用于治疗丙型肝炎病毒的高活性药物组合

本申请要求2018年12月5日提交的美国临时申请号62/775,771和2019年10月2日提交的美国临时申请号62/909,486的权益。这些申请的全部内容以参考的方式并入本文中。

技术领域

本发明是一种用于抗丙型肝炎治疗的NS5B聚合酶抑制剂和NS5A抑制剂的高活性组合，以及所述NS5A抑制剂的一种新的固体盐形式，其有利地用于固体药物剂型中。

背景技术

丙型肝炎(HCV)是一种RNA单链病毒，并且是丙型肝炎病毒属的成员。据估计，所有肝病病例中的55％至85％是由HCV引起的。HCV感染可导致肝硬化和肝癌，如果任其发展，可导致需要肝移植的肝衰竭。全世界约有7100万人患有慢性HCV感染，并且每年约有350,000至500,000人死于HCV相关并发症，主要死于肝硬化和肝细胞性癌症。

RNA聚合酶是针对抗RNA单链病毒的药物开发的关键靶点。HCV非结构蛋白NS5BRNA依赖性RNA聚合酶是一种负责启动和催化病毒RNA合成的关键酶。NS5B抑制剂存在两个主要亚类：核苷类似物和非核苷抑制剂(NNI)。核苷类似物被合成代谢为充当聚合酶的替代底物的活性三磷酸酯。非核苷抑制剂(NNI)结合所述蛋白质上的变构区域。核苷或核苷酸抑制剂模拟天然聚合酶底物，并充当链终止剂。它们抑制RNA转录的启动和新生RNA链的延长。

除了靶向RNA聚合酶之外，也可靶向其它RNA病毒蛋白质。例如，作为治疗方法的另外的靶标的HCV蛋白包括NS3/4A(一种丝氨酸蛋白酶)和NS5A(一种非结构线粒体蛋白，其是HCV复制酶的一种必需组分而没有酶能力，对于细胞途径发挥一系列作用，且对HCV功能而言是必须的)。

在2013年12月，第一个核苷NS5B聚合酶抑制剂索非布韦(sofosbuvir)(

许多其他的固定剂量的药物组合物已被批准用于治疗HCV。2014年，美国FDA批准了

2014年，美国FDA还批准了AbbVie的VIEKIRA Pak

2015年7月，美国FDA批准了Technivie

2015年10月，美国FDA警告HCV治疗Viekira Pak和Technivie可导致严重的肝损伤，主要在患有基础晚期肝病的患者中，并且要求向说明书中加入关于安全性的附加信息。.

其它目前批准用于HCV的治疗剂包括干扰素α-2b或PEG基化的干扰素α-2b

仍然存在开发有效且无过度毒性的抗HCV疗法的强烈医学需要。潜在的耐药性加剧了这种需求。HCV RNA聚合酶表现出高复制率，所述高复制率有助于在整个基因组中产生潜在的抗性单点和双点突变和维持病毒准种。在用几乎所有单一疗法进行治疗后，在体外和体内均已鉴定出抗性突变。

因此，本发明的目的是提供化合物、药物组合物、方法和剂型以治疗和/或预防丙型肝炎病毒的感染或与丙型肝炎病毒感染相关的疾病。

发明内容

本发明提供了作为NS5B聚合酶抑制剂的化合物1或其药学上可接受的盐和作为NS5A抑制剂的化合物2或其药学上可接受的盐的高活性组合以用于在宿主(通常为人)中有利地治疗丙型肝炎感染。这种以不同机制共同作用的两种高活性抗HCV药物的组合可以以所需的组合药物制剂形式(例如固体剂型)提供，或者可以以使宿主接受以协同的生物学方式起作用的两种活性药剂的益处的方式(例如以实现重叠的药代动力学、血浆和/或AUC的方式)单独施用。

如实施例6和图4A、4B和4C中所建立的，发现化合物1和化合物2对丙型肝炎病毒显示出协同活性。无法预先预测两种活性药物在以组合方案施用于人时将如何相互作用。这两种药物可以是拮抗的、加和的或协同的。因此，本发明组合物出人意料地协同作用提供了最佳的抗HCV治疗效果。

在一个非限制性实施方式中，化合物1以半硫酸盐提供。在一个非限制性实施方式中，化合物2以双半硫酸盐提供。

化合物1为((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯：

化合物1先前在转让给Atea Pharmaceuticals的美国专利号9,828,410；10,000,523；10,005,811以及PCT申请WO 2016/21276和WO 2019/200005 10,239,911中有所描述。

化合物1的半硫酸盐如下所示为化合物1-A：

化合物1-A在转让给Atea Pharmaceuticals的US 2018-0215776以及PCT申请WO2018/144640和WO 2019/200005中公开。

化合物2为可洛派韦(Coblopasvir)(或KW-136，N-[(2S)-1-[(2S)-2-[5-[4-[7-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰基]吡咯烷-2-基]-1H-咪唑-5-基]-1,3-苯并二噁茂(benzodioxol)-4-基]苯基]-1H-咪唑-2-基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酸甲基酯)：

化合物2在转让给InterMune,Inc.的WO 2011/075607和美国专利申请US 2011/0152246(第104页)中公开。

在一个实施方式中，化合物2是双半硫酸盐(化合物2-A)：

迄今尚未公开化合物2的双半硫酸盐。实际上，迄今为止，可洛派韦(Coblopasvir)已经以双盐酸盐形式施用。Coblopasvir双盐酸盐的晶型公开于转让给北京凯因科技股份公司(Beijing Kawin Technology Share-Holding Co.)的中国专利申请CN 108904496和CN 108675998中。受让方描述了化合物2的双盐酸盐的结晶形式很难生产。尽管使用了大量的溶剂、不同的溶剂组合和多种不同的结晶技术，北京凯因科技股份公司在中国专利申请CN 108904496和CN 108675998中只得到了一种晶型(晶型H)。通过将化合物2溶解在大量MeOH(化合物2重量的2-4倍量)中，加入HCl并回流得到H晶型。

相比之下，现在令人惊讶地发现化合物2-A以展现出良好的稳定性的固体双半硫酸盐形式提供。如本发明实施例3中所讨论的，用十六种不同的无机和有机酸研究了化合物2的结晶。每种酸都在至少两种不同的溶剂中进行了测试，总共进行了48项研究。从这些条件中，令人惊讶地发现，当双半硫酸盐与作为溶剂的MeOH组合使用时，获得了适用于药物制剂的稳定的结晶化合物。

因此，本发明首次提供了化合物2-A的有利的分离的晶型。化合物2的双半硫酸盐的分离的晶型的XRPD图谱提供于图1A中。在一个实施方式中，化合物2-A的晶型通过包含至少五个、六个、七个、八个、九个或十个选自表2的2θ值的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-A的晶型通过包含包括至少或选自7.3+/-0.2°2θ、7.9+/-0.2°2θ、12.0+/-0.2°2θ、12.2+/-0.2°2θ、14.7+/-0.2°2θ、15.8+/-0.2°2θ、16.1+/-0.2°2θ、16.5+/-0.2°2θ、18.2+/-0.2°2θ和22.7+/-0.2°2θ的2θ值的XRPD图谱表征。在一个替代实施方式中，标准差是+/-0.3°2θ+/-0.4°2θ。

提供两种均呈盐形式的化合物的稳定固体组合剂型是不寻常的。共同配制的组合药物往往不包含药学上可接受的盐(Epclusa、Vosevi、Zepatier和Harvoni)或包含一种药学上可接受的盐(Daklinza)。在共制剂中使用不同的盐形式可被认为会增加吸湿性、制剂不稳定性的风险，或以其他方式降低稳定的共制剂的便利性，这会影响施用或功效。在共制剂中使用不同的盐形式在化学分析和满足监管要求方面也可能存在问题。化合物1-A和化合物2-A可以一起配制，这可能部分是因为化合物2-A结晶形式的高稳定性和纯度。如实施例5所述，当经受25℃和60％RH或40℃和75％RH时，化合物2-A的纯度没有改变。因此，在本发明的一个方面，提供了一种固体组合口服递送剂型，其包含有效治疗宿主(通常为人)的量的化合物1的半硫酸盐和化合物2的双半硫酸盐两者。

在一个实施方式中，该固定剂量组合旨在在少于12周，例如少于10周、8周或6周或更短的时间内实现持续的病毒反应。除了有效治疗病毒外，组合药物治疗有助于限制耐药性的出现。

除非另外特别指明，本文所述剂型中活性化合物的重量是针对化合物的游离形式或盐形式。例如，600mg的化合物1-A相当于550mg的化合物1。60mg的化合物2相当于67mg的化合物2-A，100mg的化合物2相当于113mg的化合物2-A。

在一个典型的实施方式中，化合物1以约300和1000mg之间(更典型地，400或500和600或800mg之间，或500和750mg之间)的剂量施用。在一个实施方式中，550mg的化合物1以约600mg的化合物1-A的剂量施用。在一个典型的实施方式中，化合物2以约25和150mg之间、更典型地50和100mg之间的剂量施用。在一个非限制性实例中，60mg的化合物2以约67mg的化合物2-A的剂型施用。

在各个方面，化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)以单一剂型一起配制或以多个剂型(例如两个或多个剂量，每个剂量都具有两种活性物质，或者其中一个剂量具有一种活性物质而另一个剂量具有另一种活性物质)提供。在一个替代的实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐以分开的剂型提供，但是以其可以在宿主中协同作用的方式例如协同地提供。例如，可以施用单独的剂型，使得存在表明活性物质共同对抗病毒的重叠的AUC或其他药代动力学参数。

在本发明的一个方面，化合物1-A和化合物2-A以分开的丸剂提供并且在一天的过程中大致同时施用。

化合物1(或其药学上可接受的盐，例如化合物1-A)与化合物2(或其药学上可接受的盐，例如化合物2-A)的组合也可用于治疗相关病症，诸如抗HCV抗体阳性和抗原阳性病症、基于病毒的慢性肝炎症、由晚期丙型肝炎引起的肝癌(肝细胞性癌症(HCC))、肝硬化、慢性或急性丙型肝炎、暴发性丙型肝炎、慢性持续性丙型肝炎和基于抗HCV的疲劳。

