一类用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染的化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地涉及一类用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染的化合物及其制备方法和应用，这类化合物可以显著降低体内HBV表面抗原(HBsAg)，同时可以有效抑制HBV病毒的复制。

背景技术

在全世界有超过2.4亿人长期感染HBV，在那些慢性感染患者中，高达40％的患者面临进展为肝纤维化、肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌的风险。乙肝患者的表面抗原清除是临床诊断和治疗的重要生物标记，慢性HBV的关键诊断症状之一是HBsAg的高血清水平，而且HBsAg的血清学清除被认为是临床上乙肝治愈的标准之一。

据报道，一些化合物可以通过抑制HBsAg分泌从而有效的降低血清中的HBsAg水平，但至今还没有该作用机制的药物用于HBV患者的临床治疗。

发明内容

本发明提供了一类新型的化合物，可以有效的抑制HBV感染细胞中HBsAg的分泌，降低HBV患者的病毒载量和病毒复制。相对于本领域已知的类似化合物，本发明的化合物具有更高的活性、更好的体内药效、更好的安全性、更优的药代性质以及更好的成药性。

本发明还提供了含有该新型化合物的药物组合物以及使用该化合物或组合物抑制HBV复制和治疗与HBV相关或由HBV引起的疾病的方法。

本发明的第一方面，提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体：

其中，X选自下组：N、CH；

R

R

R

R

R

R

各R

在另一优选例中，其中与R

其中，X选自下组：N、CH；

R

R

R

R

R

R

各R

在另一优选例中，X选自下组：N、CH；

R

R

R

R

R

R

在另一优选例中，X为N；

R

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在另一优选例中，X为N；

R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

在另一优选例中，X为N；

R

R

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各R

在另一优选例中，X为N；

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，R

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在另一优选例中，结构如式I-R-1所示：

其中，R

R

R

R

R

R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，

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R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，R

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R

R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，R

在另一优选例中，结构如式I-R-3所示：

其中，R

R

环A为含1、2或3个选自N、O、S的杂原子的5-6元杂芳基，其中杂芳基任选地进一步被1-3个选自卤素、羟基、羰基、胺基、氰基、C

R

本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的载体和一种或多种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体。

本发明的第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体的用途，用于选自下组的用途：

1)用于治疗或预防HBV感染；

2)用于制备用于治疗或预防HBV感染的药物；

3)用于抑制HBsAg的生成或分泌。

在另一优选例中，治疗对象为哺乳动物，如人。

本发明的第四方面，提供了一种HBsAg抑制剂，包含抑制有效量的一种或多种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体。

本发明的第五方面，提供了一种治疗或预防HBV感染的方法，包括步骤：向所需患者施用治疗或预防有效量的一种或多种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体。

本发明的第六方面，提供了一种抑制HBsAg的生成或分泌的方法，包括步骤：向所需患者施用抑制有效量的一种或多种本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

本发明人经过长期而深入的研究，通过结构设计意外地制备了一种结构新颖的、具有更高的活性、更好的体内药效、更好的安全性、更优的药代性质以及更好的成药性的化合物。在此基础上，发明人完成了本发明。

术语

在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。

在本发明中，术语“卤素”指F、Cl、Br或I。

在本发明中，“C

术语“环烷基”是指具有3至10个碳原子的饱和单环基团、稠环基团和桥连基团。这类基团的示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。“C

在本发明中，术语“C1-C6烷氧基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。优选为C1-C4烷氧基。

在本发明中，术语“杂环烷基”是指由一个或多个选自氮、氧、硫的杂原子与一个或多个碳原子所形成的非芳香性环状基团，包括单环基团、稠环基团和桥连基团。杂环基可以为包含1至3个选自氮、氧、硫的3至10元环体系，其中优选至少一个杂原子选自氮。杂环基中的饱和碳原子(即，-CH2-)可以任选地被-C(＝O)-、-C(＝S)-或-C(＝NH)-取代。杂环烷基的实例包括但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷酮、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢噻喃、四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,4-氧硫杂环己烷、8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、氮杂环丁烷、乙烯二氧、氧杂环丁烷或噻唑。在某些实施方式中，如果没有另外说明，杂环基团具有1-2个选自N、O和S的杂原子作为环成员，以及4-7个环原子，并且可选被至多四个选自卤素、氧代、CN、氨基、羟基、C

在本发明中，术语“芳环”或“芳基”具有相同的含义，优选为“C6-C12芳基”。术语“C6-C12芳基”是指在环上不含杂原子的具有6至12个碳原子的芳香族环基，如苯基、萘基等。“芳基”可选被至多四个选自卤素、氧代、CN、氨基、羟基、C

术语“杂芳基”是指由一个或多个选自氧、氮、硫的杂原子与一个或多个碳原子所形成的稠合或非稠合的芳香性环状基团，其中至少一个环是含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的五至八元环，优选至少一个杂原子选自氮。在环中出现两个或更多杂原子的实施方式中，所述两个或更多杂原子可彼此相同，或者所述两个或更多杂原子中的一些或全部彼此不同，前提是所述基团的环不包含两个相邻的O或S原子。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基，苯并咪唑基，苯并吡唑基，吲哚基等。“杂芳基”可选被至多四个选自卤素、氧代、CN、氨基、羟基、C

在本发明中，术语“卤代”是指被卤素取代。

在本发明中，术语“氨基”为-NH

在本发明中，术语“羰基”具有如下结构：

在本发明中，术语“胺基”为-NR

在本发明中，术语“氧基”具有如下结构：

在本发明中，术语“桥环烷基”是指具有桥连碳原子的多环基团，如

在本发明中，术语“三氟甲基”为-CF

在本发明中，术语“三氟甲氧基”为-OCF

在本发明中，当某个基团被限定为“可以进一步被……取代”时，其可以被或不被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烷氧基、卤素、羟基、氨基。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会被引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。

在本发明中，术语“取代”指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：卤素、羟基、羧基(-COOH)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3-至12元杂环基、芳基、杂芳基、C1-C8醛基、C2-C10酰基、C2-C10酯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C10磺酰基等。

化合物

本发明提供了一类抑制HBsAg分泌的化合物，有望用于治疗HBV感染并减少由HBV感染引起的严重肝脏疾病的发生率。相对于具有相似作用机制的现有技术化合物，本发明报道的化合物具有更高的活性、更好的体内药效、更好的安全性以及更优的药代性质，同时具有更好的药用属性。

本发明提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体：

其中，各基团如上文所定义。

在另一优选例中，所述化合物选自下组：

在另一优选例中，所述化合物选自下组：

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐，其具有所期望的药学活性并且在生物学上和在其它方面的均没有不合要求之处。

