一种改善睡眠的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健品技术领域，具体涉及一种改善睡眠的保健食品及其制备方法。

背景技术

随着现代社会生活节奏加快，人们的生存压力和工作压力等越来越大导致睡眠质量较差，因此现代人的睡眠正在受到严重的威胁。有资料显示，我国成年人睡眠障碍发生率较高，约为38-60％，且随着年龄增加，呈不断上升的趋势。睡眠障碍可引起焦虑、抑郁、代谢综合征、心血管以及胃肠道功能异常等疾病。

目前睡眠障碍主要以具有镇静、催眠作用的化学药物治疗为主，如巴比妥类、苯二氮卓类等，但是这类药物长期服用，会损伤中枢神经系统，出现耐药性、依赖性等不良反应。也有一些中药制剂或是保健食品用于治疗或改善睡眠障碍，如安神补脑液、安神健脑液等，安神补脑不但能促进睡眠，还能够滋肝补肾、强化精神、补气益血等。如公开号为CN106539955A公开的一种中药安神补脑缓释混悬剂，以鹿茸、甘草、人参、远志、红景天、酸枣仁、桂圆为主要成分，具有良好缓释效果，可提高中药的生物利用度，缓释作用可延长作用时间，提高睡眠质量。

但是现实情况是，现有技术中目前还没有一款产品能够很好的改善人们的睡眠障碍，仍有大部分人受到睡眠障碍的困扰。因此开发具有很好的改善睡眠功能的产品，解决睡眠障碍人们的困扰具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有改善睡眠功能的保健食品及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明提供一种改善睡眠的保健食品，包括下述重量份的原料：

鹿茸5.5-9.5份、刺五加90-110份、淫羊藿40-60份、甘草15-35份、大枣饮片65-85份；

麦芽糖醇液140-160份、山梨酸钾0.3-0.7份。

在上述技术方案中，优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸5.5份、刺五加90份、淫羊藿40份、甘草15份、大枣饮片65份；

麦芽糖醇液140份、山梨酸钾0.3份。

在上述技术方案中，优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸9.5份、刺五加110份、淫羊藿60份、甘草35份、大枣饮片85份；

麦芽糖醇液160份、山梨酸钾0.7份。

在上述技术方案中，优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸7.5份、刺五加100份、淫羊藿50份、甘草25份、大枣饮片75份；

麦芽糖醇液150份、山梨酸钾0.5份。

在上述技术方案中，优选的是，所述改善睡眠的保健食品的剂型为口服液、颗粒剂或者丸剂。

进一步优选的是所述改善睡眠的保健食品的剂型为口服液时，需要加纯化水至1000mL。

本发明还提供一种改善睡眠的保健食品的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、药材前处理

按重量份称取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，备用；

步骤2、提取

取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，加水煎煮2次，第一次加10倍量水浸泡0.5小时后煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，100目筛网过滤，合并滤液；

步骤3、浓缩

将步骤2所得滤液经减压浓缩至相对密度为1.08～1.14，冷却至常温，得清膏；

步骤4、醇沉

向步骤3所得清膏中加食用酒精，边加边搅拌，使含醇量达30％，静置24小时，取上清液，用400目滤布过滤，得醇沉液；

步骤5、回收乙醇、浓缩

将步骤4所得醇沉液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12～1.18，400目滤布过滤，得浸膏，备用；

