玉竹多糖在制备治疗肺损伤的药物中的应用

技术领域

本发明属于肺损伤治疗药物技术领域，特别是涉及玉竹多糖在制备治疗肺损伤的药物中的应用。

背景技术

急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)主要是由肺部感染、创伤、休克等因素引起，其特征是弥漫性.肺泡损伤，肺水肿形成，中性粒细胞衍生的炎症和肺表面活性物质功能障碍，临床常表现为呼吸困难、低氧血症等，严重时可发展为急性呼吸窘迫综合症、呼吸衰竭等，甚至危及生命，患病后死亡率高达30％～50％，即使幸存，其肺功能也被严重损害，严重影响患者生活质量，给患者、家庭和社会带来了巨大的医疗和经济负担。该病目前治疗手段主要依靠支持治疗(机械通气、体外ECMO)和药物治疗(糖皮质激素、非甾体类抗炎药、抗氧化应激药物、血管扩张剂等)，总体上缺乏特效的治疗方法，且患者预后并不理想。

发明内容

针对以上问题，本发明提供玉竹多糖在制备治疗肺损伤的药物中的应用。本发明通过实验研究发现，玉竹多糖能明显改善急性肺损伤所致的肺功能衰退，并对肺部具有保护作用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一方面，本发明实施例提供玉竹多糖在制备治疗肺损伤的药物中的应用。

玉竹是百合科、黄精属植物的根茎部位，味甘，性平，归肺、胃经，具有养阴润燥、生津止渴之功效，适用于肺胃阴伤，燥热咳嗽，咽干口渴，内热消渴等症，常用于治疗虚人外感，是临床中常用的滋阴药之一，作用缓和，不滋腻敛邪。目前有关玉竹改善肺损伤的作用尚无报道。本发明通过实验研究发现，玉竹多糖能够提高急性肺损伤小鼠的存活率，减少急性肺损伤小鼠的体重丢失的情况，并显著改善急性肺损伤小鼠的肺功能，保护肺部组织。因此，玉竹多糖可用于制成治疗肺损伤的药物。

优选地，所述肺损伤为急性肺损伤。

优选地，所述玉竹多糖的单糖组成包括阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖；所述阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖的质量比为1.5～1.8：1.0～1.3：65～75：1.0～1.3：500～550。进一步优选地，所述阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖的质量比为1.6～1.7：1.1～1.2：68～70：1.1～1.2：520～530。

优选地，所述玉竹多糖的制备方法为：将玉竹药材以水回流提取，向所得提取液中加入乙醇至乙醇的体积百分浓度达到75％～85％，静置8h以上，将所得沉淀分离、干燥，即得。

第二方面，本发明实施例还提供了一种治疗肺损伤的药物，所述药物的活性成分包括玉竹多糖。

优选地，所述玉竹多糖的单糖组成包括阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖；所述阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖的质量比为1.5～1.8：1.0～1.3：65～75：1.0～1.3：500～550。进一步优选地，所述阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和果糖的质量比为1.6～1.7：1.1～1.2：68～70：1.1～1.2：520～530。

优选地，所述玉竹多糖的制备方法为：将玉竹药材以水回流提取，向所得提取液中加入乙醇至乙醇的体积百分浓度达到75％～85％，静置8h以上，将所得沉淀分离、干燥，即得。

优选地，所述药物为口服制剂或注射制剂。

将本发明所提供的组合物制成口服制剂和注射制剂后，通过口服、注射的给药方式，即可发挥治疗肺损伤的作用。

优选地，所述药物为口服制剂时，还包括药学上可接受的口服制剂药用辅料。

优选地，所述药物为注射制剂时，还包括药学上可接受的注射制剂药用辅料。

附图说明

图1为本发明实施例4中各组小鼠存活率；

图2为本发明实施例4中各组小鼠体重变化，其中**表示p<0.01，###表示p<0.001；

图3为本发明实施例5中小鼠肺功能参数采集中小鼠潮气量的结果，其中**表示p<0.01，###表示p<0.001；

图4为本发明实施例5中小鼠肺功能参数采集中每分钟总通气量的结果，其中**表示p<0.01，###表示p<0.001；

图5为本发明实施例6中各组小鼠肺脏组织病理变化；

图6为本发明实施例7中各组ALI小鼠肺脏组织中的TNF-α、IL-6、IL-1β，其中*表示p<0.05，**，##表示p<0.01；***，###表示p<0.001；