具体地，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。

另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。

本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于抑制乙型肝炎病毒。

本发明的另一方面涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或其对映异构体或互变异构体，其用于治疗哺乳动物特别是人乙型肝炎病毒感染。

药物组合物和施用方法

药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。通常，本发明化合物可以与一种或多种药学上可接受的载体形成适合的剂型施用。这些剂型适用于口服给药、直肠给药、局部给药、以及其他非胃肠道施用(例如，皮下、肌肉、静脉等)。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体经由通用的药剂学方法制成。药学上可接受的载体指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的赋形剂或稀释剂。上述载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、碳酸钙、磷酸钙、淀粉、纤维素及其衍生物、葡萄糖、蔗糖、明胶等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、植物油、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-1000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如

所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

具体的给药方式和剂型取决于化合物本身的理化性质以及所应用疾病的严重程度等。

在本申请中，术语“治疗有效量”可以是在某种程度上缓解对象中的疾病或病症的一种或多种症状、使与疾病或病症相关或是其病因的一种或多种生理或生物化学参数部分或完全恢复正常、和/或降低疾病或病症的发作可能性的量。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的其他化合物(如抗肿瘤药物)联合给药。

本发明治疗方法可以单独施用，或者与其它治疗手段或者治疗药物联用。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选50～1000mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

与现有技术相比，本发明具有以下主要优点：

本发明化合物具有更高的活性、更好的体内药效、更好的安全性、更优的药代性质以及更好的成药性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1化合物EXP 1的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(10g,64.1mmol,1.0eq)溶于DMF(100mL)中，然后加入碳酸钠(17g,160.2mmol,2.5eq)和溴化苄(8.4mL,70.5mmol,1.1eq)。反应液在60度下搅拌16小时。冷却至室温后向反应液中加水(300mL)用EA萃取(80mL x2)，合并有机相，用饱和食盐水(150mL)洗，然后用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物2(9.6g,61％)为白色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物3的合成

将化合物2(9.6g,39mmol,1.0eq)溶于DMF(100mL)中，然后加入NCS(8.34g,62.4mmol,1.6eq)，反应液在80度下搅拌过夜。冷却至室温后向反应液中加水(300mL)用EA萃取(80mL x2)，合并有机相，用饱和食盐水(150mL)洗，然后用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物2(4.15g,38％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物5的合成

将化合物3(4.15g,14.8mmol,1.0eq)溶于NMP(40mL)中，然后依次加入化合物4(4.8g,16.3mmol,1.1eq)和碳酸铯(14.5g,44.5mmol,3.0eq)，反应液在90度下搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释后用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化后得到化合物5(0.96g,13％)为白色固体。CMS:[M+Na]

4)化合物6的合成

将化合物5(960mg,2.0mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，冷却到0℃后加入硼氢化锂四氢呋喃溶液(4M,2.5mL,10.0mmol,5.0eq)。反应液在室温下搅拌过夜。反应液倒入冰水中，然后用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。有机相合并后饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物6(610mg,70％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

5)化合物7的合成

将化合物6(610mg,1.4mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(15mL)中，然后加入活性二氧化锰(1.2g,13.9mmol,10.0eq)，反应液45度下搅拌2小时。反应液过滤，浓缩后得到化合物7(610mg,100％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

6)化合物8的合成

将化合物7(610mg,1.4mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(10mL)中，滴加TFA(1mL)。反应液在室温下搅拌2小时。反应液浓缩后得到化合物8(440mg,100％)为黄色油状物。LCMS:[M+H]

7)化合物10的合成

将化合物8(950mg,3.0mmol,1.0eq)溶于乙醇(20mL)和水(2mL)中，加入化合物9(5.6g，30.0mmol,10.0eq)，反应液80度下搅拌过夜。将反应液浓缩后得到粗品化合物10(1.37g,100％)为黄色油状物。LCMS:[M+H]

8)化合物12的合成

将化合物10的粗品(1.37g,3.0mmol,1.0eq)溶于DME(12mL)中，加入化合物11(3.7g,15.0mmol,5.0eq)。反应液在100度下反应4小时。冷却到室温，浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物12(500mg,37％)为黄色油状物。LCMS:[M+H]

9)化合物13的合成

将化合物12(500mg,1.1mmol,1.0eq)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，溶液冷却至0度，然后滴加BBr

10)化合物14的合成

将化合物13(370mg,1.1mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)中，滴加氯化亚砜(0.5mL)。反应液在65度下搅拌3小时。将反应液浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物14(350mg,90％)为褐色油状物。LCMS:[M+H]

11)化合物16的合成

将化合物15(2g,11.4mmol,1.0eq)溶于甲醇(20mL)中，加入硼氢化钠(1.08g,28.4mmol,2.5eq)后室温下搅拌过夜。反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯(50mL)萃取。乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化后得到化合物16(1.8g,90％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

12)化合物17的合成

将化合物16(600mg,3.37mmol,1.0eq)溶于无水DMF(5mL)中，溶液冷却至0度，分批加入钠氢(60％，340mg,8.4mmol,2.5eq)，溶液在0度下搅拌半个小时，然后再滴加碘甲烷(720mg,5.1mmol,1.5eq)。反应液在0度下反应3小时。将反应液倒入冰水中，然后用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。有机相合并后饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化后得到化合物17(620mg,96％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

13)化合物18的合成

将化合物17(600mg,3.1mmol,1.0eq)溶于甲醇(20mL)中，加入钯碳(10％，60mg)，反应液室温下搅拌4小时。反应液过滤浓缩后得到化合物18(320mg,100％)为无色胶状物。HNMR:(400MHz,CDCl3)δ3.95-3.88(m,1H),3.50-3.43(m,1H),3.24(s,3H),2.75-2.68(m,2H),1.90-1.82(m,2H).