步骤6、配制

按质量比取山梨酸钾、麦芽糖醇液，备用；

将山梨酸钾加纯化水溶解，得山梨酸钾溶液；

将山梨酸钾溶液、麦芽糖醇液加入步骤5所得浸膏中，边加边搅拌，并加纯化水至配制量的60％，搅拌均匀，冷藏静置24小时，400目滤布过滤，得浓配液；

所得浓配液加纯化水至配制量1000mL，搅拌20分钟，混合均匀，用板框过滤器加压过滤，得配制液。

本发明所述制备方法还可以包括以下步骤：

步骤7、灌装

口服液瓶用纯化水冲洗、干燥，备用；

用灌装机将配制液分装于口服液瓶中，20mL/支，得瓶装品；

步骤8、灭菌

步骤7所得瓶装品热压灭菌，温度115℃，时间30分钟，得待灯检品；

步骤9、灯检

剔除密封不严、破损等不合格品，灯检合格品即为待包装品；

步骤10、包装

将待包装品装盒，5支/盒，装箱，得成品。

在上述技术方案中，优选的是，步骤3中滤液减压浓缩的真空度为-0.05～-0.09Mpa，温度60～80℃。

在上述技术方案中，优选的是，步骤5中醇沉液减压回收乙醇的真空度为-0.04～-0.08Ma，温度60～80℃。

在上述技术方案中，优选的是，步骤6中：冷藏的温度为2～10℃；板框过滤器滤材为支撑过滤纸板；所得配制液中控检测pH，其值应为5.5～6.5。

本发明的有益效果是：

本发明提供的改善睡眠的保健食品主要是以鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、及大枣饮片制成，方中鹿茸性味甘、咸、温，归肾、肝经，具有壮肾阳，益精血，强筋骨功效；淫羊藿性味辛、甘、温，归肝、肾经，具有补肾阳，强筋骨的功效；二者合用，针对肾阳衰虚，精血亏虚可补肾阳，益精血；刺五加性味辛、微苦、温，归脾、肾、心经，益气健脾，补肾安神，缓解肺肾两虚，脾肺气虚，心脾不足，失眠多梦等症；甘草性味甘、平，归心、肺、脾、胃经，大枣性味甘、温，归脾、胃、心经，二者合用，以加强补中益气，养血安神功效。纵观全方，鹿茸填精补髓；淫羊藿温阳益肾，补血生精；刺五加、甘草、大枣温胃健脾，以补气血生化之源。诸药合用，共奏生精补髓、益气养血，健脑安神功效，最终达到改善睡眠的保健功能。

动物试验结果表明：(1)本发明的改善睡眠的保健食品连续30天经口灌胃给予动物后，可见动物生长良好，体重持续增长；(2)三个剂量组动物连续30天经口给予不同剂量受试物后，均未出现直接睡眠现象；(3)三个剂量组动物的睡眠发生率与阴性对照组比较，中、高剂量组戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率显著增加(P﹤0.05，P﹤0.05)、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验结果阳性；(4)三个剂量组动物的睡眠潜伏期与阴性对照组比较，低、高剂量组睡眠潜伏期显著缩短(P﹤0.05，P﹤0.05)，戊巴比妥钠睡眠潜伏期试验结果阳性；(5)延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验结果阴性；(6)并且本发明的改善睡眠的保健食品没有任何毒性。由此依据《保健食品检验与评价技术规范》可以判定，本发明的改善睡眠的保健食品具有改善睡眠功能。

具体实施方式

本发明提供一种改善睡眠的保健食品，包括下述重量份的原料：

原料：鹿茸5.5-9.5g、刺五加90-110g、淫羊藿40-60g、甘草15-35g、大枣饮片65-85g；

辅料：麦芽糖醇液140-160g、山梨酸钾0.3-0.7g。

优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸5.5份、刺五加90份、淫羊藿40份、甘草15份、大枣饮片65份；

麦芽糖醇液140份、山梨酸钾0.3份。

优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸9.5份、刺五加110份、淫羊藿60份、甘草35份、大枣饮片85份；

麦芽糖醇液160份、山梨酸钾0.7份。

优选的是，所述改善睡眠的保健食品包括下述重量份的原料：

鹿茸7.5份、刺五加100份、淫羊藿50份、甘草25份、大枣饮片75份；

麦芽糖醇液150份、山梨酸钾0.5份。

优选的是，所述改善睡眠的保健食品的剂型为口服液、颗粒剂或者丸剂。

进一步优选的是所述改善睡眠的保健食品的剂型为口服液时，需要加纯化水至1000mL。

本发明的改善睡眠的保健食品的各原料药效如下：

本发明的改善睡眠的保健食品主要是以鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、及大枣饮片制成，方中鹿茸性味甘、咸、温，归肾、肝经，具有壮肾阳，益精血，强筋骨功效；淫羊藿性味辛、甘、温，归肝、肾经，具有补肾阳，强筋骨的功效；二者合用，针对肾阳衰虚，精血亏虚可补肾阳，益精血；刺五加性味辛、微苦、温，归脾、肾、心经，益气健脾，补肾安神，缓解肺肾两虚，脾肺气虚，心脾不足，失眠多梦等症；甘草性味甘、平，归心、肺、脾、胃经，大枣性味甘、温，归脾、胃、心经，二者合用，以加强补中益气，养血安神功效。纵观全方，鹿茸填精补髓；淫羊藿温阳益肾，补血生精；刺五加、甘草、大枣温胃健脾，以补气血生化之源。诸药合用，共奏生精补髓、益气养血，健脑安神功效，最终达到改善睡眠的保健功能。

