因子XIIA抑制剂

技术领域

本发明涉及化合物和使用该化合物的治疗(或预防)方法。本发明还涉及生产本发明的化合物的过程和方法。本发明的化合物是因子XII(例如，因子XIIa)的调节剂。具体地，化合物是因子XIIa的抑制剂并且其可以作为抗凝血剂使用。

背景技术

心血管疾病是发达国家中的主要死亡原因，其每年影响全世界数百万人。该疾病通常由动脉壁的动脉粥样硬化引起，其发展数年并且特征在于内皮、内皮下脂质沉积的炎症、巨噬细胞浸润和斑块出现。在该疾病的急性期，动脉粥样硬化斑块变得不稳定并破裂，从而引发血栓形成。使血管闭塞并因此夺去组织的氧的血栓(血液凝块)的出现构成了主要的突发事件，从而导致发病和死亡。血液凝块形成起始于血小板的激活和凝聚。通过凝血的激活和纤维蛋白网络的形成强化了血小板栓。通过血栓的动脉阻塞导致下游组织死亡，并且基于发生血栓的位置，它与心肌梗塞、中风或跛行的出现有关。

静脉循环中的血栓形成具有不同的病原学，这是因为它不基于动脉粥样硬化，而是通过由于停止流动而导致的循环停滞所引发的并且通常与天然存在的凝血抑制剂(例如，抗凝血酶、蛋白C和S)缺陷并且与手术程序有关。静脉血栓形成通常发生在腿部或手臂(深静脉血栓形成，DVT)并且可以导致栓子(血栓碎片)，从而阻塞下游较小的血管，特别是在肺中(肺栓塞，PE)。DVT的其它引发剂包括癌症、肾病综合征、抗磷脂综合征和心力衰竭。

血栓形成是非常严重的病况，并且仅在英国，对于静脉和动脉血栓形成，分别与多达25,000至200,000的死亡有关。在2010年1月，英国国家健康与临床卓越研究所(NICE)发布了新的指南以提高对于进入医院的患者中早期血栓形成病征的筛选。

当前治疗或预防血栓形成的药物治疗靶向血小板或凝血。通常，在动脉疾病的预防中使用抗血小板药，然而在心房颤动、深静脉血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE)患者的中风预防中使用抗凝血剂。与当前抗凝血剂使用有关的最大的临床问题是出血风险。在进行抗凝疗法时，基于患者组和抗凝选择，多达1至3％的患者经历大出血，或者15-18％的患者经历轻度出血。

华法林和肝素(包括所有其衍生物)是最常用的抗凝血药。作为最早批准的长期口服抗凝血剂，华法林需要通过前凝血酶时间(PT)凝血测定来定期监测以确定最优剂量，这为医疗系统和患者生活质量施加了繁重的负担。华法林是非特异的并且靶向几种凝血酶，然而基于其分子量，皮下或静脉内施用的肝素靶向激活的因子X(FXa)和/或凝血酶。此外，除了NOAC与华法林相比具有更好结果的颅内出血外，已上市或处于开发中的靶向凝血酶或FXa的新的口服抗凝血剂(NOAC)也具有与肝素和华法林相当的显著出血风险。然而，与低分子量的肝素和包含华法林的维生素K拮抗剂相比，胃肠出血随NOAC而升高[New OralAnticoagulants Increase Risk for Gastrointestinal Bleeding:A SystematicReview and Meta-analysis Holster IL,Valkhoff VE,Kuipers EJ,Tjwa ETGastroenterology.2013Jul；145(1):105-112]。

因此，对于与出血无关的新型抗凝血剂的临床需要仍尚未满足。作为该领域的期望，该目标已超过了60年。然而，始终认为由于涉及血栓形成的机制被认为与涉及止血的那些机制相同，因此抗凝导致了不可避免的出血风险。

50年前，由于FXII缺陷型患者具有显著延长的体外表面-激活凝血时间，因此作为内源凝血途径中的凝血蛋白鉴别了因子XII(FXII)。然而，一系列研究可信地显示FXII在正常止血中无作用。前十年内的证据将FXII鉴别为血栓体内形成所必需的(Renne T,Pozgajova M,Gruner S,Schuh K,Pauer HU,Burfeind P,Gailani D,NieswandtB.Defective thrombus formation in mice lacking coagulation factor XII.J ExpMed2005；202:271-281；Kleinschnitz C,Stoll G,Bendszus M,Schuh K,Pauer HU,Burfeind P,Renne C,Gailani D,Nieswandt B,Renne T.Targeting coagulation factorXII provides protection from pathological thrombosis in cerebral ischemiawithout interfering with hemostasis.J Exp Med 2006；203:513-518；Renne T,Nieswandt B,Gailani D.The intrinsic pathway of coagulation is essential forthrombus stability in mice.Blood Cells Mol Dis2006；36:148-151；Hagedorn I,Schmidbauer S,Pleines I,Kleinschnitz C,Kronthaler U,Stoll G,Dickneite G,Nieswandt B.Factor XIIa inhibitor recombinant human albumin Infestin-4abolishes occlusive arterial thrombus formation without affectingbleeding.Circulation 2010；121:1510-1517和Matafonov A,Leung PY,Gailani AE,Grach SL,Puy C,Cheng Q,Sun MF,McCarty OJ,Tucker EI,Kataoka H,RennéT,MorrisseyJH,Gruber A,Gailani D.Factor XII inhibition reduces thrombus formation in aprimate thrombosis model.Blood.2014；13；123(11):1739-46)。FXII独特的特性在于不同于所有其它凝血因子中的缺陷，其缺陷不会导致出血。因此，FXIIa是发现抗凝血剂的非常有吸引力的靶标，其具有安全谱极大改善的潜力。

近期研究通过证实涉及FXII的血栓形成中的新型机制挑战了止血和血栓形成领域中的偏见。这些研究提供了明确证据：FXII是血栓出现所必需的，同时在止血中不起作用。当用胶原蛋白和肾上腺素输注激发时，显著保护FXII缺陷型小鼠抵抗血栓形成，同时在手术或夹尾期间未显示出出血时间延长。在暴露于FeCl

然而，近期研究已显示通过带负电荷的表面和激活的血小板表面激活了FXII(Zakharova等人,PLoS One.2015Feb 17；10(2):e0116665)。这些体内和体外研究表明迄今为止，尚未识别FXII在血栓形成中的作用。FXIIa的产生通过提高的凝血酶产生、纤维蛋白沉积和对纤维蛋白结构的直接血栓前作用稳定了血栓。该机制似乎不会在正常止血中起作用，因为FXII缺陷在人及小鼠中是表型沉默的，从而使得FXII成为开发新型抗凝血剂以治疗血栓形成的理想靶标。

已在几个不同的体内血栓形成模型中显示了FXII缺陷在降低血栓形成中的有效性。除上述模型外，已在通过颈动脉连接所引起的鼠科血栓形成模型中和继发于大脑中动脉的短暂阻塞的大脑微血管血栓形成的鼠科模型中证实了FXII在血栓形成中的作用。脑梗死尺寸在FXII缺陷型小鼠中显著降低并且通过浸渍人FXII恢复至大梗死尺寸。还显示FXII抑制降低了静脉血栓形成的风险。一项研究表明分离自蜱唾液腺的接触激活的Kunitz-型抑制剂(Ir-CPI)有效降低了通过血管连接所引起的小鼠和大鼠静脉血栓形成模型中的血栓形成。这种抑制性蛋白对于降低通过胶原蛋白和肾上腺素输注所引起的鼠科模型和鼠科背侧皮肤小动脉血栓形成模型中的PE也是有效的。另外，在用Ir-CPI处理的动物中，对出血时间无影响。通过H-D-Pro-Phe-Arg-氯代甲基酮(PCK)的FXIIa抑制还已显示出对血栓形成的保护。这些研究提供了FXIIa抑制在血栓形成治疗中有效的临床前概念验证。

最近，Magnus Larsson等人,“A Factor XIIa Inhibitory Antibody ProvidesThromboprotection in Extracorporeal Circulation Without Increasing BleedingRisk”Sci Transl Med 6,222ra17(2014)；证实了重组完全人抗体3F7结合至FXIIa酶口袋(enzymatic pocket)。3F7阻碍FXIIa-介导的凝血，消除了流动中的血栓形成并且阻止了小鼠和兔中的实验血栓形成。在兔中，3F7提供了与肝素同样有效，但是不同于肝素的血栓保护，3F7治疗不损害止血能力并且不会提高伤口出血。Larsson等人得到以下结论：FXIIa的靶向是旁路系统中血栓保护的安全模式，并且提供了不会因过量出血而复杂化的临床相关的抗凝策略。

达比加群(达比加群酯，dabigatran)、阿哌沙班(apixaban)、利伐沙班(rivaroxaban)、依度沙班(edoxaban)和贝曲西班(betrixaban)分别作为口服FXa/凝血酶抑制剂被批准用于短期使用。达比加群是3-({2-[(4-甲脒基-苯氨)-甲基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-羰基}-吡啶-2-基-氨基)-丙酸。

达比加群还被批准用于心房颤动(AF)患者中中风的预防并且在美国专利第6,087,380号中描述了达比加群。

利伐沙班是(S)-5-氯-N-{[2-氧-3-[4-(3-氧代吗啉-4-基)苯基]噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-羧酰胺；

利伐沙班还被批准用于降低非瓣膜AF患者中中风的风险。利伐沙班已在保护AF患者抵抗中风和非CNS全身性栓塞中显示出每天一次利伐沙班优于华法林的优势。利伐沙班还显示出相当的临床相关的大出血和非大出血，以及相对于华法林显著降低的颅内出血速率。在美国专利第7,157,456号中描述了利伐沙班。

阿哌沙班也是批准用于在预防非瓣膜心房颤动患者中中风和全身性栓塞中使用的因子Xa抑制剂。

阿哌沙班为1-(4-甲氧基苯基)-7-氧-6-[4-(2-氧代哌啶基-1-基)苯基]-4,5-二氢吡唑并[5,4-c]吡啶-3-羧酰胺：

在美国专利第6,413,980号中描述了阿哌沙班。

依度沙班是N'-(5-氯吡啶-2-基)-N

依度沙班是另一种批准用于在预防非瓣膜心房颤动患者中中风和全身性栓塞中使用和用于治疗深静脉血栓形成的因子Xa抑制剂。在美国专利第7,365,205号中描述了依度沙班。

贝曲西班是N-(5-氯吡啶-2-基)-2-[4-(N,N-二甲基甲脒基)苯甲酰氨基]-5-甲氧基苯甲酰胺：

贝曲西班是批准用于在预防中度至重度行动能力受限患者中静脉血栓栓塞中使用的因子Xa抑制剂。在美国专利第US 6,376,515号中描述了贝曲西班。

最近对于主要制药公司的心血管药物研发调查显示尚无任何处于开发的口服FXIIa抑制剂。Infestin-4是CSL Behring生产的生物药剂，其靶向FXIIa并且在小鼠和兔中的FeCl

由于FXII缺陷在人中是无症状的，因此不同于引起出血的其它凝血因子缺陷，FXII活性缺陷或抑制显示出抗凝血作用；选择性FXIIa抑制剂具有降低与现用抗凝血疗法有关的出血风险的潜力。

欧洲专利申请第EP0672658号(Eli Lilly)描述了作为凝血抑制剂有用的苯丙氨酸脯氨酸衍生物。

国际专利申请第WO 2002/064559号(Merck)也描述了作为凝血抑制剂有用的苯丙氨酸脯氨酸衍生物。化合物是相对于环加氧酶-1的环加氧酶-2抑制的选择性抑制剂。

国际专利申请第WO 02/50056号(Merck)描述了作为凝血抑制剂有用的苄基胺和环己胺衍生物。

本发明的方面的目标在于至少部分减轻与现有技术有关的问题。

本发明的某些实施方式的目标在于提供抑制FXII活性，具体地FXIIa活性，例如，FXIIa的丝氨酸蛋白酶活性的化合物。

本发明的某些实施方式的目标在于提供具有与口服生物利用度潜力一致的物理化学和药物动力学性质的化合物。

本发明的某些实施方式的目标在于提供相对于现有技术的化合物和现有疗法显示出降低的细胞毒性或提高的溶解度的化合物。

本发明的某些实施方式的另一个目标在于提供在剂量施用后，具有适当的药物动力学谱和适合的作用持续时间的化合物。本发明的某些实施方式的其它目标在于提供其中在吸收后药物的代谢碎片是GRAS(通常认为安全)的化合物。

本发明的某些实施方式的目标在于提供靶标调节剂，其中相对于其它靶标，实施方式选择性调节靶标。本发明的某些实施方式的目标在于提供作为选择性FXIIa抑制剂的化合物。具体地，本发明的某些实施方式的目标在于提供相对于凝血酶和FXa选择性抑制FXIIa的化合物。

本发明的某些实施方式满足了以上目标中的一些或全部。

发明内容

根据本发明，提供了根据式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：

其中

X是键、-C(O)NH-、-C(O)O-或-C(O)-；

L选自：键、-O-、-NR

Ar选自取代的或未取代的5至10元杂芳基(具有1、2或3个选自O、N或S的杂原子)、或者6至10元芳基，其中当取代时，杂芳基或芳基被1、2或3个取代基取代，取代基选自：卤素、C

m选自0、1、2或3；

n选自0、1、2、3或4；

o选自1或2；

R

其中当取代时，R

R

其中R

R

(a)H或C

(b)R

(c)当R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

根据本发明，提供了根据式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：

其中

X是键、-C(O)NH-、-C(O)O-或-C(O)-；

L选自：键、-NR

Ar是具有1、2或3个选自O、N或S的杂原子的取代的或未取代的9至10元双环杂芳环系统(优选地，9元)，其中当取代时，双环杂芳环系统被1、2或3个选自以下项的取代基取代：卤素、C

m选自0、1、2或3；

n选自0、1、2、3或4；

o选自1或2；

R

其中当取代时，R

R

其中R

R

(a)H或C

(b)R

(c)当R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

R

在其中R

根据式(I)的化合物可以是式(Ia)的化合物及其药学上可接受的盐：

其中

Y选自：

R

其中当由R

R

m选自1、2或3。

在实施方式中，R

在实施方式中，Y选自：

在实施方式中，R

在实施方式中，Y选自：

其中R

在实施方式中，m是2或3。可替换地，m是1或2。

在实施方式中，X是键、-C(O)NH-或-C(O)-。在实施方式中，X是键或-C(O)-。

在一个实施方式中，式(I)的化合物是根据式(IIa)、(IIb)、(IIc)或(IId)的化合物：

在式(IIa)的实施方式中，m是2或3。在式(IIa)的实施方式中，X是键。因此，在实施方式中，式(I)的化合物是根据式(IIIa)或(IIIb)的化合物：

在式(IIb)的实施方式中，m是1或2。在式(IIb)的实施方式中，X是键、-C(O)NH-或-C(O)-，优选地X是-C(O)-。

在实施方式中，R

在实施方式中，o为1。在实施方式中，R

在优选的实施方式中，o为1，并且R

在实施方式中，R

在实施方式中，式(I)的化合物可以是根据式(VIa)、(VIb)、(VIc)或(VId)的化合物：

在式(VIa)或(VIb)的化合物的实施方式中，R

在实施方式中，式(I)的化合物可以是根据式(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)或(VIId)的化合物：

在式(VIIa)或(VIIb)的化合物的实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，式(I)的化合物是根据式(VIIIa)、(VIIIb)、(VIIIc)或(VIIId)的化合物：

