组蛋白甲基转移酶EZH2在促视神经髓鞘再生药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种组合物及其在促视神经髓鞘再生药物中的应用。

背景技术

近年来，中枢神经系统（central nervous system，CNS）脱髓鞘疾病发病率呈逐年上升趋势，是以多病灶、炎性脱髓鞘为主的一种自身免疫系统疾病，其常见疾病主要包括多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）、视神经脊髓炎（Neuromyelitis Optica，NMO）等。

CNS 脱髓鞘疾病的主要受累部位为髓鞘，髓鞘是一种生物被膜，包裹轴突，具有绝缘并加速电脉冲传导、确保神经元代谢供应等作用。少突胶质细胞（oligodendrocytecell，OLs）参与 CNS中的轴突髓鞘形成，确保跳跃式神经传导。髓鞘对 CNS 的发育成熟和神经组织的可塑性发挥至关重要的作用。髓鞘形成缺陷或损伤后髓鞘再生失败会导致各种神经发育障碍、智力障碍和自闭症谱系障碍。同时，髓鞘修复缺陷也是多发性硬化症和脑白质营养不良等神经退行性疾病的基础。髓鞘破坏及再生程度与疾病严重程度、治疗有效性均密切相关。目前，

CNS 脱髓鞘疾病的治疗是神经医学界的难点之一，进一步深入研究其病理、生理及发病机制，能为其治疗及改善预后寻求更好的方法。 视神经作为 CNS 的重要组成部分，一直是 CNS 损伤修复的重要研究对象。临床上视神经炎及视神经损伤均会产生典型的脱髓鞘病变。视神经炎是视神经的急性炎症，其特征是中央视力突然丧失和眼球运动疼痛。常与 MS 相关，患者通常通过治疗可以完全恢复视力，但也可能会发展为不可逆的视力丧失。目前，临床治疗主要集中于缓解神经炎症并降低脱髓鞘的发生率，但不能从根本上治愈。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中临床治疗主要集中于缓解神经炎症并降低脱髓鞘的发生率，但不能从根本上治愈的技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

EZH2在制备促进髓鞘修复的药物或治疗CNS脱髓鞘疾病药物中的应用。

本申请还提供了一种治疗CNS脱髓鞘疾病药物，包括AAV-EZH2和AAV-CNTF。

优选的，当所述药物用于早期促进OPCs初始分化时，所述药物还包括Montelukast。

优选的，当所述药物用于延迟清除小胶质细胞，促进OLs成熟时，所述药物还包括PLX3397。

本申请中明确了Ezh2基因在视神经髓鞘形成中的作用，明确 Ezh2基因对少突胶质前体细胞分化、成髓鞘等相关功能的影响；通过 Ezh2 基因条件性敲除小鼠视神经神经损伤模型、少突胶质细胞细胞及神经元共培养模型，从分子、细胞、组织及整体水平阐明Ezh2基因对中枢神经系统髓鞘形成与保持过程中的作用及 Ezh2基因对少突胶质细胞增殖、分化、成髓鞘功能的影响，为中枢神经系统脱髓鞘疾病提供新的分子靶点。拟通过AAV-EZH2联合治疗方案来促进视神经髓鞘再生，为中枢神经系统脱髓鞘后的髓鞘再生治疗提供新的策略。

附图说明

图1为本发明中EZH2 联合治疗方案促进视神经髓鞘再生的应用原理；

图2为10周龄野生型及Ezh2

图3为本发明实施例4中的相关附图，用于展示小鼠玻璃体内注射AAV- CNTF病毒后14天制备视神经夹伤模型，视神经夹伤后21天连续给予Montelukast和PLX3397联合治疗促进髓鞘再生，视神经夹伤后19天玻璃体内注射CTB555神经示踪剂，视神经夹伤后21天取材，郎飞氏结免疫荧光染色（Caspr，Ankyrin-G）和透射电镜结果提示Ezh2

图4 为本发明实施例4中的相关附图，用于展示在小鼠玻璃体内注射AAV-CNTF或AAV-Control病毒、视神经内AAV-EZH2后14天制备视神经夹伤模型，视神经夹伤后21天连续给予Montelukast和PLX3397联合治疗促进髓鞘再生，视神经夹伤后21天取材，透射电镜统计结果提示EZH2联合治疗组与各对照组相比视神经有髓神经纤维比例显著提高。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，以下结合具体实施例，对本发明作进一步地详细说明。

请参阅图1，本申请提供了Zeste基因增强子同源物2（Enhancerof zeste homolog2，EZH2）在制备促进髓鞘修复的药物或治疗CNS脱髓鞘疾病药物中的应用。

其中所述，EZH2是多梳抑制复合物2（polycomb repressive complex 2，PRC2）的核心亚基之一，具有组蛋白甲基转移酶活性，负责催化组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）。

本申请还提供了一种治疗CNS脱髓鞘疾病药物，包括AAV-EZH2和AAV-CNTF。

当所述药物用于早期促进少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursorcells, OPCs）初始分化时，所述药物还包括Montelukast。

当所述药物用于延迟清除小胶质细胞，促进少突胶质细胞（oligodendrocytecell，OLs）成熟时，所述药物还包括PLX3397。

以下结合具体实施例对本申请进行阐述：

实施例1：

EZH2 对视神经髓鞘形成的影响：

具体的，在OLs谱系中特异性敲除Ezh2基因（Ezh2fl/fl;Olig1-Cre小鼠，简称Ezh2cKO。请参阅图2，本实施例中已经获得中枢神经系统少突胶质细胞（OLs）中特异性敲除Ezh2基因的条件性敲除小鼠（Ezh2

实施例2：

视神经OLs 中EZH2功能缺失导致视神经髓鞘再生障碍。在夹伤前14天给予促轴突再生治疗方案AAV-CNTF，夹伤后21天内每天给予Montelukast和PLX3397联合治疗方案。通过郎飞氏结免疫荧光染色（Caspr，Ankyrin-G）和透射电镜结果提示Ezh2

请参阅图3，在小鼠玻璃体内注射AAV- CNTF病毒后14天制备视神经夹伤模型，视神经夹伤后21天连续给予Montelukast和PLX3397联合治疗促进髓鞘再生，视神经夹伤后19天玻璃体内注射CTB555神经示踪剂，视神经夹伤后21天取材，郎飞氏结免疫荧光染色（Caspr，Ankyrin-G）和透射电镜结果提示Ezh2

实施例3：

AAV-EZH2联合促髓鞘再生治疗方案对视神经夹伤后髓鞘再生的影响为促进视神经夹伤后髓鞘再生。在夹伤前14天给予促轴突再生治疗方案AAV-CNTF及促髓鞘再生AAV-EZH2，夹伤后21天内每天给予Montelukast和PLX3397联合治疗方案。成年小鼠视神经通过注射腺相关病毒在OLs中过表达Ezh2基因，通过透射电镜明确AAV-EZH2的联合治疗方案对视神经夹伤后髓鞘再生的影响。

请参阅图4，在野生型小鼠玻璃体内注射AAV-CNTF或AAV-Control病毒、视神经内AAV-EZH2后14天制备视神经夹伤模型，视神经夹伤后21天连续给予Montelukast和PLX3397联合治疗促进髓鞘再生，视神经夹伤后21天取材，透射电镜统计结果提示EZH2联合治疗组与各对照组相比视神经有髓神经纤维比例显著提高。

基于上述实施例，EZH2 作为组蛋白甲基转移酶，影响髓鞘相关蛋白的表达，对中枢神经系统视神经的髓鞘形成、维持及再髓鞘化起重要作用。