本发明还提供一种改善睡眠的保健食品的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、药材前处理

按重量份称取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，备用；

步骤2、提取

取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，加水煎煮2次，第一次加10倍量水浸泡0.5小时后煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，100目筛网过滤，合并滤液；

步骤3、浓缩

将步骤2所得滤液经减压浓缩至相对密度为1.08～1.14(60±5℃)，冷却至常温，得清膏；

减压浓缩的真空度为-0.05～-0.09Mpa，温度60～80℃；

步骤4、醇沉

向步骤3所得清膏中加食用酒精，边加边搅拌，使含醇量达30％，静置24小时，取上清液，用400目滤布过滤，得醇沉液；

步骤5、回收乙醇、浓缩

将步骤4所得醇沉液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.12～1.18(60±5℃)，400目滤布过滤，得浸膏，备用；

减压回收乙醇的真空度为-0.04～-0.08Ma，温度60～80℃；

步骤6、配制

按质量比取山梨酸钾、麦芽糖醇液，备用；

将山梨酸钾加纯化水溶解，得山梨酸钾溶液；

将山梨酸钾溶液、麦芽糖醇液加入步骤5所得浸膏中，边加边搅拌，并加纯化水至配制量的60％，搅拌均匀，2～10℃冷藏静置24小时，400目滤布过滤，得浓配液；

所得浓配液加纯化水至配制量1000mL，搅拌20分钟，混合均匀，用板框过滤器(滤材为支撑过滤纸板)加压过滤，得配制液，中控检测pH，其值应为5.5～6.5。

本发明制备的改善睡眠的保健食品所用原辅料质量要求如下：

1、刺五加、大枣、淫羊藿、甘草：应符合《中华人民共和国药典》相关项下的要求。

2、鹿茸：应符合NY/T1162-2006《鹿茸片》的要求。

3、麦芽糖醇液：应符合GB 28307《食品安全国家标准食品添加剂麦芽糖醇和麦芽糖醇液》的要求。

4、山梨酸钾：应符合GB 1886.39《食品安全国家标准食品添加剂山梨酸钾》的要求。

5、纯化水：应符合《中华人民共和国药典》的要求。

本发明制备的改善睡眠的保健食品(口服液)应符合下述感官、理化指标、微生物成分指标、标志性成分指标的要求：

表1-1感官要求

表2-2理化指标

表3-3微生物指标

表4-4标志性成分指标

实施例1

本发明的改善睡眠的保健食品是由下述质量比的各成分组成：

鹿茸7.5g、刺五加100g、淫羊藿50g、甘草25g、大枣饮片75g；

麦芽糖醇液150g、山梨酸钾0.5g；

加纯化水至1000mL。

本发明的改善睡眠的保健食品的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、药材前处理

按质量比称取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，备用；

步骤2、提取

取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，加水煎煮2次，第一次加10倍量水浸泡0.5小时后煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，100目筛网过滤，合并滤液；

步骤3、浓缩

将步骤2所得滤液经减压浓缩至相对密度为1.08～1.14(60℃左右)，冷却至常温，得清膏；减压浓缩的真空度为-0.07Mpa，温度70℃；

步骤4、醇沉

向步骤3所得清膏中加食用酒精，边加边搅拌，使含醇量达30％，静置24小时，取上清液，用400目滤布过滤，得醇沉液；

步骤5、回收乙醇、浓缩

将步骤4所得醇沉液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15(60℃左右)，400目滤布过滤，得浸膏，备用；减压回收乙醇的真空度为-0.06Ma，温度70℃；

