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抗微生物拟肽

文献发布时间：2023-06-19 19:28:50

本发明涉及具有抗微生物活性，特别是针对革兰氏阴性菌的拟肽。本发明的拟肽是如下所示的通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐，其中P和X是如下文所述的元素。本发明还涉及拟肽在治疗或预防细菌感染和与细菌感染相关的疾病中的治疗应用，以及拟肽对食品、化妆品、药物或其他含营养的物质中防腐或消毒的非治疗应用。此外，本发明提供了一种有效的合成方法，如果需要，可以通过该方法以平行文库形式制备这些化合物。此外，本发明的拟肽显示出改善的抗微生物活性、低的或无红细胞溶血以及降低的细胞毒性。

耐碳青霉烯的肠杆菌科(CRE)感染的治疗选择有限。更常显示出体外抗CRE活性的抗生素包括粘菌素、替加环素和磷霉素。然而，关于它们的有效性和临床经验的数据是有限的。还有更频繁的不良反应，治疗期间耐药性的快速发展，以及全球耐药性的增加。粘菌素经常用于治疗CRE感染，但在接受粘菌素治疗的CRE感染患者中可能会产生粘菌素耐药性。自2015年以来，可转移质粒介导的粘菌素抗性基因(mcr 1-5)的发现可以更容易地在细菌之间传播粘菌素抗性，这进一步增加了粘菌素抗性传播的风险(Giamarellou H.等，Antimicrob Agents Chemother.2013，57(5)，2388-90)。

最近批准的抗生素或处于后期开发阶段的抗生素都没有令人满意的CRE覆盖率。值得注意的是，新的β-内酰胺组合对产生金属-β-内酰胺酶(MBL)的生物体缺乏活性。头孢他啶/阿维巴坦(CAZ-AVI)是最常用的抗CRE新型抗生素，但没有针对MBL生物体的活性。此外，CAZ-AVI上市后不久，报道了在单独或与其他抗生素联合使用CAZ-AVI治疗期间产生了耐药性的CAZ-AVI耐药CRE菌株。在这些关注报告之后，ECDC于2018年6月12日发布了关于该问题的快速风险评估报告。新的氨基糖苷类普拉佐米星在处方信息中有安全警告(肾毒性、耳毒性、神经肌肉阻滞和胎儿危害)。

因此，持续需要开发可用于有效治疗CRE感染的抗生素。

天然抗菌肽坦纳定(thanatin)是一种21个残基诱导型昆虫防御肽(Fehlbaum P.等，Proc.Natl.Acad.SCl.USA 1996，93，1221-1225)，其靶向革兰氏阴性菌的脂多糖转运蛋白LptA，导致LPS转运和外膜(OM)生物合成受到抑制(Vetterli S.U.等，SCl.Adv.2018；4:eaau2634)。坦纳定(thanatin)有对抗耐碳青霉烯肠杆菌科的活性，包括泛耐药菌株。这些高度耐药的微生物可引起多种感染，包括复杂性尿路感染(cUTI)、复杂性腹腔内感染(clAI)、医院或呼吸机相关性肺炎(HAPNAP)或血流感染(BSI)。

本发明包括一类新的坦纳定(thanatin)衍生的拟肽，其具有17、18、或19个氨基酸或氨基酸衍生的残基，并显示出针对肠杆菌科的窄抗微生物谱。尽管与坦纳定(thanatin)相比它们的序列较短，但这些新型坦纳定(thanatin)衍生的拟肽令人惊讶地表现出改善的抗微生物活性、低或无红细胞溶血以及降低的细胞毒性。

在第一方面中，本发明提供了通式(I)的拟肽化合物，或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物，

(I)

其中，s＝0且t＝0；或s＝1且t＝0；或s＝1且t＝1；并且

其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

或Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、HgI、

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、HgI、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

其中，

条件是在P

第一方面的一个优选实施方式涉及一种化合物，其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，

条件是在P

第一方面的更优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)胍)、Pro((4R)NH

Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Cys、Pen、

Asp、或Glu；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Cys、Pen、

Asp、或Glu，

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Agb、Agp、Dab、Dap、Har、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Phe(4OCF

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，

条件是在P

第一方面的另一实施方式涉及一种化合物，其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Tyr(苯基)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Hyp、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，

条件是在P

第一方面的另一实施方式的优选实施方式涉及一种化合物，其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Tyr(苯基)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys,

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Dab、Dap、

Cys、Hcy、NMeCys、Pen、

Asp、Glu、或HgI；

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，

条件是在P

第一方面的另一实施方式的更优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝1，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、

其中，如果s＝1且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则X

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Pro((4R)NH

Hyp；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Cys、Pen、

Asp、或Glu；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Tyr(苯基)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Cys、Pen、

Asp、或Glu；

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys、alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Agb、Agp、Dab、Dap、Lys、Narg、Ndab、Nlys、Norn、Orn、Arg、NMeLys,

alloThr、Cit、Hgn、Hse、Leu((3R)OH)、Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、或Hgl；

Phe、His、Phe(3OH)、Phe(4F)、Trp(6Cl)、Trp、Tyr、4Thz、Phe(4(4羟基苯氧基))、Phe(4NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，

条件是在P

第一方面的具体实施方式涉及一种化合物，其中，

其中，如果s＝1且t＝0，则Lys的N端氨基可选地被胍基(Gua)取代以形成Gua-Lys；

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则Pro((4R)NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

其中，如果s＝1且t＝0，则Lys的N端氨基可选地被胍基(Gua)取代以形成Gua-Lys；

Hyp；

其中，如果s＝0且t＝0，则Pro((4R)NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的更特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

Gua-Pro((4R)NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的另一更特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的另一特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的甚至更特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

Gua-Hyp；

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的另一甚至更特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的另一甚至更特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

条件是在P

第一方面的最特别优选的实施方式涉及一种化合物，其中，所述化合物选自下组：

Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro-Val-Pro((4R)NH

Pro((4R)NH

Pro-Val-Pro((4R)NH

Ndab-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro((4R)NH

Ndab-Val-Pro((4R)NH

Ndab-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Val-Norn-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro-Val-Pro((4R)NH

