一种具有益智功能的复合菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及复合菌制品技术领域，具体涉及一种具有益智功能的复合菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

目前已有很多使用益生菌的研究是针对于通过益生菌调节肠道菌群、改善肠道炎症、调节激素水平达到促进排便、减肥的目的，以减肥为主的益生菌领域接近饱和，但是对于益生菌其他的功能，缺少进一步的开发与研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有益智功能的复合菌剂及其制备方法和应用。本发明所述复合菌剂能够改善肠道环境、控制肠道内的有害菌，增强有益菌的作用，使肠道达到一个健康稳定的状态，对于机体有很好的益智作用。

本发明提供了一种具有益智功能的复合菌剂，所述复合菌剂包括长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JBLC-141、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)JYBR-190、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)JLPF-176和嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)。

优选的是，所述复合菌剂包括以下重量份的组分：长双歧杆菌JBLC-1416～10份、乳双歧杆菌JYBR-1903～7份、副干酪乳杆菌JLPF-1764～9份和嗜黏蛋白阿克曼氏菌3～8份。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：将长双歧杆菌JBLC-141的菌粉、乳双歧杆菌JYBR-190的菌粉、副干酪乳杆菌JLPF-176的菌粉和嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉混合，得到复合菌剂。

优选的是，所述长双歧杆菌JBLC-141的菌粉、乳双歧杆菌JYBR-190的菌粉、副干酪乳杆菌JLPF-176的菌粉和嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉活菌数均为100亿cfu/g。

优选的是，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉的制备方法包括以下步骤：在37℃条件下，使用MRS培养基对嗜黏蛋白阿克曼氏菌进行静置培养，离心收集菌体，冻干得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉。

优选的是，所述离心的条件为5000r/min离心3min。

优选的是，所述冻干前，还包括用PBS对菌体进行清洗，清洗后加入脱脂乳。

优选的是，当所述复合菌剂的剂型为液体时，所述混合后还包括加入水。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂或利用上述技术方案所述制备方法得到的复合菌剂在制备具有益智功能的食品或保健品中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂或利用上述技术方案所述制备方法得到的复合菌剂在制备具有调节肠道稳态功能的食品或保健品中的应用。

本发明提供了一种具有益智功能的复合菌剂。本发明所述复合菌剂能够改善肠道环境、控制肠道内的有害菌，增强有益菌的作用，使肠道达到一个健康稳定的状态，产生神经活性化合物，从而调节神经元功能、可塑性和行为，对于机体有很好的益智作用。

生物保藏说明

长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JBLC-141，于2019年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18094。

乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)JYBR-190，于2019年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18092。

副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)JLPF-176，于2019年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18043。

嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)，于2020年7月22日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，单位简称为CICC，地址为北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼，保藏编号为CICC 24917。

附图说明

图1为本发明提供的小鼠走迷宫示意图；

图2为应用例1小鼠走迷宫的时间结果；

图3为应用例2小鼠走迷宫的时间结果；

图4为应用例3小鼠走迷宫的时间结果；

图5为三组混合菌液走迷宫结果对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种具有益智功能的复合菌剂，所述复合菌剂包括长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JBLC-141、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)JYBR-190、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)JLPF-176和嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansiamuciniphila)(后文简称Akk菌)。

长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JBLC-141，于2019年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18094。乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)JYBR-190，于2019年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18092。副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)JLPF-176，于2019年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18043。嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)，于2020年7月22日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，单位简称为CICC，地址为北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼，保藏编号为CICC 24917。在本发明中，长双歧杆菌JBLC-141、乳双歧杆菌JYBR-190和副干酪乳杆菌JLPF-176优选均购自郑州百益宝生物技术公司，保藏编号如上述生物保藏说明所示。在本发明中，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌优选购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。本发明所述复合菌剂能够改善肠道环境、控制肠道内的有害菌，增强有益菌的作用，使肠道达到一个健康稳定的状态，产生神经活性化合物，从而调节神经元功能、可塑性和行为，对于机体有很好的益智作用。

在本发明中，所述复合菌剂优选包括长双歧杆菌JBLC-1416～10份，更优选为10份。长双歧杆菌可以改善肠道环境、抑制肠道有害细菌的生长、提高机体免疫力，对预防便秘、防疾病、抗衰老有重要作用。

在本发明中，所述复合菌剂优选包括乳双歧杆菌JYBR-1903～7份，更优选为7份。乳双歧杆菌可分泌多种酶类，促进食品的降解与吸收。发酵乳糖产生半乳糖，是构成脑神经系统中脑脊脂的成分，与婴儿出生后脑的迅速生长有密切关系。乳双歧杆菌分泌的大量短链脂肪酸，可酸化肠道，其结果能控制由有害菌引起的异常发酵，使肠道内渗透压增高，刺激胃肠蠕动，促进排便。乳双歧杆菌发酵乳糖产生半乳糖，是构成脑神经系统中脑脊脂的成分。

