用于个人医疗保健应用的适配体

技术领域

本文描述了对细胞膜糖蛋白并且优选地对细胞间粘附分子-1(“ICAM-1”)具有高结合亲和力和特异性的核酸适配体，并且更具体地，描述了此类适配体用于抑制人鼻病毒与此类糖蛋白结合并进入鼻腔和咽喉内的细胞的用途。

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背景技术

适配体是特异性且复杂的三维形状的短单链寡核苷酸，其结合至靶标分子。适配体的分子识别基于结构相容性和分子间相互作用，包括静电力、范德华相互作用、氢键以及芳环与靶材料的π-π堆叠相互作用。适配体的靶标包括但不限于肽、蛋白质、核苷酸、氨基酸、抗生素、低分子量有机或无机化合物、甚至全细胞。适配体的解离常数通常在微摩尔水平和皮摩尔水平之间变化，这与抗体对它们的抗原的亲和力相当。适配体也可被设计成具有高特异性，从而能够区分靶分子与密切相关的衍生物。

适配体通常通过指数富集的配体系统进化(SELEX)从大型随机核酸库中体外设计。当针对低分子量染料选择单链RNA时，在1990年首次引入了SELEX方法(Ellington,A.D.,Szostak,J.W.，1990年Nature346:818-822)。几年后，还描述了单链DNA适配体和包含化学修饰的核苷酸的适配体(Ellington,A.D.，Szostak,J.W.，1992年，Nature355:850-852；Green,L.S.等人，1995年，Chem.Biol.第2卷：第683页至695页)。自那时起，已选择用于数百个微观靶标诸如阳离子、小分子、蛋白质、细胞或组织的适配体。来自文献的示例汇编包括在以下网站的数据库中：http://www.aptagen.com/aptamer-index/aptamer-list.aspx。

感冒是美国最常见的疾病，每年有6200万人受感染。成人每年可感染感冒2次-4次，而儿童每年可感染8次-12次。这导致发病、经常缺勤、生产力下降和抗生素使用不当。这意味着美国每年花费600亿美元。

人鼻病毒引起50％-80％的感冒。鼻病毒是小的(30nm)、无包膜的单链RNA病毒。虽然鼻病毒感染在免疫活性宿主中是轻度和自限性的，但它与免疫抑制患者的肺炎、婴幼儿的毛细支气管炎有关，并且可加剧先前存在的肺部疾病，诸如哮喘和慢性阻塞性肺病。

当病毒附着于鼻上皮上的表面受体并感染宿主细胞时，鼻病毒感染主要发生在鼻咽中。百分之九十的鼻病毒附着于气道沿线的ICAM-1受体。一旦病毒进入细胞，它就会劫持细胞的复制机制以制作自身的拷贝。这导致细胞裂解和死亡，使病毒后代扩散到其他附近的细胞以重复感染周期。最终，这触发宿主免疫应答，导致呼吸道症状(例如，咳嗽、鼻漏、鼻塞、喉咙痛等)。尽管公共卫生负担沉重，但没有针对人鼻病毒的许可疫苗或抗病毒药物。

先前已经描述了针对靶蛋白诸如细胞间粘附分子1(ICAM-1)的适配体。然而，没有报道此类适配体与膜结合蛋白的结合或这些适配体防止天然配体或人鼻病毒与ICAM-1结合的能力的数据。因此，仍然需要选择性结合细胞膜糖蛋白(包括ICAM-1)并且防止人鼻病毒与此类糖蛋白的结合，从而减轻感冒症状或预防(再)感染的适配体。

发明内容

本文描述了SELEX用于选择针对细胞间粘附分子1(ICAM-1)的适配体的用途和此类适配体用于防止人鼻病毒与此类糖蛋白结合的用途。

本文还描述了一种适配体组合物。该适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力，其中该适配体组合物可减少一种或多种人鼻病毒与所述细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合并且其中该适配体组合物包含

(a)至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：与选自由SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的寡核苷酸；和/或；

(b)至少一种包含一个或多个基序的寡核苷酸，该一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ IDNO:211和SEQ ID NO:212。

适配体组合物可进一步显示对低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员、钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)以及它们的组合中的一者或多者的结合亲和力。

适配体组合物可包含至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。

本文还描述了一种个人医疗保健组合物。该个人医疗保健组合物包含如本文所述的适配体组合物。该个人医疗保健组合物可包含至少一种核酸适配体；其中该核酸适配体对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力，其中核酸适配体减少一种或多种人鼻病毒与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合并且其中适配体组合物包含

(a)至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：与选自由SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的寡核苷酸；和/或；

(b)至少一种包含一个或多个基序的寡核苷酸，该一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ IDNO:211和SEQ ID NO:212。

适配体组合物可进一步显示对低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员、钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)以及它们的组合中的一者或多者的结合亲和力。

还提供了一种将个人医疗保健组合物递送至上呼吸道的方法。该方法包括施用如本文所述的个人医疗保健组合物；该个人医疗保健组合物包含至少一种核酸适配体；其中该至少一种核酸适配体对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力，其中核酸适配体减少一种或多种人鼻病毒与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合并且其中适配体组合物包含

(a)至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：与选自由SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的寡核苷酸；和/或；

(b)至少一种包含一个或多个基序的寡核苷酸，该一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ IDNO:211和SEQ ID NO:212。

在一个方面，个人医疗保健组合物还可包含一种或多种活性成分；其中至少一种核酸适配体和一种或多种活性成分是共价或非共价附接的。

本文进一步描述了如本文所公开的适配体组合物的用途和/或如本文所公开的个人医疗保健组合物的用途，该组合物通过抑制与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合并由此抑制进入鼻腔和咽喉内的细胞用于抑制人类鼻病毒感染。该用途可包括将如本文所公开的适配体组合物和/或个人医疗保健组合物递送至上呼吸道。

附图说明

虽然本说明书通过特别指出并清楚地要求保护本发明主题的权利要求书作出结论，但据信由以下说明结合附图可更容易地理解本发明，其中：

图1示出了DNA文库的示意图。

图2示出了在选择轮次1至11期间的适配体选择策略。

图3示出了在选择轮次12至14期间适配体分裂选择策略的示意图。

图4示出前二十个适配体的富集轨迹。

图5示出了所选适配体在HNepC和HEK293细胞上的结合测定结果。

图6A-图6D示出了与HNepC细胞结合并与HEK293细胞结合的荧光标记的适配体Nas.R-4，其中图6A示出了荧光图像，并且图6B示出了HNepC细胞的明场图像，并且图6C示出了荧光图像，并且图6D示出了HEK293细胞的明场图像。

图7A-图7H示出了使用适配体Nas.R-2、适配体Nas.R-8和阴性对照适配体对HeLa细胞进行的病毒抑制测试，其中图7A示出了荧光图像，并且图7B示出了使用Nas.R-2适配体的明场图像；图7C示出了荧光图像，并且图7D示出了使用Nas.R-8适配体的明场图像；图7E示出了荧光图像，并且图7F示出了使用对照适配体的明场图像；并且图7G示出了荧光图像，并且图7H仅示出了细胞的明场图像。

图8示出了具有250nM外源性ICAM-1的适配体Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4和Nas.R-8的表面等离子体共振曲线。

图9示出了具有250nM人血清白蛋白的适配体Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4和Nas.R-8的表面等离子体共振曲线。

图10显示了ICAM-1、ICAM-3和ICAM-5的氨基酸序列比对。

图11示出了在鼻细胞阳性选择中表现出比在HEK293细胞阳性选择中更高的富集水平的序列的示例。

图12示出了选择轮次14中的序列的示例，该序列在HEK293阳性选择中表现出比在针对鼻细胞的阳性选择中更高的富集水平。

图13示出了在选择过程中鉴定的具有至少90％核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图14示出了在选择过程中鉴定的具有至少70％核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图15示出了在选择过程中鉴定的具有至少50％核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图16示出了适配体Nas.R-1的随机区域的基序分析的结果。

