β-酪蛋白A2、其组合物在促进双歧杆菌属增殖中的应用

技术领域

本发明涉及乳品领域，具体涉及β-酪蛋白A2、其组合物在促进双歧杆菌属增殖中的应用。

背景技术

牛奶不仅营养丰富，而且容易消化吸收、食用方便，是最理想的天然食品。牛奶中所含蛋白质，约80％为酪蛋白，20％为乳清蛋白。而在牛奶的酪蛋白中，30-35％是β-酪蛋白，其中又有多种变体，变体中最常见的两种是A1和A2。β-酪蛋白A1和β-酪蛋白A2的区别是组成这种蛋白质的209个氨基酸的其中一个氨基酸不同。氨基酸链的第67位是脯氨酸(Proline)的酪蛋白是β-酪蛋白A2，第67位是组氨酸(Histidine)的则是β-酪蛋白A1。

β-酪啡肽(Beta-Casomorphin-7)，也称为BCM-7，为7个氨基酸组成的多肽链。在消化过程中，消化酶将A1切开，产生BCM-7；而A2则不能被这些消化酶切断产生BCM-7。有研究表明，BCM-7可能干扰人体正常代谢，增加部分婴儿患I型糖尿病的风险；另外还可能会造成免疫反应、消化和呼吸的功能性障碍。

已有报道显示，肠道菌群与人的健康息息相关。肠道菌群中包括了有益于宿主身体健康的微生物群，如双歧杆菌、乳酸杆菌等；也包含一些有害的微生物群，比如大肠杆菌、变形杆菌等。有益菌和有害菌共生，共同维持肠道菌群的平衡，维持宿主健康。一旦肠道菌群失调，会引起腹泻等多种临床疾病的发生。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供β-酪蛋白A2、其组合物在促进双歧杆菌属增殖中的应用。含有β-酪蛋白A2的牛奶与普通牛奶相比，可显著降低腹胀、肠鸣比例，增加排便频率，并能改变大便性状；且含有β-酪蛋白A2的牛奶可显著提高肠道菌中双歧杆菌属的相对丰度。

为实现本发明目的，本发明实施例提供了β-酪蛋白A2在促进双歧杆菌属增殖中的应用。

本发明还提供了一种组合物在促进双歧杆菌属增殖中的应用，所述组合物包含β-酪蛋白；所述β-酪蛋白中，β-酪蛋白A2的质量百分比≥75％。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述β-酪蛋白中，β-酪蛋白A2的质量百分比≥90％。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述β-酪蛋白中，β-酪蛋白A2的质量百分比为100％。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述组合物为乳或乳制品。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述乳包括鲜乳、乳粉、由粉末重构的液体乳、脱脂乳、均化乳、炼乳、低倍浓缩乳、巴氏杀菌乳或非巴氏杀菌乳中的至少一种。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述乳为牛奶，每100g所述牛奶包括下述含量的营养成分：蛋白质3.2g，脂肪3.8g，碳水化合物4.5g，钠70mg；其中，所述蛋白质中，β-酪蛋白A2含量为0.9g，β-酪蛋白A2在β-酪蛋白中的质量百分比为100％。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述牛奶通过下述方法制备得到：将生牛乳经验收、过滤、标准化、均质、杀菌、冷却、罐装，得到牛奶。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述生牛乳来自于：A2型变体母牛群。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述牛奶的饮用方式为早餐和/或晚餐后1h内。

上述应用在一种可能的实现方式中，所述乳制品包括奶油、酸牛奶、夸克食品、干酪、黄油或冰激淋中的至少一种。

本发明实施例开展了健康成年人队列研究，通过对比只含有β-酪蛋白A2的A2牛奶和普通牛奶的膳食补充摄入，胃肠道舒适性和粪便性状，并对其肠道菌群进行16SrRNA高通量基因测序，对其肠道菌组成和益生菌的变化进行分析。结果证明含有β-酪蛋白A2的牛奶与普通牛奶相比，可显著降低腹胀、肠鸣比例，增加排便频率，并能改变大便性状；且含有β-酪蛋白A2的牛奶可显著提高肠道菌中双歧杆菌属的相对丰度。

附图说明

一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

图1是本发明试验例A2奶组和普通奶组在各年龄条件下双歧杆菌属随干预阶段变化情况。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。

另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

实施例1

一种A2牛奶，该牛奶通过将生牛乳经验收、过滤、标准化、均质、杀菌、冷却、罐装而得；所述生牛乳来自于A2型变体母牛群；该A2牛奶的成分见表1：

表1

试验例

实验所用牛奶为实施例1制得的A2牛奶和普通牛奶；

普通牛奶中，β-酪蛋白A2和β-酪蛋白A1的质量比为6：4。

研究A2奶组和普通奶组对人体肠道健康的影响，实验方法如下。

1.研究对象：

主要为20-65岁、无严重疾病的志愿者60人，其中青年(20-44岁)30人，中年(45岁-59岁)20人，老年(60-65)10人。

入选条件：(1)年龄20-65周岁(含20和60周岁)；(2)男女皆可(哺乳与妊娠期除外)；(3)无重大疾病史、抑郁症和病理性胃肠道疾病(HIV、癌症、免疫力低下、胃炎、结肠炎等)；(4)不定期或偶见胃肠道症状(胃肠胀气、肠鸣音异常、进餐后沉重感、腹痛)，近期胃肠功能不适者尤佳；(5)肠道动力缓慢或不规律肠道活动(粪便硬度异常，排便减少，如2-3d排便1次，或每周少于3次排便)；(6)志愿者能够理解本次试验的目的和要求，包括可能的风险及不良反应。

