用于在饲养期间预防鱼骨骼变形和/或增加鱼骨强度的昆虫粉末

本发明涉及水产养殖(或鱼类饲养)领域，更具体地涉及其用于水产养殖中的昆虫粉末。

鱼饲养涉及对鱼的定期处理。例如，在密闭空间(水池，围栏或网箱)中饲养时，这些操作是如，例如从密闭空间收集鱼，将鱼从一个密闭空间转移到另一个密闭空间，或者针对鱼进行疫苗接种的操作。

“鱼”是指在其发育的所有阶段的任何鱼类，例如在鱼苗，幼鱼或成年鱼阶段。

即使小心谨慎地按照良好实践进行这些各种操作，如果鱼不是抵抗力强的，这些各种操作也可能导致骨骼变形。

令人惊讶地，申请人注意到，向鱼施用昆虫粉末使得可以避免所述鱼骨骼变形，特别是通过增强鱼骨的坚固性。

因此，本发明涉及一种昆虫粉末，其用于在饲养期间避免鱼骨骼变形。

更具体地，本发明涉及一种昆虫粉末，其用于在饲养期间增强鱼骨的坚固性。

“昆虫粉末”是指仅由昆虫和任选的水制备的呈颗粒形式的组合物。

昆虫粉末中的残留水分含量为2至15％，优选为3至8％，更优选为3至6％。该水分含量可以例如根据源自2009年1月27日的CE 152/2009法规的方法(103℃/4h)来确定。

应当注意，在本申请的上下文中，除非另有规定，否则所指示的值的范围应理解为包括端值。

在整个申请中，如果没有对法规，标准或指令精确指出日期，则该法规，标准或指令自申请之日起生效。

当将昆虫粉末研磨至人类或动物进食可接受的粒度时，其可以称为“昆虫粉”。“人类或动物进食可接受的粒径”是指在100µm至1.5mm之间，优选在300µm至1mm之间，更优选在500µm至800µm之间的粒径。

“昆虫”特别是指鞘翅目(

优选地，双翅目属属于短角亚目(sous-ordre des

优选地，鳞翅目属于双孔亚目(sous-ordre des

优选地，鞘翅目属于扁虫下目(infra-ordre des

更优选地，鞘翅目选自黄粉虫(

因此，本发明所针对的昆虫粉末优选是鞘翅目粉末，更特别是黄粉虫的粉末。

有利地，所述昆虫粉末是从上述昆虫物种的幼虫阶段获得的。

“饲养”是指从鱼苗阶段到成年阶段的鱼的生产，然后维持和生长。

更具体地，本发明针对的饲养是具有商业目的的饲养，其允许进行鱼类的密集生产，例如在密闭空间中的饲养。

鱼的骨骼包括头骨和中枢骨，也称为脊柱。该中枢骨由椎骨组成，由于其侧向发育，该椎骨具有肋骨。

“鱼骨”是指鱼的中枢骨，椎骨和/或肋骨，优选中枢骨。

“鱼骨骼变形”是指所述鱼的头骨和/或鱼骨的正常形状的任何改变，优选地，所述鱼的中枢骨的正常形状的任何改变。

“鱼骨的坚固性增强”是指鱼骨强度的提高，该强度可以通过针穿过鱼骨所需的总功(单位：N.s)来度量。例如，所述的鱼骨强度可以使用质构仪(例如，由Stable MicroSystems Ltd.设计的TA-XT2)通过按压针式探针(例如，由Stable Micro Systems Ltd.设计的P/2N)以恒定的速度(例如1mm/s)进入并穿过皮肤，肌肉和椎骨来确定。可以在鱼的侧线L上的A点位置进行测量，该点与背鳍ND的最前部分垂直对齐(请参见图1)。