图17示出了适配体Nas.R-1及其保守基序的预测二级结构。

图18示出了适配体Nas.R-4的随机区域的基序分析的结果。

图19示出了适配体Nas.R-8的随机区域的基序分析的结果。

图20示出了表示为DNA序列的前100个适配体的随机区域的基序分析。

具体实施方式

I.定义

如本文所用，术语“适配体”是指对特定靶标具有结合亲和力的单链寡核苷酸或肽。

如本文所用，术语“核酸”是指核苷酸的聚合物或低聚物。当核苷酸的糖部分是D-核糖时，核酸也被称为“核糖核酸”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核酸也被称为“脱氧核糖核酸”。

如本文所用，术语“核苷酸”是指由经由糖部分的5-碳的羟基基团酯化成单磷酸酯、多磷酸酯或磷酸酯衍生基团的核苷组成的化合物。当糖部分是D-核糖时，核苷酸也被称为“核糖核苷酸”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核苷酸也被称为“脱氧核糖核苷酸”。

如本文所用，术语“核苷”是指由通常通过β-糖苷键连接至5-碳糖(例如，D-核糖或2-脱氧-D-核糖)的核酸碱基诸如嘌呤或嘧啶组成的糖胺。当糖部分是D-核糖时，核苷也被称为“核糖核苷”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核苷也被称为“脱氧核糖核苷”。

如本文所用，术语“核酸碱基”是指具有碱基的化学性质的包含氮原子的化合物。核酸碱基的非限制性示例为包含吡啶、嘌呤或嘧啶部分的化合物，包括但不限于腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶。

如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由核苷酸组成的低聚物。

如本文所用，在两种或更多种寡核苷酸、核酸或适配体的上下文中，术语“相同”或“序列同一性”是指当比较和比对以达到最大对应性时两个或更多个相同或具有指定百分比的相同核苷酸的序列，如使用序列比较算法或通过目测进行测量的。

如本文所用，在两种或更多种寡核苷酸、核酸或适配体的上下文中，术语“基本上同源”或“基本上相同”通常是指当比较和比对以达到最大对应性时两个或更多个具有至少40％、60％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％核苷酸同一性的序列或亚序列，如使用序列比较算法或通过目测进行测量的。

如本文所用，术语“表位”是指靶标的与适配体相互作用的区域。表位可以是靶标内的邻接片段，或者可由在靶标的折叠形式中物理上邻近的多个点表示。

如本文所用，术语“基序”是指存在于具有与特定靶标的结合亲和力的适配体库中的连续的或一系列连续的核苷酸序列，并且与随机寡核苷酸库相比表现出比预期的统计学显著更高的发生概率。基序序列通常是适配体选择过程的结果或驱动因素。

如本文所用，术语“个人医疗保健组合物”是指以可直接递送至上呼吸道的形式的组合物。

如本文所用，“药学有效量”是指足以对受试者赋予治疗效果的量。在一些方面，治疗效果减少了鼻病毒与细胞膜糖蛋白，诸如ICAM-1的结合，降低了感冒的严重程度和/或持续时间，或降低了由于鼻病毒引起的呼吸道疾病的发生率。

II.适配体组合物

人鼻病毒(RV)是感冒的主要原因。它们被分类为三组(RV-A、RV-B和RV-C)，包括表达不同表面蛋白的约160种类型。尽管存在这种多样性，但鼻病毒主要利用上皮细胞的三种糖蛋白穿过细胞膜并进入宿主细胞复制机制：大多数RV-A和所有RV-B类型利用的细胞间粘附分子1或ICAM-1蛋白；至少十二种RV-A类型使用的低密度脂蛋白受体或LDLR家族成员；以及主要由RV-C类型使用的钙粘蛋白相关家族成员3或CADHR3蛋白。

适配体组合物可包含至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物，其中适配体组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力。在一个方面，适配体组合物可对一种或多种选自由以下组成的组的细胞膜糖蛋白具有结合亲和力：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员和钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)以及它们的组合。优选地，一种或多种细胞膜糖蛋白是细胞间粘附分子1(ICAM-1)。适配体组合物可减少一种或多种人鼻病毒与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合。

适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少95％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由SEQID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组。与SEQ ID NO:3具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO:88。

适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由包含选自由SEQ ID NO:201至SEQ ID NO:212组成的组的序列的至少10个连续的核苷酸的寡核苷酸组成的组。

适配体组合物可包含至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少70％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸选自由与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸组成的组。与SEQ ID NO:4具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ IDNO:35。与SEQ ID NO:7具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的非限制性示例为SEQID NO:36、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:97。与SEQ ID NO:8具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的非限制性示例为SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:74和SEQ IDNO:89。

至少一种寡核苷酸可包含一个或多个基序，该一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211和SEQ ID NO:212。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQID NO:211和SEQ ID NO:212组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自由SEQ IDNO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211和SEQ IDNO:212组成的组的序列具有至少90％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。适配体组合物可包含至少一种寡核苷酸，该至少一种寡核苷酸包含与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ IDNO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ ID NO:211和SEQ ID NO:212组成的组的序列具有至少95％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。

在一个方面，适配体组合物对人细胞间粘附分子1(ICAM-1)(SEQ ID NO:213)、其天然变体、多态性变体或所述蛋白质的任何翻译后修饰形式具有结合亲和力。ICAM-1的翻译后修饰的非限制性示例是二硫键(例如，在Cys48和Cys92之间、Cys52和Cys96之间、Cys135和Cys186之间、Cys237和Cys290之间、Cys332和Cys371之间、Cys403和Cys419之间、Cys431和Cys457之间)、糖基化(例如在Asn130、Asn145、Asn183、Asn202、Asn267、Asn296、Asn385和Asn406处)、磷酸化(例如在Thr521或Thr530处)和泛素化。

在一个方面，适配体组合物对人细胞间粘附分子1(ICAM-1)(SEQ ID NO:214)的细胞外结构域或所述结构域的任何翻译后修饰的形式具有结合亲和力。在一个方面，适配体组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)的一个或多个结构域具有结合亲和力，该结构域选自由以下组成的组：Ig样C2型1结构域(SEQ ID NO:215)、Ig样C2型2结构域(SEQ ID NO:216)、Ig样C2型3结构域(SEQ ID NO:217)、Ig样C2型4结构域(SEQ ID NO:218)、Ig样C2型5结构域(SEQ ID NO:219)、所述结构域的任何翻译后修饰的形式以及它们的混合物。在一个方面，适配体组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)的Ig样C2型1结构域(SEQ ID NO:215)、所述结构域的任何翻译后修饰的形式以及它们的混合物具有结合亲和力。

在一个方面，适配体组合物对人细胞间粘附分子1的一个或多个区域具有结合亲和力，其中所述区域包括选自由SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:222、SEQ IDNO:223以及所述序列的片段组成的组的氨基酸序列。

化学改性可将新特征引入到适配体中，诸如与靶标的不同分子相互作用、改善的结合能力、增强的寡核苷酸构象稳定性或增加的核酸酶抗性。在一个方面，适配体组合物的至少一种寡核苷酸可包含天然或非天然核碱酸基。天然的核酸碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核酸碱基的非限制性示例可包括次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-氨基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-氨基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶以及它们的混合物。

寡核苷酸的磷酸酯主链的修饰也可增加对核酸酶消化的抗性。在一个方面，寡核苷酸的核苷可通过选自由以下组成的组的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼烷磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚、氟磷酸酯以及它们的混合物。在一个方面，寡核苷酸的核苷可通过天然磷酸二酯链接。

在一个方面，寡核苷酸的核苷的糖部分可选自由以下组成的组：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O-(2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基胺基氧)乙基核糖、2’-O-2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基、其他戊糖、己糖以及它们的混合物。

在一个方面，核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物可选自由以下组成的组：锁寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。

在一个方面，至少一种寡核苷酸的5'-端和3'-端处的核苷酸可为反向的。在一个方面，至少一种寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置处被氟化。在一个方面，至少一种寡核苷酸的嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置处被氟化。在一个方面，所述适配体组合物可包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料共价地连接到所述至少一种寡核苷酸。在一个方面，所述至少一种聚合物材料可为聚乙二醇。

在一个方面，所述至少一种寡核苷酸的长度可介于约10个核苷酸和约200个核苷酸之间。在一个方面，所述至少一种寡核苷酸的长度可小于约100个核苷酸，另选地所述至少一种寡核苷酸的长度可小于约50个核苷酸。