Pro((4R)NH

Pro-Val-Pro((4R)NH

Pro((4R)NH

Ndab-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Val-Norn-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro((4R)NH

Pro-Val-Pro((4R)NH

Pro((4R)NH

Ndab-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Pro-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Sar-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Val-Nlys-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Val-Norn-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Gua-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Gua-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Gua-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Gua-Pro((4R)NH

双(2氨基乙基)Gly-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Arg-Thr-

双(2氨基乙基)Gly-Val-Pro((4R)NH

Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Ndab-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Norn-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Nlys-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Lys-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Pro((4R)NH

Norn-Pro((4R)NH

Nlys-Pro((4R)NH

Lys-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Norn-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Nlys-Pro((4R)NH

Norn-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Ndab-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Ndab-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Gua-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Arg-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro((4R)NH

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Arg-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-

Lys-Lys-DLys-Val-Pro-Ile-His-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-βGly-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Arg-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Pro-Val-Pro-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Sar-Val-Pro-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Arg-Sar-Val-Pro-Ile-Phe-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-

Lys-Gly-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Sar-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Gly-Gly-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Gly-Sar-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Sar-Sar-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Norn-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Ndab-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Nlys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Norn-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Ndab-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Narg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Nlys-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Norn-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Ndab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Nlys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Nlys-Thr-

Ndab-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro((4R)NH

Lys-Lys-Pro-Val-Pro((4R)NH

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Ile-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Cys-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-His-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Pro((4R)NH

Lys-Lys-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro((4R)NH

Lys-Lys-Hyp-Val-Hyp-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Ndab-Lys-Hyp-Val-Ndab-Ile-Thr-Tyr-Pen-Asn-Arg-Dab-Thr-

Lys-Lys-Pro((4R)NH

或其互变异构体、旋转异构体、盐、水合物或溶剂化物；

其中，P

第一方面的另一实施方式涉及化合物，其与式(I)的化合物相似，不同之处在于一个或多个原子被具有原子质量数或质量不同于通常在自然界中发现的原子质量数或质量的原子代替，例如，富含

出于清楚起见，注意到通式(I)的变量s和t不是相互独立的：s是0或1，t是0或1，条件是如果s是0，则t必须是0。换句话说：如果X

在第二方面中，本发明涉及根据第一方面的式(I)化合物的对映异构体。

以下是对应于普遍采用的惯例的氨基酸或其衍生物、或其残基的缩写列表，其适用于本发明的目的并在本文件中提及。

尽管对氨基酸或其衍生物进行了这种特定测定，但要注意的是，对于本领域技术人员来说，很明显这些氨基酸或其衍生物的衍生物，类似于相似的结构和物理化学性质，导致具有相似生物活性的功能类似物，因此仍然构成本发明要旨的一部分。