有利地，鱼骨的坚固性的增强使得可以防止或限制鱼，特别是尚未完成其生长的鱼的骨骼变形。

有利地，在饲养期间为鱼施用昆虫粉末使得可以将骨骼的坚固性提高至少40％，优选地至少55％，更优选地至少100％，相对于尚未施用昆虫粉的鱼的鱼骨的坚固性。

“施用”是指使一种或多种鱼摄入或为一种或多种鱼饲喂的事实。

优选地，在操作该鱼之前施用用于其上述用途的昆虫粉末。

“操作”是指通过人为或机械干预进行的任何鱼类移动。

有利的是，在操作之前的10天内，将昆虫粉末施用于鱼上。

优选地，在对鱼操作之前的15天内，更优选地在20天内，更优选地在30天期间施用昆虫粉末。

有利地，在上述对鱼操作之前和之后的几天中施用昆虫粉末。

有利地，将昆虫粉末每天，优选每天多次施用于鱼。

举例来说，对鱼的操纵产生自其疫苗接种和/或从淡水到海水的转移。

在对鱼操作以进行其疫苗接种之前，为了防止任何骨骼变形和/或加强鱼骨，在鱼处于培育室期间，优选自进入培育室，更优选自孵化场(自出生开始)时向鱼施用昆虫粉末。

在对鱼操作以便在将其从淡水转移到海水(或盐水)之前，为了防止任何骨骼变形和/或加强鱼骨，在从淡水转移到海水之前的10天内，优选地在15天内，更优选地在20天内，还更优选地在30天内将昆虫粉末施用于鱼。

因此，本发明所针对的鱼优选地是旨在要在其饲养期间从淡水转移到海水中的鱼。

因此，这种鱼更特别是在其野生状态的生命周期中从淡水迁移到海水的一种或多种鱼。

更具体地，本发明针对在淡水中繁殖并且在海水中进行其生长主要部分的鱼。这种鱼通常称为溯河产卵鱼。

有利地，根据本发明，所述昆虫粉末被用于在饲养属于鲑科的鱼期间增强其鱼骨的坚固性。

优选地，所述鱼属于鳟属(

根据本发明特别优选的物种是：大西洋鲑鱼(saumon Atlantique)，褐鳟(TruiteBrune或Truite commune)，北极红点鲑(Omble chevalier)，银鲑(Saumon pacifique)，大鳞大麻哈鱼(saumon royal)和虹鳟鱼(Truite arc-en-ciel)。

优选地，因此，如上所述地在将这些鱼的饲养期间从该淡水向海水(或盐水)的转移之前对该鱼施用昆虫粉末。

优选地，相对于昆虫粉末的总重量，根据本发明使用的昆虫粉末包含至少68重量％的蛋白质。

更优选地，昆虫粉末包含至少69重量％的粗蛋白质，还更优选至少70重量％的粗蛋白质，重量百分比是相对于昆虫粉末的总重量给出的。

“蛋白”是指粗蛋白质的量。粗蛋白质的定量是本领域技术人员熟知的。举例来说，可以提及Dumas方法或凯氏定氮法。优选地，使用对应于标准NF EN ISO 16634-1(2008)的Dumas方法。

这种粉末的实例在下文的实施例1和2中进行描述。

有利地，相对于昆虫粉末的总重量，昆虫粉末包含68至75重量％的蛋白质，优选地在69至72％之间，更优选地，大约70％。

优选地，相对于昆虫粉末的总重量，昆虫粉末还包含按重量计2％至15％的甲壳质，更优选地4％至12％，还更优选地6％至10％的甲壳质。

根据本发明，“甲壳质”是指任何类型的甲壳质衍生物，即包括N-乙酰基-葡糖胺单元和D-葡糖胺单元的任何类型的多糖衍生物，特别是甲壳质-多肽共聚物(有时称为“甲壳质-多肽复合材料”)。这些共聚物也可以与通常为黑色素类型的颜料结合。

甲壳质被认为是在生物世界中仅次于纤维素的第二大合成聚合物。实际上，甲壳质是由生物世界中的许多物种合成的：它部分构成甲壳类和昆虫的外骨骼，以及构成围绕并保护真菌的侧壁。更具体地说，在昆虫中，甲壳质占其外骨骼的3％至60％。