在一个方面，所述至少一种寡核苷酸可共价地或非共价地附接到一种或多种活性成分。在一个方面，所述一种或多种活性成分可选自包含以下的组：呼吸道疾病治疗剂、感冒治疗剂、流感治疗剂、抗病毒剂、抗微生物剂、凉爽感觉剂、温热感觉剂、恶臭吸收剂、天然提取物、肽、酶、药物活性成分、金属化合物以及它们的混合物。在一个方面，所述一种或多种活性成分可包括但不限于药物活性成分、薄荷醇、左旋薄荷醇、锌和其盐、桉树、樟脑以及它们的组合。合适的活性成分包括通常被认为是安全并且提供医疗保健有益效果的任何材料。

在一个方面，所述至少一种寡核苷酸可经由分子相互作用非共价地附接到所述一种或多种活性成分。分子相互作用的示例是芳环的静电力、范德华相互作用、氢键合和π—π堆积作用。

在一个方面，可使用一种或多种接头或间隔子将所述至少一种寡核苷酸共价地附接到所述一种或多种活性成分。接头的非限制性示例是化学上不稳定的接头、酶不稳定的接头和不可裂解的接头。化学上不稳定的接头的示例是酸可裂解的接头和二硫化物接头。酸可裂解的接头利用低pH来触发酸可裂解的键诸如腙键的水解，以释放活性成分或有效载荷。二硫化物接头可在还原环境下释放活性成分。酶不稳定的接头的示例为可在蛋白酶存在下裂解的肽接头和由释放有效载荷的葡糖苷酸酶裂解的β-葡糖苷酸接头。如果适配体通过核酸酶降解，则不可裂解的接头也可释放活性成分。

在一个方面，所述至少一种寡核苷酸可共价地或非共价地附接到一种或多种纳米材料。在本发明中，所述至少一种寡核苷酸和所述一种或多种活性成分可共价地或非共价地附接到一种或多种纳米材料。在一个方面，所述一种或多种活性成分可由所述一种或多种纳米材料携带。纳米材料的非限制性示例可包括金纳米粒子、纳米级铁氧化物、碳纳米材料(诸如单壁碳纳米管和石墨烯氧化物)、介孔二氧化硅纳米粒子、量子点、脂质体、聚(丙交酯-共-乙醇酸)纳米粒子、聚合物胶束、树枝状聚合物、血清白蛋白纳米粒子、基于DNA的纳米材料以及它们的组合。这些纳米材料可用作大体积活性成分的载体，而适配体可有利于将具有活性物质的纳米材料递送至预期靶标。

纳米材料可具有多种形状或形态。形状或形态的非限制性示例可包括球体、矩形、多边形、盘、环状、圆锥体、棱锥、杆/圆柱体和纤维。在本发明的上下文中，纳米材料通常具有至少一个小于约100μm并且更优选地小于约10μm的空间尺寸。纳米材料包括固相、半固相或液相的材料。

1.适配体也可以是以高亲和力和特异性结合靶标的肽。这些肽适配体可以是支架蛋白的一部分。肽适配体可从组合库分离，并通过定向突变或多轮可变区诱变和选择来改善。在一个方面，所述适配体组合物可包含至少一种肽或蛋白质；其中所述适配体组合物对一种或多种细胞膜糖蛋白具有结合亲和力，其中所述一种或多种细胞膜糖蛋白可选自由以下组成的组：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员和钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)；优选地细胞间粘附分子1(ICAM-1)，并且其中所述适配体被配置成减少一种或多种人鼻病毒与所述细胞膜糖蛋白，优选地细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合。具体地，所述适配体组合物可包含至少一种由以下翻译的肽或蛋白质：

(a)至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：与选自由SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性的寡核苷酸；和/或；

(b)至少一种包含一个或多个基序的寡核苷酸，该一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQ IDNO:211和SEQ ID NO:212。

III.设计适配体组合物的方法

设计核酸适配体的方法被称为指数富集的配体系统进化(SELEX)，其已被广泛研究和改善，以用于针对小分子和蛋白质选择适配体(WO91/19813)。简而言之，在SELEX的常规型式中，该过程以合成由随机生成的固定长度序列组成的大型寡核苷酸库开始，该固定长度序列两侧为充当引物的恒定5'-端和3'-端。然后将库中的寡核苷酸暴露于靶标配体，并且移除不结合靶标的那些。通过PCR(聚合酶链反应)洗脱和扩增结合的序列以准备随后几轮选择，其中洗脱条件的严格性通常增加以鉴定最紧密结合的寡核苷酸。除了常规的SELEX之外，还存在改善的型式，诸如毛细管电泳SELEX、基于磁珠的SELEX、细胞SELEX、自动化的SELEX、复合靶标SELEX等。对适配体筛选方法的综述见于(1)Kim,Y.S.和M.B.Gu，“Advances in Aptamer Screening and Small Molecule Aptasensors”，Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.2014 140:29-67(Biosensors based on Aptamers andEnzymes)以及(2)Stoltenburg,R.等人(2007年)“SELEX-A(r)evolutionary method togenerate high-affinity nucleic acid ligands”Biomol.Eng.2007 24(4):381-403，它们的公开内容以引用方式并入本文。虽然已广泛应用SELEX方法，但对于每个靶标，它既非预测型的也非标准化的。相反，必须为每个特定靶标开发一种方法，以使该方法产生可行的适配体。

尽管选择了大量的适配体，但SELEX尚未常规地用于选择对细胞膜糖蛋白诸如细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员和钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)具有结合亲和力并且防止人鼻病毒与此类蛋白质结合的适配体。出乎意料地，本发明人发现SELEX可用于防止人鼻病毒与ICAM-1受体结合的适配体的设计。

选择库

在SELEX中，初始候选库通常为化学合成的DNA寡核苷酸的混合物，每个寡核苷酸包含n个核苷酸的长可变区，该长可变区在3’端和5’端两侧为该库的所有候选物的保守区或引物识别区。这些引物识别区允许在SELEX期间具体地讲通过PCR手段来操纵中心可变区。

可变区的长度决定库的多样性，其等于4

在一个方面，寡核苷酸的起始混合物可包含多于约10

设计引物识别序列时，应注意最小化序列间的潜在退火、序列内的折叠后区或相同序列本身的退火。在一个方面，引物识别序列的长度可介于约10个和约40个核苷酸之间。在一个方面，引物识别序列的长度可介于约12个和约30个核苷酸之间。在一个方面，引物识别序列的长度可介于约18个和约26个核苷酸之间，即约18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或26个核苷酸。引物识别序列的长度和序列决定了它们的退火温度。在一个方面，所述寡核苷酸的引物识别序列可具有介于约60℃和约72℃之间的退火温度。

适配体可以是核糖核苷酸(RNA)、脱氧核苷酸(DNA)、或它们的衍生物。当适配体是核糖核苷酸时，第一SELEX步骤可包括经由引物识别序列在5'端处转录化学合成的DNA寡核苷酸的初始混合物。在选择后，候选物在扩增前通过逆转录转化回DNA。具有能与之相比的特性的RNA和DNA适配体已经针对相同的靶标进行了选择，并且在本领域中有报道。另外，这两种类型的适配体可以是彼此竞争性抑制剂，从而表明相互作用位点的潜在重叠。

可通过在选择之前或之后修饰核酸碱基而将新的功能诸如疏水性或光反应性并入寡核苷酸中。在嘧啶的C-5位置或在嘌呤的C-8或N-7位置处的修饰尤其常见，并且与SELEX的扩增步骤期间使用的某些酶相容。在一个方面，所述寡核苷酸可包含天然或非天然核酸碱基。天然的核酸碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核酸碱基的非限制性示例为次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-胺基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-胺基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、以及它们的混合物。一些非天然核酸碱基诸如5-溴尿嘧啶或5-碘尿嘧啶可用于产生可光交联的适配体，该可光交联的适配体可通过UV光活化以与靶标形成共价连接。