在实施方式中，Ar选自苯基、6元杂芳基或9至10元双环杂芳环系统(优选地，9元)，其中Ar是未取代的或被C

在实施方式中，Ar选自9至10元双环杂芳环系统(优选地，9元)，其中Ar是未取代的或被C

R

在实施方式中，Ar选自苯基、吡啶基、苯并三唑、咪唑并吡啶、吡啶并呋喃、氮杂吲哚、苯并吡唑、吡啶并氮杂噻吩、苯并噁唑、喹啉、苯硫基和异喹啉，其中Ar是未取代的或被甲基、氯、-OMe、-NH

在实施方式中，Ar选自苯并三唑、咪唑并吡啶、吡啶并呋喃、氮杂吲哚、苯并吡唑、吡啶并氮杂噻吩、苯并噁唑、喹啉和异喹啉，其中Ar是未取代的或被甲基、氯、-OMe、-NH

在实施方式中，Ar选自苯基、吡啶基、苯并三唑、咪唑并吡啶、吡啶并呋喃、氮杂吲哚、苯并吡唑、吡啶并氮杂噻吩、苯并噁唑、苯硫基，其中Ar是未取代的或被甲基、氯、-OMe、-NH

在实施方式中，Ar选自苯并三唑、咪唑并吡啶、吡啶并呋喃、氮杂吲哚、苯并吡唑、吡啶并氮杂噻吩、苯并噁唑，其中Ar是未取代的或被甲基、氯、-OMe、-NH

在实施方式中，Ar选自：

在实施方式中，Ar选自：

在实施方式中，Ar不是取代的或未取代的苯基。

在优选的实施方式中，Ar是氮杂吲哚、苯并三唑或N-甲基苯并三唑。

在优选的实施方式中，Ar是：

在实施方式中，式(I)的化合物是根据式(IXa)、(IXb)、(IXc)或(IXd)的化合物：

在式(IXa)或(IXb)的化合物的实施方式中，R

在实施方式中，L选自：键、-NR

R

在实施方式中，L选自：键、-NH-、-NMe-、-N(C(O)Me)-、和-NHC(O)-。

在实施方式中，n是0、1、2或3。在实施方式中，n是0或1。

R

在实施方式中，-L-(CR

在实施方式中，-L-(CR

R

R

R

R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

其中任何上述环基是未取代的或被1、2或3个选自以下项的基团取代的：Cl、Br、F、CF

在实施方式中，R

其中任何上述环基是未取代的或被1、2或3个选自以下项的基团取代的：Cl、Br、F、CF

在实施方式中，R

在实施方式中，式(I)的化合物是根据式(Xa)或(Xb)的化合物：

在实施方式中，式(I)的化合物是根据式(XIa)或(XIb)的化合物：

在实施方式中，R

其中当取代时，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

在实施方式中，R

R

R

优选地，R

在实施方式中，式(I)的化合物选自：

如对于技术人员显而易见的，本发明的化合物含有一些立构中心。本发明涵盖了本发明的所有可能的立体异构体，无论其处于单一立体异构形式或处于其混合物。优选的立体异构体是在吡咯烷环2位的S对映异构体。例如：

-NR

因此，在一个实施方式中，本发明的化合物是在四氢吡咯的2位具有S构型并且在-NR

在一个实施方式中，当2位处于S构型时，四氢吡咯上的-L-(CR

在一个实施方式中，本发明的化合物具有如下所示的立体化学。

在一个实施方式中，取代至化合物，如式(IIa)的吡咯烷上的-(CR

在一个实施方式中，R

在本发明的方面中，提供了本发明的化合物用作药剂的用途。

根据另一个方面，本发明提供了包含本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。

在一个实施方式中，药物组合物可以是包含其它药物活性剂的组合产品。

在本发明的优选方面，化合物是选择性FXIIa抑制剂。术语“选择性FXIIa抑制剂”表示相对于凝血酶和FXa选择性抑制FXIIa的化合物。通常，本发明的化合物可以对于FXIIa具有比凝血酶至少>10倍，优选地至少>100倍的选择性。

根据本发明的另一个方面，提供了本发明的化合物用于在预防或治疗通过因子XIIa调节的病况中的用途。通过因子XIIa的调节可预防或可治疗的病况通常将是通过因子XIIa的抑制可预防或可治疗的病况。因此，本发明的化合物可以用于在预防或治疗通过因子XIIa的抑制可预防或可治疗的病况中使用。

本发明的化合物可以用于在预防或治疗选自下列的病况中使用或者作为下列病况的治疗或预防的共疗法使用，病况选自：血栓形成、深静脉血栓形成、复杂左侧消融(肺静脉分离；VT消融)、再灌注损伤，也称为局部缺血性-再灌注损伤、经导管主动脉瓣置换术(TAVR)，也称为经导管主动脉瓣植入(TAVI)、脊柱或硬膜外麻醉、腰部诊断性穿刺、胸外科手术、腹部外科手术、骨科大手术、肝活组织检查、经尿道前列腺切除术、肾活组织检查、肾机能不全、肝病、内腔镜检查伴活组织检查、前列腺或膀胱活组织检查、电生理学研究或用于室上性心动过速的射频导管消融术(包括通过单次经室间隔穿刺的左边消融)、血管照相术、起搏器或埋藏式复律除颤器(ICD)植入(除非复杂的解剖学环境，例如，先天性心脏病)、机械瓣膜植入、人工瓣膜植入、心肌梗塞、心绞痛(包括不稳定性绞痛)、血管成形术或主动脉冠状动脉分流术后的再闭塞和再狭窄、中风、心房颤动患者以降低他们的中风风险、患有心房颤动和慢性肾病的患者、短暂性缺血发作、外周动脉闭塞病症、肺栓塞、深静脉微血管疾病、需要体外膜肺氧合(ECMO)的患者、需要体外循环，如冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者、弥漫性血管内凝血(DIC)、动脉粥样硬化、关节炎、癌症患者的血栓形成、无症状性脑缺血、中风、神经创伤性病症、神经炎性病症、包括与人工表面接触的医学程序，包括肾脏透析、其中FXIIa的抑制可以是有益的其它病况，如阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、黄斑变性、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿、中风中的脑水肿、引起水肿的其它原因、遗传性血管性水肿或获得性血管性水肿。

通过因子XIIa的抑制可预防或可治疗的病况可以是与血液变稠、凝血或血液凝块形成有关的病况，例如，病况可以是血栓形成。

在本发明的实施方式中，提供了用于在与高风险出血、低风险出血或血栓栓塞病症有关的病况的预防或治疗中使用或作为病况的共疗法中使用的化合物。

在本发明的实施方式中，提供了用于在与高风险出血有关的病况的预防或治疗中使用或作为病况的共疗法中使用的化合物。

在本发明的实施方式中，提供了用于在与低风险出血有关的病况的预防或治疗中使用或作为病况的共疗法中使用的化合物。

在本发明的实施方式中，提供了用于在与血栓栓塞病症有关的病况的预防或治疗中使用或作为病况的共疗法中使用的化合物。

在本发明的实施方式中，本发明的化合物作为与高风险出血有关的病况的预防或治疗的一部分使用，其中治疗选自复杂左侧消融(肺静脉分离；VT消融)、脊柱或硬膜外麻醉、腰部诊断性穿刺、胸外科手术、腹部外科手术、骨科大手术、肝活组织检查、经尿道前列腺切除术、肾活组织检查、肝病或肾机能不全。

在本发明的实施方式中，本发明的化合物作为与低风险出血有关的病况的预防或治疗的一部分使用，其中治疗选自内腔镜检查伴活组织检查、前列腺或膀胱活组织检查、电生理学研究或用于室上性心动过速的射频导管消融术(包括通过单次经室间隔穿刺的左边消融)、血管照相术、起搏器或埋藏式复律除颤器(ICD)植入(除非复杂的解剖学环境，例如，先天性心脏病)、机械瓣膜植入或人工瓣膜植入。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于避免或减轻现有抗凝血疗法，如达比加群、利伐沙班、阿哌沙班、华法林、依度沙班和贝曲西班的禁忌征。

在本发明的方面中，提供了本发明的化合物用于避免或减轻现有抗凝血疗法，如达比加群、利伐沙班、阿哌沙班、华法林、依度沙班和贝曲西班的禁忌征的使用。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用利伐沙班的疗法的禁忌征；其中禁忌征可以包括：小于15mL/分钟/1.73m

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用阿哌沙班的疗法的禁忌征；其中禁忌征可以包括：小于15mL/min的肌酐清除率(CrCl)或者<15mL/分钟/1.73m

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用依度沙班的疗法的禁忌征；其中禁忌征包括由于与华法林相比，缺血性中风风险升高而未在CrCl>95mL/分钟的NVAF患者中使用依度沙班。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用达比加群的疗法的禁忌征；其中禁忌征包括患有心房颤动的中风预防(与非瓣膜心房颤动有关的中风和全身性栓塞的预防)、肾损害CrCl<15mL/min或透析、DVT或PE治疗(指明用于治疗已用肠胃外抗凝血剂治疗5-10天的患者的深静脉血栓形成(DVT)和肺栓子(PE))、CrCl≤30mL/min或透析、DVT或PE预防(指明在髋关节置换术后用于预防深静脉血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE))、达比加群与去纤维蛋白多核苷酸、米非司酮和人凝血酶原复合物浓缩物禁用，达比加群不应与以下药剂一起使用：抗凝血酶alfa、抗凝血酶iii、阿哌沙班、卡马西平、达肝素钠、地塞米松、多柔比星、多柔比星脂质体、决奈达隆、依度沙班、依诺肝素、磺达肝素、磷苯妥英、肝素、酮康唑、来匹卢定、奈法唑酮、苯巴比妥、苯妥英、扑米酮、利福平、金丝桃、替诺福韦df、替拉那韦、长春碱和华法林。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用达比加群的疗法的禁忌征；其中禁忌征包括：肾损害(CrCl<15mL/min)、血液透析、过敏症、活动性病理出血、止血损伤、机械或人工心瓣、血栓栓塞事件(例如，瓣膜血栓形成、中风、TIAs、MI)、过量大出血(显著的术后心包积液，需要干预血液动力学障碍)、分娩和生产期间出血风险升高、用于活动性出血的抗凝血剂、选择性外科手术或侵袭性程序、中风风险升高的患者、当与抗血小板剂、华法林、肝素、纤维蛋白溶解疗法和长期NSAID或阿司匹林共施用时增加的出血风险、先天性或获得性凝血障碍、溃疡性GI病及其它胃炎样症状、近期出血、近期脑、脊柱或眼科手术、经历轴索麻醉(脊椎/硬膜外麻醉)的患者、具有出现可以导致长期或永久性瘫痪的硬膜外或脊柱血肿风险的经历椎管穿刺的患者，与P-gp诱导剂和抑制剂、P-gp诱导剂(例如，利福平)或它们的任意组合的共施用。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于减轻使用贝曲西班的疗法的禁忌征；其中禁忌征包括：服用P-gp抑制剂的患者、患有严重肾损害的患者、患有肝损害的患者、患有内源性凝血异常的患者或者具有人工心瓣的患者，与影响止血的药物(借此提高出血风险)共施用、与阿司匹林共施用、与其它抗血小板剂共施用、与其它抗凝血剂共施用、与肝素共施用、与血栓溶解剂共施用、与选择性血清素重吸收抑制剂(SSRIs)共施用、与5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRIs)共施用和与非甾族抗炎药物(NSAIDs)共施用。

在一个实施方式中，本发明的化合物可以用作用于血栓栓塞病症的预防和/或疗法的抗凝血剂；其中病症是以下中的一个：心肌梗塞、心绞痛(包括不稳定性绞痛)、血管成形术或主动脉冠状动脉分流术后的再闭塞和再狭窄、中风、心房颤动患者以降低他们的中风风险、心房颤动和慢性肾病患者、短暂性缺血发作、外周动脉闭塞病症、再灌注损伤，也称为局部缺血性-再灌注损伤、经导管主动脉瓣置换术(TAVR)，也称为经导管主动脉瓣植入(TAVI)、肺栓塞、深静脉微血管疾病或需要体外膜肺氧合(ECMO)的患者。

在一个实施方式中，根据本发明的化合物可以适合于预防和/或治疗弥漫性血管内凝血(DIC)。

在一个实施方式中，本发明的化合物还适合于预防和/或治疗动脉粥样硬化和关节炎，并且另外还适合于预防和/或治疗癌症患者的血栓形成。

在一个实施方式中，本发明的化合物用于在预防和/或治疗血栓形成的方法中使用。

在本发明的方面中，本文所公开的化合物可以用作抗凝血剂。

在本发明的方面中，提供了预防血栓形成或深静脉血栓形成，预防和/或治疗选自下列的病况的方法：血栓形成、复杂左侧消融(肺静脉分离；VT消融)、脊柱或硬膜外麻醉、腰部诊断性穿刺、胸外科手术、腹部外科手术、骨科大手术、肝活组织检查、经尿道前列腺切除术、肾活组织检查、肾机能不全、肝病、内腔镜检查伴活组织检查、前列腺或膀胱活组织检查、电生理学研究或用于室上性心动过速的射频导管消融术(包括通过单次经室间隔穿刺的左边消融)、血管照相术、起搏器或埋藏式复律除颤器(ICD)植入(除非复杂的解剖学环境，例如，先天性心脏病)、机械瓣膜植入、人工瓣膜植入、心肌梗塞、心绞痛(包括不稳定性绞痛)、血管成形术或主动脉冠状动脉分流术后的再闭塞和再狭窄、中风、心房颤动患者以降低他们的中风风险、患有心房颤动和慢性肾病的患者、短暂性缺血发作、外周动脉闭塞病症、肺栓塞、深静脉微血管疾病、需要体外膜肺氧合(ECMO)的患者、需要体外循环，如冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者、弥漫性血管内凝血(DIC)、动脉粥样硬化、关节炎、癌症患者的血栓形成、无症状性脑缺血、中风、神经创伤性病症、神经炎性病症、包括与人工表面接触的医学程序，包括肾脏透析、其中FXIIa的抑制可以是有益的其它病况，如阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、黄斑变性、糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿、中风中的脑水肿、引起水肿的其它原因、遗传性血管性水肿或获得性血管性水肿，其中方法包括施用治疗有效量的本发明的化合物或作为共疗法施用治疗有效量的本发明的化合物。

在本发明的方面中，提供了预防凝血的方法，其中方法包括施用治疗有效量的本发明的化合物。

在本发明的方面中，提供了预防和/或治疗血栓形成的方法，其中方法包括施用治疗有效量的本发明的化合物。

在本发明的方面中，提供了本发明的化合物在用于预防和/或治疗通过因子XII(任选地因子XIIa)的抑制可预防和/或可治疗的病况的药剂生产中的使用，例如，病况可以是血栓形成。

在本发明的另一个方面，提供了药物组合物，其中组合物包含本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂。

在一个实施方式中，药物组合物可以是包含其它药物活性剂的组合产品。其它药物活性剂可以是在本文其它处所公开的活性剂。

本发明的化合物可以用于预防和/或治疗任何以上公开的病况。可替换地，本发明的化合物可以在以上公开的病况的预防和/或治疗中用作共疗法。当本发明的化合物相对于特定病况用作共疗法时，它表示本发明的化合物可以与病况的另一种本领域已知的疗法组合使用。例如，FXII(a)抑制剂可以与抗-血小板疗法组合使用以提供提高的抗-血栓形成效力而不会导致与单独的抗-血小板疗法相比提高的出血风险。此外，FXII(a)抑制剂有可能与其它治疗组合使用。