在某些实施方式中，施用化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)至多24周、至多12周、至多10周、至多8周、至多6周或至多4周。在替代实施方式中，施用化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)至少4周、至少6周、至少8周、至少10周、至少12周或至少24周。在某些实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐每天或每隔一天至少施用一次。

在某些实施方式中，所述患者是非肝硬化的。在某些实施方式中，所述患者是肝硬化的。在另一实施方式中，肝硬化宿主患有代偿性肝硬化。在替代实施方式中，所述肝硬化宿主患有失代偿性肝硬化。在一个实施方式中，所述宿主患有Child-Pugh A级肝硬化。在替代实施方式中，宿主患有Child-Pugh B级或Child-Pugh C级肝硬化。

上述组合也可用于治疗一系列HCV基因型。已在全球范围内确定了至少6种不同的HCV基因型，其每一种都有多种亚型。基因型1-3在世界范围内普遍存在，而基因型4、5和6在地理上更为有限。基因型4在中东和非洲很常见。基因型5主要在南非发现。基因型6主要存在于东南亚。尽管美国最常见的基因型是基因型1，但定义基因型和亚型有助于确定治疗类型和持续时间。例如，不同的基因型对不同的药物有不同的反应。最佳治疗时间因基因型感染而异。在基因型中，亚型(例如基因型1a和基因型1b)对治疗的反应也可能不同。感染一种基因型并不排除以后感染不同基因型。

在一个实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐的组合(例如化合物1-A和化合物2-A)用于治疗HCV基因型1、HCV基因型2、HCV基因型3、HCV基因型4、HCV基因型5或HCV基因型6。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型1a。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型1b。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型2a。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型2b。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型3a。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型3b。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型4a。在一实施例中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型4d。在一实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型5a。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型6a。在一个实施方式中，所述化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐用于治疗HCV基因型6b、6c、6d、6e、6f、6g、6h、6i、6j、6k、6l、6m、6n、6o、6p、6q、6r、6s、6t或6u。

在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A的组合用于治疗HCV基因型1、HCV基因型2、HCV基因型3、HCV基因型4、HCV基因型5或HCV基因型6。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型1a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型1b。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型2a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型2b。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型3a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型4a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型4d。

在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型5a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型6a。在一个实施方式中，化合物1-A和化合物2-A用于治疗HCV基因型6b、6c、6d、6e、6f、6g、6h、6i、6j、6k、6l、6m、6n、6o、6p、6q、6r、6s、6t或6u。

本发明还包括特定的组合和剂型，其中化合物1-A可以是无定形的或结晶盐的形式，并且单独地，化合物2-A可以是结晶或无定形的。

因此，本发明包括至少以下实施方式：

(a)化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐的有效组合，用于治疗HCV感染的患者，通常为人。

(b)化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐的组合的有效固体剂型，用于治疗HCV感染的患者，通常为人。

(c)化合物1-A和化合物2-A的有效组合，用于治疗HCV感染的患者，通常为人。

(d)化合物1-A和化合物2-A的组合的固体剂型，用于治疗HCV感染的患者，通常为人。

(e)实施方式(a)或(b)，其中化合物2或其药学上可接受的盐是化合物2-B。

(f)实施方式(a)或(b)，其中化合物2或其药学上可接受的盐是化合物2-C。

(g)实施方式(a)-(f)中的任一个，其中所述组合为组合药物组合物形式。

(h)实施方式(a)-(f)中的任一个，其中所述组合为每种抗HCV活性药剂的分开的药物剂型的形式，其以协同方式使用。

(i)(g)或(h)的药物剂型，其适合于口服递送。

(j)(g)的剂型，其为丸剂、片剂或凝胶形式。

(k)(g)或(h)的药物剂型，其适合于肠胃外递送。

(l)(g)或(h)的药物剂型，其适合于静脉递送。

(m)实施方式(a)-(k)中的任一项，其中化合物1、化合物1-A、化合物2或化合物2-A为结晶形式。

(n)下式的化合物2-A：

(o)本文描述的化合物2-A的分离的结晶形式，其通过与图1A的XRPD图谱基本上相似的XRPD图谱表征。

(p)本文描述的化合物2-A的分离的结晶形式，其通过包含包括至少或选自7.3+/-0.2°2θ、7.9+/-0.2°2θ、12.0+/-0.2°2θ、12.2+/-0.2°2θ、14.7+/-0.2°2θ、15.8+/-0.2°2θ、16.1+/-0.2°2θ、16.5+/-0.2°2θ、18.2+/-0.2°2θ和22.7+/-0.2°2θ的2θ值的XRPD图谱表征。

(q)实施例(p)，其中标准差为+/-0.3°2θ。

(r)实施例(p)，其中标准差为+/-0.4°2θ。

(s)实施方式(m)，其中化合物2-A为结晶形式。

(t)实施方式(m)，其中化合物2-A为以基本上类似于图1A的XRPD图谱表征的结晶形式。

(u)实施方式(m)，其中化合物2-A为通过包含包括至少或选自7.3+/-0.2°2θ、7.9+/-0.2°2θ、12.0+/-0.2°2θ、12.2+/-0.2°2θ、14.7+/-0.2°2θ、15.8+/-0.2°2θ、16.1+/-0.2°2θ、16.5+/-0.2°2θ、18.2+/-0.2°2θ和22.7+/-0.2°2θ的2θ值的XRPD图谱表征的结晶形式。

(v)实施方式(u)，其中标准差为+/-0.3°2θ。

(w)实施方式(u)，其中标准差为+/-0.4°2θ。

(x)上述实施方式中的任一个，其中在所述组合中使用了另外的抗HCV有效化合物。

(y)一种药物组合物，其包含实施方式(a)-(x)中的任一个和药学上可接受的赋形剂。

(z)一种药物组合物，其包含实施方式(a)-(x)中任一个和药学上可接受的赋形剂和第三抗HCV有效药剂，其中所述第三抗HCV有效药剂通过与化合物1、化合物1-A、化合物2或化合物2-A不同的机制起作用。

(aa)实施方式(a)-(z)中任一的有效组合在制备用于治疗有需要的患者的丙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

(bb)一种制备意图用于治疗有需要的患者的丙型肝炎病毒感染的治疗用途有药物的方法，其特征在于在制备中使用了实施方式(a)-(z)中任一的有效组合。

(cc)一种治疗丙型肝炎病毒感染的方法，包括向有需要的患者施用实施方式(a)-(z)中任一的有效组合。

(dd)一种治愈丙型肝炎病毒感染的方法，其包括向有需要的患者施用实施方式(a)-(z)中任一的有效组合。

(ee)一种预防性治疗有丙型肝炎病毒感染风险的患者的方法，包括向有需要的患者施用实施方式(a)-(z)中任一的有效组合。

(ff)一种治疗与丙型肝炎病毒感染有关的病症的方法，所述与丙型肝炎病毒感染有关的病症选自基于病毒的慢性肝脏炎症、晚期丙型肝炎导致的肝癌(肝细胞癌(HCC))、肝硬化、慢性或急性丙型肝炎、暴发性丙型肝炎、慢性持续性丙型肝炎和基于抗HCV的疲劳，所述方法包括向有需要的患者施用实施方式(a)-(z)中任一的有效组合。

(gg)实施方式(aa)-(ff)中的任一个，其中所述患者是肝硬化的。

(hh)实施方式(aa)-(ff)中的任一个，其中所述患者是非肝硬化的。

(ii)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型1。

(jj)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型2。

(kk)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型3。

(ll)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型4。

(mm)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型5。

(nn)实施方式(aa)-(hh)中的任一个，其中所述HCV感染是基因型6。

附图说明

图1A是如实施例3中所述的化合物2-A的XRPD图谱。x轴是以度数测量的2θ，y轴是以计数测量的强度。

图1B是如实施例3中所述的化合物2-A的DSC图。上面的x轴是以摄氏度为单位测量的温度，而下面的x轴是以分钟为单位测量的时间。y轴是以毫克(mg)为单位测量的重量。

图2是如实施例3中所述的化合物2-B的XRPD图谱。x轴是以度数测量的2θ，而y轴是以计数测量的强度。

图3是如实施例3中所述的化合物2-C的XRPD图谱。x轴是以度数测量的2θ，y轴是以计数测量的强度。

图4A是如实施例6中所述的使用化合物1-A和化合物2的组合对HCV基因型1a(GT1a)的90％抑制的等效线图。x轴代表实现对HCV GT1a的90％抑制所需的化合物2的浓度(nM)，y轴代表实现对HCV GT1a的90％抑制所需的化合物1-A的浓度(nM)。通过将单独的化合物1-A实现90％抑制的剂量与化合物2实现90％抑制的剂量连接形成加和线。图中的星号(*)表示两种药物一起实现90％抑制的浓度。星号低于加和线，表明观察到了化合物1-A和化合物2的组合对抗HCV GT1a的协同作用。

图4B是如实施例6中所述的使用化合物1-A和化合物2的组合对HCV基因型1b(GT1b)的90％抑制的等效线图。x轴代表实现对HCV GT1b的90％抑制所需的化合物2的浓度(nM)，y轴代表实现对HCV GT1b的90％抑制所需的化合物1-A的浓度(nM)。通过将单独的化合物1-A实现90％抑制的剂量与化合物2实现90％抑制的剂量连接形成加和线。图中的星号(*)表示两种药物一起实现90％抑制的浓度。星号低于加和线，表明观察到化合物1-A和化合物2的组合对抗HCV GT1b的协同作用。