在一个方面，所述寡核苷酸的核苷可通过选自包含以下的组的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼烷磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚、氟磷酸酯以及它们的混合物。在一个方面，所述寡核苷酸的核苷可通过天然磷酸二酯链接。

在一个方面，所述寡核苷酸的核苷的糖部分可选自包含以下的组：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O-(2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基胺基氧)乙基核糖、2’-O-2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基、其他戊糖、己糖以及它们的混合物。

在一个方面，所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物可选自包含以下的组：锁寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。

当在SELEX过程中使用经修饰的核苷酸时，它们应当与扩增步骤期间使用的酶相容。与商业酶相容的修饰的非限制性示例包括在RNA库中糖的2'位置处的修饰。嘧啶核苷酸的核糖2'-OH基团可替换为2'-氨基、2'-氟、2'-甲基或2'-O-甲基，这些基团保护RNA不被核酸酶降解。磷酸接头中的另外改性诸如硫代磷酸酯和硼烷磷酸酯也与聚合酶相容并赋予核酸酶抗性。

在一个方面，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸可在戊糖基团的2'位置处被氟化。在一个方面，所述寡核苷酸的嘧啶核苷酸可至少部分地在戊糖基团的2'位置处被氟化。在一个方面，所述寡核苷酸的所有嘧啶核苷酸可在戊糖基团的2'位置处被氟化。在一个方面，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸可在戊糖基团的2'位置处被胺化。

另一种方法，最近描述为二维SELEX，同时应用体外寡核苷酸选择和动态组合化学(DCC)，例如寡核苷酸的某些基团(胺基)与醛化合物库之间的可逆反应。该反应产生以与常规SELEX相同的原理选择的亚胺寡核苷酸。因此，可以鉴定与天然适配体不同的靶向发夹RNA修饰的适配体。

一种非常不同的方法涉及光学异构体的使用。天然寡核苷酸是D-异构体。L-类似物具备核酸酶抗性，但不能由聚合酶合成。根据光学异构的规则，L-系列适配体可与其靶标(T)形成复合物，所述复合物具有与由D-系列异构体和靶标(T)的对映体(T')形成的复合物相同的特性。因此，如果化合物T’可为化学合成的，则其可用于进行天然适配体(D)的选择。一旦鉴定，该适配体可化学合成为L-系列。这一L-适配体是天然靶标(T)的配体。

选择步骤

单链寡核苷酸可折叠以产生二级结构和三级结构，类似于碱基对的形成。因此，初始序列库是三维形状的库，每个三维形状对应于可触发静电相互作用、产生氢键等的单元分布。选择变成了在库中鉴定适合靶标的形状的问题，即允许最大数量的相互作用和形成最稳定的适配体-靶标复合物的形状。对于小靶标(染料、抗生素等)，所鉴定的适配体的特征在于微摩尔范围内的平衡解离常数，而对于蛋白质靶标，低于10

在每一轮中的选择通过从游离寡核苷酸物理分离与靶标相关的寡核苷酸进行。可以应用多种技术(色谱法、过滤保留、电泳等)。调节选择条件(靶标/候选物的相对浓度、离子浓度、温度、洗涤等)，使得在寡核苷酸之间发生靶结合竞争。一般来讲，严格性随着轮检的进行而增加，以便促进捕获具有最高亲和力的寡核苷酸。此外，进行反选择或阴性选择以消除识别载体或不需要的靶标(例如，过滤器、小珠等)的寡核苷酸。

用于选择靶标特异性适配体的SELEX过程的特征在于重复五个主要步骤：(1)将寡核苷酸结合到靶标，(2)分配或移除具有低结合亲和力的寡核苷酸，(3)洗脱具有高结合亲和力的寡核苷酸，(4)扩增或复制具有高结合亲和力的寡核苷酸，以及(5)调节或制备用于下一个循环的寡核苷酸。设计该选择过程以鉴定对靶材料具有最大亲和力和特异性的寡核苷酸。

在一个方面，设计适配体组合物的方法可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物，b)选择缓冲液，以及c)靶材料，该靶材料包含一种或多种选自由以下组成的组的细胞膜糖蛋白：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员、钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)、它们的截短物以及它们的混合物；优选地细胞间粘附分子1(ICAM-1)及其截短物。在另一个方面，设计适配体组合物的方法可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物，b)选择缓冲液，以及c)细胞，该细胞表达一种或多种选自由以下组成的组的细胞膜糖蛋白：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员、钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)、它们的截短物以及它们的混合物；优选地细胞间粘附分子1(ICAM-1)及其截短物。在又另一个方面，设计适配体组合物的方法可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物，b)选择缓冲液，以及c)人鼻上皮细胞，该人鼻上皮细胞表达一种或多种选自由以下组成的组的细胞膜糖蛋白：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)家族成员、钙粘蛋白相关家族成员3(CDHR3)、它们的截短物以及它们的混合物；优选地细胞间粘附分子1(ICAM-1)及其截短物。

在一个方面，所述寡核苷酸的混合物可包括选自由脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物组成的组的寡核苷酸。此外，所述一种或多种细胞膜糖蛋白或其截短物可与其他物质诸如蛋白质或肽或表达所述糖蛋白的细胞的一部分混合分离。

通常重复SELEX循环几次，直到鉴定出具有高结合亲和力的寡核苷酸。循环次数取决于多个变量，包括靶标特征和浓度、起始随机寡核苷酸库的设计、选择条件、靶标结合位点与寡核苷酸的比率、以及分配步骤的效率。在一个方面，所述接触步骤可进行至少5次。在一个方面，所述接触步骤可进行介于6次和30次之间的次数。在一个方面，所述方法还可包括在所述接触步骤期间移除不结合所述靶材料的寡核苷酸的步骤。

寡核苷酸是寡阴离子，每个单元在特定pH下具有电荷和氢键供体/受体位点。因此，选择缓冲液的pH和离子强度是重要的并且应代表预期适配体应用的条件。在一个方面，所述选择缓冲液的pH可在约2和约9之间，另选地在约5和约8之间。

阳离子不仅有利于寡核苷酸的正确折叠，而且还可提供有益效果。在一个方面，所述选择缓冲液可包含阳离子。阳离子的非限制性示例为Na

为了使适配体在其应用期间保持其结构和功能，体外选择过程可在与其正在开发的那些条件类似的条件下进行。在一个方面，所述选择缓冲液可包括个人医疗保健组合物的溶液或悬浮液，该个人医疗保健组合物选自包括以下的组：片剂、冻干片剂、棒糖、锭剂、液体中心填充糖果、糖果、粉末、颗粒物质、膜、液体、溶液、悬浮液、口腔冲洗剂或漱口水、盐水洗涤液、可分散流体、喷雾剂、快速溶解纤维、蒸气、乳膏、软膏、粉末、颗粒物质、膜以及它们的组合。

在一个方面，所述选择缓冲液可包含至少一种表面活性剂。在一个方面，至少一种表面活性剂可选自由以下组成的组：阴离子表面活性剂、两性或两性离子表面活性剂以及它们的混合物。阴离子表面活性剂的非限制性示例为烷基和烷基醚硫酸盐或磺酸盐，包括月桂基硫酸铵、月桂基聚氧乙烯醚硫酸铵、月桂基硫酸三乙基胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙基胺、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸二乙醇胺、月桂基聚氧乙烯醚硫酸二乙醇胺、月桂酸单甘油酯硫酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、月桂基硫酸钾、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钾、月桂基肌氨酸钠、月桂酰肌氨酸钠、月桂基肌氨酸、椰油酰肌氨酸、椰油酰硫酸铵、月桂酰硫酸铵、椰油酰硫酸钠、月桂酰硫酸钠、椰油酰硫酸钾、月桂基硫酸钾、月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸三乙醇胺、椰油酰硫酸单乙醇胺、月桂基硫酸单乙醇胺、十三烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、椰油酰羟乙磺酸钠、以及它们的组合。非限制性两性表面活性剂包括被广义描述为脂族仲胺和叔胺的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8个至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团，诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根、或膦酸根，包括椰油酰两性基乙酸盐、椰油酰两性基二乙酸盐、月桂酰两性基乙酸盐、月桂酰两性基二乙酸盐以及它们的混合物。两性离子表面活性剂的非限制性示例包括被广义地描述为脂族季铵、鏻鎓和锍化合物的衍生物的那些表面活性剂，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一包含约8个至约18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子基团，诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根和甜菜碱。