图7为本发明实施例7中各组ALI小鼠血清中的TNF-α、IL-6、IL-1β，其中*表示p<0.05，**，##表示p<0.01；***，###表示p<0.001；

图8为本发明实施例7中各组ALI小鼠血液中细胞数目；其中A为白细胞，B为单核细胞，C为淋巴细胞，D为中性粒细胞；*表示p<0.05，**表示p<0.01；***，###表示p<0.001)；

图9为本发明实施例8中各组ALI小鼠肠道菌群Alpha多样性分析结果，其中*表示p<0.05，##表示p<0.01；

图10为本发明实施例8中各组ALI小鼠肠道菌群Beta多样性PCoA分析；

图11为本发明实施例9中各组小鼠肠道菌群结构在门水平上物种组成相对丰度及差异分析结果，其中*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001；

图12为本发明实施例9中各组小鼠肠道菌群结构在属水平上物种组成相对丰度及差异分析结果，其中*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001；

图13为本发明实施例9中各组小鼠肠道菌群结构在种水平上物种组成相对丰度及差异分析结果，其中*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001；

图14为本发明实施例10中标准品的色谱图；

图15为本发明实施例10中样品的色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步举例说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例中所采用的实验动物为6周龄雄性健康C57BL/6N小鼠，体重为20±2g，由北京维通利华动物实验中心提供。小鼠在天津中医药大学实验动物中心(天津)饲养，室温(22±2℃)，相对湿度58-65％，光周期12h交替。

以下实施例中所采用的其他原料、试剂或仪器等，如未注明生产厂商或特殊说明，均为从商业途径获得的常规产品。未注明具体条件的试验，按照常规条件或制造商建议的条件进行。

实施例1

本发明实施例提供了一种玉竹多糖的制备方法：

称取2kg玉竹饮片，打碎机打碎，按10：1的液料比加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后充分浸泡1h，使药和水充分混合浸湿，加热至微沸，开始计时2h。待药液冷却置常温后用9层纱布过滤药渣，滤得的药渣按8：1的液料比进行第二次提取，提取时间2h，两次滤液合并后在4℃下存放。采用95％乙醇调节乙醇的终浓度为80％，4℃静置醇沉过夜。用旋转蒸发仪将沉淀中的乙醇完全旋出，冷冻干燥后得玉竹多糖254g，呈淡黄色固体粉末。

实施例2

本发明实施例提供了一种玉竹多糖的制备方法：

称取2kg玉竹饮片，打碎机打碎，按9：1的液料比加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后充分浸泡1h，使药和水充分混合浸湿，加热至微沸，开始计时2h。待药液冷却置常温后用9层纱布过滤药渣，滤得的药渣按7：1的液料比进行第二次提取，提取时间2h，两次滤液合并后在4℃下存放。采用95％乙醇调节乙醇的终浓度为75％，4℃静置醇沉过夜。用旋转蒸发仪将沉淀中的乙醇完全旋出，冷冻干燥后得玉竹多糖246g，呈淡黄色固体粉末。

实施例3

本发明实施例提供了一种玉竹多糖的制备方法：

称取2kg玉竹饮片，打碎机打碎，按11：1的液料比加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后充分浸泡1h，使药和水充分混合浸湿，加热至微沸，开始计时2h。待药液冷却置常温后用9层纱布过滤药渣，滤得的药渣按9：1的液料比进行第二次提取，提取时间2h，两次滤液合并后在4℃下存放。采用95％乙醇调节乙醇的终浓度为85％，4℃静置醇沉过夜。用旋转蒸发仪将沉淀中的乙醇完全旋出，冷冻干燥后得玉竹多糖249g，呈淡黄色固体粉末。

实施例4

本发明实施例提供了玉竹多糖在改善脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠一般情况的作用(存活率、体重)。本实施例所采用的玉竹多糖为实施例1制得的玉竹多糖。