图4C是如实施例6中所述的使用化合物1-A和化合物2的组合对包含GT3a-NS5B基因型(GT1b_3a-NS5a)的嵌合HCV复制子的90％抑制的等效线图。x轴代表实现对嵌合HCV复制子的90％抑制所需的化合物2的浓度(nM)，y轴代表实现对嵌合HCV复制子的90％抑制所需的化合物1-A的浓度(nM)。通过将单独的化合物1-A实现90％抑制的剂量与化合物2实现90％抑制的剂量连接形成加和线。图中的星号(*)表示两种药物一起实现90％抑制的浓度。星号低于加和线，表明观察到化合物1-A和化合物2的组合对包含GT1b_3a-NS5B的嵌合HCV复制子的协同作用。

图5是NS5B聚合酶抑制剂化合物1-A和NS5A抑制剂化合物2-A。

具体实施方式

本发明提供了特异性NS5B聚合酶抑制剂和特异性NS5A抑制剂的高活性组合，其用于有利地治疗宿主(通常为人)中的丙型肝炎感染。

该组合疗法中使用的抗HCV化合物是：1)NS5B抑制剂，((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯(化合物1)，或其药学上可接受的盐；和2)NS5A抑制剂，N-[(2S)-1-[(2S)-2-[5-[4-[7-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰基]吡咯烷-2-基]-1H-咪唑-5-基]-1,3-苯并二噁茂-4-基]苯基]-1H-咪唑-2-基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酸甲基酯(化合物2)，或其药学上可接受的盐。在典型的实施方式中，化合物1以半硫酸盐衍生物(化合物1-A)施用。在典型的实施方式中，化合物2以双半硫酸盐衍生物(化合物2-A)施用。

在一个实施方式中，所述药物组合以固定剂量剂型(例如丸剂或片剂)施用。在另一实施方式中，这两种化合物的施用方式使得有需要的宿主以协同的方式接受两种化合物的益处，如通过标准药代动力学测量的。

出乎意料地发现化合物1和化合物2的组合协同作用以提供最佳的抗HCV治疗效果(实施例6，图4A-图4C)。组合方案中的两种药物可以是拮抗的、加和的或协同的，并且无法预先预测两种活性药物在施用于人时会如何相互作用。因此，令人惊讶地发现化合物1和化合物2对丙型肝炎病毒显示协同活性

用于HCV的共配制药物往往不包含盐或仅包含一种盐。稳定的固体组合剂型包含两种盐是不常见的，因为这可能冒增加剂型的吸湿性或稳定性的风险。然而，在本发明中，化合物1-A和化合物2-A一起配制，这可能是由于结晶化合物2-A的有利特性。

化合物1(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯)先前描述于转让给Atea Pharmaceuticals的美国专利号9,828,410；10,000,523；10,005,811；10,239,911和PCT申请WO 2016/21276和WO 2019/200005中。化合物1的合成描述于以下实施例1中。

化合物1-A先前公开于转让给Atea Pharmaceutical的US 2018-0215776和PCT申请WO 2018/144640和WO 2019/200005中。化合物1-A(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯的半硫酸盐)的合成描述于下文的实施例2中。在一个实施方式中，化合物1-A以其药学上可接受的组合物或其固体剂型提供。在另一实施方式中，化合物1-A是无定形固体。在一个实施方式中，化合物1-A是结晶固体。

用于制备化合物1-A的非限制性说明性方法包括：

(i)第一步，在烧瓶或容器中，将化合物1溶解在有机溶剂(例如丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙腈或乙醚等)中；

(ii)向第二烧瓶或容器中加入第二有机溶剂，其可以与步骤(i)中的有机溶剂相同或不同，任选地将第二溶剂冷却至0-10℃，并逐滴加入H

(iii)在环境温度或略微升高或降低的温度(例如23-35℃)下，将来自步骤(ii)的0.5/1.0摩尔比率的H

(iv)在例如环境温度或略微升高或降低的温度下，搅拌步骤(iii)的反应直至形成化合物1-A的沉淀；

(v)任选地过滤由步骤(iv)得到的沉淀物，并用有机溶剂洗涤；和

(vi)任选地在升高的温度(例如55、56、57、58、59或60℃)下，任选地在真空中干燥所得化合物1-A。

在某些实施方式中，上述步骤(i)在丙酮中进行。此外，步骤(ii)中的第二有机溶剂可以是例如甲醇，并且步骤(v)中的有机溶剂混合物是甲醇/丙酮。

在一个实施方式中，在步骤(i)中将化合物1溶解在乙酸乙酯中。在一个实施方式中，在步骤(i)中将化合物1溶解在四氢呋喃中。在一个实施方式中，在步骤(i)中将化合物1溶解在乙腈中。在另一实施方式中，在步骤(i)中将化合物1溶解在二甲基甲酰胺中。

在一个实施方式中，步骤(ii)中的第二有机溶剂是乙醇。在一个实施方式中，步骤(ii)中的第二有机溶剂是异丙醇。在一个实施方式中，步骤(ii)中的第二有机溶剂是正丁醇。

在一个实施方式中，溶剂混合物在步骤(v)中用于洗涤，例如是乙醇/丙酮。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是异丙醇/丙酮。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是正丁醇/丙酮。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是乙醇/乙酸乙酯。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是异丙醇/乙酸乙酯。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是正丁醇/乙酸乙酯。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是乙醇/四氢呋喃。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是异丙醇/四氢呋喃。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是正丁醇/四氢呋喃。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是乙醇/乙腈。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是异丙醇/乙腈。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是正丁醇/乙腈。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是乙醇/二甲基甲酰胺。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是异丙醇/二甲基甲酰胺。在一个实施方式中，步骤(v)中用于洗涤的溶剂混合物是正丁醇/二甲基甲酰胺。

化合物1-A已完成了针对感染HCV的患者的1b/2a期临床试验。该多部分研究评估了单剂量和多剂量化合物1-A在健康受试者、非肝硬化HCV感染的患者和肝硬化HCV感染的患者中的作用。化合物1-A在被施用于所有测试的HCV感染组时诱导了显著的抗病毒减少。在7天的过程中每天一次(QD)地施用化合物1-A，并观察到有效的抗病毒活性。在接受600mgQD化合物1-A(相当于550mg的化合物1)的非肝硬化HCV感染的患者中，HCV GT1感染的患者中的平均最大HCV RNA减少为4.4log

除非另有说明，化合物1或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A)以β-D-构型提供。在一个替代实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A)可以以β-L-构型提供。化合物1的氨基磷酸酯或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A)可以R或S手性磷衍生物或其混合物(包括外消旋或非对映体混合物)提供。这些立体构型的所有组合都是本文描述的本发明中的替代实施方式。

这些替代构型包括但不限于：

其他的替代构型包括

在一个实施方式中，任何上述立体异构体或其药学上可接受的盐在本发明的任何方面中用作化合物1。在另一实施方式中，任何一种上述立体异构体或其药学上可接受的盐在本文中本发明的任何方面用作化合物1-A。

在一个替代实施方式中，化合物1-A以化合物说明中描述的特定氨基磷酸酯之外的氨基磷酸酯的半硫酸盐形式提供。在另一替代实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐以化合物说明中描述的特定氨基磷酸酯之外的氨基磷酸酯形式提供。大范围的氨基磷酸酯是本领域技术人员已知的，可以根据需要对其进行选择以提供如本文所述的活性化合物。例如，化合物1的氨基磷酸酯或其药学上可接受的盐包括式A的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R

R

R

R

在替代的非限制性实施方式中，本发明包括化合物1的草酸盐(化合物1-B)、HCl盐(化合物1-C)或硫酸盐(化合物1-D)。

化合物1和化合物1-A的代谢涉及产生5’-单磷酸酯和随后的N

Atea Pharmaceuticals,Inc.在美国专利号9,828,410；10,000,523；10,005,811；和10,239,911和US2018-0215776；和PCT申请号WO 2016/144918；WO 2018/048937；WO2018/013937；和WO 2018/144640中公开了用于治疗HCV的β-D-2’-脱氧-2’-α-氟-2’-β-C-取代-2-修饰-N

化合物2和化合物2-A

化合物2公开于转让给InterMune,Inc.的WO 2011/075607和美国专利申请US2011/0152246(第104页)中。

在一个实施方式中，化合物2以其药学上可接受的盐形式(例如化合物2-A)施用。在一个实施方式中，使用化合物2或化合物2-A的固体形式。在一个实施方式中，所述化合物2或化合物2-A的固体形式是结晶固体。

化合物2(Coblopasvir或KW-136；N-[(2S)-1-[(2S)-2-[5-[4-[7-[2-[(2S)-1-[(2S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰基]吡咯烷-2-基]-1H-咪唑-5-基]-1,3-苯并二噁茂-4-基]苯基]-1H-咪唑-2-基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酸甲基酯)的合成是本领域已知的。可用于制备化合物2的合成方法的非限制性实例包括转让给InterMune,Inc.的WO 2011/075607中报道的那些。

化合物2的结晶形式和制剂描述于转让给北京凯因科技股份公司(Beijing KawinTechnology Share-Holding Co.)的中国专利申请CN 108904496和CN 108675998中。迄今为止，此前公开的化合物2的唯一结晶形式是描述于中国专利申请‘496和‘998中的双盐酸盐。

