黄芪紫檀烷苷在制备治疗肾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，涉及黄芪紫檀烷苷在制备治疗肾病药物中的应用。

背景技术

糖尿病已经成为一个严重的全球公共卫生问题。糖尿病患者机体长期处于高血糖状态下，会使全身血管不断受损，并影响肾脏、心脏、神经等器官，最终导致各种糖尿病并发症发生。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，简称DN)属于糖尿病微血管并发症，是导致终末期肾病的主要原因之一，多达40％的糖尿病患者会发展为DN。DN的主要临床表现为患者出现肾小球肥大、蛋白尿、肾小球滤过率降低、肾脏纤维化、肾脏功能丧失等症状。目前临床上主要通过控制血糖、降血脂、降血压、改变饮食及生活方式来延缓DN的进展。临床目前治疗DN的药物主要有肾素-血管紧张素系统抑制剂(RASIs)和钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂等，其中RASIs是最常用的一线药物疗法，RASIs可以减少蛋白尿的产生并延缓肾小球滤过率的下降，但RASIs并不能完全阻止患者向终末期肾病的进展。SGLT2抑制剂不仅可以控制血糖，还有着潜在的保护肾脏的作用。然而在近期研究中，研究人员发现SGLT2抑制剂可能会增加2型糖尿病患者发生糖尿病酮症酸中毒的风险。因此，研究新的治疗DN的药物，有效地阻止患者向终末期肾病，同时减小药物的毒副作用，极为重要。

肾小球内皮细胞(GEnCs)是构成肾小球的细胞之一，与肾小球基底膜、足细胞共同构成了肾小球滤过屏障。GEnCs与血液中的循环物质直接接触，会受到葡萄糖、脂质和炎症因子的影响，因此GEnCs的损伤在DN发生发展中起到关键作用。在DN早期，GEnCs会出现内皮糖萼脱落、线粒体损伤和氧化应激、异常细胞信号传导和内皮-间质转化等特征。GEnCs具有独特的开窗特征，这种特征与大量滤过有关，且开窗功能和内皮糖萼紧密相关。当肾小球内皮细胞的开窗面积减少，内皮细胞上糖萼数量减少，将导致肾小球屏障功能受损。GEnCs表面层的糖萼异常改变是导致DN患者早期出现微量白蛋白尿的主要原因，微量白蛋白尿是肾小球内皮细胞损伤的标志，也是DN早期常见的临床症状之一。由于现有的药物并不能完全阻止糖尿病肾病的进展，且存在一定的毒副作用，因此，亟需开发一种治疗新的药物来阻止糖尿病肾病的进展。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出黄芪紫檀烷苷在制备治疗肾病药物中的应用，本发明研究发现黄芪紫檀烷苷对高糖(HG)刺激人肾小球内皮细胞(GEnCs)的糖尿病肾病模型具有保护作用，可以通过改善线粒体损伤，减少ROS的生成，调控PI3K/AKT/mTOR通路以促进自噬，对治疗糖尿病肾病存在潜在作用，可阻止糖尿病肾病的进展，同时减小毒副作用。

本发明的第一方面提供黄芪紫檀烷苷的应用。

具体地，黄芪紫檀烷苷在制备治疗肾病药物中的应用。

黄芪紫檀烷苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

黄芪紫檀烷苷在制备治疗高糖诱导的糖尿病肾病药物中的应用。

黄芪紫檀烷苷(Methylnissolin或Astrapterocarpan)，其结构式如下式(Ⅰ)所示，其分子量为300.31，化学式为C

在DN中，促进细胞自噬是治疗糖尿病肾病的一种途径，而细胞的自噬会受到PI3K/Akt/mTOR通路的严格调控，PI3K/Akt/mTOR通路是参与正常细胞过程的最重要的信号通路之一，它的异常激活可以调节自噬、凋亡、上皮-间质转化等生理活动。mTOR是P13K/Akt的下游靶点，其活性依赖于PI3K/Akt信号通路的调节。在机体正常情况下，酪氨酸激酶受体激活PI3K，然后将其底物磷脂酰肌醇二磷酸转化为肌醇三磷(PIP3)。然后，PI3K和磷酸肌醇依赖性激酶-1协同激活Akt，然后传递信号以激活mTOR。有研究显示，活性氧(ROS)在调节PI3K/Akt/mTOR信号传导中会起到关键作用，在DN的早期，GEnCs会出现氧化应激，线粒体损伤被认为是高血糖条件下增加ROS产生的关键。