选择缓冲液可包含至少一种材料，该至少一种材料选自包含以下的组：含水载体、凝胶基质、硅氧烷调理剂、有机调理材料、非离子聚合物、沉积助剂、流变改性剂/悬浮剂、有益剂以及它们的混合物。含水载体的非限制性示例为水以及低级烷基醇和多元醇(包括乙醇、异丙醇、丙二醇、己二醇、甘油和丙二醇)的水溶液。凝胶基质的非限制性示例包含脂肪醇水溶液，包括鲸蜡醇、硬脂醇、二十二醇以及它们的混合物。硅氧烷调理剂的非限制性示例包含聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、环状硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、和具有各种官能团的改性硅氧烷，该官能团诸如氨基基团、季铵盐基团、脂族基团、醇基团、羧酸基团、醚基团、糖或多糖基团、氟改性的烷基基团、烷氧基基团、或此类基团的组合。有机调理材料的非限制性示例包括烃油、聚烯烃、脂肪酯、氟化调理化合物、脂肪醇、烷基葡糖苷和烷基葡糖苷衍生物、季铵化合物、具有至多约2,000,000分子量的聚乙二醇和聚丙二醇(包括CTFA名称为PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-1000、PEG-2M、PEG-7M、PEG-14M、PEG-45M的那些)以及它们的混合物。非离子聚合物的非限制性示例包括聚亚烷基二醇，诸如聚乙二醇类。沉积助剂的非限制性示例包括具有阳离子胺或季铵官能团的乙烯基单体与水溶性间隔单体(诸如丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、烷基和二烷基丙烯酰胺、烷基和二烷基甲基丙烯酰胺、丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯、乙烯基己内酯和乙烯基吡咯烷酮)的共聚物；乙烯基酯、乙烯醇(通过聚乙酸乙烯酯的水解制备)、马来酸酐、丙二醇和乙二醇、阳离子纤维素、阳离子淀粉和阳离子瓜尔胶。流变改性剂/悬浮剂的非限制性示例包括基于丙烯酸、甲基丙烯酸或其他相关衍生物的均聚物、基于藻酸的材料、以及纤维素衍生物。有益剂的非限制性示例包括增白剂、强化剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗微生物剂、去头皮屑剂、抗恶臭剂、香料、嗅觉增强剂、抗痒剂、凉爽剂、抗粘附剂、保湿剂、光滑剂、表面改性剂、抗氧化剂、天然提取物和精油、染料、颜料、漂白剂、营养物质、肽、维生素、酶、螯合剂以及它们的混合物。

阴性选择或反选择步骤可最小化与不期望的靶标或靶标内的不期望表位结合的寡核苷酸的富集。在一个方面，所述设计适配体组合物的方法还可包括使以下物质接触的步骤：a)寡核苷酸的混合物，b)选择缓冲液，以及c)一种或多种不期望的靶标。用于针对未结合靶标对适配体进行阴性选择或反选择的方法已于WO201735666公布，其内容以引用方式并入本文。

设计适配体组合物的方法可包括以下步骤：a)合成寡核苷酸的混合物；b)使以下物质接触：i.所述寡核苷酸的混合物，ii.选择缓冲液，以及iii.包含一种或多种细胞膜糖蛋白的靶材料；其中所述糖蛋白选自由以下组成的组：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、其片段以及它们的组合，以产生靶标悬浮液；c)从所述靶标悬浮液中去除液相以产生靶标-寡核苷酸混合物；d)使所述靶标-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生靶标-适配体混合物；以及e)使所述靶标-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生适配体混合物。在一个方面，所述步骤可重复进行至少5次。在一个方面，所述步骤可进行介于6次和30次之间的次数，优选地小于20次。

在另一个方面，设计适配体组合物的方法包括以下步骤：a)合成包含寡核苷酸的脱氧核糖核苷酸的随机混合物，该寡核苷酸由下列组成：i.位于5'-端处的T7启动子序列、ii.位于中部的可变40-核苷酸序列、和iii.位于3'-端处的保守反向引物识别序列；b)使用在戊糖基团的2'位置处被氟化的嘧啶核苷酸和天然嘌呤核苷酸以及突变T7聚合酶转录所述脱氧核糖核苷酸的随机混合物以产生氟化核糖核苷酸的混合物；c)使以下物质接触：i.所述氟化核糖核苷酸的混合物，ii.选择缓冲液，以及iii.包含一种或多种细胞膜糖蛋白的靶材料；其中所述糖蛋白选自由以下组成的组：细胞间粘附分子1(ICAM-1)、其片段以及它们的组合，以产生靶标悬浮液；d)从所述靶标悬浮液中移除液相以产生靶标-寡核苷酸混合物；e)使所述靶标-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生靶标-适配体混合物；f)使所述靶标-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生RNA适配体混合物；g)逆转录并扩增所述RNA适配体混合物以产生所述RNA适配体混合物的DNA拷贝；以及h)对所述RNA适配体混合物的所述DNA拷贝进行测序。

选择后的修饰

为了提高适配体的稳定性，可在选择过程之后在适配体中引入化学修饰。例如，核糖部分的2'-OH基团可替换为2'-氟、2'-氨基或2'-O-甲基。此外，适配体的3'-端和5'-端可用不同的基团封端，诸如链霉亲和素-生物素、反向胸腺嘧啶核苷、胺、磷酸根、聚乙二醇、胆固醇、脂肪酸、蛋白质、酶、荧光团等，从而使得寡核苷酸具有核酸外切酶抗性或提供一些附加有益效果。其他修饰描述于本公开的先前章节中。

与可导致适配体-靶标相互作用特性丧失的主链改性不同，有可能在寡核苷酸的3'-端或5'-端中的一者处缀合各种基团，以便将其转化成递送载体、工具、探针或传感器而不破坏其特性。这种灵活性构成了适配体的显著优点，尤其是它们在本发明中的应用。在一个方面，一种或多种个人护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的3'-端。在一个方面，一种或多种个人护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的5'-端。在一个方面，一种或多种个人护理活性成分可共价地附接到所述至少一种寡核苷酸的随机位置。

对适配体的修饰的并入可使用酶法或化学方法进行。用于修饰适配体的酶的非限制性示例是末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、T4RNA连接酶、T4多核苷酸激酶(PNK)、DNA聚合酶、RNA聚合酶、以及本领域技术人员已知的其他酶。TdT为可向脱氧核糖核苷酸的3'末端添加修饰的脱氧核苷酸的模板非依赖性聚合酶。T4RNA连接酶可用于通过使用经适当修饰的核苷3',5'-双膦酸酯来标记3'-端处的核糖核苷酸。PNK可用于磷酸化合成寡核苷酸的5'-端，从而令其能够进行其他化学转化(参见下文)。DNA聚合酶和RNA聚合酶通常用于在整个序列中随机并入修饰的核苷酸，前提条件是此类核苷酸与酶相容。

用于改性适配体的化学方法的非限制性示例为本领域的技术人员已知的并入本文的核糖核苷酸的高碘酸盐氧化、5'-磷酸的EDC活化、随机化学标记方法、以及其他化学方法。

在高碘酸盐氧化期间，偏高碘酸盐和原高碘酸盐裂解3'-核糖核苷酸的相邻二醇之间的C-C键，从而产生两个醛部分，这些醛部分使得能够在RNA适配体的3'-端处缀合标记或活性成分。所得的醛可容易地与含肼或含伯胺的分子反应。当使用胺时，可用氰基硼氢化钠(NaCNBH3)将产生的席夫碱还原为更稳定的仲胺。

当使用5'-磷酸的EDC活化时，寡核苷酸的5'-磷酸通常用EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐)和咪唑活化以产生反应性咪唑中间体，然后与伯胺反应以产生在5'端修饰的适配体。因为反应需要5'磷酸酯基团，所以可首先用激酶(例如，PNK)处理合成寡核苷酸。