14)化合物19的合成

将化合物18(204mg,2.0mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入DMAP(25mg,0.2mmol,0.1eq),三乙胺(600mg,6.0mmol,3.0eq)和对甲苯磺酰氯(270mg,3.0mmol,1.5eq)，反应液在室温下搅拌1小时。将反应液倒入水中并用二氯甲烷(30mL)萃取。有机相合并后饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化后得到化合物19(110mg,20％)为无色胶状物。

LCMS:[M+Na]

15)化合物20的合成

将化合物12(96mg,0.28mmol,1.0eq)溶于无水DMF(5mL)中，依次加入碳酸铯(268mg,0.8mmol,3.0eq)和化合物19(84mg,0.32mmol,1.2eq)，反应液在80度下搅拌4小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物20(60mg,50％)为淡黄色胶状物。

LCMS:[M+H]

16)化合物EXP 1的合成

将化合物20(44mg,0.1mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(3mL)和水(0.5mL)中，然后加入固体氢氧化锂(7mg,0.3mmol,3.0eq)。反应液室温下搅拌2小时。反应液用稀盐酸调pH值到6左右，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 1(1.6mg,4％)为类白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例2化合物EXP 2的制备

将化合物EXP 1(200mg)溶于乙酸乙酯(1mL)中，加入正己烷(10mL)，将所得溶液过滤得到的固体，减压干燥后得到化合物EXP 2(150mg,收率75％)。

LCMS:[M+H]

实施例3化合物EXP 3的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(1.1g,5.7mmol,1.0eq)溶于甲醇(30mL)中，然后加入钯碳(10％,500mg),置换氢气后室温下反应18小时。反应完全后过滤除去钯碳，浓缩得到化合物2(500mg,86％)为无色油状物。

2)化合物4的合成

将化合物3(500mg,3.0mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(20mL)中，然后加入化合物2(306mg,3.0mmol,1.0eq)和三苯基膦(1.18g,4.5mmol,1.5eq),冰浴冷却至零摄氏度，将溶有DIAD(909mg,4.5mmol,1.5eq)的四氢呋喃(5mL)溶液缓慢加入，然后室温反应18小时。反应完全后反应液浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物4(500mg,67％)为白色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物5的合成

将化合物4(500mg,2mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(252mg,6mmol,3.0eq),室温反应1小时，旋蒸除去甲醇，残留物用乙酸乙酯(30mL)稀释后用饱和食盐水(30mL)洗涤，分出的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到化合物5(150mg,75％)为无色油状物。

4)化合物6的合成

将化合物5(100mg,0.98mmol,1.0eq)溶于吡啶(10mL)中，然后加入对甲苯磺酰氯(559mg,2.9mmol,3eq)的二氯甲烷(10mL)溶液。反应液在室温下搅拌0.5小时，然后升温至55℃继续搅拌3个小时。反应液冷却至室温后，加入DCM(20mL)稀释，并用稀盐酸(2M)调节反应液pH值至3，然后分液。分出的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到化合物6(130mg,58％)为白色固体。LCMS:[M+Na]

5)化合物8的合成

将化合物7(120mg,0.34mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，然后加入化合物6(130mg,0.51mmol,1.5eq)和碳酸铯(333mg,1.02mmol,3.0eq),升温至80摄氏度反应1小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释后用饱和食盐水洗涤。分出的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到化合物8(50mg,33％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

6)化合物EXP 3的合成

将化合物8(50mg,0.11mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(19mg,0.44mmol,4.0eq),室温下反应1小时。反应完成后浓缩，加入稀盐酸(1M)水溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用pre-HPLC(0.05％FA/乙腈/水)纯化得到化合物EXP 3(5.8mg,13％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例4化合物EXP 4的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(400mg,3.5mmol,1.0eq)溶于吡啶(10mL)中，然后加入对甲苯磺酰氯(800mg,4.2mmol,1.2eq)的二氯甲烷(2mL)溶液。反应液在室温下搅拌0.5小时，然后升温至55℃继续搅拌5个小时。反应液冷却至室温后，加入二氯甲烷(20mL)稀释，并用稀盐酸(2M)调节反应液pH值至3。分离后的有机相用饱和碳酸氢钠水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后过滤浓缩得到化合物2(450mg,50％)为无色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物3(80mg,0.22mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，然后加入化合物2(107mg,0.33mmol,1.5eq)和碳酸铯(215mg,0.66mmol,3.0eq),升温至80摄氏度反应4小时。冷却至室温，反应液用水稀释，然后用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/5)纯化后得到化合物4(30mg,30％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 4的合成

将化合物4(30mg,0.065mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(27mg,0.65mmol,10.0eq),室温下反应3小时。反应完毕后浓缩，加入1M稀盐酸溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到化合物EXP 4(11.3mg,40％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例5化合物EXP 5的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(150mg,1.39mmol,1.0eq)溶于吡啶(5mL)中，然后加入二氯甲烷(1mL)和对甲基苯磺酰氯(317mg,1.67mmol,1.2eq)。反应液在55度下搅拌5小时。冷却至室温，反应液用二氯甲烷(50mL)稀释。有机相用水洗，盐酸水溶液(1M,15mL)洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到的残留物用硅胶制备板(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物2(230mg,63％)为无色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物2(72mg,0.27mmol,2.0eq)溶于无水DMF(5mL)中，依次加入碳酸铯(134mg,0.41mmol,3.0eq)和化合物3(50mg,0.14mmol,1.0eq)，反应液在80度下搅拌4小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物4(44mg,70％)为淡黄色油状物。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 5的合成

将化合物4(44mg,0.1mmol,1.0eq)溶于甲醇(5mL)和水(2.5mL)中，然后加入固体氢氧化锂(12mg,0.5mmol,5.0eq)。反应液室温下搅拌3小时。反应液用稀盐酸调pH值到4左右，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 5(8.3mg,20％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例6化合物EXP 6的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(2g,11.54mmol,1.0eq)溶于吡啶(40mL)中，并将对甲苯磺酰氯(2.64g,13.85mmol,1.2eq)的二氯甲烷(7mL)溶液在室温下加入反应液中。室温搅拌30分钟后，加热至55℃并继续搅拌5小时。反应液先用DCM(40mL)稀释后再用稀盐酸(2N)调节pH值至3，分出的有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物2(3.4g,90％)LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物2(644mg,1.97mmol,4.0eq)溶于DMF(20mL)中，室温下加入化合物3(180mg,0.49mmol,1.0eq),Cs

3)化合物5的合成

将化合物4(49mg,0.09mmol,1.0eq)溶于三氟乙酸(1mL)与二氯甲烷(1mL)的混合溶液中，反应液在室温下搅拌1小时。反应液浓缩，残留物用水(10mL)溶解后水相用二氯甲烷(6x 10mL)萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到化合物5(35.6mg，90％)为白色油状物。LCMS:[M+H]

4)化合物EXP 6的合成

将化合物5(35.6mg,0.08mmol，1.0eq)溶于四氢呋喃(3mL)和水(0.75mL)的混合溶液中，室温下加入一水合氢氧化锂(71mg,1.7mmol,20.0eq)并搅拌16小时。反应液中加入水(5mL)，然后加入甲酸调节pH值为5，得到的溶液用二氯甲烷(2x 30mL)萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩，残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物EXP6(1.8mg，6％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例7化合物EXP 7的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(30mg,0.071mmol,1.0eq)溶于甲醇(3mL)中，依次加入化合物2(5M,43uL,0.214mmol,3.0eq)，醋酸(30uL)，4A分子筛(100mg)和醋酸硼氢化钠(45mg,0.214mmol,3.0eq)，反应液在室温下搅拌3小时。反应液用甲醇(20mL)稀释后过滤，滤液浓缩后得到的残留物用乙酸乙酯(30mL)溶解，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，得到的残留物用硅胶制备板(二氯甲烷/甲醇＝9/1)纯化后得到化合物3(18mg，41％)为黄色固体。