Ala AL-丙氨酸

Arg RL-精氨酸

Asn NL-天冬酰胺

Asp DL-天冬氨酸

Cys CL-半胱氨酸

Gln QL-谷氨酰胺

Glu EL-谷氨酸

Gly G甘氨酸

His HL-组氨酸

Ile IL-异亮氨酸

Leu LL-亮氨酸

Lys KL-赖氨酸

Met ML-甲硫氨酸

Phe FL-苯基丙氨酸

Pro PL-脯氨酸

Ser SL-丝氨酸

Thr TL-苏氨酸

Trp WL-色氨酸

Tyr YL-酪氨酸

Val VL-缬氨酸

2OHVal(S)-2-羟基-3-甲基丁酸

Ala(cPr)(S)-2-氨基-3-环丙基丙酸

Ala(四氢吡喃4基)(S)-2-氨基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)丙酸

Abu (S)-2-氨基丁酸

alloIle L-别异亮氨

βGly3-氨基丙酸

Cha (S)-2-氨基-3-环己基丙酸

Cpa (S)-2-氨基-3-环戊基丙酸

Cpg (S)-2-氨基-2-环戊基乙酸

Cyg (S)-2-氨基-2-环丙基乙酸

Dea (S)-2-氨基-3-乙基戊酸

Hle (S)-2-氨基-5-甲基己酸

Nle (S)-2-氨基己酸

OctGly(S)-2-氨基癸酸

Sar N-甲基甘氨酸

tBuGly(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸

tBuAla(S)-2-氨基-4,4-二甲基戊酸

NMeAlaN-甲基-L-丙氨酸

NMeValN-甲基-L-缬氨酸

Gua-Val N-脒基-L-缬氨酸

TMG-Val (S)-2-(N,N,N',N'-四甲基胍基)-丙酸

Nva (S)-2-氨基戊酸

Phe(3OH)(S)-2-氨基-3-(3-羟基苯基)丙酸

Phe(4F) (S)-2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酸

Phe(4OCF

Trp(6Cl)(S)-2-氨基-3-(6-氯-lH-吲哚-3-基)丙酸

Tyr(3Cl)(S)-2-氨基-3-(3-氯-4-羟基苯基)丙酸

Tyr(3F) (S)-2-氨基-3-(3-氟-4-羟基苯基)丙酸

Tyr(苯基) (S)-2-氨基-3-(4-苯氧基苯基)丙酸

4Thz(R)-噻唑烷-4-羧酸

Phe(4(4羟基苯氧基)) (S)-2-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)丙酸

Phe(4NH

Tyr(Me) (S)-2-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙酸

NtyrN-(4-羟基苄基)甘氨酸

NpheN-(苄基)甘氨酸

Agb (S)-2-氨基-4-胍基丁酸

Agp (S)-2-氨基-3-胍基丙酸

Dab (S)-2,4-二氨基丁酸

Dap (S)-2,3-二氨基丙酸

Har N6-氨基甲酰-L-赖氨酸

NargN-(3-胍基丙基)甘氨酸

NdabN-(2-氨基乙基)甘氨酸

NlysN-(4-氨基丁基)甘氨酸

NornN-(3-氨基丙基)甘氨酸

Orn (S)-2,5-二氨基戊酸

Pro((4R)胍(2S,4R)-4-胍基吡咯烷-2-羧酸

Pro((4R)NH

Pro((4S)NH

NMeLysN-甲基-L-赖氨酸

双(2氨基乙基)GlyN,N-双(2-氨基乙基)甘氨酸

alloThr L-别苏氨酸

Cit (S)-2-氨基-5-脲基戊酸

Hgn (S)-2,6-二氨基-6-氧代己酸

Hse L-高丝氨酸

Hyp (2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸

Leu((3R)OH) (2S,3R)-2-氨基-3-羟基-4-甲基戊酸

Hgl (S)-2-氨基己二酸

Pra L-炔丙基甘氨酸

Abu(4N

Hcy L-同型半胱氨酸

NMeCys甲基-L-半胱氨酸

Pen (R)-2-氨基-3-巯基-3-甲基丁酸

D-异构体的缩写，例如，

缩写“Gua-”后接如上所列出的氨基酸或氨基酸残基的缩写，对应于N-脒基化氨基酸或氨基酸残基，其N-末端氨基被胍基(Gua)取代，例如：

Gua-GluN-脒基-L-谷氨酸

(S)-2-胍基-戊二酸

缩写“TMG-”后跟如上所列的氨基酸或氨基酸残基的缩写，对应于具有被N,N,N'N'-四甲基胍基(TMG)取代的N端氨基的氨基酸或氨基酸残基，例如：

TMG-Trp(S)-2-(N,N,N',N'-四甲基胍基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸。

在第三方面中，本发明涉及包含根据第一方面的化合物或化合物的混合物和至少一种药学惰性载体的药物组合物。

在第三方面的一个实施方式中，药物组合物是适合口服、局部、透皮、注射、口腔、经粘膜、直肠、肺部或吸入给药的形式。在第三方面的另一实施方式中，所述药物组合物的形式为片剂、糖衣丸、胶囊剂、溶液剂、液体剂、凝胶剂、膏剂、乳膏剂、软膏剂、糖浆剂、浆剂、悬浮液、喷雾剂、雾化器、气雾剂或栓剂。

在第四方面中，本发明涉及根据第一方面的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

在第五方面中，本发明涉及根据第一方面的式(I)化合物或其药学上可接受的盐用作药物。

在第六方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物用作具有抗生素活性的药物活性物质。

在第七方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防感染或与此类感染相关的疾病；特别是与呼吸系统疾病、或皮肤或软组织疾病、或胃肠道疾病、或眼部疾病、或耳部疾病、或CNS疾病、或骨骼疾病、或心血管疾病、或泌尿生殖系统疾病相关的感染，或院内感染，或导管相关和非导管相关感染，或尿路感染，或血流感染；或感染引起的败血。

在第八方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物作为食品、化妆品、药物和/或其他含营养的物质的消毒剂或防腐剂的应用。

在第九方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物作为具有抗生素活性的药物活性物质的应用。

在第十方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物或根据第三方面的组合物用于治疗或预防感染或与此类感染相关的疾病的应用；特别是与呼吸系统疾病、或皮肤或软组织疾病、或胃肠道疾病、或眼部疾病、或耳部疾病、或CNS疾病、或骨骼疾病、或心血管疾病、或泌尿生殖系统疾病相关的感染，或院内感染，或导管相关和非导管相关感染，或尿路感染，或血流感染；或感染引起的败血。

在第十一方面中，本发明涉及根据第一方面的化合物或根据第三方面的组合物作为食品、化妆品、药物和/或其他含营养的物质的消毒剂或防腐剂的应用。

在第十二方面中，本发明涉及一种治疗感染或与感染相关的疾病或病症的方法，所述感染尤其是诸如医院感染、导管相关和非导管相关感染、尿路感染、血流感染，所述与感染相关的疾病或病症尤其是诸如呼吸机相关性肺炎(VAP)、呼吸机相关性细菌性肺炎(VABP)、医院获得性肺炎(HAP)、医院获得性细菌性肺炎(HABP)、医疗保健相关性肺炎(HCAP)、囊性纤维化、肺气肿、哮喘、肺炎、流行性腹泻、坏死性小肠结肠炎、盲肠炎、胃肠炎、胰腺炎、角膜炎、眼内炎、耳炎、脑脓肿、脑膜炎、脑炎、骨软骨炎、心包炎、附睾炎、前列腺炎、尿道炎、败血症等疾病或病症；手术伤口、外伤、烧伤，所述方法包括以下步骤：

向需要其的受试者施用药学上可接受量或治疗活性量的根据第一方面的化合物或化合物的混合物或根据第三方面的治疗活性量的药物组合物。

在第十三方面中，本发明涉及一种用于制备根据第一方面的化合物的方法，其包括以下步骤：

(a)将适当官能化的固体支持物与氨基酸的适当N-保护的衍生物偶联，该氨基酸在所需的终产物中位于P

(b)从由此获得的产物中去除N-保护基团；

(c)将由此获得的产物与该氨基酸的适当N-保护的衍生物偶联，该氨基酸在所需的终产物中位于P

(d)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，这些氨基酸在所需的终产物中位于P

(e)可选选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护，并化学转化由此释放的反应性基团；

(f)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，这些氨基酸在所需的终产物中位于P

如果s＝0且t＝0，

(g)进行包括以下的步骤：

(g1)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，或可选地羟基酸的适当保护的衍生物，进一步实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，所述氨基酸或羟基酸在所需的终产物中位于X

(g2)可选选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护，并化学转化由此释放的反应性基团；

(g3)可选地，除去X

如果s＝1且t＝0，

(h)进行包括以下的步骤：

(h1)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，进一步实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，所述氨基酸在所需的终产物中位于X

(h2)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，或可选地羟基酸的适当保护的衍生物，进一步实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，所述氨基酸或羟基酸在所需的终产物中位于X