在本发明研究发现Methylnissolin可以显著地改善细胞线粒体的损伤和减少ROS生成，Methylnissolin通过改善线粒体的状况来减少ROS的生成，从而达到治疗DN的目的。高水平的葡萄糖会导致细胞内的ROS水平增加，而高水平的ROS会使PI3K/Akt/mTOR通路活化，并抑制细胞的自噬。细胞的自噬具有参与细胞存活和维持细胞代谢平衡的功能，其属于一种分解代谢的细胞过程，细胞的自噬会受到PI3K/AKT/mTOR通路的严格调控。本发明研究发现，在糖尿病肾病组织中的自噬相关通路PI3K/AKT/mTOR会被激活，通过抑制该信号通路的活化，可以调节细胞的自噬，而Methylnissolin可以促进GEnCs的自噬。综上，Methylnissolin可以通过改善线粒体损伤以减少ROS的生成，从而抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化来起到促进GEnCs自噬的作用，最终达到对抗DN的效果。

优选地，所述治疗高糖诱导的糖尿病肾病药物为治疗高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤的药物。

优选地，所述高糖为浓度不低于30mmol/L的葡萄糖。

优选地，所述黄芪紫檀烷苷的浓度为1-25μmol/L。

更优选地，所述黄芪紫檀烷苷的浓度为1.5625、3.125、6.25、12.5或25μmol/L。

进一步优选地，所述黄芪紫檀烷苷的浓度为12.5μmol/L。

优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

优选地，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂中的一种或几种。

相对于现有技术，本发明的有益效果如下：

(1)本发明提供了一种从黄芪中提取出的黄酮类化合物Methylnissolin在制备治疗肾病药物中的应用，Methylnissolin可以有效改善HG诱导的细胞活力损伤；通过增加细胞对葡萄糖的摄取来对抗DN；改善HG导致GEnCs的细胞粘附蛋白VE-cadherin表达的降低、内皮糖萼相关蛋白表达的降低以及GEnCs紧密连接蛋白表达的降低的情况，即Methylnissolin可以通过改善GEnCs上细胞粘附蛋白、内皮糖萼、紧密连接蛋白相关标志物的表达来改善DN的屏障功能障碍；可以通过改善线粒体损伤，以及减少ROS的生成来抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化，最终起到促进GEnCs自噬以对抗DN的作用，可阻止糖尿病肾病的进展，同时减小毒副作用；

(2)本发明以浓度不低于30mmol/L的葡萄糖模拟体内的高糖(HG)环境，浓度为1-25μmol/L的Methylnissolin对高糖诱导的细胞活力损伤具有一定的改善效果，当浓度为12.5μmol/L时效果最佳。

附图说明

图1为本发明采用MTT检测Methylnissolin对HG诱导的GEnCs细胞活力影响图；

图2为本发明Methylnissolin对各组GEnCs葡萄糖摄取的影响图；

图3为本发明Methylnissolin对各组GEnCs内皮细胞粘附相关蛋白的影响图；

图4为本发明Methylnissolin对各组GEnCs内皮糖萼相关蛋白的影响图；

图5为本发明Methylnissolin对各组GEnCs紧密连接相关蛋白的影响图；

图6为本发明Methylnissolin对各组GEnCs线粒体的影响图；

图7为本发明Methylnissolin对各组GEnCs细胞ROS水平的影响图；

图8为本发明Methylnissolin对各组GEnCs自噬相关信号通路的影响图。

具体实施方式

为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。

以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。

1实验方法

1.1本发明使用到的材料：

人肾小球内皮细胞(human renal glomerular endothelial Cells，GEnCs)来自于Fenghui Biological；

药物氯沙坦(Losartan，简称为LOS)(MCE，HY-17512)和Methylnissolin(MCE，HY-N2484)来自于MCE；

ECM培养基由ScienCell(USA)提供；

抗体PI3K(4228S)、P-PI3K(4257S)、Akt(9272S)、P-Akt(9271S)、mTOR(5536S)，P-mTOR(2983S)、来自于CST(Cell signaling Technology，USA)；

