一种幽门螺杆菌检测试剂盒

技术领域

本发明属于医疗器械技术领域，具体涉及一种幽门螺杆菌检测试剂盒。

背景技术

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是定植于胃粘膜表面的一种重要病原菌，与慢性胃炎、消化性溃疡、胃恶性肿瘤等疾病密切相关。幽门螺杆菌主要通过口-口、粪-口传播，多成家庭聚集感染；因此早期确证幽门螺杆菌感染有利于疾病早期诊断、治疗以及预防。由于幽门螺杆菌定植在胃黏膜上皮细胞表面，正常胃黏膜上皮细胞1~3d更新一次，幽门螺杆菌随脱落的胃黏膜经粪便排出。通过取唾液或粪便检测幽门螺杆菌抗原可诊断幽门螺杆菌现症感染，该方法操作简单，样本来源容易获取，在检测幽门螺杆菌展现出较好的发展前景。同时，使用

现有技术如公开号CN101231284A公开了一种诊断幽门螺杆菌感染的尿素试剂盒；其具体涉及一种使用13C-UBT（Urea Breath Test，尿素呼气试验）来诊断幽门螺杆菌（Hp）感染的尿素试剂盒，包括一定剂型的尿素[

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有较高检测精确度与准确性的幽门螺杆菌检测试剂盒，同时能够降低检测试剂盒中含

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括：含有

上述增敏剂包括新型有机酸；

上述新型有机酸的结构式为

本发明采用新型有机酸作为增敏剂的成分，与含

进一步地，根据本发明一实施方式，检测试剂盒中

进一步地，根据本发明一实施方式，

进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂的量为1.5~4.5g。

进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂还包括柠檬酸、酒石酸、抗坏血酸中的至少一种。

更进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂包括新型有机酸和柠檬酸。

更进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂中新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.25~0.55：1。

进一步地，根据本发明一实施方式，含有增敏剂的容器还包括甜味剂、防腐剂、着色剂、香料中的至少一种。

进一步地，根据本发明一实施方式，新型有机酸采用6-羟基苯并吡喃-3-甲醛与醋酸酐制得。

更进一步地，根据本发明一实施方式，新型有机酸的制备方法为：将无水醋酸钠、醋酸酐与6-羟基苯并吡喃-3-甲醛置于容器中，在搅拌作用下，并利用油锅进行加热反应，旋蒸，加入去离子水，过滤，洗涤，重结晶，加入氢氧化钠溶液进行水解，用酸调节体系pH至5~6，抽滤，洗涤，重结晶，得到新型有机酸。

本发明采用新型有机酸作为增敏剂的成分，与含

附图说明

图1为实施例1中新型有机酸的红外光谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

根据本发明一优选实施方式，一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括：

1）一个含有

2）一个含有增敏剂的容器，将增敏剂配制成增敏剂水溶液；

3）指定装患者呼气的测试瓶；

4）用于向测试瓶呼气的细管。

本发明的另一目的是提供一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，其步骤包括：

（a）将增敏剂配制成增敏剂水溶液，并服用一剂

（b）采用向测试瓶呼气的细管，并利用测试瓶收集患者呼出的气体；首先进行长呼气，不收集前部分呼出的气体，仅仅收集后部分呼出的气体。

进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂水溶液的制备方法为：

将增敏剂、碳酸钠、香料、甜味剂置于去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.2~2.8的增敏剂水溶液。

更进一步地，根据本发明一实施方式，增敏剂为1.5~4.5g、碳酸钠为0.075~0.15g、香料为0.025~0.045g、甜味剂为0.035~0.065g、去离子水为100~200g。

进一步地，根据本发明一实施方式，在新型有机酸的制备方法中，按重量份计，无水醋酸钠为2.0~3.5份、醋酸酐为8~15份、6-羟基苯并吡喃-3-甲醛为2.5~4.5份、去离子水为50~100份、氢氧化钠溶液为20~40份。