本发明提供了化合物2的新盐形式，双半硫酸盐化合物2-A，和化合物2-A的有利的分离的结晶形式。

在一个实施方式中，化合物2-A的结晶形式通过与图1A所示的XRPD图谱基本上相似的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-A的结晶形式通过包含至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个来自表2的2θ值的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-A的结晶形式通过包含以下的XRPD图谱表征：

a)包括至少或选自7.3、7.9、12.0、12.2、14.7、15.8、16.1、16.5、18.2和22.7+/-0.2°2θ的2θ值；

b)至少两个、三个或四个选自7.3、7.9、12.0、12.2、14.7、15.8、16.1、16.5、18.2和22.7+/-0.2°2θ的2θ值；

c)至少五个、六个或七个选自7.3、7.9、12.0、12.2、14.7、15.8、16.1、16.5、18.2和22.7+/-0.2°2θ的2θ值；

d)至少八个或九个选自7.3、7.9、12.0、12.2、14.7、15.8、16.1、16.5、18.2和22.7+/-0.2°2θ的2θ值；

e)包括至少或选自7.3、12.0、14.7、16.5和18.2+/-0.2°2θ的2θ值；或

f)至少一个选自7.3、12.0、14.7、16.5和18.2+/-0.2°2θ的2θ值。

用于描述结晶形式的加减符号“+/-0.2°2θ”是指列表中通过+/-0.2°2θ表征的2θ值。例如，在以上(a)中，包括至少或选自7.3、7.9、12.0、12.2、14.7、15.8、16.1、16.5、18.2和22.7+/-0.2°2θ的2θ值单独地包括以下2θ值：7.3+/-0.2°2θ、7.9+/-0.2°2θ、12.0+/-0.2°2θ、12.2+/-0.2°2θ、14.7+/-0.2°2θ、15.8+/-0.2°2θ、16.1+/-0.2°2θ、16.5+/-0.2°2θ、18.2+/-0.2°2θ和22.7+/-0.2°2θ。在替代实施方式中，标准差是+/-0.3°2θ。在替代实施方式中，标准差是+/-0.4°2θ。用于描述结晶形式的+/-0.2°2θ的标准差还包括+/-0.3°2θ和+/-0.4°2θ的标准差。

实施例3的结晶研究还产生了化合物2的另外两种固体结晶盐形式，即双硝酸盐(化合物2-B)和二氢溴酸盐(化合物2-C)。这些结晶形式非常具有溶剂特异性。尽管在其他四种溶剂中进行了研究，但化合物2-B仅在CH

在另一实施方式中，化合物2以药学上可接受的双硝酸盐化合物2-B施用。

本发明还描述了化合物2的双硝酸盐(化合物2-B)的结晶形式。在一个实施方式中，化合物2-B的结晶形式通过与图2所示的XRPD图谱基本上相似的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-B的结晶形式通过包含至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个来自表3的2θ值的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-B的结晶形式通过包含以下的XRPD图谱表征：

a)包括至少或选自8.7、9.3、14.2、14.7、15.2、15.5、19.1、21.4、21.7和27.2+/-0.2°2θ的2θ值；

b)至少两个、三个或四个选自8.7、9.3、14.2、14.7、15.2、15.5、19.1、21.4、21.7和27.2+/-0.2°2θ的2θ值；

c)至少五个、六个或七个选自8.7、9.3、14.2、14.7、15.2、15.5、19.1、21.4、21.7和27.2+/-0.2°2θ的2θ值；

d)至少八个或九个选自8.7、9.3、14.2、14.7、15.2、15.5、19.1、21.4、21.7和27.2+/-0.2°2θ的2θ值；

e)包括至少或选自8.7、9.3、15.2、21.4和21.7+/-0.2°2θ的2θ值；或

f)至少一个选自8.7、9.3、15.2、21.4和21.7+/-0.2°2θ的2θ值。

在替代实施方式中，标准差是+/-0.3°2θ。在替代实施方式中，标准差是+/-0.4°2θ。

在进一步的替代实施方式中，化合物2作为药学上可接受的二氢溴酸盐化合物2-C施用。

本发明还描述了化合物2的二氢溴酸盐(化合物2-C)的结晶形式。在一个实施方式中，化合物2-C的结晶形式通过与图3所示的XRPD图谱基本上相似的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-C的结晶形式通过包含至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个来自表4的2θ值的XRPD图谱表征。在一个实施方式中，化合物2-C的结晶形式通过包含以下的XRPD图谱表征：

a)包括至少或选自8.5、9.5、14.8、15.4、19.0、21.5、22.0、23.0、24.2和30.9+/-0.2°2θ的2θ值；

b)至少两个、三个或四个选自8.5、9.5、14.8、15.4、19.0、21.5、22.0、23.0、24.2和30.9+/-0.2°2θ的2θ值；

c)至少五个、六个或七个选自8.5、9.5、14.8、15.4、19.0、21.5、22.0、23.0、24.2和30.9+/-0.2°2θ的2θ值；

d)至少八个或九个选自8.5、9.5、14.8、15.4、19.0、21.5、22.0、23.0、24.2和30.9+/-0.2°2θ的2θ值；

e)包括至少或选自9.5、15.4、21.5、23.0和24.2+/-0.2°2θ的2θ值；或

f)至少一个选自9.5、15.4、21.5、23.0和24.2+/-0.2°2θ的2θ值。

在替代实施方式中，标准差是+/-0.3°2θ。在替代实施方式中，标准差是+/-0.4°2θ。

定义

如在本发明的上下文中使用的术语“D-构型”指与非天然存在核苷或“L”构型相反的，模拟糖部分的天然构型的主要构型。术语“β”或“β端基异构体”用于指代核苷类似物，其中核苷碱基被配置(布置)在该核苷类似物中呋喃糖部分的平面之上。

术语“共施用”和“共同施用”或组合治疗用于描述施用根据本发明所述的化合物1或其药学上可接受的盐与化合物2或其药学上可接受的盐的组合。在某些实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)与至少一种其它活性药剂一起施用，例如当适合时，与至少一种其他的抗HCV剂一起施用。共同施用的时机最好由治疗患者的医学专家确定。有时优选同时施用所述药剂或至少以允许两种药物在治疗的患者中重叠的药理作用的方式施用所述药剂。或者，选择用于组合治疗的药物可以在不同时间施用于患者。当然，当存在多于一种病毒或其它感染或其它病症时，根据需要，本发明的化合物可以组合其它药剂以治疗该其它感染或病症。

如本文使用的术语“宿主”是指在其中HCV病毒可以复制的单细胞或多细胞生物体，包括细胞系和动物，典型地为人类。术语宿主特别地指受感染细胞、全部或部分HCV基因组转染的细胞以及能够用本文所述的组合物治疗的携带HCV基因组或其部分的动物，特别是灵长类动物(包括黑猩猩)和人。在本发明的大多数动物应用中，宿主为人患者，其包括但不限于具有重叠的药代动力学的剂量方案。然而，在某些情形中，本发明显然预期兽医应用(例如黑猩猩)。宿主可以为例如能够承载所述病毒的牛类、马类、鸟类、犬科动物、猫科动物等。

“药学上可接受的盐”是公开的化合物的衍生物，其中母体化合物被修饰成其无机和有机的酸或碱加成盐而没有过度毒性。本发明所述的化合物的盐可以通过常规化学方法由具有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量的量的适当的碱(例如Na、Ca、Mg或K氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应或通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量的量的适当的酸反应来制备。此类反应通常在水或有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是典型的。本发明化合物的盐可以任选地以溶剂化物的形式提供。

药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(例如胺)的无机或有机酸盐；酸性残基(例如羧酸)的碱金属盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括例如由无过度毒性的无机或有机酸形成的母体化合物的常规盐和季铵盐。例如，常规的酸式盐包括那些衍生自无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)的盐；和由有机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n为0-4)等，或使用产生相同反离子的不同酸)制备的盐。可以在例如Remington’sPharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,PA,p.1418(1985)中找到另外的合适的盐的清单。

所述化合物可以以任何提供所需结果的摩尔比率递送。例如，可以为所述化合物提供小于摩尔当量的反离子，例如以半硫酸盐的形式。或者，可以为所述化合物提供多于摩尔当量的反离子，例如以二硫酸盐的形式。所述化合物与反离子的摩尔比率的非限制性实例包括1:0.25、1:0.5、1:1和1:2。

同位素替代

本发明包括化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)的组合，其中所述化合物中的一者或两者以高于天然同位素丰度(即富集)的量具有期望的原子同位素替代。同位素是具有相同原子序数但质量数不同的原子，即质子数相同但中子数不同的原子。以一般实例的方式而非限定，可以在所述结构中的任意位置使用氢的同位素、例如氘(

用同位素例如氘替代由于更大的代谢稳定性、例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求，从而可以提供某些治疗优势。在代谢分解位点用氘替代氢可以降低该键处的代谢速率或消除该键处的代谢。在可以存在氢原子的化合物的任何位置，氢原子可以是氢的任何同位素，包括氕(

术语“同位素标记的”类似物是指作为“氘代类似物”、“

治疗方法

如本文使用的治疗是指将有效量的本发明所述的组合施用于宿主(例如感染或可能感染HCV病毒的人)。在一个实施方式中，所述治疗方法包括将有效量的化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐施用于宿主(例如感染或可能感染HCV病毒的人)。在另一实施方式中，所述治疗方法包括将化合物1-A和化合物2施用于宿主，例如感染或可能感染HCV病毒的人。在另一实施方式中，所述治疗方法包括将化合物1和化合物2-A施用于宿主(例如感染或可能感染HCV病毒的人)。在另一实施方式中，所述治疗方法包括将化合物1-A和化合物2-A施用于宿主，例如感染或可能感染HCV病毒的人。

术语“预防性的”或预防，当使用时，是指施用本发明所述的组合物以预防或减少病毒性病症发生的可能性。本发明在替代实施方式中包括治疗和预防或预防性治疗。在一个实施方式中，将所述组合施用于已经暴露于且因此处于丙型肝炎病毒感染的感染风险中的宿主。

本发明涉及一种治疗下述疾病的方法：丙型肝炎病毒(包括HCV的耐药性和多药耐药性形式和相关疾病状态、病症)或HCV感染的并发症(包括肝硬化和相关肝毒性)；以及HCV感染继发的其它病症，例如虚弱、食欲不振、体重减轻、乳房增大(特别是在男性中)、皮疹(特别是在手掌上)、血凝固困难、皮肤上的蜘蛛样血管、意识错乱、昏迷(脑病)、腹腔体液蓄积(腹水)、食管静脉曲张、门静脉高压、肾衰竭、脾肿大、血细胞减少、贫血、血小板减少症、黄疸病和肝细胞性癌症等。所述方法包括向有需要的宿主(通常人)施用有效量的本文所述的组合，任选地与至少一种另外的生物活性药剂、例如另外的抗HCV药剂组合，进一步任选地与药学上可接受的载体添加剂和/或赋形剂组合。在另一实施方式中，所述方法包括向处于HCV感染风险中的患者施用有效量的本发明所述的组合。在另一实施方式中，将如上所述的组合与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂一起使用，任选地与第三抗HCV药剂组合使用。在另一实施方式中，本发明所述的组合可以在肝炎相关肝移植后施用于患者以保护新器官。