抗体VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)(sc-9989)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(Glypican-1)(sc-365000)，多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1)(sc-12765)、ZO-1(sc-8146)来自于SantaCruz Biotechnology(USA)；

试剂JC-1碘化物(JC-1iodide)(sc-364116)来自于Santa Cruz(Dallas，TX)；

试剂荧光葡萄糖类似物2-NBDG(N13195)来自于Life Technologies(Carlsbad，CA)。

Methylnissolin的提取方法：取干燥黄芪根，将其研磨粉碎过筛后，加入2-3倍体积的甲醇加热回流提取2-4次，每次提取1-2h。将得到的甲醇提取液合并，并加入乙酸乙酯。将加入乙酸乙酯的甲醇提取溶液进行柱层析，洗脱液采用氯仿-甲醇，进行梯度洗脱。每一步氯仿-甲醇总体积为2L，洗脱液的中各组分的体积比分别为：氯仿-甲醇(1:0)、氯仿-甲醇(50:1)、氯仿-甲醇(20:1)、氯仿-甲醇(10:1)、氯仿-甲醇(1:1)。将得到的洗脱馏分进一步进行柱层析分离，洗脱液采用甲醇-丙酮-水进行梯度洗脱。每一步甲醇-丙酮-水总体积为550mL，洗脱液的中各组分的体积比分别为：甲醇-丙酮-水(0.68:0.29:1)、甲醇-丙酮-水(0.85:0.5:1)。将得到的馏分溶液进行薄层色谱法进行鉴定，并将确定的Methylnissolin馏分进行旋转蒸发。得到的粉末使用甲醇复溶，并用氮气吹干制得Methylnissolin粉末。

1.2细胞培养及处理

细胞培养：GEnCS在含有5.6mmol/L葡萄糖、5wt％胎牛血清、100单位/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1wt％内皮细胞生长因子的ECM培养基中于恒温细胞培养箱(37℃，5％CO

细胞处理：当细胞密度处于80％时，弃掉培养基，PBS洗涤一次，加入不含血清的ECM培养基于恒温细胞培养箱(37℃，5％ CO

1.3MTT法(又称MTT比色法，其中MTT为噻唑蓝)检测Methylnissolin对HG诱导的GEnCs细胞活力损伤的作用

为了探究Methylnissolin对DN的影响和作用机制，选择用HG(30mmol/L glucose)构建体外DN模型。并通过MTT法研究Methylnissolin对HG诱导的GEnCs细胞活力影响。

具体实验分组设为：将GEnCs细胞分别与正常葡萄糖组(简称为NC组，5.6mmol/Lglucose)、高糖组(简称为HG组，30mmol/L glucose)、HG+不同浓度Methylnissolin给药治疗组共孵育，Methylnissolin浓度如下：①1.5625μmol/L，②3.125μmol/L，③6.25μmol/L，④12.5μmol/L，⑤25μmol/L，⑥50μmol/L，⑦100μmol/L。然后用MTT法检测GEnCs细胞活力，使用Image J应用程序进行分析。

将GEnCs细胞接种于96孔板中，8000个/每孔，使用5.6mmol/L葡萄糖、5％胎牛血清、1％青霉素-链霉素和1％内皮细胞生长因子的ECM培养基培养24h使细胞贴壁；细胞贴壁后，使用不含血清的5.6mmol/L葡萄糖、1％青霉素-链霉素和1％内皮细胞生长因子的ECM培养基饥饿细胞24h。饥饿后，模型组使用高糖培养基(30mmol/L葡萄糖、5％胎牛血清、1％青霉素-链霉素和1％内皮细胞生长因子的ECM)造模24h建立GEnCs高糖模型，给药组按照Methylnissolin分组浓度加高糖培养基进行给药处理；24h后，每孔加入5mg/mL MTT溶液10μL，将96孔板放置于恒温细胞培养箱(37℃，5％ CO