附图说明

图1示出了使用标准静脉内施用剂量，化合物M05272在股血管氯化铁引起的血栓形成模型中的抗凝血效力。相对于仅对于60分钟时间点施用媒介物(vehicle)的小鼠计算凝块形成的抑制百分比。每组使用最少4只小鼠。

具体实施方式

以下提供了在本发明申请中使用的术语定义。本文中未定义的任何术语采取技术人员将理解的术语的正常含义。

术语“卤素(卤代，halo)”是指卤族元素(halogen)(元素周期表的17族)中的一个。具体地，该术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，该术语是指溴或碘。

术语“烷基”是指直链或支链烃链。例如，术语“C

术语“烷氧基”是指通过氧连接至分子的烷基。例如，术语“C

术语“卤代烷基”是指被至少一个卤素原子取代的烃链，卤素原子在每次出现时独立地选自(例如)氟、氯、溴和碘。例如，术语“C

术语“烯基”是指含有至少一个双键的支链或直链烃链。例如，术语“C

术语“炔基”是指含有至少一个三键的支链或直链烃链。例如，术语“C

术语“杂烷基”是指含有位于链中或链末端的任何碳之间的选自N、O和S的至少一个杂原子的支链或直链烃链。例如，术语“C

术语“碳环”是指含有饱和或不饱和碳的环系统。“碳环”系统可以是单环或稠合多环系统，例如，双环或三环。“碳环”部分可以含有3至14个碳原子，例如，在单环系统中含有3至8个碳原子并且在多环体系中含有7至14个碳原子。“碳环”涵盖了环烷基部分、环烯基部分、芳基环系统和包含芳香部分的稠环系统。

术语“杂环”是指含有选自N、O或S的至少一个杂原子的饱和或不饱和的环系统。“杂环”系统可以含有1、2、3或4个杂原子，例如，1或2个。“杂环”系统可以是单环或稠合多环系统，例如，双环或三环。“杂环”部分可以含有3至14个碳原子，例如，在单环系统中含有3至8个碳原子并且在多环体系中含有7至14个碳原子。“杂环”涵盖了杂环烷基部分、杂环烯基部分和杂芳香部分。例如，杂环基可以是：环氧乙烷、氮丙啶、氮杂环丁烷、环氧丙烷、四氢呋喃、吡咯烷、咪唑烯、琥珀酰亚胺、吡唑烷、噁唑烷、异噁唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哌嗪和四氢吡喃。

术语环烷基是指饱和烃环系统。例如，“C

术语“C

术语“杂环烷基”是指含有碳原子并且在环内含有选自N、O和S的至少一个杂原子的饱和烃环系统。例如，可以存在1、2或3个杂原子，任选地，1或2个。“杂环烷基”可以通过任何碳原子或杂原子键合至该分子的其余部分。“杂环烷基”可以具有与该分子的其余部分的一个或多个，例如，一个或两个键：这些键可以通过该环中的任何原子。例如，“杂环烷基”可以是“C

术语“杂环烯基”是指含有碳原子并且在环内含有选自N、O和S的至少一个杂原子的非芳族不饱和烃环系统。例如，可以存在1、2或3个杂原子，任选地，1或2个。“杂环烯基”可以通过任何碳原子或杂原子键合至该分子的其余部分。“杂环烯基”可以具有与该分子的其余部分的一个或多个，例如，一个或两个键：这些键可以通过该环中的任何原子。例如，“杂环烯基”可以是“C

当作为整体应用于取代基时，术语“芳族的”表示在其中导致产生共轭π系统的所有原子均处于相同平面的环或环系统内的共轭π系统中具有4n+2个电子的单环或多环系统。

术语“芳基”是指芳烃环系统。环系统在其中导致产生共轭π系统的所有原子均处于相同平面的环内的共轭π系统中具有4n+2个电子。例如，“芳基”可以是苯基和萘基。芳基系统本身可以被其它基团取代。术语“芳基”还包括非完全芳族，但在环系统内含有芳环的双环或三环系统，例如，茚满或四氢萘。

术语“杂芳基”是指在单环或在稠环系统内具有至少一个选自O、N和S的杂原子的芳烃环系统。环或环系统在其中导致产生共轭π系统的所有原子均处于相同平面的共轭π系统中具有4n+2个电子。例如，“杂芳基”可以是咪唑、噻吩、呋喃、噻蒽、吡咯、苯并咪唑、吡唑、吡嗪、吡啶、嘧啶和吲哚。术语“杂芳基”还包括非完全芳族，但含有芳环的双环或三环系统。杂原子可以存在于芳环或非芳环中的环系统内。例如，杂芳基还涵盖了苯并吡喃、色满、二氢吲哚、四氢喹啉。

在本文中，术语“卤素”包括对F、Cl、Br和I的提及。卤素可以是Br。卤素可以是I。

以

作为实线和虚线所画出的键表示可以是单键或双键的键，只要在化学上是可能的。例如，以下所画的键可以是单键或双键。

当部分被取代时，它可以在部分的任一点取代，只要在化学上是可能的并且符合化合价要求。部分可以被一个或多个取代基，例如，1、2、3或4个取代基取代；任选地，在基团上存在1或2个取代基。当存在两个或更多个取代基时，取代基可以是相同或不同的。取代基可以选自：OH、NHR、脒基、胍基、羟基胍基、亚胺甲基氨、异硫脲基、脲基、巯基、C(O)H、酰基、酰氧基、羧基、磺基、氨磺酰、氨基甲酰基、氰基、偶氮、硝基、卤素、C

取代基仅存在于其中它们在化学上是可能的位置，本领域技术人员能够(通过实验或理论上)决定哪些取代在化学上是可能的，哪些不是，而无需不适当的工作。

邻、间和对位取代是在本领域中很好地理解的术语。为了消除疑问，“邻位”取代是其中相邻的碳具有取代基的取代型式，取代基是单一基团，例如，在以下实例中的氟代基团，或者分子的其它部分，如通过以

“间位”取代是其中两个取代基位于彼此间隔一个碳的碳上的取代型式，即在取代的碳之间具有单一碳原子。换言之，在远离具有另一个取代基的原子的第二个原子上存在取代基。例如，以下基团是间位取代的。

“对位”取代是其中两个取代基位于彼此间隔两个碳的碳上的取代型式，即在取代的碳之间具有两个碳原子。换言之，在远离具有另一个取代基的原子的第三个原子上存在取代基。例如，以下基团是对位取代的。

“酰基”表示通过羟基的除去，来源于(例如)有机酸的有机基，例如，具有式R-C(O)-的基团，其中R可以选自H、C

在整个描述过程中，本发明公开的化合物还包含其药学上可接受的盐、溶剂化物和立体异构体。当化合物具有立构中心时，本发明考虑了(R)和(S)立体异构体，同样地通过本发明申请完成了立体异构体的混合物或外消旋混合物。当本发明的化合物具有两个或更多个立构中心时，考虑了(R)和(S)立体异构体的任意组合。(R)和(S)立体异构体的组合可以导致非对映体混合物或单一非对映异构体。本发明的化合物可以作为单一立体异构体存在或者可以是立体异构体的混合物，例如，外消旋混合物及其它对映体混合物和非对映体混合物。当混合物是对映异构体的混合物时，对映体过量可以是任何以上所公开的那些。当化合物是单一立体异构体时，化合物仍可以作为杂质含有其它非对映异构体或对映异构体。因此，单一立体异构体不必需具有100％的对映体过量(e.e.)或非对映体过量(d.e.)，但是可以具有约至少85％，至少60％或以下的e.e.或d.e.。例如，e.e.或d.e.可以是90％或以上，90％或以上，80％或以上，70％或以上，60％或以上，50％或以上，40％或以上，30％或以上，20％或以上或者10％或以上。

本发明考虑了本发明化合物的药学上可接受的盐。这些可以包括化合物的酸加成盐和碱盐。这些可以是化合物的酸加成盐和碱盐。另外，本发明考虑了化合物的溶剂化物。这些可以是化合物的水合物或其它溶剂化形式。

适合的酸加成盐由形成无毒盐的酸组成。实例包括：乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、1,5-萘二磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/二氢磷酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟醋酸盐。

适合的碱盐由形成无毒盐的碱组成。实例包括：铝、精氨酸、苄星青霉素、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。还可以形成酸和碱的半盐，例如，半硫酸盐和半钙盐。有关适合的盐的综述，参见Stahl and Wermuth的"Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use"(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。

可以通过三种方法中的一种或多种制备式(I)的化合物的药学上可接受的盐：

(i)通过使本发明的化合物与所期望的酸或碱反应；

(ii)通过从本发明的化合物的适合前体除去酸-或碱-不稳定的保护基或者通过使用所期望的酸或碱使适合的环前体，例如，内酯或内酰胺开环；或者

(iii)通过与适当的酸或碱反应或者通过适合的离子交换柱将本发明的化合物的一种盐转化为另一种。

通常在溶液中进行全部三种反应。可以使所得的盐沉淀出并通过过滤收集或者可以通过蒸发溶剂回收。所得的盐中的离子化程度可以在完全电离至几乎不电离之间改变。

本发明的化合物可以以非溶剂化和溶剂化形式两者存在。术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含本发明的化合物和化学计量的量的一种或多种药物可用的溶剂分子，例如，乙醇的分子络合物。当溶剂是水时，使用术语“水合物”。

在本发明的范围内包括了络合物，如笼形物、药物-主体分子包合络合物，其中与上述溶剂化物相反，药物和主体分子以化学计量的或非化学计量的量存在。还包括含有可以处于化学计量的或非化学计量的量的两种或更多种有机和/或无机组分的药物的络合物。所得络合物可以是电离、部分电离或非电离的。有关这些络合物的综述，参见J PharmSci,64(8),1269-1288by Haleblian(August 1975)。

在下文中，对任何制剂的化合物的所有提及包括对其盐、溶剂化物和络合物的提及以及对其盐的溶剂化物和络合物的提及。

本发明的化合物包括如本文所定义的一些制剂的化合物，包括其所有多晶形物和晶体惯态，如下文所定义的其前体药物和异构体(包括光学、几何和互变异构体)和本发明的同位素-标记的化合物。

本发明还包括本发明的所有药物可用的同位素-标记的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数，但是原子量或质量数不同于自然界中最常见的原子量或质量数的原子取代。

适合于在本发明的化合物中包括的同位素的实例包括氢的同位素，如

某些同位素-标记的化合物，例如，引入放射性同位素的那些在药物和/或底物组织分布研究中是有用的。考虑到它们易于掺入和方便的检测方式，对于该目的，放射性同位素氚，即

用重同位素，如氘，即

在纯化前，基于所使用的合成程序，本发明的化合物可以作为对映异构体的混合物存在。可以通过本领域中已知的常规方法分离对映异构体。因此，本发明覆盖了单个对映异构体及其混合物。

对于本发明的化合物的制备方法的一些步骤，可能必需保护不希望反应的潜在反应性功能并因此切割保护基。在这种情况下，可以使用任何相容的保护基。具体地，可以使用保护和脱保护的方法，如T.W.GREENE(Protective Groups in Organic Synthesis,A.Wiley-lnterscience Publication,1981)或P.J.Kocienski(Protecting groups,GeorgThieme Verlag,1994)描述的那些。在先前方法中使用的所有上述反应和新型起始材料的制备是常规的，并且参考文献先例和与之有关的实例和制备，对于它们的性能或制备的适当试剂和反应条件以及分离所期望的产物的程序是本领域技术人员熟知的。

另外，可以根据多种熟知的方法，如(例如)结晶或色谱法纯化本发明的化合物以及用于其制备的中间体。

本发明的一种或多种化合物可以与一种或多种药剂混合，例如，抗炎剂、抗-纤维化剂、化疗剂、抗癌剂、免疫抑制剂、抗-肿瘤疫苗、细胞因子疗法或者酪氨酸激酶抑制剂，以用于治疗通过ROCK抑制所调节的病况，例如，纤维化疾病、自体免疫、炎性-纤维化病况、炎性病况、中枢神经系统病症或者癌症。

可以通过治疗的单个组分的同时、顺序或单独剂量施用来实现这种组合治疗。这些组合产品使用了在上述治疗有效的剂量范围内的本发明的化合物和在其批准的剂量范围内的另一种药物-活性剂。

可以单独或与其它药物活性剂(例如，具体地，对于上述疾病的治疗和/或预防有效的药剂)组合体内施用本发明的化合物。适合的组合包括本发明的化合物以及一种或多种活性物质，可以通过举例提及活性物质并且其优选地为：降脂剂，具体地，HMG-CoA-(3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A)-还原酶抑制剂；冠状动脉治疗剂/血管扩张剂，具体地ACE(血管紧张素转化酶)抑制剂；AII(血管紧张素II)受体拮抗剂；β-肾上腺素能受体拮抗剂；α-1-肾上腺素能受体拮抗剂；利尿剂；钙离子通道阻断剂；导致环磷酸鸟苷(cOMP)升高的物质，如，例如，可溶性鸟苷酸环化酶的刺激剂；纤维蛋白溶酶原活化因子(血栓溶解剂/溶纤维蛋白)和提高血栓溶解/纤维蛋白溶解的化合物，如纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂抑制剂的抑制剂(PAI抑制剂)或凝血酶-激活的纤维蛋白溶解抑制剂(TAFI)的抑制剂；具有抗凝活性的物质(抗凝血剂)；抑制血小板凝聚的物质(血小板凝聚抑制剂、凝血细胞凝聚抑制剂)；和纤维蛋白原受体拮抗剂(糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂)。

本发明的化合物在癌症治疗中可以是有利的，因为癌症患者具有血栓前期状态并且可能需要抗凝血剂。这通常必须与出血风险平衡，因此，本文的化合物由于出血风险降低而在癌症患者中提供了更安全的抗凝血剂。对于癌症治疗，本发明的化合物可以与已知的癌症治疗疗法组合施用。

本发明的化合物可以以单晶形式或者以晶体形式的混合物存在或者它们可以是无定形的。因此，可以将设计用于药物使用的本发明的化合物作为晶体或无定形产物施用。例如，可以通过如沉淀、结晶、冷冻干燥或喷雾干燥或蒸发干燥的方法作为固体塞(solidplugs)、粉末或薄膜获得它们。微波或高频干燥可以用于该目的。

对于本发明的上述化合物，当然所施用的剂量将随所使用的化合物、施用形式、所期望的治疗和所指明的病症而改变。药物剂量领域内的技术人员将容易地鉴别适合的剂量，例如，剂量可以是标准剂量的量。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以独自使用，但是通常将以药物组合物的形式施用，其中本发明的化合物或其药学上可接受的盐与药物可用的佐剂、稀释剂或载体结合。用于选择和制备适合的药物制剂的常规程序描述于(例如)"Pharmaceuticals-TheScience of Dosage Form Designs",M.E.Aulton,Churchill Livingstone,1988。

基于本发明的化合物的施用形式，用于施用本发明的化合物的药物组合物将优选地包括0.05至99％w(重量百分比)的本发明的化合物，更优选地0.05至80％w的本发明的化合物，更优选地0.10至70％w的本发明的化合物并且更优选地0.10至50％w的本发明的化合物，所有重量百分率基于全部组成。