如表1所示，实验共分五组，对照组(7天)、模型组(7天)、玉竹多糖低剂量给药组(7天)、玉竹多糖中剂量给药组(7天)、玉竹多糖高剂量给药组(7天)。每组测试6只相同处理的小鼠，给药前各组小鼠适应性饲养一周。给药前和实验期间的饲料满足SPF级饲养和营养需要。各组小鼠给药方式为：

模型组(7天)：实验7天内予给药组同等体积的生理盐水灌胃，于第3～5天连续三天以5mg/kg、0.1mL/20g的给药剂量尾静脉注射LPS，诱导急性肺损伤模型。每天称重1次，根据体重变化及时调整给药体积；

玉竹多糖低、中、高剂量给药组(7天)：分别给予玉竹多糖100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg，剂量为按每10g体重灌服0.1mL计算，连续喂养7天，期间在第3～5天予尾静脉注射LPS(5mg/kg)。每天称重1次，根据体重变化及时调整给药体积；

对照组(7天)：尾静脉注射及灌胃均使用同等体积生理盐水。

表1玉竹多糖对于ALI小鼠实验给药分组及剂量

实验结果：

如图1所示，与对照组相比，模型组小鼠自造模后存活率显著降低，而给予玉竹多糖干预后，给药组小鼠的存活率有明显提升，其中玉竹多糖高剂量给药组效果最佳。

如图2所示，第7天时，给药组小鼠较模型组相比，有回调体重的趋势，对比实验7天内小鼠的体重变化，发现玉竹多糖高剂量给药组可明显减少LPS导致的体重丢失的情况。

实施例5

本发明实施例提供了玉竹多糖改善LPS诱导的ALI小鼠肺功能的作用。

取实施例4中检测完体重的小鼠，使用EMKA动物肺功能监测系统进行各组小鼠肺功能检测。将体积描记箱打开，将动物放入体积描计箱内同时将上半部分安装至底座部分并检查密封，开启通风泵，调节至0.5LPM，以保证腔体内新鲜空气，调整各通道的坐标范围后开始采集动物信号。

通过对小鼠潮气量(TV)和每分钟总通气量(MV)进行测量，分别用15min测量时间内的总平均值以及连续5min内获得相关肺功能参数，以此评价玉竹多糖对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺功能的改善作用。

实验结果：

小鼠肺功能结果如图3和图4所示，与对照组相比，模型组TV、MV显著下降。玉竹多糖低、中、高剂量给药组与模型组相比能明显提高TV、MV水平，改善ALI导致的呼吸功能下降，玉竹多糖高剂量给药组效果最佳，其次是玉竹多糖中剂量给药组，最次为玉竹多糖低剂量给药组。该结果提示玉竹多糖对ALI有保护作用，并在一定程度上呈剂量依赖性。

实施例6

本发明实施例提供了玉竹多糖改善LPS诱导的ALI小鼠肺部病理的作用。

ALI发生后，可导致肺泡间隔增宽，肺间隙有大量炎性细胞浸润，严重的可形成成片实质区，导致肺部形态结构被破坏。本实验选择苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining，HE)对病变程度进行比较，从而观察玉竹多糖对ALI小鼠肺部形态学的影响。

取实施例5中检测完肺功能的小鼠的肺脏组织，固定于4％甲醛溶液中7天，然后将组织块放于包埋盒内，置于福尔马林溶液中。将包埋盒置于提篮内插好，放入脱水室，依次用以下试剂浸泡，以进行脱水处理：50％v/v乙醇，2h；75％v/v乙醇，2h；95％v/v乙醇I，1h；95％v/v乙醇II，1h；无水乙醇，2h；无水乙醇，2h；二甲苯I，20min；二甲苯II，20min；石蜡I，0.5h；石蜡II，0.5h；石蜡III，0.5h(其中“95％v/v乙醇I，1h；95％v/v乙醇II，1h”表示在95％v/v乙醇中浸泡1h，另取新的95％v/v乙醇浸泡1h。下同)。将包埋蜡温度设定为58℃，操作台上包埋后即刻放在冷台上降温，带蜡块完全变硬后，将其置于阴暗环境中保存。