步骤6、配制

按质量比取山梨酸钾、麦芽糖醇液，备用；

将山梨酸钾加纯化水溶解，得山梨酸钾溶液；

将山梨酸钾溶液、麦芽糖醇液加入步骤5所得浸膏中，边加边搅拌，并加纯化水至配制量的60％，搅拌均匀，6℃冷藏静置24小时，400目滤布过滤，得浓配液；

所得浓配液加纯化水至配制量1000mL，搅拌20分钟，混合均匀，用板框过滤器(滤材为支撑过滤纸板)加压过滤，得配制液，中控检测pH，其值应为6左右；

步骤7、灌装

口服液瓶用纯化水冲洗、干燥，备用；

用灌装机将配制液分装于口服液瓶中，20mL/支，得瓶装品；

步骤8、灭菌

步骤7所得瓶装品热压灭菌，温度115℃，时间30分钟，得待灯检品；

步骤9、灯检

剔除密封不严、破损等不合格品，灯检合格品即为待包装品；

步骤10、包装

将待包装品装盒，5支/盒，装箱，得成品。

本实施例制备的改善睡眠的保健食品的口服液符合感官、理化指标、微生物成分指标、标志性成分指标的要求。

实施例2

与实施例1不同的是，本实施例的改善睡眠的保健食品是由下述质量比的各成分组成：鹿茸5.5g、刺五加90g、淫羊藿40g、甘草15g、大枣饮片65g；麦芽糖醇液140g、山梨酸钾0.3g；。

本实施例制备的改善睡眠的保健食品具有很好的改善睡眠功能，并且无毒。

实施例3

与实施例1不同的是，本实施例的改善睡眠的保健食品是由下述质量比的各成分组成：鹿茸9.5g、刺五加110g、淫羊藿60g、甘草35g、大枣饮片85g；麦芽糖醇液160g、山梨酸钾0.7g。

本实施例制备的改善睡眠的保健食品具有很好的改善睡眠功能，并且无毒。

实施例4

本发明的改善睡眠的保健食品是由下述质量比的各成分组成：

鹿茸7.5g、刺五加100g、淫羊藿50g、甘草25g、大枣饮片75g；

麦芽糖醇液150g、山梨酸钾0.5g。

本发明的改善睡眠的保健食品的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、药材前处理

按质量比称取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，备用；

步骤2、提取

取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，加水煎煮2次，第一次加10倍量水浸泡0.5小时后煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，100目筛网过滤，合并滤液；

步骤3、浓缩

将步骤2所得滤液经减压浓缩至相对密度为1.08～1.14(60℃左右)，冷却至常温，得清膏；减压浓缩的真空度为-0.07Mpa，温度70℃；

步骤4、醇沉

向步骤3所得清膏中加食用酒精，边加边搅拌，使含醇量达30％，静置24小时，取上清液，用400目滤布过滤，得醇沉液；

步骤5、回收乙醇、浓缩

将步骤4所得醇沉液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15(60℃左右)，400目滤布过滤，得浸膏，备用；减压回收乙醇的真空度为-0.06Ma，温度70℃；

加入蔗糖和糊精适量，干燥后制成颗粒剂。

本实施例制备的改善睡眠的保健食品具有很好的改善睡眠功能，并且无毒。

实施例5

本发明的改善睡眠的保健食品是由下述质量比的各成分组成：

鹿茸7.5g、刺五加100g、淫羊藿50g、甘草25g、大枣饮片75g；

麦芽糖醇液150g、山梨酸钾0.5g。

本发明的改善睡眠的保健食品的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、药材前处理

按质量比称取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，备用；

步骤2、提取

取鹿茸、刺五加、淫羊藿、甘草、大枣饮片，加水煎煮2次，第一次加10倍量水浸泡0.5小时后煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，100目筛网过滤，合并滤液；

步骤3、浓缩

将步骤2所得滤液经减压浓缩至相对密度为1.08～1.14(60℃左右)，冷却至常温，得清膏；减压浓缩的真空度为-0.07Mpa，温度70℃；

步骤4、醇沉

向步骤3所得清膏中加食用酒精，边加边搅拌，使含醇量达30％，静置24小时，取上清液，用400目滤布过滤，得醇沉液；

步骤5、回收乙醇、浓缩

将步骤4所得醇沉液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.15(60℃左右)，400目滤布过滤，得浸膏，备用；减压回收乙醇的真空度为-0.06Ma，温度70℃；