进一步地，根据本发明一实施方式，在新型有机酸的制备方法中，氢氧化钠溶液的浓度为5~10wt%。

进一步地，根据本发明一实施方式，在新型有机酸的制备方法中，加热反应温度为125~150℃，反应时间为4~8h。

以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：

实施例1：

一种新型有机酸的制备方法为：

按重量份计，将2.5份无水醋酸钠、10份醋酸酐与3份6-羟基苯并吡喃-3-甲醛置于三口烧瓶中，在搅拌作用下，并利用油锅加热至135℃反应6h，旋蒸除去溶剂，加入60份去离子水使醋酸钠溶解，过滤，用去离子水洗涤，并用氯仿作为溶剂进行重结晶，加入25份浓度为7.5wt%的氢氧化钠溶液进行水解，用浓度为5wt%的稀硫酸调节体系pH至5.5，抽滤，用去离子水洗涤，并用热水进行重结晶，得到新型有机酸，其结构式为

采用核磁共振波谱仪（VNMRS600型）对其进行核磁表征，

实施例2：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括：

1）一个含有

2）一个含有2.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中实施例1中的新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.25：1，将增敏剂配制成增敏剂水溶液；

3）指定装患者呼气的测试瓶；

4）用于向测试瓶呼气的细管。

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法为：

将2.5g增敏剂、0.1g碳酸钠、0.03g柠檬香料（购自江苏采薇生物科技有限公司）、0.045g阿斯巴甜置于150g去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.5的增敏剂水溶液。

实施例3：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：1）一个含有

实施例4：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：2）一个含有4.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中实施例1中的新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.25：1，将增敏剂配制成增敏剂水溶液。

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法为：

将4.5g增敏剂、0.1g碳酸钠、0.03g柠檬香料（购自江苏采薇生物科技有限公司）、0.045g阿斯巴甜置于150g去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.5的增敏剂水溶液。

实施例5：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：2）一个含有2.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中实施例1中的新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.55：1，将增敏剂配制成增敏剂水溶液。

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法同实施例2。

实施例6：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：2）一个含有2.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中仅包括实施例1中的新型有机酸，将增敏剂配制成增敏剂水溶液。

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法同实施例2。

实施例7：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：2）一个含有2.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中仅包括柠檬酸，将增敏剂配制成增敏剂水溶液。

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法同实施例2。

为了进一步提高检测试剂盒的检测准确性与敏感性，在增敏剂水溶液的制备过程中添加0.015~0.035g 11-酮基-beta-乳香酸；其与增敏剂水溶液的其他成分相互作用，在使用小剂量含有

实施例8：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例2不同的是，检测试剂盒中包括：2）一个含有2.5g增敏剂的扁囊，其中增敏剂中实施例1中的新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.25：1，将增敏剂配制成增敏剂水溶液；

本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法为：

将2.5g增敏剂、0.1g碳酸钠、0.03g柠檬香料（购自江苏采薇生物科技有限公司）、0.02g 11-酮基-beta-乳香酸、0.045g阿斯巴甜置于150g去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.5的增敏剂水溶液。

实施例9：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例6不同的是，本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法为：

将2.5g增敏剂、0.1g碳酸钠、0.03g柠檬香料（购自江苏采薇生物科技有限公司）、0.02g 11-酮基-beta-乳香酸、0.045g阿斯巴甜置于150g去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.5的增敏剂水溶液。

实施例10：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，与实施例7不同的是，本实施例中，增敏剂水溶液的制备方法为：

将2.5g增敏剂、0.1g碳酸钠、0.03g柠檬香料（购自江苏采薇生物科技有限公司）、0.02g 11-酮基-beta-乳香酸、0.045g阿斯巴甜置于150g去离子水中溶解完全，并搅拌混合均匀，得到pH值为2.5的增敏剂水溶液。

实施例11：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，其步骤包括：

（a）使用实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒；将增敏剂配制成增敏剂水溶液，并服用一剂

（b）采用向测试瓶呼气的细管，并利用测试瓶收集患者呼出的气体；首先进行长呼气，不收集前部分呼出的气体，仅仅收集后部分呼出的气体。

实施例12：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例3中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例13：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例4中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例14：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例5中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例15：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例6中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例16：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例7中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例17：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例8中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例18：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例9中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

实施例19：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为实施例10中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