所述组合疗法和剂型也可用于治疗与HCV病毒暴露相关或因其而发生的病症。例如，所述活性化合物可用于治疗HCV抗体阳性和HCV抗原阳性病症、基于病毒的慢性肝脏炎症、晚期丙型肝炎引起的肝癌(例如肝细胞癌)、肝硬化、急性丙型肝炎、暴发性丙型肝炎、慢性持续性丙型肝炎和基于抗HCV的疲劳。

本文所述的组合和药物组合物还可用于治疗相关病症，例如抗HCV抗体阳性和抗原阳性病症、基于病毒的慢性肝脏炎症、晚期丙型肝炎引起的肝癌(肝细胞癌(HCC))、肝硬化、慢性或急性丙型肝炎、暴发性丙型肝炎、慢性持续性丙型肝炎和基于抗HCV的疲劳。所述组合还可预防性地使用以用于预防或限制抗HCV抗体或抗原呈阳性或已暴露于丙型肝炎的个体中的临床疾病进展。

药物组合物和剂型

化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐的施用可以使用任何期望的形式进行，包括但不限于口服、局部、肠胃外、肌内、静脉内、皮下、经皮(其可以包括渗透增强剂)、口腔和栓剂施用和其他施用途径。在一个实施方式中，所述活性化合物或化合物的组合以本领域公知并在下文进一步描述的固体剂型提供。肠溶包衣口服片剂也可用于提高化合物口服施用途径的生物利用度。最有效的剂型将取决于所选特定药剂的生物利用度/药代动力学和患者疾病的严重程度。口服剂型是特别优选的，因为易于施用和预期有利的患者依从性。

在某些实施方式中，根据本发明所述的药物组合物包含抗HCV病毒有效量的如本文所述的各自单独或组合形式的化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐，任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合，进一步任选地与至少一种其他活性化合物组合或交替。

在一个实施方式中，所述组合物包含在药学上可接受的载体中的化合物1或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A)和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物2-A)的固体剂型。所述药物组合物可以包含化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐，或者所述化合物可以以分开的剂型形式通过使宿主以协同方式(通过标准药代动力学测量)接受两种化合物的益处的方式施用。

本领域普通技术人员将认识到治疗有效量将随要治疗的感染或病症、其严重程度、要使用的治疗方案、所使用的药剂的药代动力学以及要治疗的患者或受试者(动物或人)而变化，并且这种治疗量可由主治医师或专家确定。

化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)可以与一种或多种药学上可接受的载体配制成一种或多种混合物。一般而言，优选以可口服施用的形式、特别是一种或多种固体剂型(例如丸剂或片剂)来施用所述一种或多种药物组合物。某些制剂可以通过肠胃外、静脉内、肌内、局部、经皮、口腔、皮下、栓剂或其它途径(包括鼻内喷雾)施用。静脉内和肌肉内制剂通常在无菌盐水中施用。本领域的普通技术人员可以修饰制剂以使得其更溶解于水或其他溶媒中，例如，这可以容易地通过较小修饰(成盐、酯化等)来完成，其完全属于本领域普通技术范围内。修饰化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)的施用途径和施用方案以管理本发明化合物的药代动力学以在患者中获得最大有益效果也在常规技术范围内。

在某些药物剂型中，可以使用化合物的前药形式，特别是包括本发明化合物的酰化(乙酰化或其他)和醚(烷基和相关的)衍生物、磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、氨基磷酸酯和各种盐形式，以实现期望的效果。本领域普通技术人员将认识到如何容易地将本发明化合物修饰成前药形式，以促进活性化合物向宿主生物或患者体内的靶向位点递送。在可用的情况下，本领域普通技术人员还将利用前药形式的有利药代动力学参数，用于将本发明化合物向宿主生物体或患者体内的靶向位点递送，以使化合物的预期效果最大化。

本公开中提及的量通常是指游离形式(即非盐物质、水合物或溶剂化物形式)。本文所述的典型值代表游离形式的当量，即如同将施用游离形式的量。如果施用盐，则需要根据盐和游离形式之间的摩尔重量比率来计算量。

根据本发明所述的治疗活性制剂中包含的化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)的量是实现根据本发明所述的期望结果的有效量，例如用于治疗HCV感染，降低HCV感染的可能性，或抑制、减少和/或消除HCV或其继发效应，包括HCV继发的疾病状态、病症和/或并发症。通常，药物剂型中的本发明化合物的治疗有效量的范围可以是例如每天约0.001mg/kg至约100mg/kg或更多。化合物1或化合物1-A可以例如以范围为每天约0.1mg/kg患者至约15mg/kg患者的量施用，这取决于患者中药剂的药代动力学。

在某些实施方式中，所述药物组合物在剂型中，其在单位剂型中包含约1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg、约200mg至约600mg、约300mg至约500mg或约400mg至约450mg的化合物1或相当量的化合物1-A以及约1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg的化合物2或相当量的化合物2-A。

在某些实施方式中，所述药物组合物是在剂型中，如在固体剂型中，其在单位剂型中包含至多约10、约50、约100、约125、约150、约175、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约375，约400、约425、约450、约475、约500、约525、约550、约575、约600、约625、约650、约675、约700、约725、约750、约775、约800、约825，约850、约875、约900、约925、约950、约975或约1000mg或更多的化合物1或相当量的化合物1-A。

在某些实施方式中，所述药物组合物是在剂型中，如在固体剂型中，其在单位剂型中包含至多约10、约50、约60、约100、约125、约150、约175、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约375，约400、约425、约450、约475、约500、约525、约550、约575、约600、约625、约650、约675、约700、约725、约750、约775、约800、约825，约850、约875、约900、约925、约950、约975或约1000mg或更多的化合物2或相当量的化合物2-A。

在一个实施方式中，将包含至多约800mg、至多约700mg、至多约600mg、至多约500mg、至多约400mg、至多约300mg、至多约200mg或至多约100mg的化合物1或相当量的化合物1-A和至多约145mg、至多约130mg、至多约125mg、至多约110mg、至多约100mg，至多约90mg、至多约75mg、至多约70mg、至多约65mg、至多约60mg、至多约55mg、至多约50mg、至多约45mg、至多约40mg、至多约35mg、至多约30mg、至多约25mg、至多约20mg、至多约15mg、至多约10mg或至多约5mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。

在一个实施方式中，将包含至少约100mg、至少约200mg、至少约300mg、至少约400mg、至少约500mg、至少约600mg或至少约700mg的化合物1或相当量的化合物1-A和至少约5mg、至少约10mg、至少约15mg、至少约20mg、至少约25mg、至少约30mg、至少约35mg、至少约40mg、至少约45mg、至少约50mg、至少约55mg、至少约60mg、至少约65mg、至少约70mg、至少约75mg、至少约90mg、至少约100mg、至少约110mg、至少约125mg、至少约130mg或至少约145mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。

在一个实施方式中，如本文所述的化合物的组合以包含至多约600mg的化合物1-A和至多约30mg的化合物2或相当量的化合物2-A的单个片剂施用。在一个实施方式中，施用至多约30mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，如本文所述的化合物的组合以包含至多约600mg的化合物1-A和至多约45mg的化合物2或相当量的化合物2-A的单个片剂施用。在一个实施方式中，施用至多约45mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，如本文所述的化合物的组合以包含至多约600mg的化合物1-A和至多约60mg的化合物2或相当量的化合物2-A的单个片剂施用。在一个实施方式中，施用至多约67mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，如本文所述的化合物的组合以包含至多约600mg的化合物1-A和至多约100mg的化合物2或相当量的化合物2-A的单个片剂施用。在一个实施方式中，施用至多约113mg的化合物2-A。

或者，化合物1-A或相当量的化合物1的固体剂型可以与另外的包含化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型组合施用。根据医疗服务提供者的指示，该组合可以每天施用一次、两次、三次或至多四次。在一个实施方式中，化合物1-A或化合物1以与化合物2或相当量的化合物2-A不同的时间表施用。例如，化合物1或相当量的化合物1-A可以每天施用两次，而化合物2或相当量的化合物2-A每天仅施用一次，反之也可：化合物2或相当量的化合物化合物2-A可以一天施用多次，而化合物1或相当量的化合物1-A一天仅施用一次。

在一个实施方式中，将包含至多约800mg、至多约700mg、至多约600mg、至多约500mg、至多约400mg、至多约300mg、至多约200mg或至多约100mg的化合物1或相当量的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至多约145mg、至多约130mg、至多约125mg、至多约至约110mg、至多约100mg、至多约90mg、至多约75mg、至多约70mg、至多约65mg、至多约60mg、至多约55mg、至多约50mg、至多约45mg、至多约40mg、至多约35mg、至多约30mg、至多约25mg、至多约20mg、至多约15mg、至多约10mg或至多约5mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。

在一个实施方式中，将包含至少约100mg、至少约200mg、至少约300mg、至少约400mg、至少约500mg、至少约600mg、至少约700mg或至少约800mg的化合物1或相当量的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至少约5mg、至少约10mg、至少约15mg、至少约20mg、至少约25mg、至少约30mg、至少约35mg、至少约40mg、至少约45mg、至少约50mg、至少约55mg、至少约60mg、至少约65mg、至少约70mg、至少约75mg、至少约80mg、至少约90mg、至少约100mg、至少约110mg、至少约125mg、至少约130mg或至少约145mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。

在一个实施方式中，将包含至多约600mg的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至多约30mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。在一个实施方式中，施用至多约30mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，将包含至多约600mg的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至多约45mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。在一个实施方式中，施用至多约45mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，将包含至多约600mg的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至多约60mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。在一个实施方式中，施用至多约67mg的化合物2-A。