(h3)可选选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护，并化学转化由此释放的反应性基团；

(h4)可选地，除去X

如果s＝1且t＝1，

(i)进行包括以下的步骤：

(i1)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，进一步实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，所述氨基酸在所需的终产物中位于X

(i2)使用氨基酸的适当N-保护的衍生物，或可选地羟基酸的适当保护的衍生物，进一步实施与步骤(b)和(c)基本对应的步骤，所述氨基酸或羟基酸在所需的终产物中位于X

(i3)可选选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护，并化学转化由此释放的反应性基团；

(i4)可选地，除去X

(j)将由此获得的产物从所述固体支持物上分离；

(k)可选选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护，并化学转化由此释放的反应性基团；

(l)除去存在于残基链的任何成员的官能团上的任何保护基团，以及可选的可能另外存在于分子中的任何保护基团；

(m)可选地对分子中存在的一个或多个反应性基团进行额外的化学转化；

(n)如果需要，除去存在于残基链的任何成员的官能团上的任何保护基团，以及可选的可能另外存在于分子中的任何保护基团；和

(o)可选地将由此获得的产物转化为药学上可接受的盐；或者

可选地将由此获得的药学上可接受或不可接受的盐转化为相应的游离式(I)化合物；或者

可选地将由此获得的药学上可接受的或不可接受的盐转化为不同的药学上可接受的盐。

上文定义的化合物的对映异构体也构成本发明的一部分。这些对映异构体可以通过改进上述方法制备，其中使用所有手性原料的对映异构体。

本发明的方法可以有利地作为平行阵列合成进行以产生本发明的拟肽文库。这种平行合成允许人们以中等到高产率和确定的纯度获得大量(通常为12至576种，通常为96种)如上所述的化合物阵列，从而最大限度地减少二聚和多聚副产物的形成。

官能化固体支持物方便地衍生自聚苯乙烯，与优选1-5％二乙烯基苯交联；涂有聚乙二醇间隔物(Tentagel

固相支持物通过接头官能化，即双官能间隔分子，其一端包含用于连接到固体支持物的锚定基团，另一端包含用于后续化学转化和切割程序的选择性可切割官能团。出于本发明的目的，使用了两种类型的接头：

1型接头设计用于在酸性条件下释放酰胺基团(H.Rink,Tetrahedron Lett.1987,28,3783-3790)。这种接头形成氨基酸羧基的酰胺；由此类接头结构官能化的树脂的实例包括4-[(((2,4-二甲氧基苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧基乙酰氨基)氨基-甲基]PS树脂、4-[(((2,4-二甲氧基苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧基乙酰氨基)-氨基甲基]-4-甲基-苄基胺PS树脂(Rink酰胺MBHA PS树脂)、和4-[(((2,4-二甲氧基-苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧基乙酰氨基)氨基甲基]苄基胺PS-树脂(Rink酰胺BHA PS树脂)、和Fmoc-氨基-黄嘌呤-3-基氧基PS树脂、Sieber接头树脂)。优选地，支撑体衍生自聚苯乙烯，其与二乙烯基苯，最优选1-5％二乙烯基苯交联，并通过4-(((2,4-二甲氧基-苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧基乙酰氨基)接头官能化。

2型接头设计为最终在酸性条件下释放羧基。这种接头与氨基酸的羧基形成酸不稳定的酯，通常是酸不稳定的苄酯、二苯甲基酯和三苯甲基酯；此类接头结构的实例包括2-甲氧基-4-羟甲基苯氧基(Sasrin

当作为平行阵列合成进行时，本发明的方法可以有利地如下文所述进行，但是在需要合成本发明的单一化合物的情况下，本领域技术人员将立即明白如何修改这些程序。

将等于通过平行方法合成的化合物总数的数量的反应容器(通常为12至576，通常为96)装载10至1000mg，优选40mg的合适的官能化固体载体，优选1至5％交联聚苯乙烯。

使用的溶剂必须能够使树脂溶胀，其包括但不限于二氯甲烷(DCM)、二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二噁烷、甲苯、四氢呋喃(THF)、乙醇(EtOH)、三氟乙醇(TFE)、异丙醇等。含有极性溶剂作为至少一种组分的溶剂混合物(例如，20％TFE/DCM、35％THF/NMP)有利于确保树脂结合肽链的高反应性和溶剂化(G.B.Fields，C.G.Fields，J.Am.Chem.Soc.1991,113,4202-4207)。

随着在温和酸性条件下释放C端羧酸基团，不影响侧链中保护官能团的酸不稳定基团的各种接头的开发，受保护肽片段的合成取得了相当大的进展。2-甲氧基-4-羟基苄醇衍生的接头(Sasrin

氨基酸及其残基的合适保护基例如是，

-用于氨基(例如也存在于赖氨酸的侧链中)

Cbz苄氧羰基

Boc叔丁氧羰基

Fmoc 9-芴基甲氧基羰基

Alloc烯丙氧基羰基

Teoc 三甲基甲硅烷基乙氧羰基

Tcc三氯乙氧羰基

Nps邻硝基苯磺酰基

Trt三苯基甲基或三苯甲基

ivDe l-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-l-亚基)-3-甲基丁基；

-对于羧基(例如也存在于天冬氨酸和谷氨酸的侧链中)，通过与醇组分转化为酯

tBu叔丁基

Bn 苄基

Me 甲基

Ph 苯基

Pac苯甲酰甲基

烯丙基

Tse三甲基甲硅烷基乙基

Tce三氯乙基

Dmab 4-N-(l-[二甲基-2,6-二氧亚环己基]-3-甲基丁基)-氨基苄基；

2-PhiPr2-苯基-异丙基；

-对于胍基(例如存在于精氨酸的侧链中)

Pmc 2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基

Ts甲苯磺酰基(即对甲苯磺酰基)