LCMS:[M+H]

2)化合物EXP 7的合成

将化合物3(18mg,0.04mmol，1.0eq)溶于甲醇(2mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(8mg,0.20mmol,5.0eq)的水溶液(1mL)，反应液在室温下搅拌1小时。浓缩除去甲醇，残留物用水(5mL)溶解后加入甲酸调节溶液pH＝4。冷冻干燥后得到的粗品用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 7(8.7mg，52％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例8化合物EXP 8的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(740mg,10mmol,1.0eq)溶于吡啶(10mL)中，然后加入溶于DCM(10ml)的对甲苯磺酰氯(2.3g,12mmol,1.2eq)。反应液在室温下搅拌0.5小时，然后升温至65℃继续搅拌3个小时。反应液冷却至室温后，加入DCM(20ml)稀释，并用稀盐酸(2M)调节反应液pH值至3，然后分液。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得到化合物2(1.5g,66％)为白色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物3(70mg,0.19mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，然后加入化合物2(87mg,0.38mmol,2.0eq)和碳酸铯(186mg,0.57mmol,3.0eq),升温至80摄氏度反应1小时。反应完全后用乙酸乙酯(50mL*3)与饱和食盐水(50mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/5)纯化后得到化合物4(30mg,37％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 8的合成

将化合物4(30mg,0.071mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(30mg,0.71mmol,10.0eq),室温下反应1小时。反应完成后浓缩，加入1M稀盐酸溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩，制备(0.05％FA/乙腈/水)纯化得到化合物EXP 8(5.8mg,21％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例9化合物EXP 9的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(10g,56.8mmol,1.0eq)溶于甲醇(100mL)中，加入硼氢化钠(5.4g,142mmol,2.5eq)后室温下搅拌过夜。反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯(500mL)萃取。乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化后得到无色胶状物2(9.81g,97％)。LCMS:[M+Na]

2)化合物3的合成

将化合物2(2.0g,11.2mmol,1.0eq)溶于吡啶(20mL)中,慢慢加入对甲苯磺酰氯(2.56g,13.5mmol,1.2eq)，反应液在55度下搅拌6小时。将反应液倒入水中，并用2M的HCl调pH至5，用DCM(3X 100mL)萃取。有机相合并后水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到无色胶状物3(2.26g,61％)。LCMS:[M+H]

3)化合物5的合成

将化合物3(302mg,0.83mmol,1.0eq)溶于无水DMF(50mL)中，依次加入碳酸铯(1.08g,3.31mmol,4.0eq)，Na

4)化合物6的合成

将化合物5(330mg，0.63mmol)溶于DCM(4mL)，然后慢慢加入TMSI(5mL)，反应液室温下搅拌2小时。反应液用水(30mL)淬灭，用EA(3X 40mL)萃取。乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥，浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到化合物6(240mg，90％)。LCMS:[M+H]

5)化合物EXP 9的合成

将化合物6(50mg,0.12mmol,1.0eq)溶于THF(4mL)，然后加入氢氧化锂水溶液(1M，1mL,1mmol,8.3eq)。反应液室温下搅拌2小时。THF低温减压除去，残留物加水(40mL)稀释后用柠檬酸调至PH值为3到4，然后用EA(3X 40mL)萃取。乙酸乙酯溶液用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 9(12.9mg，26％)。

LCMS:[M+H]

实施例10化合物EXP 10的制备

将化合物EXP 9(80mg，0.168mmol，1.0eq)溶于DCM(20mL)，0度下慢慢加入Dess-Martin试剂(214mg，0.504mmol，3.0eq)。反应液在室温下搅拌2小时。反应液用饱和NaHCO

LCMS:[M+H]

实施例11化合物EXP 11的制备

1)化合物2的合成

室温下，将化合物1(0.5g,4.9mmol,1.0eq)溶于吡啶(8mL)中，然后滴加对甲基苯磺酰氯(1.1g,5.9mmol,1.2eq)的二氯甲烷(2mL)溶液。反应液在室温下搅拌1小时，然后升温至55度并搅拌6小时。冷却至室温，将稀盐酸(2N)水溶液加入到反应液中，调节反应液pH值至2-3，然后用二氯甲烷(3x 50mL)萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化得到化合物2(0.8g，64％)为白色固体。LCMS:[M+Na]

2)化合物4的合成

将化合物2(56mg,0.22mmol,2.0eq)溶于DMF(3mL)中，然后分别加入化合物3(40mg,0.11mmol,1.0eq)和碳酸铯(106mg,0.33mmol,3.0eq)。反应液在80度下搅拌6小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯(30mL)和水(50mL)稀释。分出有机相，水相用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到化合物4(40mg，82％)为白色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 11的合成

将化合物4(40.0mg,0.08mmol,1.0eq)溶于甲醇(2mL)与水(1mL)的混合溶剂中，室温下加入一水合氢氧化锂(18.6mg,0.44mmol,5.0eq)。反应液在室温下搅拌1小时。将反应液浓缩后加入1N盐酸水溶液调节反应液pH值至2-3，水相用二氯甲烷(3x 30mL)萃取。合并后的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 11(11.4mg，27％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例12化合物EXP 12A以及EXP 12B的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(1g,11.3mmol,1.0eq)溶于吡啶(20mL)中，然后加入对甲苯磺酰氯(2.59g,13.6mmol,1.2eq)的二氯甲烷(5mL)溶液。室温搅拌30分钟后加热至55℃并继续搅拌5小时。反应液用二氯甲烷(20mL)稀释后再用稀盐酸(2N)调节pH值至3，分出的有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干后得到化合物2(1.5g，54％)为无色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物2(40mg,0.164mmol,1.2eq)溶于无水DMF(3mL)中，依次加入和化合物3(50mg,0.136mmol,1.0eq)和碳酸铯(134mg,0.410mmol,3.0eq)，反应液在80度下搅拌4小时。反应液冷却至室温后用乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水洗，饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物4(41mg,70％)为棕色胶状物。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 12A以及EXP 12B的合成

将化合物4(41mg,0.094mmol,1.0eq)溶于甲醇(5mL)和水(2.5mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(18mg,0.470mmol,5.0eq)的水(0.5mL)溶液。反应液室温下搅拌2小时。将反应液浓缩后除去甲醇，残留物用水(20mL)稀释，然后用稀盐酸(1N)调pH值到4左右。水相用二氯甲烷(3x 20mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％氨水/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 12A(5.3mg，收率14％)以及EXP 12B(6.5mg，收率17％)。