HE染色方法：

将蜡块切片，将切片放于烤箱60℃10min进行脱蜡；将脱蜡后的切片取出，于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10min，再于无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95％v/v乙醇、75％v/v乙醇中各浸泡5min，流水冲洗5min。l％伊红溶液染色1-2min，流水冲洗15-30sec；75％v/v乙醇浸泡3min，95％v/v乙醇浸泡3min，无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ各浸泡3-5min，上行梯度脱水；于二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ中各浸泡5min进行透明。用中性树胶滴加玻片组织周围，后用盖玻片覆盖封片。在光镜显微镜下观察并拍照、记录。

实验结果：

肺脏组织经HE染色后，于显微镜下拍照，观察各组小鼠肺脏组织的病理改变，如图5所示，与对照组相比，模型组小鼠肺泡间隔明显增宽，肺间隙有大量炎性细胞浸润。玉竹多糖高、中、低剂量给药组与模型组相比，肺泡间隔增厚现象减轻，炎性细胞浸润减少，其中玉竹多糖高剂量给药组改善效果最为明显，玉竹多糖中剂量给药组次之，玉竹多糖低剂量给药组改善效果次于玉竹多糖中剂量给药组。研究结果显示，玉竹多糖可以呈剂量依赖性地降低ALI小鼠肺泡壁厚度，降低炎性浸润，对ALI小鼠的肺脏具有保护作用。

实施例7

本发明为了研究玉竹多糖治疗肺损伤的机理，还进行了玉竹多糖的抗炎活性的研究。

本发明实施例提供了玉竹多糖的抗炎活性。本实施例所采用的血清和肺脏组织为实施例5中检测完肺功能的小鼠的血清和肺脏组织。

1、玉竹多糖对LPS诱导的ALI小鼠TNF-α(肿瘤坏死因子α)、IL-6(白介素6)、IL-1β(白介素1β)促炎因子水平的影响

当机体受到有害刺激会产生重要的防御机制，炎症发生时，损伤组织及血液会产生并释放对炎症反应起加强作用的炎症因子，其中TNF-α、IL-1β、IL-6是重要的促炎因子，本实验通过评估小鼠肺脏组织及血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量，评估玉竹多糖的抗炎活性。

TNF-α、IL-6、IL-1β含量测定原理：采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定，将TNF-α、IL-6、IL-1β抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或样品，其中的TNF-α、IL-6、IL-1β与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的TNF-α、IL-6、IL-1β抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TNF-α、IL-6、IL-1β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

用ELISA试剂盒测定TNF-α、IL-6、IL-1β水平(ELISA试剂盒购自上海优选生物科技有限公司，型号为YX-091206H(用于测定IL-6)、YX-E201407M(用于测定TNF-α)、YX-000912M(用于测定IL-1β))的具体操作如下：

溶液的制备：20×洗涤缓冲液用蒸馏水按1:20比例稀释。

(1)试剂盒室温平衡20min，从铝箔袋中取出所需板条。

(2)设置空白孔、标准品孔和样本孔，标准品孔中加不同浓度的标准样品50μL，样本孔先加入待测样品(血清和预处理后的肺脏组织)10μL，再加样品稀释液40μL。肺脏组织样本的预处理方法为：取适量肺脏组织按1：9的质量比加入生理盐水，剪碎后置于冰上使用超声破碎仪充分破碎、离心，取上清待测。

(3)除空白孔外，向孔中加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，将反应孔用封板膜盖住封口，37℃恒温孵育60min。

(4)弃去液体，在吸水纸上拍干，每空加满稀释后的1×洗涤缓冲液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸拍干，重复洗板5次。

(5)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长检测各孔OD值。

实验结果：

如图6和图7所示，与对照组相比，模型组肺脏组织和血清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高，且与模型组相比，玉竹多糖低、中、高剂量给药组的TNF-α、IL-6、IL-1β水平在肺脏组织中可显著降低；在血清样本中，玉竹多糖低、中、高剂量给药组的IL-6、IL-1β水平被明显抑制了，而对TNF-α没有明显作用。由以上结果可见，玉竹多糖可显著降低LPS诱导的ALI小鼠促炎相关细胞因子，具有一定的抗炎活性。