对比例1：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括：

1）一个含有

2）指定装患者呼气的测试瓶；

3）用于向测试瓶呼气的细管。

对比例2：

一种幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法，与实施例11不同的是：步骤（a）中，将实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒替换为对比例1中的幽门螺杆菌检测试剂盒。

试验例：

1. 红外结构表征

采用傅立叶红外光谱仪（Nicolet67型号）对实施例1中制得的新型有机酸进行红外表征，扫描范围为500-4000cm

图1为实施例1中新型有机酸的红外光谱图；由图1可以看出，在3400cm

2. 幽门螺杆菌检测试剂盒测试结果

（1）实验对象：50名幽门螺杆菌感染的患者（近期不使用制酸剂、抗Hp药物等），DOB≥2.4‰为阳性，DOB＜2.4‰为阴性；首先采用市购标准

表1

由表1可以看出，实施例11-14中Kappa指数不低于0.8，AUC高于0.9，说明使用的幽门螺杆菌检测试剂盒的检测结果与市购标准幽门螺杆菌检测试剂盒的一致性好，且检测准确性较高；对比实施例11与对比例2，实施例11中Kappa指数与AUC均高于对比例2，且实施例11中使用的幽门螺杆菌检测试剂盒中的

另外，对比实施例11与实施例15-16，实施例11中Kappa指数与AUC均高于实施例15-16，说明本发明采用6-羟基苯并吡喃-3-甲醛与醋酸酐制得的新型有机酸作为增敏剂的成分，将其与含

由表1还可以看出，实施例17中Kappa指数高于0.93，AUC高于0.95，对比实施例11与实施例17，实施例15与实施例18，实施例16与实施例19，实施例17中Kappa指数与AUC均高于实施例11，实施例18中Kappa指数与AUC均高于实施例15，实施例19中Kappa指数与AUC均高于实施例16，说明在增敏剂水溶液中添加11-酮基-beta-乳香酸，其进一步提高了幽门螺杆菌检测试剂盒的检测精确度与准确性。

（2）增敏剂成分对幽门螺杆菌检测试剂盒的影响

对于实施例2中的幽门螺杆菌检测试剂盒改变增敏剂成分中新型有机酸与柠檬酸的重量比，即2.5g增敏剂中实施例1中的新型有机酸和柠檬酸的重量比分别为0.15：1、0.25：1、0.35：1、0.45：1、0.55：1、0.65：1，并分为记为试验组A1、试验组A2、试验组A3、试验组A4、试验组A5、试验组A6；其中幽门螺杆菌检测试剂盒的使用方法均与实施例11相同，与市购标准

表2

由表2可以看出，试验组A2-试验组A5中Kappa指数高于0.82，AUC高于0.91，高于试验组A1、试验组A6，说明在幽门螺杆菌检测试剂盒添加的增敏剂中新型有机酸和柠檬酸的重量比为0.25~0.55：1时，得到的幽门螺杆菌检测试剂盒具有更为优良的检测精确度与准确性。

（3）实验对象：50名近期使用制酸剂、抗Hp药物的幽门螺杆菌感染的患者；其他测试与分析方法同（1）。

表3

由表3可以看出，对使用过制酸剂、抗Hp药物的幽门螺杆菌感染的患者进行检测，实施例11-14中Kappa指数高于0.7，AUC高于0.83，说明使用本发明制得的幽门螺杆菌检测试剂盒的检测结果与市购标准幽门螺杆菌检测试剂盒的一致性较好，具有较高的检测精确度，且具有一定的检测准确性，即药物的使用对幽门螺杆菌检测试剂盒的检测精确度与准确性影响不大；对比实施例11与对比例2，实施例11中Kappa指数与AUC均高于对比例2，且实施例11中使用的幽门螺杆菌检测试剂盒中的

由表3还可以看出，实施例17中Kappa指数高于0.82，AUC高于0.93，对比实施例11与实施例17，实施例15与实施例18，实施例16与实施例19，实施例17中Kappa指数与AUC均高于实施例11，实施例18中Kappa指数与AUC均高于实施例15，实施例19中Kappa指数与AUC均高于实施例16，说明在增敏剂水溶液中添加11-酮基-beta-乳香酸，其进一步提高了幽门螺杆菌检测试剂盒的检测精确度与准确性。

本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。