化合物EXP 12A

LCMS:[M+H]

化合物EXP 12B

LCMS:[M+H]

实施例13化合物EXP 13的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(3g,16.02mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(50mL)中，然后加入咪唑(2.2g,32.21mmol,2.0eq)和TBDPSCl(6.6g,24.01mmol,1.5eq)。反应液在室温下搅拌2小时。反应液浓缩后，加入20毫升水，用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取。有机相合并后用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化后得到化合物2(6.5g,95％)为无色油状物。LCMS:[M+Na]

2)化合物3的合成

将化合物2(4g,9.40mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，在0度下，缓慢加入NaH(60％,1.2g,28.19mmol,3.0eq)，反应半小时后，加入碘甲烷(2.7g,18.80mmol,2.0eq)，反应液室温下搅拌1小时。将反应液加入到冰水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(3x 10mL)萃取。有机相合并后饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化后得到化合物3(2.65g,65％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

3)化合物4的合成

将化合物3(1.5g,3.41mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，加入TBAF(3.2g,10.24mmol,3.0eq)。反应液室温下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化后得到化合物4(566mg,83％)为无色油状物。

4)化合物5的合成

将化合物4(300mg,1.49mmol,1.0eq)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，在0度下，依次加入TsCl(600mg,2.98mmol,2.0eq),吡啶(5mL)和DMAP(180mg,1.49mmol,1.0eq)室温下搅拌16小时。向反应液中加入1M的盐酸水溶液调PH值为3，用乙酸乙酯(3x 10mL)萃取，合并有机相后，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物5(335mg,63％)为无色油状物。

5)化合物7的合成

将化合物5(195mg,0.55mmol,4.0eq)溶于无水DMF(10mL)中，依次加入碳酸铯(200mg,0.62mmol,4.5eq)，无水亚硫酸钠(138mg,1.10mmol,8.0eq)和化合物6(50mg,0.14mmol,1.0eq)，反应液在80度下搅拌4小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物7(50mg,67％)为淡黄色油状物。LCMS:[M+H]

6)化合物8的合成

将化合物7(55mg,0.10mmol,1.0eq)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M,2mL)，反应液在室温下搅拌1小时。将反应液浓缩后得到化合物8(45mg,100％)为淡黄色油状物。LCMS:[M+H]

7)化合物EXP 13的合成

将化合物8(45mg,0.10mmol,1.0eq)溶于甲醇(6mL)和水(3mL)中，然后加入固体氢氧化锂(12mg,0.50mmol,5.0eq)。反应液室温下搅拌2小时。反应液用稀盐酸调pH值到4左右，浓缩得到的残留物用prep-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 13(16.0mg,38％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例14化合物EXP 14的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(2.5g,8.17mmol,1.0eq)溶于DME(50mL)中，冰浴降温至0℃，慢慢加入LiAlH

2)化合物3的合成

将化合物2(2.0g,9.0mmol,1.0eq)溶于DMF(20mL)中，冰浴降温至0℃，慢慢加入NaH(1.08g,27.0mmol,3.0eq,60％)。反应液在0℃下搅拌0.5小时，然后滴加CH

3)化合物4的合成

将化合物3(1.53g,6.12mmol,1.0eq)溶于甲醇(20mL)中，然后加入钯碳(10％,200mg)。反应液在氢气球的气氛下常温搅拌2小时。过滤，滤液浓缩后得到化合物4(782mg,80％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

4)化合物5的合成

将化合物4(782mg,4.89mmol,1.0eq)溶于吡啶(5mL)中，然后加入对甲基苯磺酰氯(1.12g,5.87mmol,1.2eq)的二氯甲烷(5mL)溶液。反应液在60度下搅拌4小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯(200mL)稀释。有机相用盐酸水溶液(1M,50mL)洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物通过硅胶柱层析纯化(PE/EA＝4/1)得到化合物5(1.2g,78％)为无色胶状物。LCMS:[M+Na]

5)化合物7的合成

将化合物6(100mg,0.27mmol,1.0eq)溶于无水DMF(15mL)中，依次加入碳酸铯(356mg,1.09mmol,4.0eq)，化合物5(344mg,1.09mmol,4.0eq)和亚硫酸钠(276mg,2.19mmol,8.0eq)，反应液在80度下搅拌5小时。反应液用乙酸乙酯(200mL)稀释，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物通过硅胶柱层析纯化(DCM/MeOH＝40/1)得到化合物7(78mg,56％)为淡棕色固体。LCMS:[M+H]

6)化合物EXP 14的合成

将化合物7(73mg,0.14mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(4mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(40mg,0.95mmol,6.8eq)的水(1mL)溶液。反应液室温下搅拌2小时。反应液用稀盐酸调pH值到3～7左右后，用乙酸乙酯萃取(3x 30mL)。有机相合并后用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到的粗品用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 14(10.3mg,15％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例15化合物EXP 15的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(1.02g,10mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(15mL)中，然后在冰浴下加入咪唑(680mg,10mmol,1.0eq)和TBDPSCl(1.92g,7mmol,0.7eq)。反应液在室温下搅拌16小时。反应液浓缩后，加入20毫升水，用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取。有机相合并后用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物2(1.0g,30％)为无色油状物。LCMS:[M+Na]

2)化合物3的合成

将化合物2(680mg,2mmol,1.0eq)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，在0度下，缓慢加入NaH(60％，160mg,4mmol,2.0eq)，反应半小时后，加入碘甲烷(568mg,4mmol,2.0eq)。反应液室温下搅拌16小时。将反应液加入到冰水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(3x 10mL)萃取。有机相合并后饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化后得到化合物3(600mg,84％)为无色油状物。LCMS:[M+Na]

3)化合物4的合成

将化合物3(580mg,1.64mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(15mL)中，加入TBAF(1.55g,4.91mmol,3.0eq)。反应液室温下搅拌16小时。反应液用乙酸乙酯(20mL)稀释后用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化后得到化合物4(150mg,79％)为无色油状物。

4)化合物5的合成

将化合物4(93mg,0.8mmol,1.0eq)溶于无水二氯甲烷(1mL)和吡啶(3mL)中，在0度下，加入TsCl(229mg,1.2mmol,1.5eq)。反应液室温下搅拌16小时。向反应液中加入1M的盐酸水溶液调PH值为3～4，用乙酸乙酯(3x 10mL)萃取，合并有机相后，用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化后得到化合物5(150mg,69％)为无色油状物。LCMS:[M+Na]