在一个实施方式中，将包含至多约600mg的化合物1-A的固体剂型每天施用一次，并且将另外的包含至多约100mg的化合物2或相当量的化合物2-A的固体剂型每天一次地施用于有需要的宿主以治疗HCV。在一个实施方式中，施用至多约113mg的化合物2-A。

本组合的化合物通常口服施用，但可以肠胃外、局部或栓剂形式，以及鼻内(作为鼻喷雾剂)或如本文中另外描述的方式施用。更普遍地，这些化合物可以一种或多种片剂、胶囊剂、注射剂、静脉内制剂、混悬剂、液体制剂、乳剂、植入物、颗粒剂、球型制剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、可吸入制剂、经皮制剂、口腔制剂、舌下制剂、局部制剂、凝胶剂、粘膜剂等施用。

在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多24周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多12周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多10周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多8周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多6周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至多4周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少4周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少6周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少8周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少10周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少12周。在某些实施方式中，所述组合每天至少施用一次，持续至少24周。在某些实施方式中，所述组合至少每隔一天施用，持续至多24周、12周、至多10周、至多8周、至多6周或至多4周。在某些实施方式中，所述组合至少每隔一天施用至少4周、至少6周、至少8周、至少10周、至少12周或至少24周。

出于本发明的目的，根据本发明所述的组合物的预防或预防性有效量落入与上述治疗有效量相同的浓度范围内，并且通常与治疗有效量相同。

为了制备根据本发明所述的药物组合物，通常将治疗有效量的化合物化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐(例如化合物1-A和化合物2-A)根据常规药物配制技术与药学上可接受的载体紧密混合，以生产制剂。载体可以采取多种形式，这取决于施用(例如口服或肠胃外)所期望的制剂形式。在制备口服剂型的药物组合物中，可以使用任何常用的药物介质。因此，对于液体口服制剂、如混悬剂、酏剂和溶液剂，可以使用适合的载体和添加剂，包括水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等。对于固体口服制剂如散剂、片剂、胶囊剂，并且对于固体制剂如栓剂，可以使用适合的载体和添加剂，包括淀粉、糖载体如葡萄糖、manifold、乳糖和相关载体；稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。如果需要，片剂或胶囊剂可以是通过标准技术而肠溶包衣或缓释的。使用这些剂型可显著增强化合物在患者体内的生物利用度。

对于肠胃外制剂，载体通常包含无菌水或氯化钠水溶液，但也可包括其他成分，包括有助于分散的成分。当然，在使用无菌水并保持无菌的情况下，组合物和载体也必须进行灭菌。还可以制备可注射的混悬剂，在这种情况下，可以使用适合的液体载体、悬浮剂等。

脂质体混悬剂(包括靶向病毒抗原的脂质体)也可通过常规方法制备，以生产药学上可接受的载体。这可能适合于递送根据本发明所述的核苷化合物的游离核苷、酰基/烷基核苷或磷酸酯前药形式。

在根据本发明所述的典型实施方式中，所述药物组合物用于治疗、预防或延缓HCV感染或HCV的继发疾病状态、病症或并发症。

固体剂型

本发明的一个方面是活性化合物或其药学上可接受的盐的固定剂型，其任选地为组合的固定剂型。

在一个实施方式中，固定剂量组合包含所述化合物中的至少一种或其药学上可接受的盐的喷雾干燥固体分散体，并且该组合物适合于口服递送。在该实施方式的一方面，所述固定剂量组合包含化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐，其中所述化合物中的至少一种处于喷雾干燥的固体分散体中。

在另一实施方式中，所述固定剂量组合是所述化合物中的至少一种或其药学上可接受的盐的颗粒层状固体分散体，并且该组合物适合于口服递送。在该实施方式的一方面，所述固定剂量组合是颗粒层状固体分散体，其包含化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐。在某些实施方式中，使用结晶化合物1-A制备喷雾干燥分散体或颗粒分层固体分散体组分。在某些实施方式中，使用结晶化合物2-A制备喷雾干燥分散体或颗粒层状固体分散体组分。在替代实施方式中，化合物1或药学上可接受的盐(例如化合物1-A)或者化合物2或药学上可接受的盐(例如化合物2-A)可以以无定形化合物递送。

在其他实施方式中，所述固体分散体还包含至少一种选自聚维酮、泊洛沙姆和HPMC-AS的赋形剂。在一个实施方式中，泊洛沙姆是泊洛沙姆407或泊洛沙姆混合物，所述泊洛沙姆混合物可以包含泊洛沙姆407。在一个实施方式中，HPMC-AS是HPMC-AS-L。

在其他实施方式中，由化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐制备的固定剂量组合物还包含以下一种或多种赋形剂：磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油酰氧基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六烷醇；如聚乙二醇(PEG)的脂肪醇；聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸，如棕榈酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸单甘油酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯(

在其他实施方式中，由化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐制备的固定剂量组合物还包含以下一种或多种表面活性剂：聚氧乙烯二醇、聚氧丙烯二醇、癸基葡糖苷、月桂基葡糖苷、辛基葡糖苷、聚氧乙烯二醇辛基苯酚、Triton X-100、甘油烷基酯、月桂酸甘油酯、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、十二烷基二甲胺氧化物和泊洛沙姆。泊洛沙姆的实例包括泊洛沙姆188、237、338和407。这些泊洛沙姆可以商标名

在其他实施方式中，由化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐制备的固定剂量组合物还包含以下一种或多种表面活性剂：聚乙酸乙烯酯、胆酸钠盐、磺基琥珀酸二辛酯钠、十六烷基三甲基溴化铵、皂苷、糖酯、Triton X系列、脱水山梨糖醇三油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯、油基聚氧乙烯(2)醚、硬脂基聚氧乙烯(2)醚、月桂基聚氧乙烯(4)醚、氧乙烯和氧丙烯的嵌段共聚物、二油酸二甘醇酯、油酸四氢糠酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单蓖麻油酸甘油酯、鲸蜡醇、硬脂醇、氯化十六烷基吡啶鎓、苯扎氯铵、橄榄油、单月桂酸甘油酯、玉米油、棉籽油和葵花籽油。

在替代实施方式中，由化合物1或其药学上可接受的盐和化合物2或其药学上可接受的盐制备的固定剂量组合物通过包括溶剂的方法或干法制粒制备，任选随后压缩或压实、喷雾干燥、纳米-悬浮加工、热熔挤出、挤出/滚圆、模塑、滚圆、分层(例如喷涂分层悬浮液或溶液)等。这种技术的实例包括使用合适的冲头和模具直接压缩，例如其中将冲头和模具安装到合适的压片机上；使用合适的造粒设备如高剪切造粒机湿法造粒以形成湿颗粒，然后干燥成颗粒；造粒，然后使用合适的冲头和模具压制，其中将冲头和模具安装在合适的压片机上；将湿物质挤出以形成圆柱形挤出物，其切成所需长度或在重力断裂成长度和磨擦；挤出/滚圆，其中挤出物被倒圆成球形颗粒并通过滚圆致密；使用如常规锅或Wurster柱的技术将悬浮液或溶液喷涂成层到惰性芯上；使用安装在压缩单元上的合适模具进行注射或压缩成型等。

示例性崩解剂包括海藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠(交联甲羧纤维素钠)、粉状纤维素、壳聚糖、交联甲羧纤维素钠、交联聚维酮、瓜尔胶、低取代羟丙基纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、海藻酸钠、乙醇酸淀粉钠、部分预胶化淀粉、预胶化淀粉、淀粉、羧甲基淀粉钠等，或其组合。

示例性润滑剂包括硬脂酸钙、硬脂酸镁、山嵛酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、轻质矿物油、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、硬脂富马酸钠、硬脂酸、硬脂酸锌、二氧化硅、胶体二氧化硅、二氧化硅处理的二甲基二氯硅烷、滑石或其组合。

可对本文所述的剂型芯进行包衣以产生包衣片剂。来自芯的剂量可以用功能性或非功能性包衣，或功能性和非功能性包衣的组合包衣。“功能性包衣”包括改变整个组合物的释放特性的片剂包衣，例如持续释放或延迟释放包衣。“非功能性包衣”包括不是功能性包衣的包衣，例如装饰性包衣。由于包衣的初始溶解、水合作用、穿孔等，非功能性包衣可能对活性药剂的释放有一些影响，但不会被认为是与非包衣组合物的显著偏差。非功能性包衣还可掩盖包含活性药物成分的未包衣组合物的味道。包衣可包含光阻挡材料、光吸收材料或光阻挡材料和光吸收材料。

示例性聚甲基丙烯酸酯包括丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物，例如a.氨基甲基丙烯酸酯共聚物USP/NF，例如聚(甲基丙烯酸丁酯、(2-二甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯)1:2:1(例如EUDRAGIT E 100、EUDRAGIT EPO和EUDRAGIT E 12.5；CASNO.24938-16-7)；b.聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1(例如EUDRAGIT L30 D-55、EUDRAGITL100-55、EASTACRYL 30D、KOLLICOAT MAE 30D和30DP；CAS NO.25212-88-8)；c.聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:1(例如EUDRAGIT L 100、EUDRAGIT L 12.5和12.5P；也称为甲基丙烯酸共聚物，A型NF；CAS NO.25806-15-1)；d.聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:2(例如EUDRAGIT S 100、EUDRAGIT S 12.5和12.5P；CAS NO.25086-15-1)；e.聚(丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸)7:3:1(例如Eudragit FS 30D；CAS No.26936-24-3)；f.聚(丙烯酸乙酯，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸三甲氨乙酯氯化物)1:2:0.2或1:2:0.1(例如EUDRAGITS RL 100、RL PO、RL 30D、RL 12.5、RS 100、RS PO、RS 30D或RS 12.5；CASNO.33434-24-1)；g.聚(丙烯酸乙酯，甲基丙烯酸甲酯)2:1(例如EUDRAGIT NE 30D、Eudragit NE 40D、Eudragit NM 30D；CAS No.9010-88-2)；等等，或者它们的组合。