甲壳质含量通过提取它来确定。这样的方法可以是AOAC 991.43方法。

相对于昆虫粉末的总重量，该昆虫粉末的脂肪含量(也称为脂质含量)优选为5-20重量％，更优选为9-17％，还更优选为11-15％。

有利地，相对于昆虫粉末的总重量，昆虫粉末包含13重量％的脂质。

优选地，相对于昆虫粉末的总重量，该昆虫粉末包含按重量计至少1％，更优选地至少2％，还更优选地至少3％的油酸。

优选地，相对于昆虫粉末的总重量，昆虫粉末包含按重量计至少1％，更优选至少2％，还更优选至少3％的亚油酸。

有利地，相对于昆虫粉末的总重量，该昆虫粉末包含按重量计1％至6％，更优选地2％至5％，还更优选地2.5％至3.5％的油酸。

有利地，相对于昆虫粉末的总重量，昆虫粉末包含按重量计1％至6％，更优选地2％至5％，还更优选地2.5％至3.5％的亚油酸。

确定脂肪物质含量的方法是本领域技术人员熟知的。作为实例并且优选地，该含量将根据CE 152/2009法规的方法进行确定。

根据一个优选的实施方案，所述昆虫粉末的油酸/亚油酸比率为0.5至1.5，优选等于1。

有利地，相对于昆虫粉末的总重量，根据本发明的昆虫粉末包含1至10重量％，优选地2至6重量％，例如大约3至4％的灰分。

灰分构成根据本发明的组合物燃烧产生的残余物，并且主要由磷，钙，钠，镁和钾组成。根据本发明的昆虫粉末的这些矿物质，特别是磷和钙，具有高生物利用度。

确定灰分含量的方法是本领域技术人员熟知的。优选地，灰分含量根据2009年1月27日的CE 152/2009法规所规定的方法进行确定。

有利地，根据本发明的昆虫粉末包含少于2重量％的磷，相对于昆虫粉末的总重量。

测定磷含量的方法是本领域技术人员熟知的。优选地，磷含量根据满足标准NF ENISO/IEC 17025：2005的方法，例如通过ICP-MS(代表“电感耦合等离子体质谱法”)进行测定。

有利地，相对于粗蛋白质的总重量，该昆虫粉末的蛋白质具有按重量计大于或等于80％，优选地大于或等于85％的消化率。

消化率是通过72/199/CE指令中描述的方法测量的胃蛋白酶消化率。

更优选地，相对于粗蛋白质的总重量，消化率大于或等于86重量％，还更优选地大于或等于88重量％，例如，相对于粗蛋白质的总重量，其等于90重量％。

这种昆虫粉末可以通过包括以下步骤的方法进行制备：

i) 杀死昆虫，

ii) 将昆虫的角质层与柔软部分分开，

iii) 使昆虫柔软部分熟化，

iv) 将昆虫的柔软部分分为固体部分和液体部分，

v) 将在步骤iv)中获得的固体部分与步骤ii)中获得的角质层混合，

vi) 干燥在步骤v)中获得的混合物以获得干燥混合物，和

vii) 研磨在步骤vi)中获得的混合物。

有利地，在杀死步骤i)之后，将昆虫直接用于实施将角质层从昆虫的柔软部分分离的步骤ii)，即，昆虫不经过任何处理，如在步骤i)和步骤ii)之间的研磨，冷冻或脱水。

上述方法的步骤在下面的实施例1中更充分地描述。

角质层是昆虫表皮分泌的外层(或外骨骼)。它通常由三个层组成：上表皮，外角质层和内角质层。

“柔软部分”是指昆虫的肉(特别是包括肌肉和内脏)和汁液(特别地包括体液，水和血淋巴)。特别地，柔软部分不包括昆虫的汁液。

昆虫的角质层与柔软部分的分离可以使用压滤机或带式分离器，优选使用带式分离器进行。

“带式分离器”是指包括挤压带(或压缩带)和带孔鼓的装置。

在步骤ii)中分离角质层后，可以将它们保持在75-95℃，优选80-90℃的温度下，直到它们在步骤v)中与固体部分混合为止。

有利地，根据本发明的昆虫粉末得自属于鞘翅目的昆虫物种，优选得自黄粉虫。因此，根据本发明的昆虫粉末是鞘翅目的粉末，优选黄粉虫(Tenebrio molitor)的粉末。