在本发明中，所述复合菌剂优选包括副干酪乳杆菌JLPF-1764～9份，更优选为9份。副干酪乳杆菌JLPF-176是可以食用的对于肠道蠕动以及肠道微生态起到良好调节作用的益生菌，它具有良好的耐酸及胆汁抗性，能够降低血浆胆固醇，增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力，加快肠道内病原体的清除，治疗肠道菌群紊乱，增强肠道通透性。

在本发明中，所述复合菌剂优选包括嗜黏蛋白阿克曼氏菌3～8份，更优选为8份。Akk菌能在肠道粘液层中生长，并利用宿主分泌的粘蛋白“为食”，从而通过竞争性排斥的方式在肠道内定居并保护肠道免受病原体的侵害。

在本发明中，长双歧杆菌JBLC-141、乳双歧杆菌JYBR-190、副干酪乳杆菌JLPF-176和嗜黏蛋白阿克曼氏菌结合后，能够通过脑肠轴系统，调节肠道菌群的平衡，使肠道达到一个健康稳定的状态，产生神经活性化合物，从而调节神经元功能、可塑性和行为，达到益智效果。

本发明使用以上四种菌进行复配，益智效果显著且易于获取，可以达到改善肠道环境、控制肠道内的有害菌，增强有益菌的作用，使肠道达到一个健康稳定的状态从而更好地通过脑肠轴的机制对机体进行益智调节。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：将长双歧杆菌JBLC-141的菌粉、乳双歧杆菌JYBR-190的菌粉、副干酪乳杆菌JLPF-176的菌粉和嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉混合，得到复合菌剂。

在本发明中，所述长双歧杆菌JBLC-141的菌粉、乳双歧杆菌JYBR-190的菌粉、副干酪乳杆菌JLPF-176的菌粉和嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉活菌数均为100亿cfu/g。本申请活性高的菌株进行组合，能够实现更好的益智条件效果。

在本发明中，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉的制备方法包括以下步骤：在37℃条件下，使用MRS培养基对嗜黏蛋白阿克曼氏菌进行静置培养，离心收集菌体，冻干得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌粉。在本发明中，所述离心的条件优选为5000r/min离心3min。在本发明中，所述离心优选在室温下进行，更优选为25℃。在本发明中，所述冻干前，优选还包括用PBS对菌体进行清洗，清洗后加入脱脂乳，保证菌体在最适条件下参与反应。在本发明中，当所述复合菌剂的剂型为液体时，所述混合后还包括加入水。在本发明中，所述水优选为蒸馏水。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂或利用上述技术方案所述制备方法得到的复合菌剂在制备具有益智功能的食品或保健品中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述复合菌剂或利用上述技术方案所述制备方法得到的复合菌剂在制备具有调节肠道稳态功能的食品或保健品中的应用。

下面结合具体实施例对本发明所述的一种具有益智功能的复合菌剂及其制备方法和应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

按照长双歧杆菌JBLC-1416重量份、乳双歧杆菌JYBR-1903重量份、副干酪乳杆菌JLPF-1764重量份和Akk菌3重量份进行配比，即将长双歧杆菌JBLC-1416g、乳双歧杆菌JYBR-1903g、副干酪乳杆菌JLPF-1764g和Akk菌3g与50ml无菌水混合，得到混合菌液A2。实施例1对应对比例1和应用例1。

实施例2

按照长双歧杆菌JBLC-1418重量份、乳双歧杆菌JYBR-1905重量份、副干酪乳杆菌JLPF-1766重量份、Akk菌6重量份进行配比，即将长双歧杆菌JBLC-1418g、乳双歧杆菌JYBR-1905g、副干酪乳杆菌JLPF-1766g和Akk菌6g与50ml无菌水混合，得到混合菌液B2。实施例2对应对比例2和应用例2。

实施例3

按照长双歧杆菌JBLC-14110重量份、乳双歧杆菌JYBR-1908重量份、副干酪乳杆菌JLPF-1769重量份、Akk菌8重量份进行配比，即将长双歧杆菌JBLC-14110g、乳双歧杆菌JYBR-1908g、副干酪乳杆菌JLPF-1769g和Akk菌8g与50ml无菌水混合，得到混合菌液C2。实施例3对应对比例3和应用例3。

对比例1

一种长双歧杆菌菌液(A4)，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，为保证菌液浓度相同，加入长双歧杆菌JBLC-1416g与18ml无菌水混合。