可以用不同的方法进行随机化学标记。因为它们允许在沿着适配体的随机位点处进行标记，所以与末端标记方法相比可获得更高程度的修饰。然而，由于核酸碱基被修饰，因此可破坏适配体与其靶标的结合。最常见的无规化学修饰方法涉及使用光反应性试剂，诸如基于叠氮基苯的试剂。当叠氮基苯基团暴露于紫外光下时，其形成不稳定的氮宾，该氮宾与适配体的双键以及C-H和N-H位点反应。

关于用于改性适配体的方法的附加信息概述于HermansonG.T.的“BioconjugateTechniques”(第969页至1002页，第2版，Academic Press,San Diego，2008年)中，其内容以引用方式并入本文。

在选择之后，除了化学改性之外，还可进行序列截短以移除对于结合或对于折叠成结构不是必需的区域。此外，可将适配体连接在一起以提供不同的特征或更好的亲和力。因此，本文所述的适配体的任何截短物或组合也可掺入适配体组合物中。

IV.适配体组合物在个人医疗保健产品中的应用

本文描述了个人医疗保健组合物和使用此类组合物来预防和治疗由于呼吸道病毒感染引起的感冒样症状的方法。在一些方面，个人医疗保健组合物包含如本文所公开的至少一种适配体；其中该至少一种适配体对ICAM-1具有结合亲和力并且被配置成减少一种或多种人鼻病毒与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合。个人医疗保健组合物可优选地应用于上呼吸道区域，诸如鼻腔和咽喉，以提供对鼻病毒结合和进入细胞的屏障。

个人医疗保健组合物优选地包含药学有效量的至少一种适配体。在一些方面，个人医疗保健组合物可包含约0.001％至约1％，或者约0.005％至约0.5％，或者约0.01％至约0.1％的至少一种适配体，所有百分比均按组合物的重量计。

个人医疗保健组合物可口服施用或鼻内施用。在一个方面，个人医疗保健组合物可为口腔组合物。口服组合物可以是液体形式、半固体形式、悬浮液形式或能够快速溶解在口中的任何固体形式。口服剂型的非限制性示例可包括片剂、冻干片剂、棒糖、锭剂、液体中心填充糖果、糖果、粉末、颗粒物质、膜、液体、溶液、悬浮液、口腔冲洗剂或漱口水、盐水洗涤液、可分散流体、喷雾剂、快速溶解纤维诸如聚乙烯吡咯烷酮和聚(乙烯醇)、以及它们的组合。考虑到其在崩解之前不应被吞咽并且可以容易地放入口中，固体口服剂型可具有任何期望的大小、形状、重量、稠度或硬度。另选地，个人医疗保健组合物可以是鼻用组合物。鼻用组合物可以是能够快速分散在鼻子中的任何剂型。鼻用剂型的非限制性示例可包括蒸气、乳膏、软膏、粉末、颗粒物质、膜、液体、可分散流体、喷雾剂以及它们的组合。

如本文所用，关于人/哺乳动物的术语“施用”是指人/哺乳动物摄取或被引导摄取，或摄取，或递送，或咀嚼，或饮用或喷雾，或置于口腔或鼻子中，或吸入一种或多种个人医疗保健组合物。施用可按需要或期望进行，例如每周一次或每天，包括每天多次，例如每天至少一次、每天至少两次、每天至少三次或每天至少四次。

可施用个人医疗保健组合物以预防和治疗感冒样症状。如本文所用，“感冒样症状”是指通常与呼吸道病毒感染相关的症状。这些症状包括但不限于鼻塞、胸闷、打喷嚏、鼻漏、疲劳或不适、咳嗽、发烧、喉咽痛、头痛和其他已知的感冒症状。

如本文进一步使用的，关于呼吸道疾病的“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指施用所提及的组合物预防、缓解、改善、抑制或减轻呼吸道疾病的一种或多种症状或呼吸道疾病本身，或相对于有需要的哺乳动物受试者，优选地人类的呼吸道疾病的任何类似益处。因此，此类益处包括例如：预防呼吸道疾病或其相关症状在哺乳动物中发生，例如当哺乳动物易患呼吸道疾病但尚未被诊断出患有该疾病时；抑制呼吸道疾病或其相关症状；和/或缓解、逆转或治愈呼吸道疾病或其相关症状。就本发明的方法涉及预防呼吸道疾病而言，应理解，术语“预防”不要求完全阻挡呼吸道疾病。相反，如本文所用，术语“预防”等是指技术人员识别对呼吸道疾病(诸如例如，在冬季月份的人类中)的易感性的能力，使得所提及的组合物的施用可在与疾病相关的症状发作之前发生。

本发明的个人医疗保健组合物和方法可包括、由或基本上由以下因素组成：本文所述的本发明的基本要素和限制，以及本文所述或以其他方式用于旨在供受试者使用的个人医疗保健组合物中的任何附加或任选的成分、组分或限制。

除非另外指明，否则本文中所有份数、百分比和比率均按重量计。除非另外指明，否则所有此类涉及所列成分的重量均基于活性物质水平计，并且因此不包括可包含于可商购获得的材料中的溶剂或副产物。除非另外指明，否则本文所涉及的所有测量均在25℃下进行。

本发明的个人医疗保健组合物可包含一种或多种以下物质：

个人医疗保健组合物可包含溶剂。溶剂的非限制性示例包括水、丙二醇、乙醇、甘油、聚乙二醇以及它们的混合物。溶剂可以按组合物的重量计约2％至约99％，或者约5％至约95％，或者约10％至约80％，或者约12％至约65％，或者约20％至约50％的量存在。

个人医疗保健组合物可包含增稠剂。增稠剂的非限制性示例可包括羧甲基纤维素(CMC)、羧甲基纤维素钠；以及它们的混合物。当存在时，组合物可包含约0.01％至约60％，或者约0.1％至约40％，或者约1％至约30％，或者约2％至约20％，或者约3％至约15％的增稠剂，所有百分比均按组合物的重量计。在一个方面，增稠剂可提供保湿和/或水合益处，其减轻了接触时的咳嗽和/或有助于愈合口腔和/或咽喉。

个人医疗保健组合物可包含稀释剂。稀释剂的非限制性示例可包括微晶纤维素、硅化微晶纤维素诸如

个人医疗保健组合物可包含崩解剂。可包括崩解剂以在施用后制定固体口服剂型的快速崩解。崩解剂的非限制性示例可包括交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代的羟丙基纤维素、瓜尔胶、藻酸钠以及它们的混合物。合适的崩解剂水平为按组合物的重量计约1％至约20％，或者约2％至约15％，或者约3％至约10％，或者约5％至约8％。

在一个方面，组合物可包含甘露糖醇和交联聚维酮以提供快速崩解和溶解。使用可溶性糖如甘露糖醇的一个优点是它可以吸收水并快速溶解。使用崩解剂如交联聚维酮的一个优点是它可以吸收水并溶胀，从而导致剂型分解。当剂型分解时，其暴露于液体，诸如口腔中的唾液，并且可更快地溶解。甘露糖醇与交联聚维酮的比率可为约15:1，或者约13:1，或者约10:1。

个人医疗保健组合物可包含润滑剂。润滑剂的非限制性示例可包括硬脂富马酸钠、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、氢化植物油、滑石、聚乙二醇、矿物油以及它们的组合。润滑剂的合适水平为按组合物的重量计约0.05％至约5％，或者约0.1％至约3％，或者约0.25％至约1.5％，或者约0.3％至约1％，或者约0.4％至约0.6％的润滑剂。

在一个方面，个人医疗保健组合物可以是非牛顿流体或触变流体，在经受剪切力时表现出降低的表观粘度，但在静止时表现出高的表观粘度。非牛顿流体的一个优点是它允许通过在施加剪切力(诸如通过剧烈摇动装置产生的那些)后立即用泵喷雾装置或挤压型喷雾瓶喷涂来施用，但使所喷涂的材料在粘膜或皮肤上保持至少暂时相对不可移动。优选地，组合物在撤回剪切力后可具有非常快速的粘度恢复率。

个人医疗保健组合物可包含流变改性剂。流变改性剂的非限制性示例可包括羧甲基纤维素钠、褐藻胶、角叉菜胶(包括ι、κ、λ角叉菜胶以及它们的组合)、卡波姆、半乳甘露聚糖、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基壳多糖钠、羧甲基葡聚糖钠、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物(可从FMCCorporation,Philadelphia,Pa以