因此，本发明更特别地针对鞘翅目，优选黄粉虫的粉末，其用于在饲养期间避免鱼骨骼变形和/或增强鱼骨的坚固性。

此外，本发明涉及昆虫粉末，例如鞘翅目粉末，优选黄粉虫的粉末，用于在饲养期间特别是例如在对鱼操作前，避免鱼骨骼变形和/或增强鱼骨的坚固性。

昆虫粉末及其施用或使用方式具有与上面描述的那些相同的优选实施方式和特征。

特别地，根据本发明昆虫粉末在操纵鱼之前的10天内进行使用。

优选地，昆虫粉末在对鱼操作之前的15天内，更优选在20天内，更优选在30天内进行使用。

有利地，昆虫粉末在对鱼操作之前和之后的上述天数中使用。

有利地，该昆虫粉末每天使用一次，优选每天使用多次。

本发明还涉及一种饲养鱼的方法。

更特别地，饲养鱼的方法是一种旨在在饲养期间避免鱼骨骼变形和/或增强鱼骨的坚固性的方法，该方法包括向所述鱼施用昆虫粉末。

有利地，根据本发明的饲养鱼的方法包括在对其进行操纵之前的10天内向该鱼施用一种昆虫粉末。

根据本发明的饲养方法所针对的鱼是上述优选的那些，并且该昆虫粉末有利地具有上述特征，并且特别地，例如，该昆虫粉末有利地是鞘翅目粉末，优选地是黄粉虫粉末。

昆虫粉末的施用或使用方式具有与上述那些相同的优选实施方式和特征。

特别地，昆虫粉末在对鱼操作之前的15天内，更优选在20天内，更优选在30天内进行施用。

有利地，昆虫粉末在对鱼操作之前和之后的上述几天中进行施用。

有利地，将昆虫粉末每天，优选每天多次施用于鱼。

举例来说，对鱼的操纵产生自其疫苗接种和/或其从淡水到海水的转移。

在对鱼进行操作以进行疫苗接种之前，为了防止任何骨骼变形和/或加强鱼骨，在鱼处于培育室期间，优选自其进入培育室，更优选自孵化场(自其出生开始)时向其施用昆虫粉末。

在对鱼进行操作以将其从淡水转移到海水(或盐水)之前，为了防止任何骨骼变形和/或加强鱼骨，在从淡水转移到海水之前的10天之内，优选地，在15天内，更优选地在20天内，还更优选地在30天内将昆虫粉末施用于鱼。

更特别地，施用于鱼的昆虫粉末构成相对于鱼的食谱的总重量的至少5重量％，优选至少10重量％，优选至少15重量％，再更优选至少20重量％。

在本申请中，“食谱”是指以给定的比例施用于鱼的所有成分，可以同时或分别施用这些成分。

例如，根据本发明的昆虫粉末可以用作为通常在鱼的食谱中施用的鱼粉的替代物。

它可以部分或全部代替鱼粉。优选地，昆虫粉代替鱼粉重量的25％或更多，优选鱼粉重量的50％或更多。

用昆虫粉末代替鱼粉允许在饲养期间避免鱼骨骼变形和/或增强鱼骨的坚固性。

优选地，昆虫粉末代替通常施用于鱼的鱼粉的50％。

昆虫粉也可以代替全部通常施用于鱼的鱼粉。

食谱中的其他成分有利地选自鱼粉，大豆粉，豌豆，小麦，玉米，小麦麸质，玉米麸质，植物如大豆的蛋白浓缩物，大豆卵磷脂，油(尤其鱼油，菜籽油)，维生素，矿物质，抗氧化剂，天然食品颜料，特别类胡萝卜素(如虾青素)，氨基酸(例如蛋氨酸，赖氨酸，苏氨酸)和/或食品添加剂如增稠剂(瓜尔胶)和磷酸一钠。