排除条件：(1)腹泻、流感患者；(2)近15天使用过益生菌制剂、益生元、抗生素、促胃肠消化物质者；(3)长期使用有抑制或预防流感类症状作用的药物，如抗组胺类药、止咳药、高剂量维生素C等；(4)在过去6个月内接种过流感疫苗，或15d内接种过其他疫苗；(5)有酒精或药物成瘾者；(6)在过去3个月中参加过其他临床试验者。

退组条件：(1)研究员认为不能完全配合试验安排的志愿者；(2)观察期使用抗生素、其他含益生菌产品及乳制品者；(3)观察期发生病理性疾病、腹泻、流感者。

2.实验设计

本实验经过洛阳北方企业集团有限公司职工医院医学伦理委员会科研伦理审查(编号为2018032)。

(1)A2奶组和普通奶组干预方式

A2奶组：早晚餐后1h内各饮用一瓶A2牛奶(250mL)，持续15天，停服观察15天后，继续早晚餐后1h内各饮用一瓶普通牛奶(250mL)，持续15天，停服观察7天，共44天；

普通奶组：早晚餐后1h内各饮用一瓶普通牛奶(250mL)，持续15天，停服观察15天后，继续早晚餐后1h内各饮用一瓶A2牛奶(250mL)，持续15天，停服观察7天，共44天。

(2)实验方法

样本采集：分别于入组一周、干预两周、洗脱两周和第二次干预两周后，采集当日第一次大便样本。

健康状况监测：受试期间胃肠道健康状况(腹胀、嗳气、腹痛、排便满意度等)，由受试者取样前三天填写。

高通量测序方法：使用Qiagen Stool Kits(Qiagen，Valencia,CA)，从100mg的粪便中提取细菌基因组总DNA；

进一步通过NanoDrop定量，PCR扩增细菌基因组上的V3-V4基因片段(PCR引物序列341F：CCTAC GGGNG GCWGC AG，805R：GACTA CHVGG GTATC TAATC C)，构建测序文库；

然后进行Illumina HiSeq测序；

菌群多样性和丰富性被量化为可操作分类单元的数目(OTUs)，并用RDP 16s数据库进行菌群物种注释。

3.实验结果：

(1)入组基线情况：见表2；由表2可知，A2牛奶组和普通牛奶组的志愿者的性别、年龄、身高、体重等基线信息没有显著统计学差异，说明实验设计较好地平衡了各类变量因素，避免了基线水平差异的干扰。

表2

x±s表示均值±标准差；差异检验方法：皮尔逊卡方检验(χ2)；Wilcoxon秩检验。

(2)胃肠道舒适性和粪便性状：

干预两周后，和普通奶组(饮用普通牛奶2周)相比，A2奶组(饮用A2牛奶2周)发生偶尔腹胀的比例低了6％，经常腹胀的比例低了4％；肠鸣症状方面，A2奶组减少肠鸣的比例低了1％，经常肠鸣比例下降5％；A2奶组排便频率两次每天的比例增加了6％，两天一次的比例则下降了6％；排便性状差异较小，两组相比，主要体现在A2奶组“3-肠状成块、表面有裂痕”有6％的降低，以及“4-四型，肠状或像蛇一样且柔软光滑”有3％的增加。

洗脱两周后，和普通奶组(停服普通牛奶2周)相比，A2奶组(停服A2牛奶2周)没发生排气症状的显著提高了13％，正常排气的降低了6％。其余指标无显著差异。

交替干预两周后，普通奶组(继续饮用A2牛奶2周)和A2奶组(继续饮用普通牛奶2周)志愿者的腹痛状况评分分布有显著统计学差异。具体来讲，和继续饮用A2牛奶的普通奶组相比，继续饮用普通牛奶的A2奶组发生偶尔腹胀的比例高了9％。

表3

上述结果说明，队列志愿者经过两周的A2牛奶饮用，和饮用普通牛奶对比，比较明显地降低了志愿者腹胀、肠鸣比例，增加了排便频率，以及微弱地改变了大便性状；且这种改善在洗脱两周和更换饮用牛奶类型后基本消失。

(3)肠道菌组成和益生菌的变化：

A2奶组和普通奶组在各年龄条件下双歧杆菌属随干预阶段变化情况见图1。由图1可知，年龄显著影响了肠道菌群多样性的影响。A2牛奶组，志愿者饮用A2牛奶2周后，肠道双歧杆菌的丰度比入组时显著提高。普通牛奶组，志愿者洗脱两周，再继续饮用A2牛奶两周后，其肠道双歧杆菌的丰度比洗脱阶段显著提高。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。