浓缩，合坨，过筛，制丸，55℃干燥3小时后，过20目筛选丸，即得改善睡眠的保健食品的微丸。

本实施例制备的改善睡眠的保健食品具有很好的改善睡眠功能，并且无毒。

本发明的改善睡眠的保健食品的剂型优选为上述实施例中的口服液、颗粒剂或者丸剂，除此之外还可以制备成其他的剂型，这里不再一一列举。

本发明实施例1制备的改善睡眠的保健食品改善睡眠功能、安全性毒理的动物试验报告如下：

一、由四川省疾病预防控制中心对改善睡眠的保健食品改善睡眠功能进行检验，动物试验报告如下：

1、材料和方法

1.1样品：本发明实施例1制备的改善睡眠的保健食品，系棕红色液体，人体每日推荐量为40ml/60kg.BW。以蒸馏水作溶剂配制受试物，冷藏保存。

1.2实验动物：由四川省中医药科学院实验动物中心提供的雌性昆明种小鼠120只，体重18-22g。饲料来源于四川省医学科学院，四川省人民医院实验动物研究所。实验动物房温度20-25℃，相对湿度为40％-70％。

1.3剂量选择及受试物给予方式：直接睡眠试验、延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验及巴比妥钠睡眠潜伏期试验，均设6.67ml/kg.BW、13.33ml/kg.BW、20.00ml/kg.BW三个剂量组(分别相当于人体推荐量的10、20、30倍)。首先配制受试物溶液，即低、中剂量组分别取83.4ml、166.6ml受试物原液，依次加蒸馏水250ml混匀即可，冰箱保存，用完再配，高剂量组直接取用受试物原液。每天按20ml/kg.BW经口灌胃一次，连续给予30天。

1.4主要仪器与试剂：试验用玻璃槽、石英钟。SIGMA-ALDRICH生产的戊巴比妥钠；国药集团化学试剂有限公司生产的巴比妥钠。

1.5试验方法

1.5.1直接睡眠试验：各组动物分别给予不同剂量的受试物，对照组给予同体积的蒸馏水后，以小鼠翻正反射消失为指标，观察各受试物组是否出现睡眠现象。

1.5.2延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验；各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg.BW(经预试所得)，以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试物能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。

1.5.3戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验：各组动物于末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量39mg/kg.BW(经预试所得)，记录30分钟内翻正反射消失达1分钟以上入眠动物数。

1.5.4巴比妥钠睡眠潜伏期试验：动物末次给予受试物和溶剂对照后15分钟，按10ml/kg.BW给各组动物腹腔注射巴比妥钠405mg/kg.BW(经预试所得)，以翻正反射消失为指标，观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

1.6试验数据统计：睡眠时间和体重的数据经方差齐性检验，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett

1.7结果判定：延长戊巴比妥钠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验、巴比妥钠睡眠潜伏期试验三项实验中二项阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定该受试样品具有改善睡眠功能作用。

2结果

2.1、改善睡眠的保健食品对小鼠体重的影响

从表1-3可见，各组动物的初始体重经方差齐性试验，方差齐(P＞0.05)，且方差分析结果(P＞0.05)，说明各组动物之间的初始体重是均衡的。试验期间各组动物的体重持续增长，各剂量组小鼠的中期体重、结束体重与阴性对照组比较，均无显著性差异(P＞0.05)。

表1改善睡眠的保健食品对延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验小鼠体重的影响

表2改善睡眠的保健食品对戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验小鼠体重的影响

表3改善睡眠的保健食品对睡眠潜伏期试验小鼠体重的影响

2.2改善睡眠的保健食品直接睡眠试验

结果见表4，三个剂量组动物连续30天经口给予不同剂量的受试物后，均未出现直接睡眠现象。

表4改善睡眠的保健食品对小鼠直接睡眠的影响

2.3改善睡眠的保健食品延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验

结果见表5，三个剂量组动物的睡眠时间与阴性对照组比较，各剂量组的睡眠时间均无显著性差异(P＞0.05)。

表5改善睡眠的保健食品对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

2.4改善睡眠的保健食品戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验

结果见表6，三个剂量组的小鼠睡眠发生率与阴性对照组比较，降低剂量组无显著性差异外(P＞0.05)，中、高剂量组戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率升高均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)。

表6改善睡眠的保健食品对阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响

2.5改善睡眠的保健食品巴比妥钠睡眠潜伏期试验

结果见表7，三个剂量组的小鼠睡眠潜伏期与阴性对照组比较，除中剂量组无显著性差异外(P＞0.05)，低、高剂量组的睡眠潜伏期时间缩短均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)。

表7改善睡眠的保健食品对巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期的影响

3小结：

改善睡眠的保健食品连续30天经口灌胃给予动物后，可见动物生长良好，体重持续增长，各剂量组的睡眠时间与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)；低、高剂量组小鼠的睡眠潜伏期时间缩短均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)；中、高剂量组戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率升高，均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)；且无直接睡眠作用。根据结果判定标准，可见改善睡眠的保健食品对动物具有改善睡眠的功能。