维生素和/或矿物质可以例如作为预混合物形式提供。

有利地，为鱼提供的食谱包含至少0.4重量％，优选至少0.6重量％，更优选0.6重量％至2重量％的甲壳质，相对于食谱的总重量。

有利地，相对于食谱的总重量，为鱼提供的食谱包含33至57重量％，优选38至52重量％，例如约43至47％的蛋白质。

有利地，相对于食谱的总重量，为鱼提供的食谱包含按重量计为13至38％，优选地按重量计为18至31％，例如大约22至26％的脂质。

有利地，为鱼提供的食谱包含1至8重量％，优选2至7重量％，例如大约5至6％的灰分，相对于食谱的总重量。

本发明的其他特征和优点将在以下作为举例说明给出的实施例中变得显而易见，并参考：

-图1，是鱼的示意图，在其上表示鱼骨的机械性能的测量位置；

-图2，其是说明在24天期间根据鱼的食谱A，B或C得出的鱼骨强度(单位：N.s)的图表。

根据本发明的昆虫粉末由黄粉虫的幼虫制备，这些幼虫已经接受了基于谷物副产物(麦麸型)的食谱。收到幼虫后，在杀死之前，可以将其在4℃下在其饲养池中存放0至15天，而不会有主要的损失。

活幼虫(+4℃至+25℃)在穿孔(1毫米)条带式传送带上以厚度为2-10厘米的层的形式被传送到漂烫室。因此，将昆虫在92℃的水中进行漂烫(喷嘴)。在漂烫室中的停留时间为5分钟。

在漂烫结束时的幼虫温度在75℃至92℃之间。

幼虫一旦漂烫，就被传送到带式分离器(来自Baader公司的带式分离器601)的进料斗中，以便将幼虫的角质层与柔软部分分开。鼓孔的直径为1.3毫米。

杀死后立即进行分离，以使幼虫没有时间冷却到环境温度。

昆虫的柔软部分被收集在槽中，并且角质层使用刮刀进行收集。

将昆虫的柔软部分重置在步骤2的收集槽中，在大约90℃的温度下搅拌1h。

然后使用三相倾析器将柔软部分分离成三部分。使用的倾析器是来自Flottweg的Tricanter® Z23。

分离条件：

-流速：最高500Kg/h；

-罐的转速：4806 rpm (3000G)；

-罐和螺杆之间的速度差(Y min)：5％(1.4r/mm)。

在此分离阶段结束时获得了三个部分：油质部分，固体部分和含水部分，

在步骤2中收集的全部角质层(100％)保持在大约80-90℃的温度，直到它们与在步骤4中获得的全部固体部分混合为止，即固体部分/角质层的比为大约5.7(以湿重计)。

使用了来自Vrieco-Nauta公司的锥形螺旋混合器。

在步骤6中获得的混合物使用来自Haarslev公司的圆盘干燥机干燥5小时，以获得干燥的混合物。

最后，干燥的混合物使用连续锤式研磨机(6个可逆运动部件–厚度8毫米)将磨碎。研磨机由带有流量控制活门(180kg/h)的料斗供料。用于控制输出粒度的带孔格栅为1.8毫米。电机的转速为3000rpm(电动，吸收功率4kW(5.5CV))。

根据以下方法表征了在实施例1中制备的昆虫粉末：

-蛋白质：“Dumas”方法，其对应于标准NF EN ISO 16634-1(2008)