1.4ROS的检测方法

将处于对数期的GEnCs细胞以1*10

1.5利用JC-1试剂盒检测线粒体的膜电位变化

将GEnCs细胞以1*10

1.6利用荧光探针2-NBDG检测葡萄糖摄取情况

将GEnCs细胞以3*10

1.7蛋白质印迹法(Western blot，简称WB)

以上述的“细胞培养和处理”方法进行培养及处理细胞，用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。之后，用10％聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)进行凝胶电泳；将样品转移到聚偏二氟乙烯膜PVDF膜上并用牛奶溶液封闭。将膜与用1×TBST稀释1000倍的一抗(Syndecan-1、Glypican-1、VE-cadherin、β-actin、ZO-1、β-tubulin、PI3K、P-PI3K、Akt、P-Akt、mTOR、P-mTOR)于4℃摇床孵育过夜，然后与二抗(1：5000)进一步孵育室温下1h。使用化学曝光法进行成像曝光并对条带进行分析。

1.8统计学处理

用Image J对蛋白条带灰度值和荧光强度进行分析。数据用GraphPad Prism 7进行统计分析，计量数据使用平均值±平均数的抽样误差(Mean±S.E.M)表示，组间比较用单因素方差进行分析。p<0.05即代表有统计学差异。

2实验结果

实施例1Methylnissolin对HG诱导的GEnCs细胞活力影响及最佳给药浓度筛选

通过MTT实验检测Methylnissolin梯度给药(1.562μmol/L、3.125μmol/L、6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)对于HG诱导的GEnCs活力影响。与NC组相比，***p<0.001；与HG组相比，##p<0.01，###p<0.001，n＝6，Mean±S.E.M。结果如图1所示，给药治疗组与HG组对比可知，浓度为1.562-25μmol/L的Methylnissolin可以提高细胞的活力，且呈浓度依赖性，在12.5μmol/L时细胞活力最高，随着Methylnissolin浓度继续提高，从25μmol/L开始，细胞活力逐渐下降。因此，选择12.5μmol/L的Methylnissolin进行后续给药实验，评估其对DN中GEnCs损伤的影响。

实施例2Methylnissolin改善HG诱导的GEnCs葡萄糖摄取的能力

2-NBDG试剂可以检测细胞对葡萄糖的摄取能力，可用于评估抗糖尿病药物对葡萄糖摄取的促进作用。本发明利用2-NBDG试剂，通过荧光光谱检测Methylnissolin对细胞摄取葡萄糖的影响。

2-NBDG检测葡萄糖摄取实验：将GEnCs细胞以3*10

结果如图2所示，与NC组相比，HG组的绿色荧光明显降低，这表明GEnCs处于HG条件下对葡萄糖的摄取能力降低。与HG组相比，阳性对照组和Methylnissolin给药治疗组的荧光强度增加，这表明Methylnissolin可以恢复HG损伤后GEnCs对葡萄糖的摄取能力。其中，图2中，2-NBDG染色代表图，比例尺(Scale bar)＝20μm，n＝3。

实施例3Methylnissolin改善HG诱导的GEnCs内皮屏障相关蛋白的表达

DN早期蛋白尿的出现和屏障功能受损密切相关，GEnCs损伤是导致屏障功能障碍的原因之一，肾小球内皮细胞上细胞粘附蛋白、内皮糖萼、紧密连接蛋白的正常表达是维持屏障功能的关键，因此本发明还检测了相关标志蛋白的表达。

1、血管内皮(VE)-钙粘蛋白(VE-cadherin)是一种严格的内皮特异性粘附分子，位于内皮细胞之间的连接处，VE-cadherin作为主要粘附蛋白，其功能是起到维持和控制内皮细胞接触的主要作用。细胞粘附蛋白VE-cadherin的变化会导致肾小球滤过膜完整性缺失，有研究表明在HG条件下GEnCs的VE-cadherin表达会被抑制。