可以将药物组合物以(例如)乳膏剂、凝胶剂、洗剂、溶液、混悬液的形式局部施用(例如至皮肤)，或者全身施用，例如，通过以片剂、胶囊剂、糖浆、粉末或颗粒剂的形式口服施用；或者通过以用于注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的无菌溶液、混悬液或乳液的形式肠胃外施用；通过以栓剂形式直肠施用；或者通过以气溶胶形式吸入。

对于口服施用，本发明的化合物可以与佐剂或载体混合，例如，乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇；淀粉，例如，马铃薯淀粉、玉米淀粉或支链淀粉；纤维素衍生物；粘结剂，例如，明胶或聚乙烯吡咯烷酮；和/或润滑剂，例如，硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等，然后挤压成片剂。如果需要糖衣片剂，则可以用浓缩糖溶液涂覆如上制备的核，浓缩糖溶液可以含有(例如)阿拉伯胶、明胶、滑石和二氧化钛。可替换地，可以用溶于易于挥发的有机溶剂中的适合的聚合物涂覆片剂。

对于柔胶囊(软胶胶囊，soft gelatin capsule)的制备，本发明的化合物可以与(例如)植物油或聚乙二醇混合。使用任何上述用于片剂的赋形剂，硬胶囊(硬胶胶囊，hardgelatin capsule)可以含有化合物的颗粒。另外，可以将本发明的化合物的液体或半固体制剂填充至硬胶囊。用于口服的液体制剂可以处于糖浆或混悬液的形式，例如，含有本发明的化合物的溶液，而其余部分是糖和乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。任选地，这些液体制剂可以含有着色剂、调味剂、甜味剂(如糖精)、防腐剂和/或作为增稠剂的羧甲基纤维素或本领域技术人员已知的其它赋形剂。

对于静脉内(肠胃外)施用，本发明的化合物可以作为无菌水或油溶液施用。

出于本发明的化合物的治疗目的的剂量大小将天然地根据病况的性质和严重程度，动物或患者的年龄和性别以及施用途径，根据熟知的医学原则而改变。

预计本发明的化合物的剂量水平、剂量频率和治疗持续时间将基于制剂和临床适应症、患者的年龄和共病医学病况而不同。使用本发明的化合物的治疗的标准持续时间可以是任何时间长度。例如，治疗持续时间可以是数天、数周、数月或数年。治疗可以是无限期的。对于大部分临床适应症，可能治疗可以在1个月至7个月之间。在复发性感染或与对其存在供血不良的组织或植入材料，包括骨/关节、呼吸道、心内膜和牙科组织有关的感染的情况下，可能必需将治疗持续时间延长至7天以外。

实施例和合成

1H-NMR：在Bruker DRX 400MHz或Jeol ECS 400MHz光谱仪上获得光谱。在294K(除非另作说明)测量光谱，并且以TMS(0.0ppm)、DMSO-d6(2.50ppm)、CDCl3(7.26ppm)做参比，以百万分中的一个(ppm)报告化学位移(δ-值)。以赫兹(Hz)报告耦合常数(J)，并将光谱裂分模式表示为单峰(s)、双重峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、多重峰或更多重叠信号(m)，宽信号(br)；在括号中提供了溶剂。

缩写

在实施例及其它说明部分中使用了以下缩写。

ABCN：偶氮双环己烷腈；Boc：叔丁氧羰基；Cbz：苄氧羰基；DavePhos：2-二环己基膦-2'-(N,N-二甲基氨)联苯；dba：三(二亚苄基丙酮)；DBU：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCE：1,2-二氯乙烷；DCM：二氯甲烷；DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；二噁烷：1,4-二噁烷；DIPEA：二异丙基乙胺；DMA：二甲基乙酰胺；DMAP：4-(二甲基氨)吡啶；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DMS：二甲基硫化物；DMSO：二甲亚砜；Dppf：1,1'-双(二苯基膦)二茂铁；dtbpf：([1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]；EtOAc：乙酸乙酯；Fmoc：9-芴甲氧羰基；h：小时；HATU：2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐；HBTU：(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐；HPLC：高效液相色谱；MIDA：N-甲基亚氨基二乙酸；min：分钟；LCMS：液相色谱-质谱；MS：质谱；Ms：甲磺酰基；Pet-醚：石油醚(b.p.60-80℃)；quant.：定量(转化)；Rt：保留时间；RT：室温；SCX：强阳离子交换；TEA：三乙胺；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃；TsCl：p-甲苯磺酰氯；XPhos：2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯；XantPhos：4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽；

分析方法

使用以下所列参数，使用反相分析HPLC-MS进行产物和中间体的分析。

HPLC分析方法：

AnalpH2_MeOH_4min:Phenomenex Luna C18(2)3μm,50×4.6mm；A＝水+0.1％甲酸；B＝MeOH+0.1％甲酸；45℃；％B:0.0min 5％,1.0min37.5％,3.0min 95％,3.5min95％,3.51min 5％,4.0min 5％；2.25mL/min。

AnalpH2_50-95MeOH_4min:Phenomenex Luna C18(2)3μm,50×4.6mm；A＝水+0.1％甲酸；B＝MeOH+0.1％甲酸；45℃；％B:0.0min 50％,1.5min 95％,3.5min 95％,3.51min 5％,4.0min 5％；2.25mL/min。

AnalpH9_MeOH_4min:Phenomenex Luna C18(2)3μm,50×4.6mm；A＝水pH 9(碳酸氢铵10mM)；B＝MeOH+0.1％甲酸；45℃；％B:0.0min5％,1.0min 37.5％,3.0min 95％,3.5min 95％,3.51 5％,4.0min 5％；2.25mL/min。

AnalpH2_MeOH_QC_V1:Phenomenex Gemini NX C18 5μm,150×4.6mm；A＝水+0.1％甲酸；B＝MeOH+0.1％甲酸；40℃；％B:0.0min 5％,0.5min,5％,7.5min 95％,10.0min 95％,10.1min 5％,13.0min 5％；1.5mL/min。

AnalpH9_MeOH_QC_V1:Phenomenex Gemini NX C18 5μm,150×4.6mm；A＝水+pH 9(碳酸氢铵10mM)；B＝MeOH；40℃；％B:0.0min 5％,0.50min 5％,7.5min 95％,10.0min95％,10.1min 5％,13.0min 5％；1.5mL/min。

Agilent_MeCN_HPLC_3min:Phenomenex Luna C18,50×2mm:A＝水+0.1％甲酸；B＝MeCN+0.1％甲酸；5-95％B 0-3min；1mL/min

UPLC分析方法

AnalpH2_MeCN_UPLC_3.8min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×50mm,A＝水+0.05％甲酸；B:乙腈+0.05％甲酸；35℃；％B:0.0min 10％,0.5min 10％,1min 35％,1.5min 45％,2.3min 90％,3.2min 90％,3.8min 10％；0.55mL/min

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×50mm,A＝水+0.05％甲酸；B:乙腈+0.05％甲酸；35℃；％B:0.0min 10％,0.5min 10％,1min 35％,1.5min 45％,2.3min 90％,3.2min 90％,3.6min 10％,4.0min 10％；0.55mL/min

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.2min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×50mm,A＝水+0.05％甲酸；B:乙腈+0.05％甲酸；40℃；％A:0.0min 95％,0.3min 95％,2min 5％,3.5min5％,3.6min 95％,4.2min 95％；0.6mL/min

AnalpH2_MeCN_UPLC_5.0min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×50mm,A＝水+0.05％甲酸；B:乙腈+0.05％甲酸；40℃；％A:0.0min 50％,3.0min 90％,5.0min 90％,5.1min 50％；0.4mL/min

AnalpH2_MeCN_UPLC_6.1min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×100mm,A＝水+0.05％甲酸；B:乙腈+0.05％甲酸；40℃；％A:0.0min 60％,2.0min 90％,6.0min 90％,6.1min 60％；0.3mL/min

AnalpH9_MeCN_UPLC_10min:Acquity UPLC BEH C-18 1.7um,2.1×50mm,A＝5mM乙酸铵的水溶液；B:乙腈；40℃；％B:0.0min 3％,1.0min 3％,7.0min 100％,7.5min100％,9.0min 3％,10min 3％；0.5mL/min

Thermo_MeOH_UHPLC_1.2min:Phenomenex Kinetex,2.6uM,50×2.1mm,A＝水+0.1％甲酸；B＝MeOH+0.1％甲酸；2-95％B 0-1.0min；1.3mL/min

一般方法

一般方法1(GM1)：酰胺偶联

将羧酸(1.0eq)、胺(1.0-1.5eq)、N,N-二异丙基乙胺或三乙胺(1.5-3.0eq)和偶联剂，如HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐)、HATU(1-[双(二甲基氨)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸盐)或HCTU(O-(1H-6-氯代苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐)(1.0-1.5eq)在无水溶剂，如DMF或DCM中的混合物在室温下搅拌1-72h。使用以下方法中的一个分离和纯化产物：

用水和NaCl的饱和水溶液的混合物稀释反应混合物并用EtOAc萃取。用Na

真空除去溶剂并将残余物溶于EtOAc，用NaHCO

用水或NaCl的饱和水溶液稀释反应并用DCM萃取。用MgSO

将反应在冰浴中冷却并用水稀释并用EtOAc萃取。用NaHCO

一般方法2(GM2)：Boc脱保护

方法Boc脱保护2A：将Boc-保护的胺在DCM:TFA(以10:1至1:1的比例)的混合物中搅拌1-18h。

方法Boc脱保护2B：将Boc-保护的胺溶于EtOAc或DCM中，并且添加4M HCl在二噁烷中的溶液、2M HCl在Et

方法Boc脱保护2C：将粗Boc-保护的胺在DCM中的溶液通过MP-TsOH柱，用MeOH(多至5倍柱体积)清洗并用2M NH

将反应混合物(或含有产物的部份：方法2C)真空浓缩以获得粗材料，将粗材料作为粗产物使用或者通过以下方法中的一个纯化：

SCX-2，然后通过制备HPLC

通过添加1M NH

用0.5N HCl

反相色谱法

加入水和饱和NaHCO

制备HPLC，任选地随后进行SCX-2。

SCX-2，随后添加4M HCl在二噁烷中的溶液并除去溶剂以提供HCl盐。

一般方法3(GM3)：氢化

一般方法3A(用H

任选地，可以在反应过程中添加另外部分的Pd/C。

一般方法3B(用甲酸铵氢化)：将烯烃(1eq)溶于EtOH并添加Pd/C(0.5eq)和NH

任选地，可以在反应过程中添加另外部分的Pd/C和/或NH

一般方法3C(用H-Cube氢化)：将烯烃溶于质子溶剂并通过H-cube反应器(Pd/C柱)，典型条件：30℃，20巴，1mL/min。真空蒸发溶剂并且在未进一步纯化的情况下使用材料。

一般方法4(GM4)：酯水解

方法酯水解4A：将酯(1.0eq)溶于MeOH或1,4-二噁烷，并添加1M LiOH(1-2eq)并在室温下搅拌1-64h。

任选地，可以在反应期间添加另外当量的1M LiOH

方法酯水解4B：将酯(1.0eq)溶于1:1:1的1M NaOH/MeOH/THF溶液中并在室温下搅拌1-18h。

方法酯水解4C：将酯(1.0eq)溶于10M NaOH(5当量)在MeOH中的溶液中，并在60℃搅拌1-18h。

真空除去溶剂并使用以下方法中的一个分离产物：

粗产物在使用时未进一步纯化。

用水稀释并酸化至pH 1-4，然后用EtOAc或DCM萃取。用MgSO

将粗产物溶于水并用EtOAc或DCM清洗水层。用1M HCl使水层酸化并将产物萃取至EtOAc或DCM。干燥(MgSO

添加2N HCl，调节至pH 7。真空蒸发溶剂并将残余物溶于DCM。过滤溶液并减压浓缩滤液，将所得固体残余物真空干燥。

用水稀释粗混合物并用Et

一般方法5(GM5)：Fmoc脱保护

在室温下，将Fmoc-保护的胺在哌啶和DCM或DMF的10:1混合物中搅拌1-18h。减压除去溶剂并在未进一步纯化的情况下使用残余物，或者通过柱色谱法或制备HPLC纯化残余物。

一般方法6(GM6)：使用NaBH

方法NaBH

方法NaBH

真空浓缩该反应混合物，然后在饱和NaHCO

一般方法7(GM7)：甲基N-(二苯基亚甲基)甘氨酸盐的烷基化

在N

一般方法8(GM8)：苯甲酮脱保护和原位Boc保护

向甲基N-(二苯基亚甲基)甘氨酸盐衍生物(1.0eq)在DCM中的溶液中添加2M HCl在二乙醚(约20eq)中的溶液并将反应在RT下搅拌(24-72h)并真空浓缩反应混合物。向粗混合物在DCM中的溶液中添加Boc

一般方法9(GM9)：芳基碘向烷基碘偶联

向烘干、N

一般方法10(GM10)：使用胺的碘替换

向碘代物质(1.0eq)在无水DMF中的溶液中添加胺(2.5eq)并将反应加热至50℃。1h后，将反应混合物冷却至RT并用水稀释。用EtOAc萃取水溶液并用LiCl

一般方法11(GM11)：甲磺硫化和替换

在氮气下，向醇(1.0eq)在无水DCM中的溶液中添加Et

用环胺替换11A：向甲磺酸盐(1.0eq)在无水DMF中的溶液中添加环胺(10eq)并将反应加热至90℃，17-24h。将反应冷却至RT并用水稀释。用EtOAc(3×)萃取水溶液并用盐水(1×)清洗合并的有机相，用Na

用环酰胺的替换11B：在N

一般方法12(GM12)：—使用T3P的酰胺偶联

在0℃，向酸(1.0-1.1当量，取决于酸或胺是否是限制试剂)、(1.0-1.1eq，取决于酸或胺是否是限制试剂)和Et

RgA的合成

(4-氨甲基-苄基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯的合成：

步骤1：将1-(N-Boc-氨甲基)-4-(氨甲基)苯(3.80g，16.1mmol)溶于DCM(100mL)和DIPEA(5.0mL，29mmol)中，随后添加FmocCl(5.0g，19mmol)。在室温下将反应混合物搅拌1小时，然后出现沉淀。加入水(100mL)并将沉淀过滤并干燥以提供白色固体状的[4-(叔-丁氧羰基氨-甲基)-苄基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(6.32g，86％)

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.52min,m/z 481.3[M+H]

步骤2：[将[4-(叔-丁氧羰基氨-甲基)-苄基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(6.32g，13.2mmol)在二噁烷(50mL)中混悬并缓慢添加HCl溶液(4M在二噁烷中，20mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后添加另外部分的4M HCl在二噁烷中的溶液(10mL)，并将混合物在室温下另外搅拌2小时。用异己烷(150mL)稀释反应混合物，通过过滤收集产物并真空干燥以提供黄白色固体状的(4-氨甲基-苄基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(4.0g，73％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.32min,m/z 359.3[M+H]

5-氨甲基-3-甲氧基-吡啶-2-腈(对于GS7)

(5-甲氧基-1-氧-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯

将叔丁基(5-甲氧基吡啶-3-基)氨基甲酸甲酯(1eq)溶于氯仿(5mL)。加入间氯过氧苯甲酸(1.9eq)并将反应混合物在RT搅拌过夜。用二氯甲烷稀释反应混合物并用2M氢氧化钠的水溶液清洗。用MgSO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.26min,m/z 255.3[M+H]