合适的烷基纤维素包括例如甲基纤维素、乙基纤维素等或其组合。示例性的水基乙基纤维素包衣包括AQUACOAT，其为进一步包含十二烷基硫酸钠和鲸蜡醇的30％的分散体，可从FMC,Philadelphia,PA购得；SURELEASE，其为进一步包含稳定剂或其他包衣成分(例如油酸铵、癸二酸二丁酯、胶体无水二氧化硅、中链甘油三酯等)的25％分散体，可从Colorcon,West Point,PA购得；可从Aqualon或Dow Chemical Co(Ethocel),Midland,MI购得的乙基纤维素。本领域技术人员将理解，其他纤维素聚合物(包括其他烷基纤维素聚合物)可以替代部分或全部乙基纤维素。

可用于制备功能性包衣的其他合适材料包括醋酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)；邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)；聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯；中性或合成蜡，脂肪醇(例如月桂醇、肉豆蔻醇、硬脂醇、鲸蜡醇或特别是鲸蜡硬脂醇)，脂肪酸，包括脂肪酸酯，脂肪酸甘油酯(甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯)，氢化脂肪，烃，普通蜡，硬脂酸，硬脂醇，具有烃主链的疏水性和亲水性材料，或其组合。合适的蜡包括蜂蜡、糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、微晶蜡、小烛树蜡(candelilla)和蜡样物质(例如在室温下通常为固体且熔点为约30℃至约100℃的材料)或其组合。

在其他实施方式中，功能性包衣可包含可消化的长链(例如C8-C50，特别是C12-C40)，取代或未取代的烃，例如脂肪酸，脂肪醇，脂肪酸的甘油酯，矿物油和植物油，蜡，或其组合。可以使用熔点在约25℃和约90℃之间的烃。具体而言，可以使用长链烃材料、脂肪(脂肪族)醇。

所述包衣可任选地包含另外的药学上可接受的赋形剂，例如增塑剂、稳定剂、水溶性组分(例如成孔剂)、抗粘剂(例如滑石)、表面活性剂等，或其组合。

功能性包衣可包含释放调节剂，其影响功能性包衣的释放特性。例如，释放调节剂可用作成孔剂或基质破坏剂。释放调节剂可以是有机的或无机的，并且包含可以在使用环境中从包衣中溶解、提取或浸出的材料。释放调节剂可以包括一种或多种亲水性聚合物，包括纤维素醚和其他纤维素制品，例如羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素或醋酸邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素；聚维酮；聚乙烯醇；丙烯酸聚合物，例如胃溶性Eudragit FS 30D、pH敏感的Eudragit L30D 55、L 100、S100或L 100-55；或其组合。其他示例性的释放调节剂包括聚维酮；糖类(例如乳糖等)；金属硬脂酸盐；无机盐(例如磷酸氢钙、氯化钠等)；聚乙二醇(例如聚乙二醇(PEG)1450等)；糖醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇等)；碱金属烷基硫酸盐(例如月桂基硫酸钠)；聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如聚山梨醇酯)；或其组合。示例性基质破坏剂包括水不溶性有机或无机材料。有机聚合物包括但不限于纤维素、纤维素醚如乙基纤维素、纤维素酯如乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素和乙酸丙酸纤维素；淀粉可以作为基质破坏剂。示例性或无机破坏剂包括许多钙盐，例如磷酸一钙、二钙和三钙；二氧化硅和滑石粉。

所述包衣可任选地包含增塑剂以改进所述包衣的物理特性。例如，因为乙基纤维素具有相对高的玻璃化转变温度并且在正常包衣条件下不形成柔性膜，所以在将其用作包衣材料之前向乙基纤维素添加增塑剂可能是有利的。通常，包衣溶液中包含的增塑剂的量基于聚合物的浓度，例如，取决于聚合物，可以为聚合物的约1％至约200％，但最常为聚合物的约1wt％至约100wt％。然而，增塑剂的浓度可以通过常规实验确定。

用于乙基纤维素和其他纤维素的增塑剂的实例包括如癸二酸二丁酯、邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、三醋精或其组合的增塑剂，尽管也可以使用其他水不溶性增塑剂(例如乙酰化单甘油酯、邻苯二甲酸酯、蓖麻油等)。

用于丙烯酸聚合物的增塑剂的实例包括柠檬酸酯，例如柠檬酸三乙酯NF、柠檬酸三丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、1,2-丙二醇、聚乙二醇、丙二醇、邻苯二甲酸二乙酯、蓖麻油、三醋精或其组合，尽管也可以使用其他增塑剂(例如乙酰化单甘油酯、邻苯二甲酸酯、蓖麻油等)。

可以使用合适的方法将所述包衣材料施加到剂型芯的表面。可以使用诸如简单或复杂凝聚、界面聚合、液体干燥、热和离子凝胶化、喷雾干燥、喷雾冷却、流化床包衣、包衣锅包衣或静电沉积的方法。

在某些实施方式中，在所述剂型芯和外部包衣之间使用任选的中间包衣。这种中间包衣可用于保护所述活性药剂或芯亚单元的其他组分免受外部包衣中使用的材料的影响或提供其他特性。示例性中间包衣通常包含水溶性成膜聚合物。此类中间包衣可包含成膜聚合物，例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、聚环氧乙烷等或其组合；和增塑剂。增塑剂可用于降低脆性并增加拉伸强度和弹性。示例性增塑剂包括聚乙二醇丙二醇和甘油。

组合和交替疗法

耐药性有时因编码用于病毒复制的酶的基因的突变而发生。可以通过将其他化合物加至所述组合疗法来延长、增强或恢复组合疗法对HCV感染的效力。可以将该进一步的组合疗法与另一种、甚至两种或三种其他的诱导不同于主组合物的突变或通过不同于主组合物的途径起作用的抗病毒化合物组合或交替施用。或者，所述组合物的药代动力学、生物分布、半衰期或其他参数可通过这种组合疗法改变(如果认为协同，则可包括交替疗法)。

本发明已经提供了一种通过施用选定的NS5B抑制剂和NS5A抑制剂治疗HCV或与HCV感染相关的病症的有利的组合疗法。可以通过以共同配制或单独提供的方式加入第三、第四或甚至第五活性药剂来实现另外的治疗效果。

由于化合物1和化合物1-A是NS5B聚合酶抑制剂并且化合物2和化合物2-A是NS5A抑制剂，因此将化合物1和化合物2与例如以下物质组合施用于宿主可能是有用的：

(1)蛋白酶抑制剂，例如NS3/4A蛋白酶抑制剂；

(2)另一种NS5A抑制剂；

(3)另一种NS5B聚合酶抑制剂；

(4)NS5B非底物抑制剂；

(5)干扰素α-2a，其可以PEG化或以其他方式被修饰，和/或利巴韦林；

(6)非基于底物的抑制剂；

(7)解旋酶抑制剂；

(8)反义寡脱氧核苷酸(S-ODN)；

(9)适体；

(10)核酸酶抗性核酶；

(11)iRNA，包括microRNA和SiRNA；

(12)抗病毒的抗体、部分抗体或结构域抗体，或

(13)诱导宿主抗体应答的病毒抗原或部分抗原。

可以与本发明所述的组合进一步组合或交替施用的另外的抗HCV药剂的非限制性实例包括：

(i)蛋白酶抑制剂，例如特拉匹韦

(ii)NS5A抑制剂，例如ACH-2928、ACH-3102、IDX-719、达卡他韦、雷迪帕韦、维帕他韦(Epclusa)、依巴司韦(MK-8742)、格佐普韦(MK-5172)和奥贝他韦(ABT-267)；

(iii)NS5B抑制剂，例如AZD-7295、克立咪唑、达塞布韦(Exviera)、ITX-5061、PPI-461、PPI-688、索非布韦(Sovaldi)、MK-3682和mericitabine；

(iv)NS5B抑制剂，例如ABT-333和MBX-700；

(v)抗体，例如GS-6624；

(vi)组合药物，例如Harvoni(雷迪帕韦/索非布韦)；Viekira Pak(奥贝他韦/帕利瑞韦/利托那韦/达塞布韦)；Viekirax(奥贝他韦/帕利瑞韦/利托那韦)；G/P(帕利瑞韦和格来瑞韦)；Technivie

如果施用所述组合以治疗导致肝癌或肝硬化的晚期丙型肝炎病毒，在一个实施方式中，该化合物可以与另一种典型用于治疗肝细胞性癌症(HCC)的药物组合或交替施用，例如由Andrew Zhu描述于“New Agents on the Horizon in Hepatocellular Carcinoma”Therapeutic Advances in Medical Oncology,V 5(1),2013年1月,41-50。适合于宿主已经患有HCC或处于HCC风险的组合治疗的化合物实例包括抗血管生成剂、舒尼替尼、布立尼布、利尼伐尼、雷莫芦单抗、贝伐单抗、西地尼布、帕唑帕尼、TSU-68、乐伐替尼、抗EGFR抗体、mTor抑制剂、MEK抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂、卡培他滨、顺铂、卡铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、伊立替康、奥沙利铂、拓扑替康和其他拓扑异构酶。

实施例

通用方法

在400MHz傅立叶变换

以下缩写用于实施例中：

DCM：二氯甲烷

EtOAc：乙酸乙酯

EtOH：乙醇

GT：基因型

HPLC：高效液相色谱

NaOH：氢氧化钠

Na

MeOH：甲醇

Na

NH

PE：石油醚

硅胶(230至400目，吸附剂)

t-BuMgCl：叔丁基氯化镁

THF：四氢呋喃(THF)，无水

TP：三磷酸酯

实施例1.化合物1的合成

步骤1：(2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羟基甲基)-4-甲基四氢呋喃-3-醇的合成(1-2)

向50L烧瓶中加入甲醇(30L)并在10±5℃下搅拌。在10±5℃下将NH

步骤2：((s)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-(甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯(化合物1)的合成