二、由四川省疾病预防控制中心对改善睡眠的保健食品安全性毒理学评价试验报告如下：

1.材料和方法

1.1样品：本发明实施例1制备的改善睡眠的保健食品，为棕红色液体，人体每日推荐量为40ml/60kg·BW。受试样品为厂家提供的6.67倍浓缩液，用蒸馏水作溶剂配制受试物，冷藏保存。

1.2实验动物：

1.2.1饲养环境及饲料来源：试验动物房温度20-25℃，相对湿度40-70％。饲料来源于四川省医学科学院.四川省人民医院实验动物研究所。

1.2.2动物：相关试验动物使用情况见表1。

表1实验动物一览表

1.3剂量选择与受试物给予方式：

1.3.1急性经口毒性试验：设15000mg/kg.BW一个剂量组，按20ml/kg.BW一次经口灌胃。灌胃前动物禁食16h，不限饮水，首次染毒后观察7天。

1.3.2Ames试验：设0.16、0.8、4、20、100μl/皿五个剂量组及溶剂对照组(蒸馏水)、自发对照组和阳性对照组。

1.3.3骨髓细胞微核试验：试验根据6.67倍浓缩液设2500mg/kg.BW、5000mg/kg.BW、10000mg/kg.BW三个剂量组，另设溶剂(蒸馏水)对照及环磷酰胺阳性对照组(CP，40mg/kg.BW)。按20ml/kg.BW经口灌胃，两次间隔24h，首次染毒后观察30h。

1.3.4精子畸形试验：试验根据6.67倍浓缩液设2500mg/kg.BW、5000mg/kg.BW、10000mg/kg.BW三个剂量组，另设溶剂(蒸馏水)对照组和环磷酰胺阳性对照组(CP，40mg/kg.BW)。每天按20ml/kg.BW经口灌胃，连续5天，首次染毒后观察35天。

1.3.530天喂养试验：试验根据6.67倍浓缩液设2.5ml/kg.BW、5.0ml/kg.BW、10.0ml/kg.BW三个剂量组(分别相当于人体推荐摄入量的25、50、100倍)，另设蒸馏水对照组。采用灌胃法，首次染毒后观察30天。

1.4主要仪器与试剂：

1.4.1主要仪器：日本奥林巴斯光学株式会社生产的AU-400全自动生化分析仪、XT-2000i型全自动血细胞分析仪、METTLER电子天平、OLYMPUSBH-2型显微镜、解剖器械、超净工作台。

1.4.2主要试剂：生化试剂盒、环磷酰胺、1,8-二羟基蒽醌、叠氮化钠、2-氨基芴、4-硝基喹啉-N氧化物、丝裂霉素C、S-9混合液。

1.5试验方法：

1.5.1急性经口毒性试验：采用最大耐受剂量法，大、小鼠分别随机分成两组，共4组，每组同系同性10只动物。称受试物75g加蒸馏水至100ml混匀后备用。大、小鼠一次经口给予受试物。观察一周内动物的中毒表现及死亡情况，试验结束称体重后处死动物作大体解剖。

1.5.2Ames试验：使用经β-萘黄酮与苯巴比妥联合诱导雄性大鼠肝S

1.5.3骨髓细胞微核试验：采用30h两次给药法，将小鼠按雌雄分别随机分为5组，每组5只动物，称取2.5g、5.0g、10.0g受试物分别加蒸馏水至20ml，另称取0.04gCP加蒸馏水至20ml，混匀即可，两次灌胃间隔24h，于第二次给受试物后6h脱颈椎处死动物，取胸骨髓按《保健食品检验与评价技术规范》中的规定进行制片，固定，Giemsa染色后，在油镜下每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞(PCE)中含微核的PCE数，计算微核细胞率(‰)。观察200个红细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/NCE)。

1.5.4精子畸形试验：将小鼠随机分为5组，每组5只动物，称取10.0g、20.0g、40.0g受试物分别加蒸馏水至80ml，另称取0.04g CP加蒸馏水至20ml混匀即可(环磷酰胺每天临用时配制)。连续灌胃5天，于首次给予受试物后第35天，脱颈椎处死动物取双侧附睾进行制片，按《保健食品检验与评价技术规范》中的规定，甲醇固定，1％伊红染色后，在高倍镜下每只动物计数1000条完整精子，记录精子畸形、畸形类型及计算精子畸形率。