Cbz 苄氧羰基

Pbf 五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基

- 和对于羟基(例如存在于苏氨酸和丝氨酸的侧链中)

tBu 叔丁基

Bn苄基

Trt 三苯甲基

Alloc 烯丙氧基羰基。

9-芴基甲氧基羰基-(Fmoc)-保护的氨基酸衍生物优选用作构建本发明的拟肽的结构单元。对于脱保护，即Fmoc基团的切割，可以使用20％哌啶的DMF溶液或2％DBU/2％哌啶的DMF溶液以及25％六氟异丙醇的CH

反应物的量，即氨基酸衍生物的量，通常为1至20当量(eq)，基于最初称入反应管中的官能化固体支持物的毫当量/克(meq/g)负载(对于聚苯乙烯树脂，通常为0.1至2.85meq/g)。如果需要，可以使用额外当量的反应物来驱动反应在合理的时间内完成。优选的工作站(但不限于此)是Protein Technologies'Symphony X和MultiSynTech's-Syro合成仪，后者在完全保护的线性肽从固体支持物上分离的过程中额外配备了一个转移单元和一个储存盒。所有合成器都能够提供受控环境，例如，如果需要，反应可以在不同于室温的温度以及惰性气体气氛下完成。

酰胺键的形成需要激活α-羧基以进行酰化步骤。当通过常用的碳二亚胺(如二环己基碳二亚胺(DCC,Sheehan&Hess,J.Am.Chem.Soc.1955,77,1067-1068)或二异丙基碳二亚胺(DIG,Sarantakis等Biochem.Biophys.Res.Commun.1976,73,336-342))进行激活时，所得二环己基脲和二异丙基脲分别是不溶的，并且分别溶于通常使用的溶剂。在碳二亚胺方法的变体中，1-羟基苯并三唑(HOBt，

由于接近定量的偶联反应是关键的，因此需要有实验证据来证明反应的完成。茚三酮试验(Kaiser等，Anal.Biochemistry 1970，34，595)和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)试验(Hancook W.S等，Anal.Biochem 1976，71，260)，其中对树脂结合肽的等分试样的阳性比色反应定性地表明伯胺的存在，可以在每个偶联步骤后轻松快速地进行。对于仲胺检测，例如脯氨酸衍生物，可以使用四氯苯醌测试(Vojkovsky T.，Pept.Res.1995，68，236)。当Fmoc发色团与碱一起释放时，Fmoc化学允许分光光度法检测Fmoc发色团(Meienhofer等，Int.J.Peptide Protein Res.1979，13，35-42)。

通过反复暴露于纯溶剂，将每个反应容器内的树脂结合中间体洗掉过量的残留试剂、溶剂和副产物。

洗涤程序重复最多约30次(优选约5次)，通过诸如TLC、GC、LC-MS或检查洗涤物的方法监测试剂、溶剂和副产物去除的效率。

上述在反应孔内使树脂结合的化合物与试剂反应然后去除过量试剂、副产物和溶剂的过程在每次连续转化中重复，直到获得最终的树脂结合的完全保护的线性肽。

在这种完全保护的线性肽从固体支持物上分离之前，如果需要，可以选择性地使分子中存在的一个或多个受保护的官能团脱保护并适当地取代由此释放的反应基团。为此，所讨论的官能团必须首先受到保护基团的保护，该保护基团可以选择性地去除而不影响存在的剩余保护基团。Alloc(烯丙氧基羰基)是此类氨基保护基团的一个实例，它可以被选择性地去除，例如通过DCM/DMSO中的Pd°和二甲基巴比妥酸(DMBA)，而不影响分子中存在的剩余保护基团，如Fmoc。然后可以用适合于进一步官能化或使用成熟的内酰胺桥使固体支持物上的肽环化的试剂处理由此释放的反应基团。所述桥是通过将例如2,4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸和赖氨酸的带氨基侧链分别与位于通过酰胺键形成的结构中的相对位置的谷氨酸和天冬氨酸残基的羧基侧链连接起来形成的。侧链氨基侧链的优选保护基是烯丙氧羰基(alloc)，天冬氨酸和谷氨酸烯丙基酯的侧链羧基(烯丙基)。例如，通过在无水DCM和10当量DMSO中的二甲基巴比妥酸中应用0.2当量四(三苯基膦)钯(0)(10mM)，在树脂上组装线性肽后，可以在固体支持物上形成内酰胺桥，以选择性地从待连接的氨基酸残基侧链的氨基和羧基官能团中去除配位保护基和氨基保护基。重复上述程序后，通过添加4当量的DIPEA的NMP溶液，随后在添加2当量的PyBOP的DMF溶液或使用2当量的Oxyma和4当量的DIG的DCM溶液，在固体支持物上形成内酰胺桥。

最后，在支持合成(包括延伸和修饰，例如N末端官能化或环化)之后，可以使用95％TFA、2.5％H

对于根据通式(I)的本发明的某些化合物，需要额外的合成步骤。这些转化可以应用于完全保护或部分脱保护的线性或环状肽，连接到固体支持物或已经从固体支持物释放，或应用于最终脱保护的分子。

除了上述的内酰胺桥之外，已知有多种方法可以形成链间连接，包括通过以下描述的那些：J.P.Tam等，Synthesis 1979，955-957；J.M.Stewart等，Solid Phase PeptideSynthesis，第2版，Pierce Chemical Company，Rockford，IL，1984；A.K.Ahmed等，J.Biol.Chem.1975，250，8477-8482；和M.W.Pennington等，Peptides，第164-166页，Giralt和Andreu编，ESCOM Leiden，The Netherlands，1990；C.E.Schafmeister等，J.Am.Chem.Soc.2000，122，5891。

广为人知的连接是二硫桥，例如由半胱氨酸、同型半胱氨酸或青霉胺(Pen)形成。

最近，引入了另一种基于含1,4-二取代的1,2,3-三唑的烷二基的链间连接(铜(I)-催化的炔烃-叠氮化物环加成(CuAAC)“点击”反应)。该连接是通过例如L-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基侧链的ω-炔基，和例如(S)-2-氨基-4-叠氮基丁酸的氨基酸残基侧链的ω-叠氮基之间的1,3-偶极环加成反应获得的，两个残基位于结构中的相反位置。这种环加成在铜(I)的存在下是有利的。例如，这种含三唑桥的形成是通过在含有五水硫酸铜(II)(CUSO