5)化合物7的合成

将化合物5(45mg,0.16mmol,1.2eq)溶于无水DMF(10mL)中，依次加入碳酸铯(134mg,0.41mmol,3.0eq)和化合物6(50mg,0.14mmol,1.0eq)。反应液在80度下搅拌4小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物7(57mg,90％)为淡黄色油状物。LCMS:[M+H]

6)化合物EXP 15的合成

将化合物7(57mg,0.12mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(4mL)和水(1mL)中，然后加入固体氢氧化锂(15mg,0.62mmol,5.0eq)。反应液室温下搅拌3小时。反应液用稀盐酸调pH值到4左右，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 15(8.5mg,16％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例16化合物EXP 16的制备

1)化合物2的合成

将镁条(4.04g,166.221mmol,8.0eq)和TMSCl(18.1g,166.221mmol,8.0eq)混合超声15-20分钟后加入DMF(15mL)，在50℃下将化合物1(5.0g,20.818mmol,1.0eq)的DMF(50mL)溶液缓慢滴加(5-6分钟)到上述反应液中，反应液在50度下搅拌0.5小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)显示反应完全。将反应液冷却到室温，减压浓缩除去多余的TMSCl,然后将粗品混合物过滤，得到含有化合物2的DMF溶液无需纯化直接用于下一步(6.0g，红色溶液)。

2)化合物4的合成

将碘化锌(3.01g,9.430mmol,3.0eq)和化合物3(1.0g,3.146mmol,1.0eq)加入到乙腈(10mL)中，然后在50度下缓慢加入化合物2的DMF溶液(6.0g，粗品,6.5eq)，50度下搅拌过夜。冷却到室温，反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释后用1N的稀盐酸洗，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩。残留物用硅胶柱层析(乙酸乙酯)纯化后得到化合物4(1.1g,73％)为红色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物5的合成

将化合物4(1.1g,2.321mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后加入TMSI(10mL)。反应液在室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物4(550mg,61％)为红色油状物。LCMS:[M+H]

4)化合物7的合成

将化合物5(210mg,0.547mmol,1.0eq)溶于DMF(13.5mL)中，然后依次加入化合物6(421mg,1.641mmol,3.0eq),碳酸铯(713mg,2.188mmol,4.0eq)和亚硫酸钠(552mg,4.377mmol,8.0eq)，反应液在80℃下搅拌2.5小时。冷却至室温，将反应液用乙酸乙酯(40mL)稀释后过滤。滤液用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物7(138mg,54％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

5)化合物EXP 16的合成

将化合物7(138mg,0.295mmol,1.0eq)溶于甲醇(12mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(62mg,1.474mmol,5.0eq)的水(6mL)溶液。加料完毕后室温下搅拌1小时。将反应液浓缩除去甲醇，残留物用水(20mL)稀释后加入稀盐酸水溶液(1N)调节PH值为4。将混合物用二氯甲烷(3x 20mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 16(56mg,43％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例17化合物EXP 17的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(5g,56.7mmol,1.0eq)溶于吡啶(100mL)中，然后加入对甲苯磺酰氯(13g,68.1mmol,1.2eq)的二氯甲烷(25mL)溶液。室温搅拌30分钟后加热至55℃并继续搅拌5小时。反应液用二氯甲烷稀释后再用稀盐酸(2N)调节pH值至3，分出的有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干后得到化合物2(10g,73％)为无色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物3(35mg,0.092mmol,1.0eq)溶于DMF(3mL)中，然后加入化合物2(34mg,0.14mmol,1.5eq)和碳酸铯(90mg,0.28mmol,3.0eq),升温至80摄氏度反应4小时。冷却至室温后反应液用水稀释，再用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后的有机相无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到化合物4(20mg,48％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 17的合成

将化合物4(20mg,0.044mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(9.2mg,0.22mmol,5.0eq),室温下反应2小时。反应完成后浓缩，加入1M稀盐酸溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩，残留物用pre-HPLC(0.05％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物EXP 17(5.6mg,30％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例18化合物EXP 18的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(2g,22.7mmol,1.0eq)和吡啶(40mL)混合，然后加入对甲苯磺酰氯(5.2g,27.2mmol,1.2eq)的二氯甲烷(5mL)溶液，反应液在55℃下搅拌5小时。反应液加水稀释，用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取，有机相用2N稀盐酸(30mL x 3)洗涤后，再用饱和食盐水(30mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥后浓缩后得到化合物2(4.6g,84％)为白色固体。LCMS:[M+Na]

2)化合物4的合成

将化合物3(35mg,0.092mmol,1.0eq)溶于DMF(3mL)中，然后加入化合物2(34mg,0.14mmol,1.5eq)和碳酸铯(90mg,0.28mmol,3.0eq),升温至80摄氏度反应4小时。冷却至室温，反应液用水稀释后用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并后有机相无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/5)纯化后得到化合物4(15mg,37％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

3)化合物EXP 18的合成

将化合物4(15mg,0.034mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(5.7mg,0.136mmol,4.0eq),室温下反应2小时。反应完成后浓缩，加入1M稀盐酸溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤后干燥浓缩，残留物用pre-HPLC(0.05％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物EXP 18(1.8mg,12％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例19化合物EXP 19的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(80mg,0.21mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中,加入化合物2(95mg,0.42mmol,2.0eq)和碳酸铯(203mg,0.63mmol,3.0eq)，反应液在80℃下搅拌4小时。反应液加水稀释，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取，饱和食盐水(3x 30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。残留物通过硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到化合物3(15mg,16％)为白色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物EXP 19的合成

将化合物3(15mg,0.03mmol,1.0eq)溶于甲醇/水(5mL/1.5mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(14mg,0.34mmol,10.0eq)。混合物在室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，然后加入稀盐酸(1M)水溶液调节PH至3～4，然后用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(25mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。残留物通过反相柱层析(0.05％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 19(4.4mg,31％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例20化合物EXP 20的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(123mg,0.47mmol,3.0eq)溶于无水DMF(10mL)中，依次加入碳酸铯(204mg,0.63mmol,4.0eq)，无水亚硫酸钠(158mg,1.25mmol,8.0eq)和化合物2(60mg,0.16mmol,1.0eq)，反应液在80度下搅拌4小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物3(60mg,81％)为棕色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物EXP 20的合成

将化合物3(47mg,0.10mmol,1.0eq)溶于甲醇(6mL)和水(3mL)中，然后加入固体氢氧化锂(12mg,0.50mmol,5.0eq)。反应液室温下搅拌3小时。反应液用稀盐酸调pH值到4左右，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 20(18.2mg,40％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例21化合物EXP 21的制备

1)化合物2的合成

将化合物15(7.5g,72.7mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(100mL)中,然后加入Boc