个人医疗保健组合物还可包含湿润剂。可以是吸湿性物质，诸如甘油、聚乙烯或其他二醇、多糖、芦荟等的湿润剂用于抑制组合物的水分流失并且可增加保湿性质。

个人医疗保健组合物可包含酸性剂。酸性剂可包括有机酸、焦谷氨酸以及它们的组合。合适的有机酸可包括但不限于抗坏血酸、单羧酸、二羧酸、三羧酸以及它们的混合物。合适的单羧酸、二羧酸或三羧酸的具体非限制性示例包括水杨酸、富马酸、苯甲酸、戊二酸、乳酸、柠檬酸、丙二酸、乙酸、乙醇酸、苹果酸、己二酸、琥珀酸、天冬氨酸、邻苯二甲酸、酒石酸、谷氨酸、葡糖酸以及它们的混合物。不受理论的限制，据信在鼻用组合物中掺入酸可以为病毒创造恶劣环境，而不会显著刺激呼吸道的特定区域，诸如鼻组织。该组合物可包含约0.01％至约10％，或者约0.05％至约5％，或者约0.10％至约2.5％的有机酸，所有百分比均按组合物的重量计。

个人医疗保健组合物可包含表面活性剂扩散助剂，诸如以聚山梨醇酯80市售的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯、以聚山梨醇酯20市售的聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙二醇400硬脂酸酯、聚乙二醇、以泊洛沙姆407市售的聚乙烯-聚丙二醇以及它们的组合。表面活性剂可以按组合物的重量计在约0.001％至约10％，或者约0.01％至约5％，或者约0.1％至约3％范围内的浓度包含在组合物中。

附加组分

本文所述的医疗保健组合物可任选地包含一种或多种已知用于个人医疗保健产品的附加组分，前提条件是附加组分在物理和化学上与本文所述的组分相容，或不以其他方式不当地损害产品的稳定性、美观性或性能。适用于本文的任选组分包括以下物质，诸如防腐剂、pH调节剂、螯合剂、金属化合物、药物活性成分、维生素、草本成分、甜味剂、感觉剂、调味剂、天然蜂蜜、挥发性油、芳香组分(如樟脑、桉叶脑、薄荷醇、芳香剂等)、抗氧化剂、氨基酸、能量增强成分、睡眠助剂、氯化钠以及它们的组合。任选组分可以在约0.001％至约20％，或者约0.01％至约10％，或者约0.1％至约5％范围内的浓度包含在个人医疗保健组合物中，所有百分比均按组合物的重量计。

在一个方面，个人医疗保健组合物可包含防腐剂。可任选地包含防腐剂以防止微生物污染。防腐剂的非限制性示例可包括苯扎氯铵、葡萄糖酸氯己定、苯乙醇、苯氧基乙醇、苄醇、山梨酸、硫柳汞、乙酸苯汞、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇以及它们的混合物。

在一个方面，个人医疗保健组合物可包含pH调节剂。pH调节剂的非限制性示例可包括碳酸氢钠、磷酸钠、氢氧化钠、氢氧化铵、锡酸钠、三乙醇胺、柠檬酸钠、琥珀酸二钠以及它们的混合物。任选的pH调节剂可包含在组合物中以将pH调节至约2至约8，或者约2至约5的值。如果存在，pH调节剂通常以按组合物的重量计在约0.01％至约5.0％范围内的浓度包含在内。

在一个方面，个人医疗保健组合物可包含螯合剂。合适的任选螯合剂的非限制性示例可包括植酸、乙二胺四乙酸(EDTA)的二钠盐和钙盐、EDTA四钠、六偏磷酸钠(SHMP)、二(羟乙基)甘氨酸、8-羟基喹啉以及它们的混合物。螯合剂可以按组合物的重量计在约0.001％至10％，优选地约0.005％至约5％，更优选地约0.01％至约2％范围内的浓度包含在内。

个人医疗保健组合物可包含金属化合物。适用于本文的金属化合物包括含有选自由以下组成的组的金属离子的那些金属化合物：锰(Mn)、银(Ag)、锌(Zn)、锡(Sn)、铁(Fe)、铜(Cu)、铝(Al)、镍(Ni)、钴(Co)以及它们的混合物。适用于本文的金属化合物的非限制性示例包括乙酸锌、氯化锌、抗坏血酸锌、葡糖酸锌、zincpidolate、琥珀酸锌、硫酸锌、依地酸锌以及它们的混合物。乙酸锌是最优选的金属化合物。

当个人医疗保健组合物包含含有锌离子的金属化合物时，据信锌离子提供抗病毒特性。锌离子已被证明为抗病毒和抗菌的。据信它们抑制鼻病毒多肽的裂解，防止感染病毒粒子的复制和形成。锌离子部分地通过降低细胞间粘附分子ICAM的表达来降低鼻病毒穿透细胞膜的能力。锌离子也被证明刺激T细胞淋巴细胞，包括天然抗病毒、干扰素-γ的产生。这些锌离子稳定细胞质膜，保护细胞免受细胞毒性剂的影响，并防止细胞渗漏。此外，已知金属离子诸如铁、银、铜和锌可提供抗病毒特性以预防和治疗感冒和流感样症状。个人医疗保健组合物中金属化合物的浓度可以在约0.001％至约20％，或者约0.01％至约10％，或者约0.05％至约5％，或者约0.1％至约2％，或者0.2％至约1％的范围内，所有百分比均按组合物的重量计。

药物活性成分的非限制性示例可包括薄荷醇；麻醉剂，诸如苯佐卡因(benzocaine)和利多卡因(lidocaine)；减充血剂，诸如去氧肾上腺素、伪麻黄碱、丁苄唑啉(xylometazoline)和羟甲唑啉(oxymetazoline)；抗组胺药，诸如多西拉敏(doxylamine)、苯海拉明(diphenhydramine)、氯雷他定(loratadine)和西替利嗪(cetirizine)；祛痰剂，诸如愈创甘油醚(guaifenesin)、氨溴索(ambroxol)和溴已新(bromhexine)；止痛剂，诸如对乙酰氨基酚(APAP)、布洛芬(ibuprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、双氯芬酸(diclofenac)、萘普生(naproxen)和阿司匹林(aspirin)；镇咳剂，诸如右美沙芬(dextromethorphan)、可待因(codeine)、氯苯达诺(chlophedianol)和左旋丙嗪(levodropropizine)；它们的游离盐和加成盐；以及它们的组合。药物活性成分可以约0.01％至约25％，或者约0.05％至约15％，或者约0.1％至约10％、约1％至约5％的水平存在，所有百分比均按组合物的重量计。在一个方面，个人医疗保健组合物可包含至少一种适配体和一种或多种药物活性成分以缓解一种或多种症状并抑制鼻病毒结合。

维生素的非限制性示例可包括维生素A、维生素C、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素K1、维生素K3、维生素B1、维生素B3、叶酸、维生素B12、维生素B3、维生素B7以及它们的组合。在一些方面，组合物可包含约0.1％至约10％，或者约1％至约8％，或者约2％至约6％的维生素，所有百分比均按组合物的重量计。

草本成分的非限制性示例可包括迷迭香(叶)、姜、柠檬香脂、绿茶、圣罗勒、牛至、百里香、印度人参、假马齿苋、春黄菊、缬草、迷迭香、姜黄、葡萄籽、蓝莓、咖啡、姜黄素、接骨木莓、药用蜀葵根、常春藤叶、红茶、白茶、乌龙茶、绿茶以及它们的组合。在一些方面，草本成分可为全草本或植物部分、提取物、粉末、浓缩物或它们的组合。在一些方面，组合物可包含约0.1％至约10％、或者约1％至约8％、或者约2％至约6％的草本成分，所有百分比均按组合物的重量计。