根据其纯度，按照上述程序获得的最终产品可直接用于生物测定，或必须进一步纯化，例如通过制备型HPLC。

此后，如果需要，可以将如此获得的完全脱保护的产物转化为药学上可接受的盐，或将如此获得的药学上可接受的或不可接受的盐转化为相应的游离化合物或不同的药学上可接受的盐。这些操作中的任何一个都可以通过本领域公知的方法进行。

通常，本发明的肽衍生物的结构单元可以根据文献方法合成，这些方法是本领域技术人员已知的或可商购的。所有其他相应的氨基酸已被描述为未保护或Boc-或Fmoc-保护的外消旋体、(D)-或(L)-异构体。应当理解的是，未保护的氨基酸结构单元可以通过标准保护基操作容易地转化为本发明所需的相应的Fmoc保护的氨基酸结构单元。描述合成α-氨基酸的一般方法的综述包括：R.Duthaler，Tetrahedron(报道)1994，349，1540-1650；R.M.Williams，"Synthesis of optically activeα-amino acids"，Tetrahedron OrganicChemistry Series，第7卷，J.E.Baldwin，P.D.Magnus(编)，Pergamon Press.，Oxford1989。合成与本发明相关的光学活性α-氨基酸的一种特别有用的方法包括使用水解酶的动力学拆分(M.A.Verhovskaya，LA.Yamskov，Russian Chem.Rev.1991，60，1163-1179；R.M.Williams，"Synthesis of optically activeα-amino acids"，Tetrahedron OrganicChemistry Series，第7卷，J.E.Baldwin，P.D.Magnus(编)，Pergamon Press.，Oxford1989，第7章，第257-279页)。使用水解酶的动力学拆分涉及氨肽酶或腈水解酶对酰胺和腈的水解、酰基转移酶对N-酰基的切割以及脂肪酶或蛋白酶对酯的水解。有据可查的是，某些酶会特异性产生纯(L)-对映体，而其他酶会产生相应的(D)-对映体(例如：R.Duthaler，Tetrahedron Report 1994，349，1540-1650；R.M.Williams，"Synthesis of opticallyactiveα-amino acids"，Tetrahedron Organic Chemistry Series，第7卷，J.E.Baldwin，P.D.Magnus(编)，Pergamon Press.，Oxford 1989)。

本发明的拟肽可用于广泛的应用，以抑制微生物的生长或杀死微生物，从而在人类或由于其相似的病因学而在其他哺乳动物中产生所需的治疗效果。特别是，它们可用于抑制或杀死革兰氏阴性菌的生长，特别是肠杆菌科，甚至更特别是肺炎克雷伯氏菌和/或大肠杆菌。

它们可用作例如食品、化妆品、药物和其他含营养的物质的消毒剂或防腐剂。本发明的拟肽还可用于治疗或预防与植物和动物中的微生物感染相关的疾病。

为了用作消毒剂或防腐剂，拟肽可以单独，作为几种拟肽的混合物或与其他抗微生物剂组合添加到所需材料中。

本发明的拟肽可用于治疗或预防感染或与此类感染相关的疾病，特别是与疾病相关的由革兰氏阴性菌引起的院内感染，诸如呼吸机相关性肺炎(VAP)、医院获得性肺炎(HAP)、医疗保健相关性肺炎(HCAP)；导管相关和非导管相关感染，诸如尿路感染(UTI)或血流感染(BSI)；与呼吸系统疾病有关的感染，诸如囊性纤维化、肺气肿、哮喘或肺炎；与皮肤或软组织疾病相关的感染，诸如手术伤口、外伤或烧伤；与胃肠道疾病相关的感染，诸如流行性腹泻、坏死性小肠结肠炎、盲肠炎、胃肠炎或胰腺炎；与眼部疾病相关的感染，诸如角膜炎和眼内炎；与耳部疾病相关的感染，诸如中耳炎；与中枢神经系统疾病相关的感染，诸如脑脓肿和脑膜炎或脑炎；与骨病相关的感染，诸如骨软骨炎和骨髓炎；与心血管疾病相关的感染，诸如心内膜炎和心包炎；或与泌尿生殖系统疾病相关的感染，诸如附睾炎、前列腺炎和尿道炎。它们可以单独给药，作为几种肽模拟物的混合物，与其他抗微生物剂或抗生素剂，或抗癌剂，或抗病毒剂(例如抗HIV)剂组合，或者与其他药物活性剂组合。拟肽可以本身或作为药物组合物施用。

本发明的拟肽可以本身或可以与本领域熟知的载体、稀释剂或赋形剂一起作为合适的制剂施用。

包含本发明的拟肽的药物组合物可以通过常规的混合、溶解、造粒、包衣片剂制造、研磨、乳化、包封、包埋或冻干工艺来制造。药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂以常规方式配制，这些促进剂将活性拟肽加工成可药用的制剂。正确的配方取决于所选择的施用方法。

对于局部施用，本发明的拟肽可以配制成如本领域所熟知的溶液、凝胶、软膏、乳膏、悬浮液等。

全身制剂包括那些设计用于注射施用的制剂，例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射，以及设计用于透皮、透粘膜、口服或肺部施用的那些。

对于注射，本发明的拟肽可以配制在适当的溶液中，优选在生理相容的缓冲液中，诸如Hink's溶液、Ringer's溶液、或生理盐水缓冲液。溶液可含有配制剂，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，本发明的拟肽可以是粉末形式，用于在使用前与合适的载体(例如无菌无热原水)组合。

对于经粘膜施用，适合待渗透屏障的渗透剂用于本领域已知的制剂中。

对于口服施用，可以通过将本发明的活性拟肽与本领域熟知的药学上可接受的载体组合来容易地配制化合物。这样的载体使得本发明的拟肽能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆剂、混悬剂等，以供待治疗的患者口服摄取。对于口服制剂，诸如散剂、胶囊剂和片剂，合适的赋形剂包括填充剂，如糖，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；造粒剂；和结合剂。如果需要，可加入崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠。如果需要，固体剂型可以使用标准技术进行包糖衣或包肠衣。