1.5.5 30天喂养试验：采用灌胃法，将大鼠随机分成4组，每组20只大鼠，雌雄各半。首先配制受试物溶液，低、中剂量组分别取浓缩液125.0ml、250.0ml各加蒸馏水至500ml混匀备用，用完再配，高剂量组直接取用浓缩液，每天按10ml/Kg.BW一次经口灌胃，连续30天给予受试物。每天每只大鼠单笼喂养，每天观察动物的一般表现、行为、中毒表现及死亡，每周计算两次进食量，并称一次体重，根据食物摄入量，计算食物利用率，试验结束时禁食后称重并将动物麻醉后采血，用XT-2000i型全自动血细胞分析仪测定血液学指标，用日本奥林巴斯光学株式会社生产的AU-400全自动生化分析仪及德国奥林巴斯(欧洲)诊断有限公司提供的试剂盒，测定血生化指标，解剖动物观察内脏改变，称肝、肾、脾、睾丸重，计算其脏体比，取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸(卵巢)作组织病理学检查。试验期间动物自由进食、饮水。

1.6试验数据统计：骨髓微核试验采用卡方检验，精子畸形试验采用秩和检验，30天喂养试验数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett’sT3法进行两两比较，上述统计均用SPSS 11.0forWindows软件处理。

1.7结果判定

1.7.1急性经口毒性试验：根据LD

1.7.2Ames试验：受试物组回变菌落增加一倍以上(即回变菌落数等于或大于2乘以未处理对照数)，并有剂量反应关系或至少某一测试点有可重复的并有统计学意义的阳性反应，即可认为该受试物诱变试验阳性。

1.7.3骨髓细胞微核试验：试验组与对照组相比，试验结果微核率有明显的剂量反应关系并有统计学意义时，即可确认为阳性结果。若统计学上差异有显著性，但无剂量反应关系时，则需进行重复试验。结果能重复者可确定为阳性。

1.7.4精子畸形试验：每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行比较，畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，即可判定为阳性。

2、结果

2.1急性经口毒性试验：经受试物后大、小鼠的一般表现和行为均未见异常，观察期内未见动物死亡(表2)，试验结束时处死动物，大体解剖肉眼未见异常。改善睡眠的保健食品对大、小鼠急性经口MTD值均大于15000mg/kg.BW，按急性毒性分级属无毒级。

表2改善睡眠的保健食品对大、小鼠急性经口毒性试验结果

2.2Ames试验：由表3和表4中可见无论在加和不加S

表3改善睡眠的保健食品Ames试验结果(第一次)

注：以上结果为3个平皿的均值±标准差。

表4改善睡眠的保健食品Ames试验结果(第二次)

注：以上结果为3个平皿的均值±标准差。

2.3骨髓细胞微核试验：结果见表5，受试物三个剂量组的微核细胞率与阴性对照组比较，经卡方检验，雌雄鼠的微核细胞率均无显著性差异(P＞0.05)，而环磷酰胺阳性对照组则非常显著高于阴性对照组(P﹤0.01)，受试物各剂量组的PCE/NCE不少于对照组的20％。结果未见受试物诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核细胞率增高。

表5改善睡眠的保健食品对小鼠骨髓细胞微核试验结果

注：**表示与阴性对照组比较P﹤0.01。

2.4精子畸形试验：结果参见表6，受试物三个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较，经秩和检验无显著性差异(P＞0.05)，而环磷酰胺阳性对照组则非常显著高于阴性对照组(P﹤0.01)。精子畸形类型主要表现以不定形、无钩为主。上述结果表明受试物未诱发小鼠精子畸形率增高。