2、玉竹多糖对LPS诱导的ALI小鼠血液中白细胞、单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞数目的影响

按实施例4中的分组和给药方法对实验动物进行分组和给药(本实施例的小鼠与实施例4中的小鼠为同一批次的不同小鼠)，每组测试6只相同处理的小鼠。在炎症反应中，会引起机体白细胞增多，白细胞又可分为单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等。因此，本实验在第七天给药后对小鼠禁食12h，于第八天取材，采集小鼠新鲜血液，置于预先使用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)润洗过的离心管中，采集完毕后立即用血液分析仪进行细胞数目检测，据此评估其抗炎活性。

实验结果：

如图8所示，与对照组相比，模型组的白细胞(WBC)、单核细胞(MO)、淋巴细胞(LY)及中性粒细胞(NE)数目显著升高(p<0.001)。玉竹多糖中剂量(p<0.05)和高剂量(p<0.01)可以降低白细胞水平；玉竹多糖低、中、高三个剂量均可降低单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数目，且呈剂量依赖性。综合来看，高剂量给药组的效果最佳，对白细胞、单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞均有回调作用，具有统计学意义。由以上结果可见，玉竹多糖可显著降低LPS诱导的ALI小鼠血液中白细胞、单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞数目，具有一定的抗炎活性。

实施例8

本发明实施例提供了玉竹多糖对LPS诱导的ALI小鼠肠道菌群多样性的调节作用。本实施例所采用的玉竹多糖为实施例1制得的玉竹多糖。

按实施例4中的分组和给药方法对实验动物进行分组和给药(本实施例的小鼠与实施例4中的小鼠为同一批次的不同小鼠)，每组测试6只相同处理的小鼠。给药7天后，用手指按摩小鼠下腹部，找几个干净并灭菌的盒子，在盒子底部垫上几张灭菌后的滤纸，把小鼠放到滤纸上等待，收集所需的粪便。用干净的镊子放到灭菌过的EP管中，立即密封，将所有样品置于-80℃保存后送检。

Alpha多样性分析指数包括Chao1和Ace(确定物种丰富度)、Shannon和Simpson指数(确定物种多样性)，以描述不同处理样品中细菌的组成。

Alpha多样性和Beta多样性分析的方法：首先对不同样品在97％一致性阈值下的Alpha多样性分析指数(shannon、simpson、chao1、Ace)进行统计，分析样本物种多样性的复杂性。数据通过QIIME(V1.7.0)软件计算获得。基于bray curtis距离来进行主坐标分析(PCoA，Principal Co-ordinates Analysis)分析，并选取贡献率最大的主坐标组合进行做图展示。样品距离越接近，表示物种组成结构越相似。使用QIIME计算Beta多样性距离矩阵，然后用R软件(Version 2.15.3)绘制PCoA。

实验结果：

如图9所示，模型组的Alpha多样性指数比对照组降低，玉竹多糖高剂量给药组较模型组相比，对菌群结构具有调节作用，可增加物种丰富度和多样性，如上调Ace、Chao1、Shannon指数，具有统计学意义。

如图10所示，基于UniFrac的Beta多样性PCoA显示了各个组的微生物群组成的明显聚类，玉竹多糖干预后菌群结构明显改变。

实施例9

本发明为了研究玉竹多糖治疗肺损伤的机理，还进行了玉竹多糖对LPS诱导的ALI小鼠肠道菌群结构的调节作用的研究。

本发明实施例提供了玉竹多糖对LPS诱导的ALI小鼠肠道菌群结构的调节作用。待测样品为实施例8中各组小鼠的粪便。

利用Uparse软件(Uparse v7.0.1001)对所有样品的全部Effective Tags进行聚类，默认以97％的一致性(Identity)将序列聚类成为OTUs，同时会选取OTUs的代表性序列，依据其算法原则，筛选OTUs中出现频数最高的序列作为OTUs的代表序列。用Mothur方法与SILVA(http://www.arb-silva.de/)的SSUrRNA数据库对OTUs代表序列进行物种注释分析(设定阈值为0.8～1)，获得分类学信息并分别在各个分类水平：phylum(门)，genus(属)，species(种)统计各样本的群落组成。使用fdr多重检验校正，使用Kruskal-Wallis Htest，简称克氏秩和检验，对多组样本的物种进行显著性差异分析。