(6-氰基-5-甲氧基-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯

将乙腈(2mL)加入至(5-甲氧基-1-氧-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(1eq)，然后加入二甲基氨基甲酰氯(1.56eq)。将反应混合物在40℃加热4h。然后，将反应混合物冷却至0℃，并加入氰化钠(3.3eq)在水(2mL)中的溶液。将反应混合物在RT搅拌过夜。加入2M氢氧化钠的水溶液(5mL)，并将反应混合物在RT下搅拌3h。加入另外的2M氢氧化钠水溶液(10mL)，并用乙酸乙酯萃取混合物(×3)。合并有机层，用MgSO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.60min,m/z 264.3[M+H]

5-氨甲基-3-甲氧基-吡啶-2-腈

用TFA:DCM的1:1混合物处理(6-氰基-5-甲氧基-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(1eq)。通过LCMS监测反应混合物。一旦起始材料已消耗，则真空浓缩反应混合物。通过SCX-2离子交换柱纯化粗材料以提供黄白色固体状的5-氨甲基-3-甲氧基-吡啶-2-腈(55mg，定量)。

AnalpH9_MeOH_4MIN:Rt:1.50min,m/z 164.3[M+H]

方案。1-氨基-异喹啉-6-腈的合成：

将1-氨基-6-溴代异喹啉(500mg，2.24mmol)溶于DMF(5mL)，加入Pd(PPh

AnalpH9_MeOH_4MIN:Rt:2.12min,m/z 170.1[M+H]

通过类似方法制备了以下化合物：

3-氯-1-甲基-1H-吲唑-6-腈

在室温下，向1-甲基-1H-吲唑-6-腈(20.0g，105mmol)在无水乙腈(250mL)中的搅拌溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(18.0g，150mmol)。反应完成后(通过薄层色谱法监测)，浓缩反应混合物并使用乙酸乙酯和石油醚(10-30％)溶液通过硅胶快速柱色谱纯化以提供白色固体状的3-氯-1-甲基-1H-吲唑-6-腈(13.0g，59％)。

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.2min:Rt:1.96min,m/z 192.1[M+H]

C-(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基)-甲胺

步骤-1：叔丁基(1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-基)甲基氨基甲酸酯

在0℃，向1-甲基-1H-苯并三唑-5-腈(5.0g，32mmol)在无水甲醇(200mL)中的搅拌溶液中添加Boc

步骤-2：(1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-基)六亚甲基四胺盐酸盐

将(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(5.05g，19.2mmol)溶于4MHCl在二噁烷(100mL)中的溶液并在室温下搅拌45min。过滤反应混合物并真空干燥以提供白色固体状的(1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-基)六亚甲基四胺盐酸盐(2.67g，53％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:0.38min,m/z 163.2[M+H]

通过类似方法制备了以下化合物：

(5-氨甲基-噻唑-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的合成

步骤1：将二碳酸二叔丁酯(746mg，3.42mmol)加入至2-氨甲基-噻唑-5-腈(5.0g，2.9mmol)在MeCN中的溶液中(10mL)。添加DMAP(355mg，0.29mmol)，然后添加Et

步骤2：将(5-氰基-噻唑-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯溶于MeOH(20mL)并冷却至0℃。添加NiCl

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:0.82-1.34min,m/z 244.4[M+H]

c-呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基-甲胺的合成

步骤1：将7-氯代呋喃并[2.3-c]吡啶(433mg，2.82mmol)溶于乙酸(6mL)并加入锌粉(1.03g，15.8mmol)。在冷却至室温之前，将反应混合物加热回流2小时。然后，过滤化合物并真空浓缩滤液。将所得固体溶于水，使用2M NaOH碱化并使用DCM萃取(×3)。使用MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:0.36min,m/z 120.2[M+H]+

步骤2：将呋喃并[2.3-c]吡啶(206mg，1.72mmol)溶于无水THF(8mL)并冷却至-78℃，然后添加n-丁基锂(0.87mL，2.15mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后添加DMF(0.27mL，3.44mmol)。使反应混合物加热至室温并搅拌18小时。用1M HCl使反应淬灭并使用NaHCO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:0.36min,m/z 148.1[M+H]+

步骤3：将呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲醛(165mg，1.12mmol)边加热边溶于乙醇(2.5mL)。添加盐酸羟胺(164mg，2.36mmol)在水中的溶液(0.33mL)和碳酸钾(164mg，1.19mmol)在水中的溶液(0.83mL)，并使反应混合物冷却至室温并搅拌18小时。过滤混合物并减压干燥残余物以提供黄白色固体状的呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲醛肟(130mg，72％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:0.37min,m/z 163.1[M+H]+

步骤4：将呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲醛肟(130mg，0.80mmol)溶于乙酸(2mL)并加入锌粉(293mg，4.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后，过滤混合物并真空浓缩滤液以产生橙色油状的c-呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基-甲胺(123mg，定量)，其在后续反应中以“原样”使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:0.27min,m/z 149.1[M+H]+

RgB的合成

用于RgB核的一般方案：

方案：4-(溴甲基)-2,3-二氢苯并呋喃的合成

(2,3-二氢-苯并呋喃-4-基)-甲醇

将2,3-二氢苯并呋喃-4-甲醛(2.00g，13.5mmol)溶于无水MeOH(30mL)并将溶液冷却至0℃。加入NaBH

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.00min,m/z 151.3[M+H]+

4-溴甲基-2,3-二氢-苯并呋喃

将2,3-二氢苯并呋喃-4-基甲醇(1.90g，12.6mmol)溶于无水DCM(30mL)并将混合物冷却至0℃。在10分钟内滴加PBr

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.99min,m/z未提供可鉴别的离子化

方案2A(酸)

路线1：(2S)-4-(1,3-苯并二茂-5-基甲基)-1-叔丁氧羰基-吡咯烷-2-羧酸的合成

(S)-4-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将Boc-L-焦谷氨酸甲酯(1.05g，4.32mmol)溶于无水THF(20mL)。将混合物冷却至-78℃。在-78℃，在10分钟内滴加LiHMDS(1M在THF中的溶液，4.40mL，4.40mmol)。将溶液在-78℃下搅拌1小时。然后，在-78℃，在30分钟内滴加5-(溴甲基)-1,3-苯并二噁茂(0.975g，4.53mmol)在无水THF(5mL)中的溶液。将溶液在-78℃下搅拌2小时。在持续搅拌的情况下滴加饱和NaHCO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.03min,m/z 378.3[M+H]+

任选地，在添加必要的溴化苄后，可以将反应在室温下搅拌多至18小时。

任选地，在反应完成后，可以将混合物加热至室温并用饱和NH

(2S,4R)-4-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将(S)-4-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(550mg，1.46mmol)溶于无水DCM(15mL)。将混合物冷却至0℃并在N

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.26min,m/z 364.3[M+H]+

任选地，在N

任选地，不完全反应可能具有额外的1M BH

任选地，可以通过反相HPLC纯化产物。

(2S,4R)-4-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯

将(2S,4R)-4-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(352mg，0.969mmol)溶于MeOH(7.5mL)。加入LiOH(1M在H

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.10min,m/z 350.3[M+H]+

通过类似方法制备了以下化合物：

方案2B(羧酸)：

路线2：(S)-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

(S)-5-氧-4-[1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-亚甲基]-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将Boc-L-焦谷氨酸甲酯(1.00g，4.11mmol)溶于无水THF(20mL)。将混合物冷却至-78℃并在10分钟内滴加LiHMDS(1M在THF中的溶液，4.30mL，4.30mmol)。将溶液在-78℃下搅拌1小时。然后，在-78℃，在30分钟内滴加2-(三氟甲基)异烟醛(0.720g，4.11mmol)在无水THF(5mL)中的溶液。然后，将所得溶液在-78℃下搅拌2.5小时。在持续搅拌的情况下，在约-40℃滴加H

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.92min,m/z 401.2[M+H]+

任选地，可以使用TsCl代替MsCl以实现脱水。

(S)-5-氧-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将(S)-5-氧-4-[1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-亚甲基]-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(0.800g，2.00mmol)和NH

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.82min,m/z 403.2[M+H]+

(S)-2-羟甲基-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

将(S)-5-氧-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(270mg，0.671mmol)溶于无水DCM(15mL)。加入1M BH

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.00min,m/z 361.2[M+H]+

任选地，在添加BH

(S)-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯

将((S)-2-羟甲基-4-(2-三氟甲基-吡啶-4-基甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(217mg，0.602mmol)、TEMPO(28mg，0.179mmol)和PhI(OAc)

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.17min,m/z 375.4[M+H]+

通过类似方法制备了以下化合物：

方案2C(酯)

以与方案2A和2B中所示的顺序类似的方式合成了以下化合物。差异在于最终的脱保护步骤，其已从皂化改变为Boc脱保护，已在一般方法2中描述了常规BOC脱保护方法。在以上部分(方案2A和2B)中也已讨论了先前步骤的实施例合成程序。

方案。(2S,4R)-4-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成：

步骤1：在氮气下，在-78℃，向Boc-L-焦谷氨酸甲酯(10.0g，41.2mmol)在无水THF(200mL)中的溶液中滴加LiHMDS(1M在THF中的溶液，45.2mL，45.2mmol，1.1eq)。然后，将反应混合物在-78℃搅拌2h。将2-吡啶甲醛(4.8g，45.2mmol)在-78℃加入至反应混合物并在-78℃搅拌另外4h。用饱和氯化铵(100mL)使反应淬灭。用EtOAc(3×200mL)萃取粗产物并用无水硫酸镁干燥合并的萃取物并真空浓缩。通过快速柱(15％EtOAc/己烷)色谱纯化粗产物以获得黄白色固体状的(S)-4-(羟基-吡啶-2-基-甲基)-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(6.5g，45％)。

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:1.38min,m/z 351.5[M+H]+

步骤2：在0℃，向(S)-4-(羟基-吡啶-2-基-甲基)-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(6.50g，18.6mmol)在DCM(65mL)中的溶液中添加TEA(25.8mL，186mmol)和甲磺酰氯(2.3g，20.4mmol)。将反应混合物在RT下搅拌3天。将反应混合物倒入冰冷的水中并用乙酸乙酯(2×500mL)萃取。用无水Na

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:1.94min,m/z 333.4[M+H]+

步骤3：在氮气氛下，向(S)-5-氧-4-[1-吡啶-2-基-亚甲基]-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(3.5g，10.5mmol)在甲醇(35mL)中的溶液中添加10％钯碳(1.75g，16.8mmol)。将混合物在60psi下氢化3h。用硅藻土过滤反应混合物，用甲醇清洗并减压浓缩以提供黄白色固体状的粗(S)-5-氧-4-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(3.5g，100％)。LCMS显示化合物为非对映体的混合物。

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:1.23min,m/z 335.5[M+H]+

步骤4：在-78℃，向(S)-5-氧-4-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(2.8g，8.38mmol)在THF(28mL)中的溶液中添加三乙基硼氢化锂(1.1mL，10mmol)并将反应混合物搅拌1h。用饱和碳酸氢钠使其淬灭并加热至0℃。在0℃添加35％H

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:1.28min,m/z 321.5[M+H]+

步骤5：在0℃，向(S)-4-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(650mg，2.05mmol)在MeOH(10mL)和THF(10mL)中的溶液中添加1N氢氧化钠溶液(10mL)。将反应混合物在RT搅拌1h。减压浓缩反应混合物并用1N HCl酸化，从而调节至～pH 4-5。用乙酸乙酯萃取水层并减压浓缩合并的有机萃取物以提供粗产物，通过SFC纯化粗产物以提供白色固体状的(2S,4R)-4-吡啶-2-基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯(276mg，44％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:1.78min,m/z 307.3[M+H]+

方案。(2S,4R)-4-环戊基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

步骤1：在-78℃，在氮气氛下，向环戊-1-烯羧酸乙酯(9.5g，75.3mmol)在己烷(100mL)中的溶液中滴加DIBAL(1M在THF中的溶液，82mL，83mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌3h。用饱和氯化铵(100mL)使反应混合物淬灭。用二乙醚(3×200mL)萃取粗产物并用无水硫酸镁干燥合并的有机萃取物并真空浓缩以获得黄色油状的环戊-1-烯基-甲醇(5.5g，75％)。

步骤2：在-78℃，向环戊-1-烯基-甲醇(5.5g，56mmol)在二乙醚(230mL)中的搅拌溶液中添加PBr

步骤3：将(S)-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(4.0g，16.4mmol)溶于无水THF(40mL)。将混合物在-78℃冷却并在氮气氛下滴加LiHMDS(1M在THF中的溶液，18mL，18mmol)。将反应混合物搅拌2h并滴加1-溴甲基-环戊烯(2.91g，18.1mmol)的溶液。将混合物在-78℃进一步搅拌3h。用饱和氯化铵(100mL)使反应淬灭。用EtOAc(3×200mL)萃取粗产物并用无水硫酸镁干燥合并的萃取物并真空浓缩。通过快速柱(0-5％EtOAc/异己烷)色谱纯化粗产物以获得白色固体状的(S)-4-环戊-1-烯基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(非对映体的混合物)(2.8g，53％)。

步骤4：在氮气氛下，向(S)-4-环戊-1-烯基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(3.0，9.3mmol)在甲醇中的溶液中添加10％钯-碳(1.48g，13.9mmol)。将反应混合物在气球压力下氢化3h。用硅藻土过滤反应混合物，用热甲醇清洗并减压浓缩以提供黄色液体状的粗(S)-4-环戊基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(2.7g，96％)，其在后续反应中作为粗产物使用。

步骤5：在0℃，在氩气下向(S)-4-环戊基甲基-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(2.7g，8.3mmol)在THF(30mL)中的搅拌溶液中添加BH

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:2.49&2.54min,m/z 284.4[M+H]+

步骤6：在0℃，向(S)-4-环戊基甲基-2-羟甲基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.1g，3.88mmol)在乙腈(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加TEMPO(182mg，1.16mmol)和碘代苯双乙酸酯(2.75g，8.54mmol)。将混合物在RT搅拌16h，然后用乙酸乙酯萃取(2×100mL)。用盐水(100mL)清洗合并的有机层，用Na

AnalpH2_MeCN_UPLC_6.1min:Rt:2.04min,未报告分子量

步骤7：在0℃，向(S)-4-环戊基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯(780mg，2.62mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加碳酸铯(1.28g，3.93mmol)和溴化苄(0.3mL，2.88mmol)。将混合物在RT，在N

AnalpH2_MeCN_UPLC_5.0min:Rt:2.99min,m/z 388.5[M+H]+

步骤8：在氮气氛下，在Parr振荡器中，向(2S,4R)-4-环戊基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸2-苄基酯1-叔丁酯(820mg，2.11mmol)在甲醇中的溶液中添加10％的钯碳(811mg)。将反应混合物在60psi氢化3h。通过硅藻土过滤混合物，用热甲醇清洗残余物并减压浓缩滤液以提供黄白色固体状的(2S,4R)-4-环戊基甲基-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯(480mg，75.5％)。

AnalpH2_MeCN_UPLC_5.0min:Rt:1.48min,m/z 242.4[M+H]+

方案。(2S,4S)-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

步骤1和2：在0℃，向四氢-吡喃-4-酮(25.0g，250mmol)和水(250mL)的搅拌混合物中添加氰化钠(12.2g，250mmol)，然后添加硫酸氢钠直至达到pH 4.3至5。将反应混合物在10℃搅拌1h。分离有机层，并用乙酸乙酯萃取水层两次。用小部分的水(50mL)清洗合并的有机层，然后减压浓缩。将所得产物再溶于甲苯(100mL)，加热至65℃并添加吡啶(50.0mL，614mmol)，随后缓慢添加POCl