表6改善睡眠的保健食品对小鼠精子畸形试验结果

注：**表示与阴性对照组比较P﹤0.01

2.530天喂养试验

试验期间动物健康状况良好，体重持续增长，每组大鼠每天经口给予不同剂量的受试物后均未出现中毒表现，也未见动物死亡。

2.5.1改善睡眠的保健食品对大鼠体重的影响

由表7可见，三个剂量组雌雄大鼠的初始体重、1-4周体重、第30天体重与对照组比较，经统计学处理，各项指标均无显著性差异(P＞0.05)。

表7改善睡眠的保健食品对大鼠体重的影响

2.5.2改善睡眠的保健食品对大鼠每周进食量的影响

由表8可见，三个剂量组雌雄大鼠的每周进食量与对照组相比较，经统计学处理，均无显著性差异(P＞0.05)。

表8改善睡眠的保健食品对大鼠每周进食量的影响

2.5.3改善睡眠的保健食品对大鼠食物利用率的影响

结果见表9，三个剂量组雌雄大鼠的每周食物利用率以及总食物利用率与对照组相比较，经统计学处理，各项指标均无显著性差异(P＞0.05)。

表9改善睡眠的保健食品对大鼠食物利用率的影响

2.5.4改善睡眠的保健食品对大鼠血液学的影响

由表10可见，三个剂量组雌雄大鼠的血液学指标检测结果与对照组相比较，经统计学处理，除雌鼠中剂量组的单核细胞升高有显著性差异外(P＜0.05)，其余各项指标均无显著性差异(P＞0.05)。以上所测值均在本室正常值范围内。

表10改善睡眠的保健食品对大鼠血液学的影响

注：*表示与阴性对照组比较P﹤0.05

表11改善睡眠的保健食品对大鼠末期生化检验结果

续表11改善睡眠的保健食品对大鼠末期生化检验结果

注：*表示与阴性对照组比较P﹤0.05，**表示与阴性对照组比较P﹤0.01

2.5.5改善睡眠的保健食品对大鼠末期血生化的影响

由表11可见，三个剂量组的末期血生化指标检测结果与对照组相比较，经统计学处理，除雄鼠中剂量组的谷丙转氨酶降低有显著性差异(P﹤0.05)，雌鼠三个剂量组的肌酐及中剂量组的总蛋白和白蛋白均降低有显著性差异外(P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.01)，其余各项指标均无显著性差异(P＞0.05)。以上所测值均在本室正常值范围内。

2.5.6改善睡眠的保健食品对大鼠脏体比的影响

结果见表12，三个剂量组雌雄大鼠的肝体比、脾体比、肾体比以及雄鼠的睾丸体比值与对照组相比较，经统计学处理，均无显著性差异(P＞0.05)。

表12改善睡眠的保健食品对大鼠脏体比的影响

2.5.7病理学检查

试验结束后处死动物，进行大体解剖，肉眼未见异常改变。组织病理学检查结果显示：对照组有1例动物肝小叶局部轻度脂肪变性，其余受检组织未见异常；受试物高剂量组有1例动物肝组织汇管区局灶性轻度炎细胞浸润，其余受检组织均未见异常。以上发现均为动物自发病变，未见受试物高剂量组引起动物中毒性损伤改变(见表13-19)。

表13改善睡眠的保健食品对大鼠肝脏的组织学影响

表14改善睡眠的保健食品对大鼠肾脏的组织学影响

表15改善睡眠的保健食品对大鼠脾脏的组织学影响

表16改善睡眠的保健食品对大鼠胃的组织学影响

表17改善睡眠的保健食品对大鼠空肠的组织学影响

表18改善睡眠的保健食品对大鼠睾丸的组织学影响

表19改善睡眠的保健食品对大鼠卵巢的组织学影响

3.小结

3.1改善睡眠的保健食品对大、小鼠急性经口毒性试验结果MTD值均＞15000mg/kg.BW，按急性毒性分级，属无毒级。

3.2三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验以及小鼠精子畸形试验)结果未见改善睡眠的保健食品至突变作用。

3.330天喂养试验，可见动物生长发育正常，体重持续增长，体态活泼，被毛光滑柔顺，大、小便未见异常改变。试验期间未见动物出现中毒症及死亡。三个剂量组雌雄大鼠的每周体重、每周进食量、每周食物利用率、总食物利用率、脏体比值、血液学指标及末期血生化指标检测结果与对照组比较，除雌鼠中剂量组的单核细胞升高有显著性差异外(P﹤0.05)，雄鼠中剂量组的谷丙转氨酶降低有显著性差异(P﹤0.05)，雌鼠三个剂量组的肌酐及中剂量组的总蛋白和白蛋白均降低有显著性差异外(P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.01，)，其余各项指标均无显著性差异(P＞0.05)，以上所测值均在本室正常值范围内。组织病理学检查结果，除动物自发病变外，未见受试物高剂量组引起动物中毒性损伤改变。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。