2)化合物3的合成

将化合物1(4g,14.2mmol,1.0eq)，化合物2(3.76g,18.5mmol,1.3eq)，PPh3(3.92g,18.5mmol,1.3eq)溶于THF(30mL)中，冷却至0℃，然后滴加DIAD(3.72g,18.5mmol,1.3eq)，将反应液室温搅拌16小时。将反应液浓缩后得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到化合物3(4.9g,74％)为白色固体。LCMS:[M+Na]

3)化合物4的合成

将化合物3(3.2g,6.9mmol,1.0eq)溶于THF(30mL)中，冷却至0℃，然后加入LiBH

4)化合物5的合成

将化合物4(2.7g,6.4mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(20mL)中，然后加入活性二氧化锰(5.6g,64mmol,10.0eq)，反应液在55℃搅拌2.5小时。补加活性二氧化锰(5.6g,64mmol,10.0eq)，反应液继续在55℃搅拌2.5小时。将反应液冷却至室温后过滤，滤液浓缩后得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到化合物5(2.7g,74％)为白色固体。LCMS:[M+H]+＝422.2。

5)化合物6的合成

将化合物5(2.7g,6.4mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(8mL)，室温下搅拌2小时。将反应液浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机层浓缩后得到化合物6(1.76g,93％)为黄色油状物。LCMS:[M+H]+＝304.2。

6)化合物8的合成

将化合物6(1.76g,5.8mmol,1.0eq)溶于乙醇/水(35mL/3.5mL)的混合溶剂中，加入化合物7(10.8g,58mmol,10.0eq)，反应液在90℃搅拌16小时，冷却到室温后，浓缩后得到化合物8(2.57g,100％)为棕色胶状物。LCMS:[M+H]

7)化合物10的合成

将化合物8(2.57g,5.8mmol,1.0eq)溶于乙二醇二甲醚(46mL)中，加入化合物9(4.28g,17.4mmol,3.0eq)，100℃下搅拌4小时。将反应液过滤，滤液浓缩后得到的粗品通过硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到化合物10(435mg,17％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

8)化合物11的合成

将化合物10(200mg,0.45mmol,1.0eq)溶于DCM(0.08mL)中，然后加入TMSI(0.8mL),反应液在室温下搅拌过夜。然后加入水淬灭，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的残留物用TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到化合物11(97mg,61％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

9)化合物13的合成

将化合物12(24mg,0.1mmol,1.2eq)溶于DMF(6mL)中，然后加入化合物11(30mg,0.084mmol,1.0eq)和碳酸铯(82mg,0.25mmol,3.0eq)。反应液在80度下搅拌4小时。反应液冷却至室温后用乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相依次用水洗，饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化后得到化合物13(13mg,39％)为黄色固体。LCMS:[M+H]

9)化合物EXP 21的合成

将化合物13(13mg,0.03mmol,1.0eq)溶于甲醇(1.6mL)和水(0.8mL)中，然后加入氢氧化锂(5mg,0.15mmol,5.0eq)的水(0.5mL)溶液。反应液室温下搅拌3小时。将反应液浓缩后除去甲醇，残留物用水(20mL)稀释，然后用稀盐酸(1N)调pH值到4左右。水相用二氯甲烷(3x 20mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％氨水/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 21(3.8mg,32％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例22化合物EXP 22的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(31mg,0.125mmol,2.0eq)溶于无水DMF(3mL)中，依次加入碳酸铯(62mg,0.188mmol,3.0eq)和化合物2(22mg,0.063mmol,1.0eq)，反应液在80度下搅拌3小时。将反应液冷却至室温后倒入水中，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。乙酸乙酯溶液依次用饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥。浓缩后得到的粗品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物3(21mg,79％)为黄色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物EXP 22的合成

将化合物3(21mg,0.05mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(3mL)和水(0.5mL)中，然后加入固体氢氧化锂(6mg,0.25mmol,5.0eq)。反应液室温下搅拌3小时。反应液用稀盐酸调pH值到4左右，浓缩得到的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 22(4.4mg,22％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

1H NMR(400MHz,CDCl

实施例23化合物EXP 23的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(300mg,0.820mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(12mL)中，冷却至0℃，然后依次滴加三乙胺(249mg,2.460mmol,3.0eq)和三氟乙酸酐(278mg,0.984mmol,1.2eq)的二氯甲烷(0.5mL)溶液。滴加完毕后反应液升至室温并在室温下搅拌1.5小时。将反应液用二氯甲烷(30mL)稀释，然后倒入冰水中。分出有机相，有机相依次用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物2(123mg,30％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物2(123mg,0.247mmol,1.0eq)溶于DMF(12mL)中，然后依次加入化合物3(62mg,0.495mmol,2.0eq)，碳酸铯(322mg,0.989mmol,4.0eq)和Pd(dppf)Cl

3)化合物EXP 23的合成

将化合物4(31mg,0.072mmol,1.0eq)溶于甲醇(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(15mg,0.360mmol,5.0eq)的水溶液(1.5mL)，反应液在室温搅拌1小时。将反应液浓缩去除甲醇，残留物用水(15mL)稀释，然后用盐酸水溶液(1M)调节PH值为4。水相用二氯甲烷(3x15mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 23(7.4mg,25％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例24化合物EXP 24的制备

1)化合物2的合成

将化合物1(300mg,0.820mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(12mL)中，冷却至0℃，然后依次滴加三乙胺(249mg,2.460mmol,3.0eq)和三氟乙酸酐(278mg,0.984mmol,1.2eq)的二氯甲烷(0.5mL)溶液。滴加完毕后反应液升至室温并在室温下搅拌1.5小时。将反应液用二氯甲烷(30mL)稀释，然后倒入冰水中。分出有机相，有机相依次用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物2(123mg,30％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物4的合成

将化合物2(190mg,0.382mmol,1.0eq)溶于DMF(18mL)中，然后依次加入化合物3(248mg,0.765mmol,2.0eq)，碳酸铯(498mg,1.529mmol,4.0eq)和Pd(dppf)Cl

3)化合物5的合成

将化合物4(42mg,0.0769mmol,1.0eq)溶于三氟乙酸(3mL)中，常温下搅拌1小时。将反应液浓缩，残留物用乙酸乙酯(30mL)溶解，有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩得到化合物5(20mg,62％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

4)化合物EXP 24的合成

将化合物5(20mg,0.048mmol,1.0eq)溶于甲醇(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(10mg,0.240mmol)的水溶液(1.5mL)，反应液在室温搅拌1小时。将反应液浓缩去除甲醇，残留物用水(20mL)稀释，然后用盐酸水溶液(1M)调节PH值为4。水相用二氯甲烷(3x 15mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 24(2.1mg,11％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例25化合物EXP 25的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(200mg,0.4mmol,1.0eq)溶于DMF(15mL)中,加入化合物2(90mg,0.8mmol,2.0eq),碳酸铯(393mg,1.2mmol,3.0eq)和Pd(dppf)Cl