实验结果：

图11显示了小鼠肠道菌群中最丰富的门，在门水平上，拟杆菌(Bacteroidota)、厚壁菌(Firmicutes)、变形菌(Proteobacteria)、放线菌(Actinobacteriota)和脱铁杆菌(Deferribacterota)构成了所有样品中的五个优势门。与对照组相比，模型组肠道菌群中拟杆菌、厚壁菌、放线菌和脱铁杆菌丰度较低，放线菌丰度较高。给药后，变形菌(p<0.01)丰度下调，放线菌(p<0.01)上调。此外给药后，拟杆菌门、厚壁菌门丰度上调，但无显著性差异。

在属水平上(如图12所示)，丰度较高的是norank_f__Muribaculaceae，拟杆菌(Bacteroides)，乳杆菌(Lactobacillus)，一种未定等级的梭菌UCG-014(norank_f_norank_o_Clostridia UCG-014)，克雷白氏杆菌(klebsiella)，毛螺菌科NK4A136(Lachnospiraceae NK4A136 group)，Escherichia-shigella，副拟杆菌(Parabacteroides)，肠球菌(Enterococcus)和拟普雷沃菌(Alloprevotella)。与对照组相比，模型组中norank_f__Muribaculaceae，一种未定等级的梭菌UCG-014，毛螺菌科NK4A136丰度较低，拟杆菌，乳杆菌，克雷伯氏菌，Escherichia-shigella，副拟杆菌，肠球菌和拟普雷沃菌丰度较高。给药后，norank_f__Muribaculaceae(p<0.01)，拟杆菌，一种未定等级的梭菌UCG-014(p<0.01)和毛螺菌科NK4A136(p<0.01)丰度显著上调，克雷白氏杆菌(p<0.01)，Escherichia-shigella(p<0.001)和肠球菌(p<0.001)丰度显著下调，副拟杆菌下调，无显著差异。对应的种水平上(如图13所示)，给药后，uncultured_bacterium_g__norank_f__Muribaculaceae(p<0.01)，Bacteroides thetaiotaomicron(p<0.05)，unclassified_g__norank_f__norank_o__Clostridia UCG-014(p<0.01)，uncultured_Bacteroidales_bacterium_g__norank_f__Muribaculaceae(p<0.05)丰度显著上调，Escherichia_coli_g__Escherichia-Shigella(p<0.001)和一种未分类的克雷伯氏菌(unclassified_g__Klebsiella)(p<0.01)丰度显著下调。此外给药后，乳杆菌属中鼠乳杆菌(Lactobacillus murinus)丰度下调，约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)丰度上调，但无显著性差异。

结果表明，玉竹多糖对ALI小鼠肠道菌群结构具有调节作用。给药后所升高的肠道菌群如表2和表3所示。

表2玉竹多糖给药后所升高的肠道菌群

表3玉竹多糖给药后所降低的肠道菌群

实施例10

本发明实施例测定了实施例1制得的玉竹多糖的单糖组成。

多糖类化合物结构复杂，测定玉竹多糖的单糖及含量可以为其结构表征提供重要信息。本实施例通过酸解将实施例1制得的玉竹多糖分解为单糖，经过离子交换色谱柱进行分离，电化学检测器进行测定。由测定结果可知，实施例1制得的玉竹多糖中含有的单糖种类及质量如表4所示：

表4

注：“-”表示该项目未检测到该物质，原因可能是样本中该物质含量低于仪器检出限或样本中不含有该物质。

实施例11

本发明实施例提供了一种治疗肺损伤的片剂，活性成分为玉竹多糖，辅料为药学可接受的片剂辅料。其中玉竹多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。

实施例12

本发明实施例提供了一种治疗肺损伤的注射液，活性成分为玉竹多糖，辅料为药学可接受的注射液辅料。其中玉竹多糖按实施例1、实施例2或实施例3的制备方法制得。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。