对于口服液体制剂，例如混悬剂、酏剂和溶液剂，合适的载体、赋形剂或稀释剂包括水、乙二醇、油类、醇类等。另外，可以加入调味剂、防腐剂、着色剂等。

对于口腔施用，组合物可以采用通常配制的片剂、锭剂等的形式。

对于吸入施用，本发明的拟肽可方便地以来自加压包装或雾化器的气溶胶喷雾形式递送，并使用合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供阀门以递送计量的量来确定。胶囊和药筒，例如用于吸入器或吹入器的明胶可以配制为含有本发明的拟肽和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

所述化合物也可以与适当的栓剂基质(如可可脂或其他甘油酯)一起配制成直肠或阴道组合物，如栓剂。

除上述制剂外，本发明的拟肽还可以配制为储库制剂。此类长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射施用。为了制造这种储库制剂，本发明的拟肽可以用合适的聚合物或疏水材料(例如作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂，或作为微溶盐来配制。

此外，可以使用其他药物递送系统，例如本领域熟知的脂质体和乳剂。也可以使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。此外，本发明的拟肽可以使用缓释系统递送，如包含治疗剂的固体聚合物的半透性基质(例如，用于涂层支架)。已经建立了多种缓释材料并且为本领域技术人员所熟知。根据其化学性质，缓释胶囊可能会释放化合物数周至超过100天。根据治疗剂的化学性质和生物稳定性，可以采用额外的蛋白质稳定策略。

由于本发明的拟肽可包含带电荷的残基，因此它们可以本身或作为药学上可接受的盐包含在任何上述制剂中。与相应的游离形式相比，药学上可接受的盐往往更易溶于水溶剂和其他质子溶剂。

本发明的拟肽或其组合物通常以有效实现预期目的的量使用。应当理解的是，使用的量将取决于具体应用。

例如，为了用作消毒剂或防腐剂，将抗微生物有效量的本发明拟肽或其组合物应用或添加到要消毒或防腐的材料中。抗微生物有效量是指本发明的拟肽或其组合物抑制目标微生物种群生长或致死的量。虽然抗微生物有效量将取决于具体应用，但为了用作消毒剂或防腐剂，通常以相对低的量将本发明的拟肽或其组合物添加或施用至待消毒或防腐的材料。通常，本发明的拟肽包含小于约5重量％的消毒剂溶液或所要防腐的材料，优选小于1重量％，更优选小于0.1重量％。普通技术人员将能够确定用于特定应用的本发明的特定拟肽的抗微生物有效量而无需过度实验，例如使用实施例中提供的体外测定的结果。

为了用于治疗或预防微生物感染或与此类感染相关的疾病，本发明的拟肽或其组合物以治疗有效量施用或应用。治疗有效量是指有效改善症状，或改善、治疗或预防微生物感染或与其相关的疾病的量。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是考虑到本文提供的详细公开内容。

在消毒剂和防腐剂的情况下，对于治疗或预防细菌感染和/或病毒感染的局部施用，可以使用例如实施例中提供的体外测定的结果来确定治疗有效剂量。治疗可以在感染可见时进行，甚至在感染不可见时进行。普通技术专家将能够确定治疗局部感染的治疗有效量而无需过度实验。

对于全身施用，治疗有效剂量最初可以从体外测定中估计。例如，可以在动物模型中配制剂量以获得循环拟肽浓度范围，其包括在细胞培养物中确定的IC50(即，对50％的细胞培养物是致死的测试化合物的浓度)。这些信息可用于更准确地确定人体的有用剂量。

初始剂量也可以使用本领域熟知的技术根据体内数据确定，例如，动物模型。本领域的普通技术人员可以很容易地根据动物数据优化对人类的施用。

作为抗感染剂应用的剂量可以单独调整以提供足以维持治疗效果的本发明拟肽的血浆水平。治疗有效的血清水平可以通过每天施用多剂量来实现。

在局部施用或选择性摄取的情况下，本发明拟肽的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。具有本领域普通技术的人员将能够优化治疗有效的局部剂量而无需过多的实验。