本发明通过WB法检测各组VE-cadherin蛋白表达水平，使用Image J应用程序进行分析。结果如图3所示，图3A为VE-cadherin蛋白印迹条带；图3B为VE-cadherin灰度值统计图，其中，与NC组相比，***p<0.001；与HG组相比，##p<0.01，###p<0.001，n＝3，Mean±S.E.M，结果表明，HG组与NC组相比，内皮细胞粘附相关蛋白VE-cadherin表达明显降低(p<0.001)，阳性对照组和给药治疗组与HG组相比，内皮细胞粘附相关蛋白VE-cadherin表达明显升高(p<0.01)，这表明Methylnissolin可以通过提高HG诱导的GEnCs粘附相关蛋白的表达，来改善内皮屏障功能。

2、本发明还通过WB检测各组Syndecan-1和Glypican-1蛋白表达水平，使用imageJ应用程序进行分析

GEnCs覆盖肾小球毛细血管的管腔表面，是与血液直接接触的肾小球细胞。在腔侧，GEnCs被内皮糖萼覆盖，填充窗孔。内皮糖萼是一种凝胶状层，通过大小和空间位阻和静电排斥防止循环血浆蛋白的泄漏。内皮糖萼是由蛋白聚糖、糖蛋白、糖脂和糖胺聚糖组成的多孔、毛发状、规则组织层。Syndecan家族和Glypican家族是细胞表面的主要硫酸肝素蛋白聚糖，它们都与细胞质膜牢固结合。Syndecan-1和Glypican-1都是内皮糖萼的标志物。Syndecan-1是一种跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，与肾脏和心血管功能有关。Glypicans通过糖基磷脂酰肌醇锚附着在脂筏上。有实验研究表明，处于HG环境下的GEnCs的Glypican-1的表达水平会下降。

结果如图4所示，图4A为Syndecan-1和Glypican-1蛋白印迹条带；图4B为Syndecan-1的灰度值统计图；图4C为Glypican-1灰度值统计图，其中，与NC组相比，*p<0.05，**p<0.01；与HG组相比，#p<0.05，##p<0.01，n＝3，Mean±S.E.M。结果表明，HG组与NC组相比，内皮糖萼相关蛋白Syndecan-1，Glypican-1的表达明显降低(p<0.01)。阳性对照组和给药治疗组与HG组相比，内皮糖萼相关蛋白Syndecan-1、Glypican-1的表达明显升高(p<0.001)，这说明HG会抑制内皮糖萼Syndecan-1和Glypican-1的表达，Methylnissolin可以通过改善HG诱导的GEnCs内皮糖萼相关蛋白表达，来改善内皮屏障功能。

3、紧密连接蛋白的正常表达是确保机体正常屏障功能的关键。本发明通过WB检测各组GEnCs紧密连接相关蛋白ZO-1的蛋白表达水平，使用Image J应用程序进行分析。结果如图5所示，图5A为ZO-1蛋白印迹条带；图5B为ZO-1灰度值统计图。与NC组相比，**p<0.01；与HG组相比，#p<0.05，##p<0.01，n＝3，Mean±S.E.M。结果表明，HG组与NC组相比，紧密连接相关蛋白ZO-1的表达明显降低(p<0.01)。阳性对照组和给药治疗组与HG组相比，紧密连接相关蛋白ZO-1的表达升高(p<0.05，p<0.01)，且Methylnissolin效果好于阳性对照组药物，这表明Methylnissolin可以通过提高HG诱导的GEnCs紧密连接相关蛋白的表达，来改善内皮屏障功能。

实施例4Methylnissolin通过改善HG诱导的GEnCs线粒体损伤降低氧化应激水平

采用JC-1检测各组线粒体膜电位变化代表的情况，结果如图6所示，图6为用JC-1试剂检测细胞线粒体膜电位变化荧光图，CCCP-1阳性对照组显示GEnCs线粒体红色荧光完全消失，与NC组相比，HG组的线粒体红色荧光显著降低，给药治疗组与HG组相比，给药治疗组的线粒体红色荧光明显得到改善，这说明Methylnissolin可以改善HG诱导的GEnCs线粒体损伤情况。

