制备方法:

将化合物C-12溶于四氢呋喃(2.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(40.0mg)和水(1.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-12，直接用于下一步反应。

(5)化合物E-12的制备方法:

将化合物D-12(150.0mg)分散于四氢呋喃(5.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(57.5mg)、氯甲酸异丁酯(69.7mg)，搅拌40分钟，滴加氨水(0.5mL)反应20分钟，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出得化合物E-12。

(6)实施例12的制备方法:

将化合物E-12(140.0mg)溶于二氯甲烷(4.0mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，20-25℃反应16h，反应完全。将反应液倒入50mL水中，用碳酸氢钠调节pH＝7-8，二氯甲烷(50.0mL*3)萃取，合并有机层，蒸干，经制备液相纯化得实施例12(30.0mg)。ESI-MS:m/z＝514.31[M+H]

实施例13：

(1)化合物A-13的制备方法:

将2-氯嘧啶-5-硼酸(1.0g)、环戊胺(0.6g)、DIPEA(3.2g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入二氯甲烷萃取(50.0mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-13。

(2)化合物B-13的制备方法:

将化合物G(2.5g)、化合物A-13(1.3g)分散于1,4-二氧六环中(15.0mL)，加入乙酸钾(1.6g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-13的制备方法:

将化合物B-13(1.0g)溶于四氢呋喃(20.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(144.0mg)和水(20.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物C-13，直接用于下一步反应。

(4)化合物13的制备方法:

将化合物C-13(500.0mg)分散于四氢呋喃(20.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(197.0mg)、氯甲酸异丁酯(266.0mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(204.0mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例13(80.0mg)。ESI-MS:m/z＝512.31[M+H]

实施例14：

(1)化合物A-14的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g)、三氟乙胺盐酸盐(0.8g)、DIPEA(2.7g)，加入到NMP(10.0mL)中，于130℃反应2h，反应完全；加入乙酸乙酯萃取(50.0mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-14。

(2)化合物B-14的制备方法:

将化合物A-14(1.3g)分散于1,4-二氧六环(10.0mL)中，加入联硼酸频那醇酯(1.7g)、乙酸钾(1.5g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-14的制备方法:

将化合物G(694.0g)、化合物B-14(371.5mg)分散于1,4-二氧六环中(15.0mL)，加入乙酸钾(361.0g)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-14的制备方法:

将化合物C-14(500.0mg)溶于四氢呋喃(15.0mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(70.0mg)和水(15.0mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-14，直接用于下一步反应。

(5)化合物14的制备方法:

将化合物D-14(300.0mg)分散于四氢呋喃(15.0mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(115.0mg)、氯甲酸异丁酯(155.7mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(120.0mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50.0mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例14(74.0mg)。ESI-MS:m/z＝526.31[M+H]

实施例15：

(1)化合物A-15的制备方法:

将2-氯嘧啶-5-硼酸(334mg)、(S)-3-氨基四氢吡喃(256mg)、DIPEA(1.1g)，加入到NMP(15mL)中，于130℃反应3小时，TLC检测至原料反应完全；加水(50mL)稀释，二氯甲烷萃取(50mL*2)，无水硫酸钠干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-15。

(2)化合物B-15的制备方法:

将化合物G(745mg)、化合物A-15(422mg)分散于1,4-二氧六环中(30mL)，加入乙酸钾(464mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-15的制备方法:

将化合物B-15(449mg)溶于四氢呋喃(15mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(63mg)和水(15mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节pH＝6-7，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物C-15，直接用于下一步反应。

(4)实施例15的制备方法:

将化合物C-15(415.9mg)分散于四氢呋喃(20mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(159.4mg)、氯甲酸异丁酯(215.2mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(165.4mg)反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例15(40mg)。ESI-MS:m/z＝528.30[M+H]

实施例16：

(1)化合物A-16的制备方法:

将5-溴-2-氯嘧啶(1g)、3-氧杂环丁胺(0.57g)、DIPEA(2.56mL)分散于NMP(10mL)中，于100℃油浴中反应2h，LC-MS显示反应完毕。将反应液倒入150mL水中，乙酸乙酯(100mL*2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物A-16(5.17mmol)，直接用于下一步反应。

(2)化合物C-16的制备方法:

将A-16(0.6g)、联硼酸频那醇酯(0.79g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物D-16的制备方法:

将C-16(200mg)溶于四氢呋喃(5mL)中，冰浴降温0-10℃，滴加氢氧化钠(22mg)水(5mL)溶液，缓慢恢复至室温，搅拌反应3h，TLC监测至反应完全。减压蒸去全部溶剂，用少量四氢呋喃带干剩余溶剂，用1M盐酸调节pH＝5-6，加入20mL水，二氯甲烷(50mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至无液体流出，得化合物D-16，直接投下一步。

(4)实施例16的制备方法:

将D-16(0.36mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴降温至0-10℃，加入N-甲基吗啉(72mg)、氯甲酸异丁酯(88mg)，0-10℃反应30min；向反应体系中滴加氨水(76mg)，0-10℃继续反应5-10min。向反应液中加入15mL水，乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层，蒸干，经制备液相纯化得实施例16(15mg)。ESI-MS:m/z＝500.24[M+H]

实施例17：

(1)化合物A-17的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2.0g)、(S)-1,1,1-三氟异丙胺盐酸盐(1.86g)、DIPEA(5.35g)，加入到NMP(30mL)中，于130℃反应2小时，TLC检测至原料反应完全；加水(100ml)稀释，加入乙酸乙酯萃取(100mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干得到化合物A-17。

(2)化合物B-17的制备方法:

将化合物A-17(10.34mmol)分散于1,4-二氧六环(40mL)中，加入联硼酸频那醇酯(5.25g)、乙酸钾(4.06g)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-17的制备方法:

将化合物G(3.25g)、化合物B-17(2.6g)分散于1,4-二氧六环中(60mL)，加入乙酸钾(2.03g)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-17的制备方法:

将化合物C-17(2.0g)溶于四氢呋喃(20mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(274mg)和水(20mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至pH＝6-7，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-17，直接用于下一步反应。

(5)实施例17的制备方法:

将化合物D-17(1.0g)分散于四氢呋喃(20mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(375mg)、氯甲酸异丁酯(506mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(389mg)冰水浴反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例17(7mg)。ESI-MS:m/z＝540.12[M+H]

实施例18：

(1)化合物A-18的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2g)、(R)-1,1,1-三氟异丙胺盐酸盐(1.86g)分散到NMP(40mL)中，于130℃反应12小时，加水(100mL)稀释加入乙酸乙酯萃取(100mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干柱层析纯化得到化合物A-18。

(2)化合物B-18的制备方法:

将化合物A-18(320mg)分散于1,4-二氧六环(20mL)中，加入联硼酸频那醇酯(601.8mg)、乙酸钾(465mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-18的制备方法:

将化合物G(466mg)、化合物B-18(359mg)分散于1,4-二氧六环中(20mL)，加入乙酸钾(291mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-18的制备方法:

将化合物C-18(580mg)溶于四氢呋喃(15mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(79.7mg)和水(15mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至pH＝6-7，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-18，直接用于下一步反应。

(5)实施例18的制备方法:

将化合物D-18(483.8mg)分散于四氢呋喃(20mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(181.4mg)、氯甲酸异丁酯(244.9mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(188mg)冰水浴反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例18(60mg)。ESI-MS:m/z＝540.13[M+H]

实施例19：

(1)化合物A-19的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2g)、2-氟乙胺盐酸盐(1.23g)分散到NMP(40mL)中，于130℃反应12小时，加水(100mL)稀释加入乙酸乙酯萃取(100mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干柱层析纯化得到化合物A-19。

(2)化合物B-19的制备方法:

将化合物A-19(500mg)分散于1,4-二氧六环(20mL)中，加入联硼酸频那醇酯(692mg)、乙酸钾(669mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-19的制备方法:

将化合物G(424.97mg)、化合物B-19(288.48mg)分散于1,4-二氧六环中(20mL)，加入乙酸钾(264.98mg)、Pd(dppf)Cl

(2)化合物D-19的制备方法:

将化合物C-19(298.15mg)溶于四氢呋喃(10mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(44.8mg)和水(10mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至pH＝6-7，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-19，直接用于下一步反应。

(3)实施例19的制备方法:

将化合物D-19(274.59mg)分散于四氢呋喃(10mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(113.29mg)、氯甲酸异丁酯(152.97mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(235.2mg)冰水浴反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例19(100mg)。ESI-MS:m/z＝490.20[M+H]

实施例20：

(1)化合物A-20的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2g)、2,2-二氟乙烷胺盐酸盐(1.46g)分散到NMP(40mL)中，于130℃反应12小时，加水(100mL)稀释加入乙酸乙酯萃取(100mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干柱层析纯化得到化合物A-20。

(2)化合物B-20的制备方法:

将化合物A-20(500mg)分散于1,4-二氧六环(20mL)中，加入联硼酸频那醇酯(640mg)、乙酸钾(618mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-20的制备方法:

将化合物G(427.97mg)、化合物B-20(288.48mg)分散于1,4-二氧六环中(20mL)，加入乙酸钾(264.98mg)、Pd(dppf)Cl

(2)化合物D-20的制备方法:

将化合物C-20(284.66mg)溶于四氢呋喃(10mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(44.80mg)和水(10mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至pH＝6-7，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-20，直接用于下一步反应。

(3)实施例20的制备方法:

将化合物D-20(284.12mg)分散于四氢呋喃(10mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(113.29mg)、氯甲酸异丁酯(152.97mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(235.20mg)冰水浴反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例20(90mg)。ESI-MS:m/z＝508.19[M+H]

实施例21：

(1)化合物A-21的制备方法:

将5-溴-2-氯-嘧啶(2g)、2,2-二氟丙胺盐酸盐(1.64g)分散到NMP(40mL)中，于130℃反应12小时，加水(100mL)稀释加入乙酸乙酯萃取(100mL*2)，无水硫酸干燥，抽滤减压蒸干柱层析纯化得到化合物A-21。

(2)化合物B-21的制备方法:

将化合物A-21(600mg)分散于1,4-二氧六环(20mL)中，加入联硼酸频那醇酯(726mg)、乙酸钾(700mg)、Pd(dppf)Cl

(3)化合物C-21的制备方法:

将化合物G(424.97mg)、化合物B-21(323.06mg)分散于1,4-二氧六环中(20mL)，加入乙酸钾(264.98mg)、Pd(dppf)Cl

(4)化合物D-21的制备方法:

将化合物C-21(316.08mg)溶于四氢呋喃(10mL)，冰水浴下滴加氢氧化钠(44.80mg)和水(10mL)的溶液，室温反应过夜，反应液用盐酸调节至pH＝6-7，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸干得化合物D-21，直接用于下一步反应。

(3)实施例21的制备方法:

将化合物D-21(292.52mg)分散于四氢呋喃(10mL)中，冰水浴下加入N-甲基吗啉(113.29mg)、氯甲酸异丁酯(152.97mg)，搅拌30分钟，滴加氨水(235.20mg)冰水浴反应10分钟加水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体流出，经制备液相纯化得实施例21(130mg)。ESI-MS:m/z＝522.18[M+H]

试验例1、体外细胞增殖抑制活性

1.1 Jurkat细胞增殖抑制活性测定

取处于生长状态良好的Jurkat细胞，收集至离心管，调整细胞密度至5×10

1.2 OCI-LY10细胞增殖抑制活性测定

取处于生长状态良好的OCI-LY10细胞，收集至离心管，调整细胞密度至9×10

具体结果见表1，其中A表示IC

表1：化合物活性测试结果