当然，所施用的拟肽的量将取决于所治疗的受试者、受试者的体重、病痛的严重程度、施用方式和处方医师的判断。

当感染在可检测时或甚至检测不到时，可以间歇性地重复抗微生物治疗。该疗法可以单独提供或与其他药物联合提供，例如与抗HIV剂或抗癌剂，或其他抗微生物剂联合。

通常，治疗有效剂量的本文所述拟肽将提供治疗益处而不引起显著毒性。

本发明的拟肽的毒性可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，例如，通过确定LD

以下实施例说明本发明但不应被解释为以任何方式限制其范围。

缩写：

Ac乙酰基；

BSA 牛血清白蛋白；

Boc 叔丁氧基羰基；

DCHA二环己胺；

DCM 二氯甲烷；

DEAD偶氮二甲酸二乙酯；

DIC 二异丙基碳二亚胺；

DIPEA 二异丙基乙胺；

DMF 二甲基甲酰胺；

DMEMDulbecco改良的Eagle's培养基；

DODT3,6-二氧杂-1,8-辛二硫醇；

FCS 胎牛血清；

Fmoc芴基甲氧羰基；

HATUO-(7-氮杂-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；

HBSSHank缓冲盐溶液；

HBTUO-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；

HCTUO-(6-氯苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；

Hepes 4-(2-羟乙基)-l-哌嗪乙磺酸；

HFIP六氟异丙醇；

HOAtl-羟基-7-氮杂苯并三唑；

IMDMIscove's改良的Dulbecco's培养基；

IPE 异丙醚；

NMP N-甲基-2-吡咯烷酮；

NMM N-甲基吗啉；

Oxyma 乙基氰基羟基亚氨基乙酸酯；

(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷六氟磷酸盐；

TIS 三异丙基硅烷；

TPP 三苯基膦；

RPMI洛斯维帕克纪念研究所培养基；

rt室温。

实施例

1.肽合成

1.1一般合成程序

合成本发明的拟肽的一般方法在下文中举例说明。这是为了说明主要概念，并不以任何方式限制或约束本发明。本领域技术人员能够很容易地修改这些程序。

程序A.将第一个受保护的氨基酸残基偶联到树脂上

在干燥的烧瓶中，将2-氯三苯甲基氯树脂(聚苯乙烯，1％交联；加载量：1.4mMol/g)在无水的DCM中溶胀30分钟(每克树脂7mL DCM)。添加0.8当量的Fmoc保护的氨基酸和6当量DIPEA在无水DCM/DMF(4/1)(10mL/g树脂)中的溶液。在室温下摇动2-4小时后，滤出树脂并依次用DCM、DMF、DCM、DMF和DCM洗涤。然后加入无水DCM/MeOH/DIPEA (17:2:1)溶液(10mL/g树脂)。振摇3x 30分钟后，将树脂在预称重的烧结漏斗中滤出并依次用DCM、DMF、DCM、MeOH、DCM、MeOH、DCM(2x)和Et

加载量通常为0.6-0.7mMol/g。

程序B.完全保护肽片段的合成

使用24至576个反应容器在Syro肽合成仪(MultiSynTech GmbH)上进行合成。根据使用的标度(0.005至0.25mmol)，将上述树脂放入相应尺寸的反应器中，并将树脂分别在DCM和DMF中溶胀15分钟。

编制并执行以下反应循环：

重复步骤5至9以添加每个氨基酸残基。在N-末端残基是羟基酸残基的情况下，进行相同的步骤5至9。

使用标准Fmoc/tBu氨基酸结构单元，除了实施例131-133和205、实施例204和实施例146，实施例131-133和205中在P

程序C.切割/脱保护

受保护的肽组装后，将树脂悬浮在混合物切割/脱保护TFA/苯甲醚/硫代苯甲醚/水/TIS 82.5/5/5/5/2.5v/v/v/v/v(20mL/mmol的树脂)中。过滤后，切割/脱保护步骤重复两次。合并的滤液在室温下振摇3小时。线性肽在冷Et

程序D.纯化程序(制备型反相LC-MS)

使用串联的两个Waters BEH XBridge C8 OBD柱，30x150mm，5μm(目录号186003083)，通过反相色谱纯化化合物。

使用的流动相是：

A：0.1％TFA水溶液/乙腈98/2v/v

B：乙腈中的0.1％TFA

制备运行中的梯度斜率每次都基于粗产物的分析LC-MS分析进行调整。例如，以35mL/min的流速运行梯度执行的典型运行如下：

在本实施例的纯化中，目标化合物的保留时间为10.4分钟

检测：MS(ESI正60V剖面模式)和UV@220nm和254nm

使用Genevac HT4蒸发器或Büchi系统蒸发收集的级分。

1.2分析方法

分析型HPLC保留时间(RT，分钟)在HPLC系统上测定：Thermo ScientificUltimate 3000RS，MS:Thermo Scientific MSQ plus，使用Ascentis Express C8柱，100×3mm，2.7μm，使用以下溶剂A(H

检测：MS(ESI正60V剖面模式)和UV@220nm和254nm

1.3肽序列的合成

实施例1-34：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例35-38：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例39-40：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例41-62：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例63：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例64-130：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例131-133：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例134-185：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例186-201：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例202-203：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的起始氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例204：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

实施例205：

受保护的肽是从C端到N端合成的。用于合成的氨基酸官能化树脂(按照程序A获得)对应于表1中的P

2.生物学方法

2.1.肽的制备

冻干的肽在微量天平(Mettler MT5)上称重并溶解在无菌水中至最终浓度为1mg/mL。储备溶液防腐在+4℃，避光。

2.2.肽的抗微生物活性

肽的选择性抗微生物活性在96孔板(Greiner，聚苯乙烯)中通过标准CLSI肉汤微量稀释法(临床和实验室标准协会。有氧生长细菌的稀释抗微生物敏感性试验方法；批准标准-第九版)测定。稍作修改的CLSI文件M07-A9(ISBN 1-56238-783-9[打印版]；ISBN 1-56238-784-7[电子版])。临床和实验室标准协会，950West VaIley Road，Suite 2500，Wayne，Pennsylvania 19087，美国，2012)。

微生物菌落在盐水(0.85％，NaCl)中稀释，并使用McFarland读数器(bioMérieuxSA,Marcy-l’Etoile，法国)调整至0.5McFarland标准。随后，将细菌悬浮液在MueIler-Hinton II(MHII，调整阳离子)肉汤中稀释，得到大约5x 10

将微生物的接种物稀释到MueIler-Hinton II(MH，阳离子调整)肉汤中，并与0.5McFarland标准进行比较，给出约10

2.3.溶血

测试了这些肽对人红细胞(hRBC)的溶血活性。新鲜的hRBC用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤3次，并在3000x g下离心5分钟。将化合物(200μg/mL)与20％hRBC(v/v)在37℃孵育1小时，并以300rpm摇动。分别通过在PBS和2.5％Triton X-100的水溶液的存在下孵育hRBC来确定0％和100％细胞切割值。将样品离心，将上清液在PBS缓冲液中稀释8倍，并在540nm处测量光密度(OD)。100％切割值(OD

溶血百分比计算如下：(OD

2.2-2.3中描述的实验结果示于下表2中。

表2：MueIler-Hinton肉汤II中的最低抑菌浓度(MIC)和溶血

表2续

表2注：

-坦纳定是根据标准固相肽合成(SPPS)程序合成的。

表2续

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该技术已申请专利。仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
专利发明人：D·奥布雷赫特;A·鲁瑟;G·乌佩尔特;N·德容奎尔;E·布拉贝特;P·斯宾登;O·泽布;K·墨勒;
专利申请人：斯派西斯公司;苏黎世大学;

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