-脂肪物质：CE 152/2009法规的方法

-水分含量：起源于2009年1月27日的CE 152/2009法规的方法(103℃/4h)

-灰分：2009年1月27日CE 152/2009法规的方法

-磷：符合标准NF EN ISO/IEC 17025：2005的ICP-MS(代表“电感耦合等离子体质谱法”)

-钙：符合标准NF EN ISO/IEC 17025：2005的ICP-MS(代表“电感耦合等离子体质谱法”)

-甲壳质：AOAC 991.43方法，其用于对食品纤维进行定量(这些昆虫粉中食品纤维大部分由甲壳质组成，因此如此获得的甲壳质的值略微被高估)

-在1.8mm筛网上的残留物：构成粒径小于1.8mm的昆虫粉末的成分的质量

-消化道细菌：对应于标准NF ISO 2128-2(2004年12月)在30℃和37℃下的方法

-沙门氏菌：方法：经BKR 23/07-10/11认证的IRIS Salmonella®

-胃蛋白酶消化率：在指令72/199/CE中描述的方法。

昆虫粉末的组成在下表1中详述，所指示的百分比是相对于昆虫粉末的总干重的重量百分比。

表1。

灰分特别地包含钙和磷，并且昆虫粉末包含0.06％的钙和0.67％的磷，这些百分比是相对于昆虫粉末的总干重的重量百分比。

此外，该昆虫粉末的胃蛋白酶消化率大于85％。

1.材料与方法

在该实施例中使用的鱼是初始重量为60克的大西洋鲑鱼(

这些鱼接受选自三种不同食谱的食谱，包括用0％的昆虫粉代替的鱼粉(食谱A)，50％的昆虫粉代替的鱼粉(食谱B)或100％的昆虫粉代替的鱼粉(食谱C)。

这些食谱在下表2中详细说明，所指示的百分比是相对于食谱总重量的重量百分比：

表2

*TMP：昆虫粉，即黄粉虫粉

**鱼粉：Norse-70 LT，制造商：600031 VEDDE AS(东北大西洋蓝鳕鱼54.6％，挪威海春季产卵鲱鱼副产品24％，挪威海鲱鱼副产品13.1％，挪威海白肉鱼副产品4.4％，北海鲭鱼副产品2.8％，挪威海白肉鱼副产品1.1％)。

此外，相对于鱼粉的总重量，该鱼粉包含约2.6重量％的磷。

***Carophyll® Pink(10％虾青素)：一种基于虾青素的天然食用色素。

将这些鱼在4月的三个水族箱中于12℃的淡水中饲养24天(从4月5日至4月28日)。

然后将它们冷冻在+3℃下，然后评估其中枢骨的机械性能。

下表3列出了饲养条件，为鱼饲喂直至吃饱：

表3。

骨骼的机械性能使用质构仪(标号TA-XT2，由Stable Micro Systems Ltd.设计)，以恒定速度(1mm/s)将探针(P/2N型)压入并穿过位于鱼的侧线L上并与背鳍DF的最前面部分垂直对齐的点A处(图1)的皮肤，肌肉和椎骨进行确定。从统计数据中排除了无法令人满意地到达骨骼的测试(表4)。骨骼的强度是通过针穿过椎骨所需的总功(N.s)来衡量的。

食谱分析的鱼数选择进行统计的鱼数

表4。

2. 结果

使用食谱A饲喂的鱼的中枢骨强度明显小于使用食谱B或C饲喂的鱼的中枢骨强度(图2)。

实际上，使用食谱B或C饲喂的鱼的鱼骨强度分别约为24N.s或32N.s，而使用食谱A饲喂的鱼的鱼骨强度约为15N.s。

因此，与使用食谱A饲喂的鱼相比，使用食谱B饲喂的鱼的鱼骨强度提高了60％，使用食谱C饲喂的鱼的鱼骨强度提高了113％。

因此，使用昆虫粉末，尤其使用在实施例1中制备的粉末，允许增强鱼骨的坚固性。