将化合物1-2和化合物1-3(((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸异丙酯)溶解在THF(1L)中并在氮气下搅拌。然后将悬浮液冷却至低于-5℃的温度，并经过1.5小时缓慢加入1.7M的t-BuMgCl溶液(384mL)，同时保持5-10℃的温度。在室温下将NH

非晶化合物1：

结晶化合物1：

实施例2.化合物1-A的合成

向250mL烧瓶中加入MeOH(151mL)并将溶液冷却至0-5℃。在10分钟内逐滴加入浓H

实施例3.化合物2的盐研究

如表1所示，化合物2的盐研究使用了16种酸(4种无机酸和12种有机酸)。将游离碱(0.1g-1g)加入到溶剂(1-10mL)中，将混合物加热至40-80℃。加入酸，搅拌30分钟至1小时后，将混合物缓慢冷却至5±5℃。冷却后，混合物为澄清液体、粘性油或沉淀固体。过滤沉淀的固体，减压干燥并通过XPRD表征。

表1.化合物2的盐研究条件

尽管尝试了几种醇的固体(MeOH、EtOH和i-PrOH)，但所有有机酸都提供无定形固体或油。提供结晶固体的三种酸是双半硫酸盐、双HBr和双HNO

双半硫酸盐结晶固体是用于本发明所述的组合的药物开发的优选固体。

化合物2的结晶双半硫酸盐、双HBr和双HNO

双半硫酸盐化合物2-A

将游离碱(1g)溶解在6mL的甲醇中并将混合物加热至45±5℃。在45±5℃下加入H

表2.化合物2的XRPD图谱峰

双硝酸盐化合物2-B

将游离碱(1g)溶解在10mL的乙腈中，并将混合物加热至70±5℃。在70±5℃下加入65％HNO

表3.化合物2-B的XRPD图谱峰

二氢溴酸盐化合物2-C

将游离碱(0.5g)加入i-PrOH(5mL)中并将混合物加热至60-70℃。在该温度下加入48％氢溴酸水溶液(0.24g，2当量)并搅拌1小时，然后将混合物冷却至5±5℃。将所得固体过滤并在减压下干燥以提供0.48g的结晶固体化合物2-C(收率：76％)。XRPD图谱的峰展示于表4中，且XRPD图谱展示于图3中。

表4.化合物2-C的XRPD图谱峰

实施例4.化合物2和化合物2-A的合成

步骤1：在反应器中加入化合物2-1(6kg)和甲苯(46.8kg)并将混合物加热至70±5℃，然后加入活性炭(0.6kg)并将混合物搅拌60分钟。然后过滤混合物，所得滤饼用甲苯(5kg)洗涤。将滤液冷却至25±5℃。将K

步骤2：将便携式水(21kg)、异丙醇(5.6kg)和化合物2-3(7kg)装入反应器并将混合物加热至70±5℃。在70±5℃下缓慢加入盐酸(6.3kg)并将反应物搅拌1-2小时。在70±5℃下加入活性炭(0.7kg)并将反应物搅拌60分钟。然后过滤混合物并用便携式水(5kg)洗涤所得滤饼。在70±5℃下加入异丙醇(82.6kg)并将反应物搅拌1-2小时。将溶液冷却至0-5℃并搅拌30分钟。然后对反应进行离心，所得滤饼用异丙醇(5kg)洗涤。将湿材料在60±5℃下干燥直至干燥失重(LOD)不超过3.0％为止以得到5.35kg的化合物2-4，收率为76.4％(w/w)。

步骤3：将DCM(84.27kg)、HOBT(2.92kg)、Moc-L-Val-OH(3.66kg)和EDCL(3.98kg)装入反应器，搅拌所得溶液。添加化合物2-4(5.3kg)并将混合物冷却至-20±10℃。将混合物进一步冷却至-10℃并加入DIPEA(9.54kg)。在-20±10℃下搅拌反应物2-3小时。然后将混合物加热至25±5℃并加入便携式水(15.9kg)。将反应物搅拌10-20分钟。分离有机层和水层并向有机相中加入便携式水(15.9kg)。在加入盐酸(1.59kg)以达到约5-6的pH值之前将温度控制在25±5℃。将有机层与水相分离并将便携式水(15.9kg)加入有机相中。将混合物搅拌10-20分钟。再次分离所得相，有机相用10％Na

步骤4：将甲醇(14kg)和化合物2(5.8kg)装入反应器并将混合物加热至35±5℃。在35±5℃下加入活性炭(0.145kg)并将混合物搅拌30分钟，然后过滤。所得滤饼用甲醇(5kg)洗涤。将滤液的温度升至55±5℃并加入H

除了XRPD(图1A)和差示扫描量热法(DSC)(图1B)之外，化合物2-A还通过

实施例5.化合物2-A的稳定性

在三种不同条件下测量了化合物2-A的稳定性：1)开放容器；2)PE/ALU袋，其中PE袋用夹子封闭，ALU袋通过热封密封；3)具有干燥剂的PE/ALU袋，其中PE袋用塑料夹封闭，ALU袋通过热封密封，在所述袋之间放入10g硅胶。开放容器条件用两批不同的化合物2-A进行。稳定性研究结果示于表5A、表5B、表6和表7中。化合物2-A的含水量缓慢增加，在25℃/60％RH和40℃/75％RH下纯度没有变化。

表5A.批次号1在开放容器条件下的稳定性

表5B.批次号2在开放容器条件下的稳定性

表6.批次号2在PE/ALU袋条件下的稳定性

表7.批次号2在具有干燥剂的PE/ALU袋条件下的稳定性

实施例6.化合物1-A和化合物2的组合物对HCV复制子的体外抑制作用

首先针对每种类型的HCV复制子(GT1a、GT1b和GT1b_3a-NS5B)确定化合物1-A和化合物2的单独EC

在100％DMSO中制备化合物1-A和化合物2的储备溶液(20mM)。细胞培养基中的DMSO的终浓度为0.5％。在稳定转染的GT1a和GT1b复制子和瞬时转染的GT1b/3a NS5B嵌合复制子中，用9种浓度(从10,000nM开始进行的一系列的4倍稀释)在重复实验中单独测试化合物的抑制活性。将复制子细胞(GT1a和1b的为8,000个细胞/孔；GT1b/3a NS5B的为10,000个细胞/孔)接种在包含连续稀释化合物的96孔板中，并在37℃和5％CO

存活％＝(CPD–HPE)(ZPE–HPE)x 100

其中CPD是来自包含测试化合物的孔的信号，ZPE是来自DMSO对照孔的信号的平均值，而HPE是来自培养基对照孔的信号的平均值。使用Britelite plus检测了发光信号，使用原始数据(RLU)和以下等式计算了化合物的抗病毒活性(抑制百分比)：

抑制％＝(CPD–ZPE)

使用CompuSyn软件(ComboSyn,Inc.,Paramus,NJ)分析数据以获得实现50％细胞毒性(CC

表8.化合物1-A和化合物2的单独的EC

在存在0.125、0.25、1、2、4和8倍于每种HCV基因型的个体EC

表9.在组合实验中测试的化合物的终浓度

还用CompuSyn制作了每个基因型的预期的90％抑制水平的图(等效线图)(假设两种化合物的组合具有严格的累加抗病毒作用)，并获得并绘制了等效线图上的值，该图表示每种个体化合物在以其针对每种基因型的个体EC

对于所有测试的基因型，CI均小于1，表明存在协同组合效应。表10显示了三种基因型(GT1a、GT1b和GT1b_3a-NS5B)的CI。

表10.化合物1-A和化合物2的组合的组合指数

GT1a、GT1b和GT1b_3a-NS5B的等效线图分别示于图4A、图4B和图4C中。x轴代表实现90％抑制所需的化合物2的浓度，y轴代表实现90％抑制所需的化合物1-A的浓度。绘制了化合物1-A单独实现90％抑制的剂量，并绘制了化合物2单独实现90％抑制的剂量。然后将这两个点连接起来形成一条加和线。还绘制了组合使用以提供相同效果(即90％抑制)的化合物1-A和化合物2的浓度并用星号(*)表示。在每个等效线图中，星号低于加和线，再次表明存在协同效应。

在实施例6中，Huh7细胞通过电穿孔用复制子RNA瞬时转染并以10,000个细胞/孔的密度接种在96孔板中。HCV GT1a和GT1b复制子稳定细胞以8,000个细胞/孔的密度接种在96孔板中。在37℃和5％CO

根据供应商提供的方案，使用CellTiter-Fluor评估了细胞存活。将CellTiter-Fluor试剂加入孔中并在5％CO

根据供应商提供的方案，通过使用Britelite plus监测复制子报告萤火虫荧光素酶的活性来确定化合物的抗病毒活性。使用MacSynergy

实施例7.固体剂型制剂的非限制性实例

化合物1-A和2-A片剂(60mg和100mg)的代表性非限制性批次配方列于表11和表12中。这些片剂是使用直接压片工艺由常见的共混物生产的。活性药物成分(API)根据原样测试进行调整，并调整微晶纤维素的百分比。筛选化合物1-A和赋形剂(微晶纤维素、乳糖一水合物和交联羧甲基纤维素钠)，将其放入V型混合器(PK Blendmaster，0.5L碗)中，以25rpm混合5分钟。然后筛选并加入硬脂酸镁，然后加入化合物2-A。将共同的共混物分割用于生产60mg和100mg的片剂。然后使用单冲头研究压片机(Korsch XP1)和重力送粉器以10片/分钟的速度对润滑的混合物进行压片。60mg片剂是使用6mm的圆形标准凹形工具和3.5kN的压力生产的。100mg片剂是使用8mm的圆形标准凹形工具和3.9-4.2kN的压力生产的。

表11.60mg片剂制剂的非限制性实例

表12.100mg片剂制剂的非限制性实例

本说明书已经参考本发明的实施方式进行了描述。然而，本领域普通技术人员会认识到，在不脱离随附权利要求书所述的本发明范围的情况下，可以进行各种修改和改变。因此，说明书应被视为说明性而非限制性意义，并且所有这些修改旨在包括在本发明的范围内。