步骤3：在氮气氛下，向冷却至-5℃的粗3,6-二氢-2H-吡喃-4-腈(28.0g，256mmol)在THF(40mL)中的溶液中滴加DIBAL(1M在THF中的溶液，256mL，256mmol)。将反应混合物搅拌3小时，用饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭并用二乙醚(3×300mL)萃取。用MgSO

AnalpH2_MeCN_UPLC_3.8min:Rt:1.28min,m/z 113.1[M+H]+

步骤4：在氮气氛下，将(S)-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(12.0g，49.3mmol)在无水THF(120mL)中的搅拌溶液冷却至-78℃。将LiHMDS(1M在THF中的溶液，54mL，54mmol)滴加至反应混合物。将混合物在-78℃搅拌2h，然后缓慢加入3,6-二氢-2H-吡喃-4-甲醛(6.0g，54.3mmol)的溶液。将混合物在-78℃进一步搅拌2h，然后用饱和氯化铵(200mL)溶液使反应淬灭。用EtOAc(3×300mL)萃取粗产物并用无水硫酸镁干燥合并的萃取物并真空浓缩。通过快速柱(0-5％EtOAc/异己烷)色谱纯化粗材料以获得白色固体状的(S)-4-[(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-羟基-甲基]-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(7.0g，40％)。

AnalpH2_MeCN_UPLC_3.8min:Rt:1.45&1.50min,未观察到质量离子

步骤5：在0℃，向(S)-4-[(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-羟基-甲基]-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(7.00g，19.6mmol)在DCM(70mL)中的溶液中添加TEA(27.4，196mmol)和MsCl(4.5mL，58.7mmol)。将反应混合物在RT搅拌4h，然后减压浓缩。将粗产物溶于水并用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。用无水Na

AnalpH2_MeCN_UPLC_5.0min:Rt:2.39min,m/z 338.4[M+Na]+

步骤6：在氮气氛下，向(S)-4-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基甲基)-5-氧-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(1.7g，5.0mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中添加10％钯碳(644mg，6.05mmol)。将混合物在60psi下氢化2h。用硅藻土过滤反应混合物，用热甲醇清洗残余物并减压浓缩合并的滤液和清洗液以提供黄白色固体状的(S)-5-氧-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(1.4g，81％)，其在后续反应中使用而未进一步纯化。

步骤7：在0℃，在氩气下向(S)-5-氧-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(1.4g，4.1mmol)在THF(60mL)中的搅拌溶液中添加BH

AnalpH2_MeCN_UPLC_3.8min:Rt:1.86min,m/z 300.6[M+H]+

步骤8：在0℃，向(S)-2-羟甲基-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(400mg，1.33mmol)在乙腈(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加TEMPO(250mg，1.59mmol)和碘代苯双乙酸酯(945mg，2.93mmol)。将混合物在室温下搅拌16h。用乙酸乙酯萃取反应混合物(2×100mL)并用盐水(100mL)清洗合并的有机层，用Na

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:2.24min,m/z 314.4[M+H]+

步骤9：在0℃，向(S)-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(150mg，0.479mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加碳酸铯(234mg，0.718mmol)、溴化苄(0.060mL，0.53mmol)。将混合物在RT搅拌2h，然后用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。用水、盐水(10mL)清洗合并的有机层并用无水Na

AnalpH2_MeCN_UPLC_4.0min:Rt:2.39min,m/z 404.5[M+H]+

步骤10：在氮气氛下，在Parr振荡器中，向(2S,4S)-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸2-苄基酯1-叔丁酯(40mg，0.10mmol)在甲醇中的溶液中添加10％钯碳(40mg)。将反应混合物在60psi氢化2h。通过硅藻土过滤混合物，用热甲醇清洗残余物并减压浓缩以提供黄白色半固体状的(2S,4S)-4-(四氢-吡喃-4-基甲基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(28mg，90％)。

AnalpH2_MeCN_UPLC_3.8min:Rt:1.66min,m/z 312.3[M-H]-

方案

(2S,4R)-4-(3,4-二氟-苯基)-4-羟基-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(M05128-int)的合成

将N-Boc-4-氧-L-脯氨酸-甲酯(300mg，1.23mmol)溶于THF并冷却至0℃。缓慢加入3,4-二氟苯溴化镁(0.5M在THF中的溶液，4.93mL，2.47mmol)并将混合物在0℃搅拌1h。添加水和EtOAc，用硅藻土过滤反应并分离层。用EtOAc萃取水层并干燥(MgSO

按照一般方法4B，使用6mL 1M NaOH/MeOH/THF水解(2S,4R)-4-(3,4-二氟-苯基)-4-羟基-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯并将其在RT下搅拌1h。除去溶剂并使用1MHCl将残余物酸化至pH 5。用EtOAc萃取水层，干燥(MgSO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.07min,m/z 366.3[M+Na]+

通过类似方法制备了以下化合物：

方案

方案。(2S,4R)-4-(3,4-二氟-苯基)-4-羟基-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(M05128-int)的合成

将N-Boc-4-氧-L-脯氨酸-甲酯(300g，1.23mmol)溶于THF并冷却至0℃。缓慢加入3,4-二氟苯溴化镁(0.5M在THF中的溶液，4.93mL，2.47mmol)并将反应混合物在0℃搅拌1h。添加水和EtOAc，用硅藻土过滤反应混合物并分离层。用EtOAc萃取水层并干燥(MgSO

按照一般方法2a，在室温下搅拌1h，使(2S,4R)-4-(3,4-二氟-苯基)-4-羟基-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯Boc-脱保护。除去溶剂并将残余物与甲苯共沸以提供(2S,4R)-4-(3,4-二氟-苯基)-4-羟基-四氢吡咯-2-羧酸甲酯，将其在下一步中以粗产物使用。

方案。(2S,4S)-4-(3-氟-苄基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

步骤1：向(3-氟代苄基)(三苯基)氯化磷鎓(250mg，1.03mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加KOtBu(1M在THF中的溶液，1.54mL，1,54mmol)。45分钟后，添加N-Boc-4-氧-L-脯氨酸甲酯(250mg，1.03mmol并将反应混合物在室温下搅拌1小时。添加水(20mL)并用DCM(2×20mL)萃取混合物。干燥(MgSO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.40min,m/z 358.3[M+Na]+

步骤2：使用一般方法3A，使(S)-4-[1-(3-氟-苯基)-亚甲-(E)-基]-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(206mg，0.61mmol)经历2小时氢化以提供无色油状的(2S,4S)-4-(3-氟-苄基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(180mg，87％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.29min,m/z 360.3[M+Na]+

步骤3：根据一般方法4B，将(2S,4S)-4-(3-氟-苄基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯水解3小时并通过纯化方法b分离以提供无色油状的(2S,4S)-4-(3-氟-苄基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(175mg，100％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.23min,m/z 324.2[M+H]+

方案。(2S,4S)-4-(吡嗪-2-基氨基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯M05243-int的合成

将顺式-4-氨基-B-boc-L-脯氨酸甲酯盐酸盐(250mg，0.89mmol)、DavePhos(35mg，0.089mmol)、Pd

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.56min,m/z 309.3[M+H]+

方案：

(2S,4R)-4-(3-溴-苄基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(M05366)的合成

将3-溴代苄基-L-脯氨酸(500mg，1.56mmol)溶于1,4-二噁烷(15mL)并滴加NaOH水溶液(2M，1.6mL，3.12mmol)和Boc

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.28min,m/z 384.3/386.2[M+H]+

通过类似方法制备了以下化合物：

方案。(2S,4R)-4-(1,3-二氢-异吲哚-2-基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(M05181-int)的合成

步骤1：将boc-4-氧-脯氨酸甲酯(100mg，0.41mmol)和异吲哚啉(51μL，0.43mmol)溶于DCE(1.5mL)并添加乙酸(25μL，0.41mmol)。1小时后，添加NaBH(OAc)

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:1.99min,m/z 347.3[M+H]+

步骤2：按照一般方法2A，使(2S,4R)-4-(1,3-二氢-异吲哚-2-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(110mg，0.32mmol)经历boc脱保护1小时。真空除去溶剂以提供(2S,4R)-4-(1,3-二氢-异吲哚-2-基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯，其在后续反应中以粗产物使用。

AnalpH9_MeOH_4MIN:Rt:2.41min,m/z 247.4[M+H]+

RgD的合成

方案。(R)-2-二甲基氨-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸的合成

步骤1：按照一般方法1c，使用HATU和DIPEA在DCM中进行Boc-D-Glu-OBzl(2.0g，5.9mmol)与四氢吡咯(0.6mL，7.1mmol)的酰胺偶联。使用柱色谱法(Biotage，25g SNAP，20-80％EtOAc/异己烷)纯化产物以提供无色油状的(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸苄酯，其在后续反应中直接使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.04min,m/z 391.5[M+H]+

步骤2：使用一般方法2A，对(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸苄酯Boc脱保护1.5h，随后通过SCX-2纯化，然后真空干燥以提供(R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸苄酯(1.4g，82％，2步)，其在后续反应中以粗产物使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:1.68min,m/z 291.3[M+H]+

步骤3：将甲醛(37％在水中的溶液，1mL)、乙酸(0.5mL)和NaBH

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.99min,m/z 319.4[M+H]+

步骤4：使用一般方法3A，使(R)-2-二甲基氨-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸苄酯氢化36小时。真空干燥产物以提供白色固体状的(R)-2-二甲基氨-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸(1.1g，100％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:0.75min,m/z 229.3[M+H]+

方案。(2R,4R)-4-(四氢吡咯-1-羰基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

步骤1：按照一般方法1c，使用HBTU(239mg，0.63mmol)和DIPEA(329μL，1.89mmol)在DCM(5mL)中使(2R,4R)-四氢吡咯-1,2,4-三羧酸1-叔丁酯2-甲酯(172mg，0.63mmol)与四氢吡咯(52μL，0.63mmol)酰胺偶联以提供(2R,4R)-4-(四氢吡咯-1-羰基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(380mg，定量)，其在下一步中以粗产物使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.75min,m/z 327.4[M+H]+

步骤2：使用一般方法4B(和分离方法c)，将(2R,4R)-4-(四氢吡咯-1-羰基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯水解以提供无色油状的(2R,4R)-4-(四氢吡咯-1-羰基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(159mg，81％，2步)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.57min,m/z 313.3[M+H]+

通过类似方法制备了以下类似物：

方案

2-氨基-4-甲基-4-苯基-戊酸的合成

步骤1：将3-甲基-3-苯基丁醛(500mg，3.08mmol)溶于EtOH(10mL)和H

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:1.92min,m/z 189.3[M+H]+

步骤2：将2-氨基-4-甲基-4-苯基-戊腈(125mg)溶于6M HCl(5mL)并回流加热过夜。将反应混合物冷却至室温，减压除去溶剂并将残余物溶于H

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.31min,m/z 308.3[M+H]+

(R)-2-叔丁氧羰基氨基-4-氧-4-苯基-丁酸的合成

步骤1：将Z-AspOMe(500mg，1.77mmol)溶于THF(5mL)并添加SOCl

步骤2：将(R)-2-苄氧基羰基氨基-3-氯甲酰基-丙酸甲酯(370mg，1.23mmol)和CuI(22.8mg，0.12mmol)溶于THF(5mL)并冷却至-78℃。添加苯基溴化镁(1M在THF中的溶液，1.2mL，1.2mmol)，并使反应混合物加热至室温过夜。在NH

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.98min,m/z 342.3[M+H]+

步骤3：按照一般方法4A，使(R)-2-苄氧基羰基氨基-4-氧-4-苯基-丁酸甲酯(50mg，0.15mmol)水解以提供(R)-2-苄氧基羰基氨基-4-氧-4-苯基-丁酸，其在后续反应中以粗产物使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.88min,m/z 328.3[M+H]+

(R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(1,2,3,4-四氢-萘-1-基)-丙酸的合成

步骤1：将(R)-2-氨基-3-(1,2,3,4-四氢-萘-1-基)-丙酸甲酯(100mg，0.46mmol)溶于DCM(5mL)，并添加Et

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.51min,m/z 334.3[M+H]+

步骤2：将(R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(1,2,3,4-四氢-萘-1-基)-丙酸甲酯(94mg，0.28mmol)溶于MeOH并添加2M NaOH(0.28mL，0.56mmol)并在室温下搅拌2小时。添加2MHCl

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.42min,m/z 320.3[M+H]+

方案3：受限的RgD和RgB中间体

实施例程序X：(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯的合成

步骤1：(R)-4-三氟甲烷磺酰氧基-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯的三氟甲磺酸酯的形成

在-78℃，在N

步骤2：Pd-介导的偶联

使用铃木(Suzuki)条件的Pd介导的偶联的实施例：(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将(R)-4-三氟甲烷磺酰氧基-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(2.67mmol，1.00g)；1-甲基-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(1.78mmol，1当量，0.370g)；四(三苯基膦)钯(0)(0.178mmol，0.206g)；和碳酸钾(3.56mmol，0.492g)在1,4-二噁烷/水(1:1v/v，16mL)中混悬并用氮气鼓泡10分钟。将所得溶液在100℃，在微波中加热10分钟。然后，用DCM(20mL)和水(20mL)稀释反应混合物。用水(2×20mL)、盐水(20mL)清洗有机相，然后使其通过疏水性烧结玻璃筛并真空浓缩。通过快速柱色谱(Biotage Isolera，SNAP KP-Sil 50g，在硅藻土上干法装柱，梯度：异己烷/EtOAc，70:30至50:50)纯化粗产物以提供无色油状的(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(0.425g，78％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.89min,m/z 308.2[M+H]+

使用斯蒂尔(Stille)条件的Pd介导的偶联的实施例：(R)-4-嘧啶-4-基-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯

将(R)-4-三氟甲烷磺酰氧基-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(0.799mmol，1.5当量，0.300g)、4-(三丁基甲锡烷基)嘧啶(0.532mmol，1.0当量，0.196g)、四(三苯基膦)钯(0)(0.053mmol，0.1当量，0.061g)和碘化铜(I)(0.053mmol，0.1当量，0.010g)在1,4-二噁烷中混悬并用氮气鼓泡10分钟。将所得混悬液在100℃，在微波中加热5分钟。真空浓缩粗产物，然后通过快速柱色谱(Biotage Isolera，SNAP KP-Sil 25g，在硅藻土上干法装柱，梯度：异己烷/EtOAc，70:60至50:50)纯化以提供黄色油状的(R)-4-嘧啶-4-基-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(0.157g，0.515mmol，97％)，其使用时未进一步纯化。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.96min,m/z 306.3[M+H]+

步骤3：氢化(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(530-150-2-1)

根据一般步骤3A，使(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2,5-二氢-吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(1.38mmol，0.425g)、10％-碳负载钯和氢气反应以提供无色油状的(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(0.351g，1.13mmol，82％)，其使用时未进一步纯化。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.80min,m/z 310.2[M+H]+

步骤4：酯水解(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯

根据一般步骤4A使(R)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(1.13mmol，1.0当量，0.351g)和LiOH(1M在H

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.48min,m/z 296.3[M+H]+

通过类似方法合成了以下化合物：

方案4羧酰胺库

(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸的合成

步骤1：将Boc-D-Glu-OBzl(400mg，1.19mmol)溶于DCM(20mL)并添加HATU(498mg，1.31mmol)和DIPEA(0.62mL，3.57mmol)。添加2-甲基吡咯烷(0.15mL，1.42mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水清洗反应混合物(3×40mL)，干燥(MgSO