通过荧光检测各组ROS水平，使用使用Image J应用程序进行分析。结果如图7所示，图7A为各组ROS荧光代表图，Scale bar＝100μm；图7B为各组ROS荧光强度统计图，由结果来看，与NC组相比，HG组ROS水平明显升高(p<0.001)。给药治疗组与HG组相比，ROS水平显著降低(p<0.001)，这说明Methylnissolin可以抑制HG诱导的细胞ROS的生成，减少了氧化应激，其可能通过降低ROS水平减轻氧化应激起到保护GEnCs作用。其中，与NC组相比，***p<0.001；与HG组相比，###p<0.001，n＝3，Mean±S.E.M。

实施例5Methylnissolin通过减少ROS生成抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化促进自噬

本发明通过WB检测各组P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、P-mTOR和mTOR蛋白表达水平，使用Image J应用程序进行分析。结果如图8所示，其中图8A为P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、P-mTOR和mTOR的蛋白印迹条带，图8B为P-PI3K/PI3K灰度值统计图，图8C为P-AKT/AKT灰度值统计图，图8D为P-mTOR/mTOR灰度值统计图，与NC组相比，*p<0.05；与HG组相比，#p<0.05，##p<0.01，n＝3，Mean±S.E.M。由图中结果可知，与NC组相比，HG组的P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR的表达升高(p<0.05)。与HG组相比，阳性对照组和给药治疗组P-PI3K/PI3K的表达降低(p<0.05，p<0.01)，且给药治疗组对于P-PI3K/PI3K的抑制效果优于阳性对照组；与HG组相比，阳性对照组和给药治疗组P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR的表达降低(p<0.05)。结果表明，Methylnissolin可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进GEnCs自噬来对抗DN。

综上，本发明探究了Methylnissolin对高糖组刺激人肾小球内皮细胞的糖尿病肾病模型的保护作用及机制，MTT实验结果表明，Methylnissolin可以改善HG诱导的细胞活力损伤，当Methylnissolin浓度为12.5μM/mL时效果最佳。通过2-NDBG和DCFH-DA染色分别检测各组细胞对葡萄糖摄取和活性氧的影响，结果显示HG会抑制GEnCs的葡萄糖摄取，而Methylnissolin可以显著改善这种状况，这说明Methylnissolin可以通过增加细胞对葡萄糖的摄取来对抗DN。

使用JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位的变化；通过Western blot(WB)法检测内皮糖萼相关蛋白Syndecan-1，Glypican-1、细胞粘附蛋白VE-cadherin和紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达变化；WB法检测各组PI3K/AKT/mTOR通路磷酸化情况，结果显示：Methylnissolin通过增加内皮糖萼，细胞粘附蛋白和紧密连接蛋白的表达保护屏障功能；Methylnissolin可以通过改善线粒体损伤减少ROS生成抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化来促进GEnCs的自噬对抗糖尿病肾病；Methylnissolin可以改善HG导致GEnCs的VE-cadherin表达降低情况；Methylnissolin可以改善HG诱导的GEnCs内皮糖萼相关蛋白表达降低额的情况。ZO-1是确保内皮细胞之间连接的关键部分，在Methylnissolin对模型细胞的ZO-1影的检测中，本发明发现其可以改善ZO-1表达的降低，这说明Methylnissolin可以改善HG导致的GEnCs紧密连接蛋白的表达降低情况。上述结果表明，Methylnissolin可以通过改善GEnCs上细胞粘附蛋白、内皮糖萼、紧密连接蛋白相关标志物的表达来改善DN的屏障功能障碍。以上结果表明Methylnissolin是治疗糖尿病肾病的潜在药物。

综上，本发明研究发现Methylnissolin可以在改善HG诱导的GEnCs内皮屏障功能受损，通过保护线粒体功能减轻氧化应激损伤，并促进细胞自噬来改善DN。Methylnissolin可以用于制备治疗DN的新药物，并对治疗DN提供了一种新思路。