2)化合物EXP 25的合成

将化合物3(130mg,0.3mmol,1.0eq)溶于甲醇/水(5mL/1.5mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(66mg,1.5mmol,5.0eq)。反应液在室温下搅拌10分钟。将反应液浓缩，然后加入稀盐酸(1M)水溶液调节PH至3～4，然后用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(25mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。残留物通过反相快速柱层析(0.05％甲酸/乙腈/水)纯化得到化合物EXP 25(29.1mg,25％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

1H NMR(400MHz,CD

实施例26化合物EXP 26的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(150mg,0.3mmol,1.0eq)溶于DMF(6mL)中，然后依次加入化合物2(77mg,0.6mmol,2.0eq)，碳酸铯(293mg,0.9mmol,3.0eq)和Pd(dppf)Cl

2)化合物EXP 26的合成

将化合物3(60mg,0.14mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)和水(3mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(29mg,0.7mmol,5.0eq),室温下反应1小时。反应完成后浓缩，加入1M稀盐酸溶液调节pH<7，水相用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用反相快速柱层析(0.05％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 26(15.4mg,27％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例27化合物EXP 27的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(200mg,0.96mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃溶液(4mL)中，冷却至-10℃，滴加异丙基氯化镁(2M的四氢呋喃溶液,0.72mL,1.44mmol,1.5eq)，反应液在-10℃下搅拌1小时。然后缓慢加入化合物2(344mg,1.06mmol,1.1eq)。升至室温并继续搅拌12小时。反应液中加入饱和氯化铵溶液(25mL)，然后用二氯甲烷(3x 10mL)萃取,有机相合并后用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到化合物3(320mg,89％)为无色油状物。LCMS:[M+H]

2)化合物EXP 27的合成

将化合物3(90mg,0.24mmol,1.5eq)溶于无水1.4-二氧六环(20mL)中，然后依次加入化合物4(80mg,0.16mmol,1.0eq),三乙胺(49mg,0.48mmol,3.0eq)

和四三苯基磷钯(18mg,0.02mmol,0.1eq)。反应液在115℃下搅拌12小时。冷却至室温，向反应液中加入水(5mL)，用二氯甲烷(3x 20mL)萃取后将有机相丢弃。水相用pre-HPLC(0.1％甲酸/乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 27(2.1mg,2％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例28化合物EXP 28的制备

1)化合物3的合成

将化合物1(30mg,0.0853mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(3mL)中，然后依次加入三乙胺(35mg,0.3411mmol,4.0eq)和化合物2(34mg,0.0938mmol,1.1eq)。反应液在室温下搅拌1.5小时。将反应液用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后依次用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后浓缩，残留物用快速柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化后得到化合物3(29mg,70％)为棕色固体。LCMS:[M+H]

2)化合物5的合成

将化合物3(29mg,0.0599mmol,1.0eq)溶于DMF(2mL)中，然后依次加入化合物4(15mg,0.1199mmol,2.0eq)，碳酸铯(59mg,0.1798mmol,3.0eq)和Pd(dppf)Cl

2)化合物EXP 28的合成

将化合物5(15mg,0.036mmol,1.0eq)溶于甲醇(2mL)中，然后加入氢氧化锂(6mg,0.250mmol,7.0eq)的水溶液(1mL)，反应液在室温搅拌1小时。将反应液浓缩去除甲醇，残留物用水(10mL)稀释，然后用盐酸水溶液(1M)调节PH值为4。水相用二氯甲烷(3x 10mL)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后的残留物用pre-HPLC(0.1％甲酸乙腈/水)纯化后得到化合物EXP 28(3.1mg,22％)为白色固体。

LCMS:[M+H]

实施例29：体外抗HBV活性测试

1.实验目的：

通过ELISA(酶联免疫吸附测定)检测HepG2.2.15细胞培养上清HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)含量，以化合物的EC

2.实验材料:

2.1.细胞系：HepG2.2.15细胞

HepG2.2.15细胞培养基(DMEM/F12，Invitrogen-11330032；10％血清，Invitrogen-10099141；100units/ml青霉素和100μg/ml链霉素，Hyclone-SV30010；1％非必需氨基酸，Invitrogen-11140050；2mM L-GLUTAMINE，Invitrogen-25030081；300μg/mlGeneticin，Invitrogen-10131027。

2.2.试剂：

胰酶(Invitrogen-25300062)，DPBS(Corning-21031CVR)，DMSO(Sigma-D2650-100ML)，和乙型肝炎表面抗原定量检测试剂盒(安图生物-CL0310)。

2.3.耗材与仪器：

96孔细胞培养板(Corning-3599)

CO2培养箱(HERA-CELL-240)

酶标仪(BioTec，型号Synergy2)

3.实验步骤和方法

3.1第一天，种HepG2.2.15细胞(6×10

3.2第二天，先将化合物用DMSO稀释，3倍梯度稀释共8个浓度，然后加入培养基进一步稀释。再将含不同浓度化合物的培养基加到培养孔中，双复孔。培养液中DMSO的终浓度为0.5％。仅含0.5％的DMSO作为不加药对照。

3.3第五天，更换含有化合物的新鲜培养液。

3.4第八天收取培养孔中的培养液，ELISA测定HBsAg的含量。

具体步骤参照该产品说明书，步骤简述如下：

取50μl样品和标准品分别加入到反应板中，再每孔分别加入50μl酶结合物，震荡混匀，37℃温浴60分钟，然后用洗液洗板5次，再每孔加入50μl发光底物，混匀，室温避光反应10分钟，最后用酶标仪检测化学发光强度。

3.5数据分析：

计算抑制百分比：

％Inh.＝(1-样品中的HBsAg值/0.5％DMSO对照的HBsAg值)×100％。

计算EC

采用上述测试方法，本发明部分化合物的结构及对应的对HBV的抑制活性如下表：

实施例30：化合物EXP 2与对比例1的药代动力学研究

1)研究目的：为了获得化合物EXP 2、对比例1在雄性SD大鼠体内的药代动力学特征

2)实验内容

每个化合物分别取健康雄性SD大鼠6只(体重范围为180～250克)，分成3组，组一3只大鼠用于静脉给药，组二3只大鼠用于口服给药，组二给药前禁食过夜。静脉：1mg/kg，口服10mg/kg，于时间点0.083(仅组一)、0.25、0.5、1、2、4、6(仅组二)、8和24h经颈静脉或心脏穿刺采血，采集至少0.2mL全血至EDTA-K

实验结果：根据LC-MS/MS检测所得血药浓度数据，采用

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。