步骤2：将(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-(2-甲基-吡咯烷-1-基)-5-氧-戊酸苄酯(0.37g，0.91mmol)溶于EtOH(10mL)，置于N

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.75min,m/z 315.2[M+H]+

通过类似方法合成了以下化合物：

方案5(2R)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-(4-氟苯基)丁酸的合成

步骤i：在0℃，在N

步骤ii：在0℃，向叔丁基(4R)-4-[2-(4-氟苯基)乙基]-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-羧酸酯(22mg，0.069mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加一水合对甲苯磺酸(1mg，0.007mmol)。将反应在0℃搅拌1h，然后加热至RT并搅拌另外20h。真空浓缩该反应混合物，然后在DCM(20mL)和饱和NaHCO

步骤iii：向叔丁基N-[(2R)-4-(4-氟苯基)-1-羟基丁-2-基]氨基甲酸酯(36mg，0.13mmol)在丙酮(0.6mL)中的溶液中添加5％的NaHCO

高苯丙氨酸库(A)的合成

将该一般方法用于制备以下中间体：

高苯丙氨酸库(B)的合成

1-叔丁基2-锂代(2R,4R)-4-(哌啶-1-基)四氢吡咯-1,2-二羧酸酯的合成

步骤1：在N

Thermo_MeOH_UHPLC_1.2min LCMS:R

步骤2：向1-叔丁基2-甲基(2R,4R)-4-(哌啶-1-基)四氢吡咯-1,2-二羧酸酯(137mg，0.44mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加LiOH.H

Thermo_MeOH_UHPLC_1.2min LCMS:R

一般方案1

(2S,4S)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-苯基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺M05119

步骤1：将(2S,4S)-1-boc-4-苯基吡咯烷-2-羧酸(90mg，0.31mmol)、5-(氨甲基)-1-甲基-1H-苯并三唑(50mg，0.31mmol)和HATU(117mg，0.31mmol)溶于DMF(2mL)和Et

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.03min,m/z 436[M+H]+

步骤2：将(2S,4S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-苯基-四氢吡咯-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.25mmol)溶于DCM(2mL)，并添加TFA(1mL)并将混合物在室温下搅拌1小时。真空浓缩溶液以提供透明油状的(2S,4S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-苯基-四氢吡咯，其在后续反应中使用而未进一步纯化。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:1.71min,m/z 336[M+H]+

步骤3：将(2S,4S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-苯基-四氢吡咯(85mg，0.25mmol)、Boc-D-高苯丙氨酸(71mg，0.25mmol)和HATU(96mg，0.25mmol)在DMF(2mL)中合并，然后添加Et

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.40min,m/z 597.4[M+H]+

步骤4：将((R)-1-{(2S,4S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-苯基-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.19mmol)溶于DCM(2mL)，添加TFA(1mL)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过SCX-2(2g)纯化反应混合物，用MeOH清洗并用NH

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:7.58min,m/z 497.33[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.70min,m/z 497.26[M+H]+

1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.86(t,J＝5.9Hz,0.2H),8.51(t,J＝6.0Hz,0.8H),7.90(s,0.2H),7.89(s,0.8H),7.80(d,J＝8.6Hz,0.8H),7.74(d,J＝8.5Hz,0.2H),7.48(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.39-7.09(m,9.5H),6.97-6.91(m,0.5H),4.55-4.37(m,3H),4.29(s,3H),4.22(s,1H),3.95(dd,J＝9.5,7.6Hz,1H),3.50(d,J＝9.6Hz,1H),3.22(t,J＝9.8Hz,1H),2.88-2.56(m,2H),2.46-2.13(m,2H),2.08(s,2H),1.86-1.71(m,1H),1.63-1.43(m,1H)。

通过类似方法制备了以下化合物

在省略步骤4的情况下，通过类似方法(一般方案1)制备了以下化合物：

一般方案2

(S)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05306)的合成

步骤1：将(S)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(100mg，0.33mmol)、(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸(109mg，0.36mmol)、HATU(125mg，0.33mmol)和DIPEA(172μL，0.99mmol)溶于DMF(2mL)并在室温下搅拌过夜。用DCM稀释反应混合物，用水(20mL)和盐水(20mL)清洗，然后使其通过相分离器并真空除去溶剂。通过柱色谱法(biotage，0-100％EtOAc/异己烷)纯化残余物以提供黄色油状的(S)-1-((R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(79mg，41％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.35min,m/z 586[M+H]+

步骤2：将(S)-1-((R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(79mg，0.14mmol)溶于MeOH(1mL)和LiOH水溶液(1M溶液，1mL)并在室温下搅拌2h。在减压下除去溶剂以提供(S)-1-((R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(77mg，40％)，其在下一步中以粗产物使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.32min,m/z 572.2[M+H]+

步骤3：将(S)-1-((R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(77mg，0.14mmol)、C-(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基)-甲胺(29mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.14mmol)和DIPEA(94μL，0.54mmol)溶于DMF(2mL)并在室温下搅拌过夜。添加另外的DIPEA(24μL，0.14mmol)、HATU(57mg，0.14mmol)和C-(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基)-甲胺(29mg，0.15mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3天。用DCM稀释反应混合物，用水(2×20mL)，然后用盐水(20mL)清洗。将有机物通过相分离器并真空除去溶剂以提供{(R)-1-[(S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-1-羰基]-4-氧-4-吡咯烷-1-基-丁基}-氨基甲酸叔丁酯，其在下一步中以粗产物使用。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.26min,m/z 716[M+H]+

步骤4：将{(R)-1-[(S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-(4-三氟甲氧基-苄基)-四氢吡咯-1-羰基]-4-氧-4-吡咯烷-1-基-丁基}-氨基甲酸叔丁酯溶于10％TFA/DCM并在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过SCX-2柱，用1M NH

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:7.74min,m/z 616.3[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:6.27min,m/z 616.3[M+H]+

除了其中使用了修改以外，通过与以上所列那些类似的方法制备了以下化合物，其中详细说明了修改的规程的性质：

一般方案3：(氨基RgB)

(2S,4S)-4-乙酰氨基-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05144)的合成

步骤1将哌啶(1mL)缓慢加入{(3S,5S)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-5-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-3-基}-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(1.42g，1.87mmol)在DCM(10mL)中的溶液中并将反应混合物在室温下搅拌4小时。真空除去溶剂并通过柱色谱法(Biotage，100g SNAP，(0-(1％Et

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.28min,m/z 536.4[M+H]+

步骤2：胺官能化

使用方法1烷基化的胺官能化的实施例：将((R)-1-{(S)-4-氨基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.093mmol)溶于DMF(3mL)并添加DIPEA(49μL，0.14mmol，1.5eq)，随后添加乙酰氯(20μL，0.28mmol，3.0eq)。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时，然后添加盐水并用EtOAc萃取混合物。用盐水清洗合并的有机物，干燥(MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.05min,m/z 600.4[M+Na]+

使用方法2还原胺化的胺官能化的实例

((R)-1-{(2S,4S)-4-苄基氨基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯的合成

将((R)-1-{(S)-4-氨基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.19mmol)溶于DCE和AcOH(22μL，0.38mmol)中，随后添加苯甲醛(21μL，0.21mmol)和NaBH(OAc)

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.36min,m/z 626.3[M+H]+

使用方法3脲形成的胺官能化的实施例

{(R)-1-[(2S,4S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-(3-甲基-脲基)-四氢吡咯-1-羰基]-3-苯基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯的合成

将((R)-1-{(S)-4-氨基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.14mmol)溶于DCM，并添加Et

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.99min,m/z 593[M+H]+

步骤3：最终脱保护

将乙酰氨基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.090mmol)溶于DCM(4mL)并添加TFA(2mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后减压除去溶剂，并通过制备HPLC纯化粗材料以提供白色固体状的(S)-4-乙酰氨基-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(22.1mg，51％)。

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:4.21min,m/z 478.3[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.18min,m/z 478.4[M+H]+

通过类似方法制备了以下实施例：

一般方案4

(方法1)：(2S,4R)-1-((R)-2-苄基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05261)的合成

将苯甲醛(2.0mg，0.020mmol，1.05当量)、氰基硼氢钠(11mg，0.180mmol，10当量)和乙酸(0.1mL)加入至(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(10mg，0.019mmol，1.0当量)在甲醇(1mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后减压浓缩。然后，通过反相制备LCMS纯化所得产物以提供白色固体状的(2S,4R)-1-((R)-2-苄基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(6mg，53％)。

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:3.91min,m/z 623.3[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.95min,m/z 623.3[M+H]+

(方法2)(2S,4R)-1-((R)-5-氧-2-苯乙酰氨基-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05267)的合成

将N,N-二异丙基乙胺(15.0mg，0.113mmol，1.2当量)和苯乙酰氯(17mg，0.113mmol，1.2当量)加入至(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(10mg，0.019mmol，1.0当量)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。通过反相制备LCMS纯化所得产物以提供黄色油状的(2S,4R)-1-((R)-5-氧-2-苯乙酰氨基-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-吡啶-4-基甲基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(12mg，95％)。

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.19min,m/z 651.3[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.90min,m/z 651.3[M+H]+

1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(d,J＝6.0Hz,0.3H),8.55(dd,J＝12.4,7.1Hz,1H),8.46(td,J＝3.9,1.5Hz,2H),8.16(t,J＝6.1Hz,0.7H),7.84-7.69(m,2H),7.48-7.34(m,1H),7.32-7.21(m,3H),7.21-7.12(m,4H),5.01-4.90(m,0.5H),4.48-4.34(m,2H),4.34-4.23(m,5H),4.12(q,J＝7.7Hz,0.5H),3.80(dd,J＝10.1,7.5Hz,1H),3.54-3.37(m,2H),3.30-3.08(m,5H),3.00(t,J＝6.6Hz,1H),2.75-2.59(m,2H),2.47-2.20(m,2H),1.98-1.64(m,7H)。

通过类似方法制备了以下实施例：

一般方案5：最终步骤铃木

(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-[3-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-苄基]-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05350)的合成

将(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(4-溴-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(37mg，0.061mmol)、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷基-2-基)吡唑(15mg，0.072mmol)、Pd(dppf)

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.49min,m/z 612.5[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.98min,m/z 612.5[M+H]+

任选地，检查程序(work-up procedure)还可以包括用饱和盐水

通过类似方法合成了以下实施例：

一般方案6后期羧酰胺合成

(2S,4R)-1-[(R)-2-氨基-5-((S)-2-甲基-哌嗪-1-基)-5-氧-戊酰基]-4-(4-甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05417)的合成

步骤1：将(R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-5-氧-戊酸苄基酯(GS6-int1)(918mg，1.32mmol)溶于乙醇(10mL)并通过在60℃使用10％Pd/C CatCart循环通过H-cube(连续流动氢化反应系统)5小时进行氢化。真空干燥反应混合物以提供无色油状的(R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-5-氧-戊酸(775mg，96％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.03min,m/z 609.8[M+H]+

步骤2：使用HATU、DIPEA在DCM中的溶液和一般方法1分离方法c进行(R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-5-氧-戊酸与(3S)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的酰胺偶联以提供无色油状的(S)-4-((R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-5-氧-戊酰基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(117mg，94％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.40min,m/z 791.8[M+H]+

步骤3：使用TFA在DCM中的溶液，使用一般方法2A，对(S)-4-((R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-5-氧-戊酰基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯Boc脱保护1.5小时。真空浓缩反应混合物并使用SCX-2柱(5g)纯化残余物并用4M氨在甲醇中的溶液洗脱。真空干燥含有产物的部份并使用制备-HPLC纯化以提供白色固体状的(2S,4R)-1-[(R)-2-氨基-5-((S)-2-甲基-哌嗪-1-基)-5-氧-戊酰基]-4-(4-甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(15mg，16％)。

ANALPH2_MEOH_QC_v1,RT:4.33min,m/z 591.4[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,RT:6.63min,m/z 591.4[M+H]+

通过类似方法合成了以下实施例：

一般方案7

(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-环己基-四氢吡咯-2-羧酸4-氨甲基-苄酰胺(M05076)的合成

将{(R)-1-[(2S,4R)-2-(4-氰基-苄基氨基甲酰基)-4-环己基-四氢吡咯-1-羰基]-3-苯基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(GS7-int 1，140mg，0.24mmol)溶于AcOH(15mL)并添加10％Pd/C(50mg)。将混合物在H

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.25min,m/z 477.3[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:8.21min,m/z 477.3[M+H]+

1H NMR(400MHz,CDCl

通过类似方法合成了以下实施例：

一般方案8(Fmoc脱保护，然后boc脱保护)

(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-氰基-四氢吡咯-2-羧酸4-氨甲基-苄酰胺(M05091)的合成

步骤1：将[(R)-1-((2S,4R)-4-氰基-2-{4-[(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-甲基]-苄基氨基甲酰基}-四氢吡咯-1-羰基)-3-苯基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(GS8-int1，207mg，0.28mmol)溶于DCM(2mL)并添加哌啶(0.2mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后除去溶剂并通过制备LCMS纯化残余物以提供透明油状的{(R)-1-[(2S,4R)-2-(4-氨甲基-苄基氨基甲酰基)-4-氰基-四氢吡咯-1-羰基]-3-苯基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(133mg，93％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:2.27min,m/z 520.4[M+H]

步骤2：使用一般方法2A，使{(R)-1-[(2S,4R)-2-(4-氨甲基-苄基氨基甲酰基)-4-氰基-四氢吡咯-1-羰基]-3-苯基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(133mg，0.226mmol)经历Boc脱保护，并通过制备LCMS纯化以提供白色固体状的(2S,4R)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-氰基-四氢吡咯-2-羧酸4-氨甲基-苄酰胺(81.4mg，62％)。

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:5.95min,m/z 420.4[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:2.76min,m/z 420.3[M+H]+

通过类似方法合成了以下实施例：

一般方案9：

(2S,4S)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺M05200的合成。

步骤1：将((R)-1-{(S)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-4-氧-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)、1-苄基哌嗪(25μL，0.13mmol)和AcOH(7.0μL，0.13mmol)在DCE(1mL)中搅拌1小时。添加NaBH(OAc)

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.44min,m/z 695.5[M+H]

步骤2：将((R)-1-{(2S,4S)-4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(61mg，0.090mmol)溶于DCM(3mL)并添加TFA(3mL)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后除去溶剂并通过制备LCMS纯化残余物以提供白色固体状的(2S,4S)-1-((R)-2-氨基-4-苯基-丁酰基)-4-(4-苄基-哌嗪-1-基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(24.7mg，47％)。

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:7.65min,m/z 595.5[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:3.7min,m/z 595.5[M+H]+

通过类似方法合成了以下实施例：

一般方案10：(S)-1-((R)-2-甲基氨基-4-苯基-丁酰基)-吡咯烷-2-羧酸4-氨基甲基-苄基酰胺的合成，

步骤1：按照一般方法1，使用HATU(7.0g，18.4mmol)和Et

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.21min,m/z 291.3[M+H-boc]

步骤2：将(S)-1-((R)-2-叔丁氧羰基氨基-4-苯基-丁酰基)-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(500mg，1.3mmol)溶于DMF(20mL)并添加NaH(60％在矿物油中的分散系，76mg，1.9mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，然后添加碘甲烷(0.12mL，1.9mmol)并将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物冷却至0℃，用H

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.30min,m/z 405[M+H]