对比例2

一种长双歧杆菌菌液(B4)，其制备方法同实施例2相同，不同之处在于，为保证菌液浓度相同，加入长双歧杆菌JBLC-1418g与16ml无菌水混合。

对比例3

一种长双歧杆菌菌液(C4)，其制备方法同实施例3相同，不同之处在于，为保证菌液浓度相同，加入长双歧杆菌JBLC-14110g与15ml无菌水混合。

应用例1

实验动物：32只小鼠(品种，初始体重20±2.0g)，饲养环境为SPF级。

1、进行环境适应，自由进食饮水一周。将小鼠随机分为4组，每组8只，空白对照组(A1)，混合菌液灌胃组(A2)，重复学习组(重复学习组为小鼠重复走迷宫三次，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆)(A3)，单菌液(长双歧杆菌)灌胃组(A4)。

随后对混合菌液灌胃组(A2)进行混合菌液灌胃1mL/(只·次)，每天2次。对单菌液灌胃组(A4)进行单菌液灌胃1mL/(只·次)，每天2次。同时空白对照组和重复学习组分别给等量的生理盐水，持续14天，记录14天后小鼠走迷宫的时间。

小鼠迷宫实验

1、空白对照组进行无学习的走迷宫，记录小鼠在没有学习过迷宫条件的前提下走出迷宫所需时间。

2、重复学习组的小鼠进行三次重复走迷宫，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆，第四次时记录小鼠走出迷宫所需时间。

3、灌胃菌液组走迷宫，记录走出迷宫所需时间。迷宫如图1所示，结果如表1和图2所示。

表1应用例1走迷宫实验结果

结果表明，四组小鼠进行走迷宫实验，灌胃混合菌液的小鼠相与正常小鼠和单菌液灌胃组小鼠相比走迷宫耗时更短，与重复学习组的小鼠走出迷宫时间相近。说明在提高记忆方面，混合菌液的效果更好，对于小鼠的益智有明显的作用。

应用例2

实验动物：32只小鼠(品种，初始体重20±2.0g)，饲养环境为SPF级。

1、进行环境适应，自由进食饮水一周。将小鼠随机分为4组，每组8只小鼠，空白对照组(B1)，混合菌液灌胃组(B2)，重复学习组(重复学习组为小鼠重复走迷宫三次，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆)(B3)，单菌液(长双歧杆菌)灌胃组(B4)。

随后对混合菌液灌胃组(B2)进行混合菌液灌胃1mL/(只·次)，对单菌液灌胃组(B4)进行单菌液灌胃1mL/(只·次)每天2次。同时空白对照组和重复学习组分别给等量的生理盐水，持续14天。

走迷宫

1、空白对照组进行无学习的走迷宫，记录小鼠在没有学习过迷宫条件的前提下走出迷宫所需时间。

2、重复学习组的小鼠进行三次重复走迷宫，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆，第四次时记录小鼠走出迷宫所需时间。

3、灌胃菌液组走迷宫，记录走出迷宫所需时间。迷宫如图1所示，结果如表2和图3所示。

表2应用例2走迷宫实验结果

结果表明，四组小鼠进行走迷宫实验，灌胃混合菌液的小鼠相与正常小鼠和单菌液灌胃组小鼠相比走迷宫耗时更短，与重复学习组的小鼠走出迷宫时间相近。说明在提高记忆方面，混合菌液的效果更好，对于小鼠的益智有明显的作用。

应用例3

实验动物：32只小鼠(品种，初始体重20±2.0g)，饲养环境为SPF级。

1、进行环境适应，自由进食饮水一周。将小鼠随机分为4组，每组8只小鼠，空白对照组(C1)，混合菌液灌胃组(C2)，重复学习组(重复学习组为小鼠重复走迷宫三次，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆)(C3)，单菌液(长双歧杆菌)灌胃组(C4)。

随后对混合菌液灌胃组(C2)进行混合菌液灌胃1mL/(只·次)，对单菌液灌胃组(C4)进行单菌液灌胃1mL/(只·次)每天2次。同时空白对照组和重复学习组分别给等量的生理盐水，持续14天。

走迷宫

1、空白对照组进行无学习的走迷宫，记录小鼠在没有学习过迷宫条件的前提下走出迷宫所需时间。

2、重复学习组的小鼠进行三次重复走迷宫，使小鼠产生一定程度的学习经验和记忆，第四次时记录小鼠走出迷宫所需时间。

3、灌胃菌液组走迷宫，记录走出迷宫所需时间。迷宫如图1所示，结果如表3和图4所示。

表3应用例3走迷宫实验结果

结果表明，四组小鼠进行走迷宫实验，灌胃混合菌液的小鼠相与正常小鼠和单菌液灌胃组小鼠相比走迷宫耗时更短，与重复学习组的小鼠走出迷宫时间相近。说明在提高记忆方面，混合菌液的效果更好，对于小鼠的益智有明显的作用。

并且由数据可知(对应图5，三组混合菌液走迷宫结果对比图)：A组菌液浓度为32％，B组菌液浓度为50％，C组菌液浓度为70％。随菌液浓度越高，灌胃菌液的小鼠走出迷宫的用时越短。因此说明本发明所述复合菌剂对于肠道微生态的调节对小鼠有一定程度的益智作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。