步骤3：将(S)-1-[(R)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-4-苯基-丁酰基]-四氢吡咯-2-羧酸甲酯(690mg，1.7mmol)溶于KOH水溶液(5M，6mL，12mmol)、MeOH(20mL)和THF(20mL)并在50℃加热1小时。将反应混合物在冰浴中冷却，加入水并通过添加2M HCl水溶液将pH调节至pH 2。用EtOAc萃取混合物，用盐水清洗有机物，干燥(MgSO

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.27min,m/z 391.4[M+H]

步骤4：按照一般方法1，使用HATU(330mg，0.86mmol)和DIPEA(0.30mL，1.7mmol)在DCM(50mL)中实施(S)-1-[(R)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-4-苯基-丁酰基]-四氢吡咯-2-羧酸(280mg，0.72mmol)与1-(N-Boc-氨甲基)-4-(氨甲基)苯(170mg，0.72mmol)的酰胺偶联。通过柱色谱法(biotage，0-80％EtOAc/汽油)的纯化提供了无色油状的((R)-1-{(S)-2-[4-(叔-丁氧羰基氨-甲基)-苄基氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(230mg，51％)。

AnalpH2_MeOH_4MIN:Rt:3.51min,m/z 609[M+H]

步骤5：按照一般方法2A，使用5:1DCM:TFA(12mL)对((R)-1-{(S)-2-[4-(叔-丁氧羰基氨-甲基)-苄基氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-3-苯基-丙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.34mmol)脱保护并在室温下搅拌1h，随后纯化以提供白色泡沫状的(S)-1-((R)-2-甲基氨基-4-苯基-丁酰基)-四氢吡咯-2-羧酸4-氨甲基-苄酰胺(59mg，38％)。

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.61min,m/z 409.3[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:2.81min,m/z 409.3[M+H]+

方案12(最终化合物的甲基化)

(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-1-[(2R,4S)-1-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-2-羰基]-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05474)的合成

将甲醛(37％wt在水中的溶液，22mg，0.27mmol，3.0当量)和三乙酰氧基氢硼化钠(57mg，0.27mmol，3.0当量)，随后将乙酸(5.0mg，0.081mmol，0.9当量)加入至((2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-1-[(2R,4S)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-四氢吡咯-2-羰基]-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(50mg，0.090mmol，1.0当量)中DCM(10mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.28min,m/z 571.4[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:7.32min,m/z 571.4[M+H]+

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(t,J＝6.2Hz,0.3H),8.37(t,J＝6.2Hz,0.7H),7.81(s,1H),7.72(t,J＝9.2Hz,1H),7.47(s,1H),7.39(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.33(s,0.3H),7.22(d,J＝8.2Hz,0.7H),7.13-7.02(m,2H),6.92-6.77(2H),4.60-4.27(m,3H),4.27-4.18(3H),3.77-3.64(m,7H),3.52-3.40(0.3H),3.22(dd,J＝18.3,7.8Hz,1H),3.12-3.00(m,0.7H),2.91-2.67(m,1H),2.65-2.49(m,4H),2.39-2.26(m,1H),2.27-2.09(m,3H),2.05-1.85(1H),1.84-1.70(m,2H),1.69-1.49(1H)

通过类似方法制备了以下实施例：

一般方案13：(2S,4R)-1-{(R)-2-氨基-3-[四氢吡咯-1-羰基)-氨基]-丙酰基}-4-(4-甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(M05414)的合成

步骤1：按照一般方法5，使用哌啶(2mL)在DMF(8mL)中的溶液进行(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-1-((R)-2-甲基-丁酰基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基-酰胺(204mg，0.26mmol)(GS13-int1)的Fmoc脱保护。使用柱色谱法(Biotage，25g SNAP，0-15％DCM/甲醇)纯化产物以提供白色固体状的(2S,4R)-1-((R)-3-氨基-2-甲基-丙酰基)-4-(4-甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(73mg，56％)。

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:2.42min,m/z 566.5[M+H]+

步骤2：将(2S,4R)-1-((R)-3-氨基-2-甲基-丙酰)-4-(4-甲氧基-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(73mg，0.13mmol)溶于DCM(2mL)，并添加CDI(31mg，0.19mmol)和DMAP(17mg，0.14mmol)。在添加四氢吡咯(16μL，0.19mmol)之前，在室温下将反应混合物搅拌1小时。在用水淬灭前，将反应混合物搅拌另外24小时。分离层并用DCM(×3)萃取水层。用盐水清洗合并的有机层，干燥(MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.16min,m/z 663.4[M+H]+

步骤3：按照一般方法2A，使用TFA在DCM中的溶液，将((R)-2-{(2S,4R)-4-(4-甲氧基-苄基)-2-[1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-吡咯烷-1-基}-2-氧-1-{[四氢吡咯-1-羰基)-氨基]-甲基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(57mg，0.086mmol)Boc脱保护1小时。真空除去溶剂并使用SCX-2纯化残余物并用4M NH

ANALPH2_MEOH_QC_v1,RT:5.49min,m/z 563.4[M+H]+

ANALPH9_MEOH_QC_v1,RT:7.05min,m/z 563.4[M+H]+

一般方案14顺式苄基RgB化合物(M05210和M05211)的合成

步骤1：将(3-氯代苄基)(三苯基)溴化膦(400mg，0.86mmol)溶于DCM(10mL)并添加KOtBu(1M在THF中的溶液，0.86mL，0.86mmol)。45分钟后，添加N-boc-4-氧-L-脯氨酸甲酯(180mg，0.74mmol)并在室温下将反应混合物搅拌1小时。添加水(20mL)并用DCM(2×20mL)萃取混合物。干燥(MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.44min,m/z 352[M+H]+

步骤2：将(S)-4-[1-(3-氯-苯基)-亚甲(E)-基]-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(150mg，0.42mmol)溶于THF(1mL)并添加MeOH(1mL)和NaOH(1m aq，1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。除去溶剂并添加饱和NH

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.43min,m/z 338[M+H]+

步骤3：将(S)-4-[1-(3-氯-苯基)-亚甲(E)-基]-四氢吡咯-1,2-二羧酸1-叔丁酯(120mg，0.36mmol)溶于DCM(5mL)并添加HBTU(159mg，0.42mmol)、C-(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基)-甲胺(68mg，0.42mmol)和DIPEA(217μL，1.26mmol)。在室温下将反应混合物搅拌1小时，然后添加水(20mL)并用DCM萃取水层。干燥(MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.19min,m/z 482[M+H]+

步骤4：在N

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.23min,m/z 484[M+H]+(Cl)；Rt:3.09min,m/z 450[M+H]+(H)

步骤5：将(2S,4S)-4-(3-氯-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羧酸叔丁酯和(2S,4S)-4-苄基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羧酸叔丁酯的组合(140mg，0.29mmol)溶于EtOAc(3mL)并添加HCl(1M在Et

步骤6：将(2S,4S)-4-(3-氯-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯和(2S,4S)-4-苄基-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯的粗混合物溶于DCM(5mL)，并添加HBTU(110mg，0.29mmol)、(R)-2-叔丁氧羰基氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酸(87mg，0.29mmol)和DIPEA(300μL，1.74mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜，然后添加水(20mL)并用DCM萃取水层。干燥(MgSO

ANALPH2_MEOH_4min,Rt:3.29min,m/z 666[M+H]+(Cl)；Rt:3.17min,m/z 632[M+H]+(H)

步骤7：将((R)-1-{(2S,4S)-4-(3-氯-苄基)-2-[(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-氨基甲酰基]-四氢吡咯-1-羰基}-4-氧-4-吡咯烷-1-基-丁基)-氨基甲酸叔丁酯(119mg，0.18mmol)溶于EtOAc(5mL)并添加HCl(1M在Et

M05210(2S,4S)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-(3-氯-苄基)-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(9mg，9％)

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:7.34min,m/z 566.3[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.57min,m/z 566.2[M+H]+

M05211(2S,4S)-1-((R)-2-氨基-5-氧-5-吡咯烷-1-基-戊酰基)-4-苄基-四氢吡咯-2-羧酸(1-甲基-1H-苯并三唑-5-基甲基)-酰胺(33mg，33％)

ANALPH9_MEOH_QC_v1,Rt:6.97min,m/z 532.3[M+H]+

ANALPH2_MEOH_QC_v1,Rt:5.2min,m/z 532.2[M+H]+

一般方案15.后期N-烷基化：

使用一般方法合成以下化合物：

一般方案16.RgD谷氨酸衍生物的合成

使用一般方法合成以下化合物

一般方案17后期官能化的RgD甲酰胺的合成

使用一般方法合成以下化合物：

一般测试方法

已使用以下用于筛选FXIIa及其它蛋白酶活性的测定规程体外确定了本发明的化合物的活性。在微板板孔中使用发色测定，在纯化的系统中进行这些测定中的每一个。通过酰胺键将模拟天然蛋白底物的发色肽底物连接至发色基团。在蛋白水解酶催化后，从肽释放对硝基苯胺(pNA)；吸光值升高并且可以在405nm监测吸光值。

将所有化合物在100％(v/v)DMSO中溶解至10mM的储液浓度，在每个测定中使用的化合物的最高浓度为500μM。DMSO的最终浓度为在50mM Tris 137mM NaCl pH 7.4中的5％(v/v)。当不添加测试化合物时，使用5％DMSO的最终浓度。

因子XIIa抑制的确定

使用发色底物S-2302(Chromogenix)测量因子XIIa的活性。将多个化合物浓度与10nM FXIIa培育并在37℃，在50mM Tris，137mM NaCl，pH 7.4中培育10分钟，然后添加最终浓度450mM的S-2302发色底物。在37℃，每12秒监测405nm的动力学读数，监测总计3小时。确定初始速度梯度并用于计算IC

K

下表1中显示了以上述方式获得的Ki数据。已基于Ki值对本发明的化合物的活性归类，类别为“*”、“**”和“***”。类别“*”是指Ki值大于2μM的化合物。类别“**”是指Ki值在0.2μM至2μM的化合物。类别“***”是指Ki值小于0.2μM的化合物。

选择性的确定

为了确定测试化合物的选择性，测定了这些测试化合物对其它丝氨酸蛋白酶，包括FXa和凝血酶的抑制活性。本质上，将升高浓度的化合物与每种酶：FXa(5nM)和凝血酶(5nM)在37℃培育10min，然后分别与适当的发色底物，S2765(350mM)和GPR(250mM)在50mMTris，137mM NaCl，pH 7.4中培育。发色底物S2765来自Chromogenix，并且GPR来自Bachem。在37℃，每12秒监测405nm的动力学读数，监测总计3小时。确定初始速度梯度并用于计算IC

K

其中[底物]表示测定中使用的底物的浓度，Km是使用其自身底物的每种酶的测定值。该化学系列的化合物显示出竞争性抑制。

下表1中还显示了凝血酶和FXa的倍数选择性。倍数选择性显示了相对于FXa和凝血酶，对FXIIa的优先抑制。已基于倍数选择性值，相对于凝血酶，对本发明的化合物对FXIIa的倍数选择性进行了归类，类别为“+”、“++”和“+++”。类别“+”是指倍数选择性值小于10。类别“++”是指倍数选择性值在10至100。类别“+++”是指倍数选择性值大于100。

已基于倍数选择性值，相对于FXa，对本发明的化合物对FXIIa的倍数选择性进行了归类，类别为“o”、“oo”和“ooo”。类别“o”是指倍数选择性值小于10。类别“oo”是指倍数选择性值在10至100。类别“ooo”是指倍数选择性值大于100。

体内抗凝血效力的确定

试剂

AlexaFluor488缀合纤维蛋白原购自invitrogen(Paisley,UK)。

动物

将重量在20至30g之间的C57BL/6雄性小鼠用于所有实验。谢菲尔德大学(University of Sheffield)伦理委员会批准了所有程序，并且根据英国内政部动物(科学程序)法案1985实施所有程序。

用于实时评价体内纤维蛋白形成的活体镜检法

在氯化铁(FeCl

通过i.p.注射125mg/kg氯胺酮盐酸盐(Ketaset；Willows Francis Veterinary,Crawley,UK)、12.5mg/kg赛拉嗪盐酸盐(Bayer Suffolk,UK)和0.025mg/kg硫酸阿托品(phoenix Pharmaceuticals Ltd,UK)使小鼠麻醉。实施气管(以辅助呼吸)和颈动脉(用于维持麻醉和物质施用)插管并暴露股静脉。通过颈动脉施用100μL AlexaFluor488缀合纤维蛋白原(2mg/mL)和100μL化合物(在10％DMSO和90％盐水，100μL中稀释)或媒介物(10％DMSO在盐水中的溶液，100μL)5min，然后将被10％(v/v)FeCl

使用Slidebook成象软件(5.0版；Intelligent Imaging Innovations,3i,Denver,USA)定期采集实时Alexa488nm(绿色通道)图像以监测体内血栓形成1h。在FeCl

数据分析Slidebook以实时确定纤维蛋白凝块形成

通过设置血栓区以外的背景区并且测量整个损伤区域上大于背景的Alexa680nm信号强度，使用Slidebook图像分析软件分析血栓形成的实时图像。以这种方式对于绿色通道设置单个背景强度，从而允许在每个时帧，对两种探针选择仅显示大于背景的信号的像素。然后，对于FITC 488nm的像素信号强度(包括信号强度和区域)，确定所得像素选择或“掩蔽”区(定义为用于数据分析的区域)。Slidebook软件允许以自动方式对表示不同时间点的每个图像文件计算背景，因此使得能够在每个时间点进行背景扣除。通过定量FITC488nm通道中(在每个时间点)大于背景的像素强度并将掩蔽像素表示为总象素面积来确定血栓面积。当建立背景区时，作为影片运行背景内的所有时帧以确保选择作为背景的区域在实验持续时间内不出现任何凝块生长。确定氯化铁损伤之前的背景信号并从氯化铁损伤后的读数中减去。这对于使用Slidebook的分析是重要的，因为在每个时帧将相同背景区域用于信号确定。所产生的数据反映了每个像素的区域强度，并且由于背景扣除与相同图像/时帧一起发生，因此该数据通过强度对FITC区提供了准确评价。将数据作为相对荧光单位(RFU)随时间作图。

相对于仅对于60分钟时间点施用媒介物的小鼠计算凝块形成的抑制百分比。图1显示了结果。

表1

ND表示其中未获得测试数据的条目。

在本说明书的整个描述和权利要求中，单词“包含”和“含有”及其变化形式表示“包括，但不限于”，并且它们不意欲(并且不)排除其它部分、添加剂、组分、整数或步骤。在本说明书的整个描述和权利要求中，除非上下文另外要求，否则单数涵盖了复数。具体地，当使用不定冠词时，除非上下文另外要求，否则说明书应被理解为考虑了多个以及单一。

结合本发明的具体方面、实施方式或实施例描述的特性、整数、特征、化合物、化学部分或基团将理解为除非与之矛盾，否则适用于本文的任何其它方面、实施方式或实施例。在本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中所公开的所有特性和/或因此所公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任意组合合并，除了其中这些特性和/或步骤中的至少一些互相排斥的组合。本发明不局限于任何以上实施方式的详细信息。本发明延伸至在本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中所公开的特性的任何一个新颖特性或任何新颖特性的组合，或者延伸至因此所公开的任何方法或过程的步骤的任何一个新颖步骤或任何新颖步骤的组合。

读者关注与本发明申请相关的本说明书同时或在本说明书之前提交的所有文件，并且其对于本说明书的公共审查是开放的，并且所有这些文件的内容作为参考并入本文。