在一个方面，甜味剂可选自包含以下的组：糖醇、合成甜味剂、高强度天然甜味剂以及它们的组合。

营养甜味剂的非限制性示例可包括蔗糖、右旋糖、葡萄糖、果糖、乳糖、塔格糖、麦芽糖、海藻糖、高果糖玉米糖浆以及它们的组合。营养甜味剂可以按组合物的重量计约1％至约99％，或者约4％至约95％，或者约10％至约70％，或者约15％至约60％，或者约25％至约50％，在另一个示例中约35％至约45％的量存在。

糖醇的非限制性示例可包括木糖醇、山梨醇、甘露醇、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖醇、赤藓醇以及它们的组合。糖醇可以按组合物的重量计约5％至约70％，或者约10％至约60％，或者约15％至约55％，或者约25％至约50％，或者约30％至约45％的量存在。

合成甜味剂的非限制性示例可包括天冬甜素、丁磺氨钾、阿力甜、糖精钠、三氯蔗糖、纽甜、环磺酸盐以及它们的组合。合成甜味剂可以按组合物的重量计约0.01％至约10％，或者约0.05％至约5％，或者约0.1％至约3％，或者约0.2％至约1％，或者约0.1％至约0.5％的量存在。

高强度天然甜味剂的非限制性示例可包括新橙皮苷二氢查耳酮、蛇菊苷、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙C、杜尔可甙、甘草酸单铵、非洲甜果素以及它们的组合。高强度天然甜味剂可以按组合物的重量计约0.01％至约10％，或者约0.05％至约5％，或者约0.1％至约3％，或者约0.5％至约1％的量存在。

个人医疗保健组合物可包含调味体系，该调味体系包括感觉剂、调味剂、流涎剂以及它们的组合。

个人医疗保健组合物可包含感觉剂。感觉剂的非限制性示例可包括凉爽感觉剂、温热感觉剂、麻刺感觉剂以及它们的组合。感觉剂可将感觉信号递送到口腔、咽喉、鼻腔和/或鼻窦通道，使得个人医疗保健组合物可以被用户感知为立即用于缓解疾病和/或提供舒缓的感觉。

凉爽感觉剂的非限制性示例可包括WS-23(2-异丙基-N,2,3-三甲基丁酰胺)、WS-3(N-乙基-对薄荷烷-3-甲酰胺)、WS-30(1-甘油基-对薄荷烷-3-羧酸酯)、WS-4(乙二醇-对甲烷-3-羧酸酯)、WS-14(N-叔丁基-对薄荷烷-3-甲酰胺)、WS-12(N-(4-，乙氧苯基)-对薄荷烷-3-甲酰胺)、WS-5(3-(对薄荷烷-3-甲酰氨基)乙酸乙酯)、薄荷醇、左旋薄荷醇、l-薄荷酮甘油缩酮(由Symrise,Holzminden,Germany以

温热感觉剂的非限制性示例可包括香草醇正丁基醚(由Takasago International以TK-1000出售)、HeatenolTM(购自Sensient Pharmaceutical,St.Louis,MO)、Optaheat(由Symrise,Holzminden,Germany出售)、姜提取物、辣椒酊、肉桂、辣椒素、咖喱、异丁酸香兰酯(Isobutavan)、诺香草胺(Nonivamide)、香草基丁基醚(可以

调味剂的非限制性示例可包括天然调味剂、人工调味剂、人工提取物、天然提取物以及它们的组合。调味剂的非限制性示例可包括香草、蜂蜜、柠檬、柠檬蜂蜜、樱桃香草、桃子、蜜姜、春黄菊、樱桃、樱桃霜、薄荷、香草薄荷、黑莓(darkberry)、黑莓(blackberry)、覆盆子、胡椒薄荷、留兰香、水蜜桃、巴西莓、蔓越莓、蜂蜜蔓越莓、热带水果、火龙果、枸杞、红茎薄荷、石榴、黑加仑、草莓、柠檬、酸橙、桃姜、橙子、橙皮霜、杏、茴香脑、姜、菠萝蜜、杨桃、蓝莓、什果宾治、柠檬草、香蕉、草莓-香蕉汁、葡萄、树莓、柠檬青柠汁、冬绿色薄荷、口香糖、酸蜂蜜柠檬、青苹果、苹果、橘子、柚子、猕猴桃、梨、橘子、橘子酸橙、薄荷醇以及它们的组合。调味剂可以按组合物的重量计约0.05％至约10％，或者约0.1％至约8％，或者约0.2％至约6％，或者0.4％至约3％，或者约0.6％至约1.5％存在。

本文还描述了包含本文所述的个人医疗保健组合物的试剂盒。在一个方面，试剂盒可包括递送装置和包含在递送装置中的个人医疗保健组合物。在一个方面，试剂盒可任选地包括至少一种附加组分，诸如补充剂或维生素组合物。

本文还描述了提供一种或多种健康益处的方法，该方法包括向有需要的受试者施用如本文所述的包含适配体的个人医疗保健组合物，其中该适配体对ICAM-1具有结合亲和力。一种或多种健康益处的非限制性示例可包括提供物理屏障以阻断鼻病毒结合并进入细胞、有助于阻止由鼻病毒引起的感冒形成、降低由鼻病毒引起的感冒的严重程度和/或持续时间、减少患感冒的可能性以及它们的组合。

实施例

以下实施例说明了本文所述的本发明的非限制性实施例。示例性的个人医疗保健组合物可通过常规制剂和混合技术来制备。应当理解，在不脱离本发明的实质和范围的情况下，这些制剂领域内的技术人员可对个人医疗保健组合物进行其他的改性。

以下为本文所述的个人医疗保健组合物的非限制性实施例。

口腔组合物实施例

咽喉喷雾剂

口服溶解片剂配方

液体组合物

咽喉锭剂组合物

鼻用组合物

盐水鼻喷剂组合物

鼻喷剂组合物

附加鼻喷剂组合物

V.实施例

实施例1.适配体选择和下一代序列表征

A.选择策略

本发明的一个目的是开发不仅与ICAM-1受体特异性结合而且将以阻断或抑制病毒颗粒与受体蛋白结合的方式这样做的适配体。单独针对ICAM-1受体的细胞外结构域的适配体的选择不一定足以阻断病毒与相同蛋白的结合，因为适配体相对较小并且它们的阻断足迹将限于它们结合的表位。如果适配体结合的表位不涉及病毒与ICAM-1受体的结合，则它们不会抑制病毒颗粒的结合。

此目的被有意识地纳入到选择策略中，首先通过包括针对ICAM-1蛋白(SEQ IDNO:214)的细胞外结构域的几轮阳性选择；其次，通过施加双重阳性选择，使得适配体将在鼻细胞的背景下富集，用于与ICAM-1细胞外结构域的结合；第三，通过对携带类似受体蛋白(ICAM-3和ICAM-5)的HEK293细胞施加反选择；以及第四，通过针对特定的期望和不期望的适配体结合结果进行选择通道，包括通过添加鼻病毒颗粒从鼻细胞中特异性洗脱结合的适配体，通过预先施用鼻病毒颗粒阻断适配体与ICAM-1细胞的结合，针对HEK293细胞的阳性选择，针对ICAM-1的细胞外结构域的阳性选择，以及针对ICAM-1和鼻细胞的细胞外结构域的双重阳性选择。

当ICAM-1受体存在于鼻细胞上时，双重阳性选择(ICAM-1和鼻细胞的细胞外结构域)确保所富集的适配体有利于与ICAM-1受体结合。如果仅针对ICAM-1的细胞外结构域进行选择，则可能存在体内不存在的表位。如果仅针对鼻细胞进行选择，则适配体将针对此类细胞表面上除ICAM-1之外的结合靶标进行富集。

实施针对HEK293细胞的反选择以驱动与ICAM-1细胞外结构域的N端结合的适配体的富集。HEK293细胞表达ICAM受体家族的其他成员ICAM-3和ICAM-5。这些受体蛋白在细胞外结构域主要在其N端不同于ICAM-1。ICAM-1受体的N端是与鼻病毒颗粒结合的细胞外结构域的区域。因此，包括该反选择步骤以驱使适配体选择朝向那些将阻断或抑制鼻病毒与鼻细胞结合的适配体。

最后，一旦经针对ICAM-1和鼻细胞的细胞外结构域的双重阳性选择和针对HEK293细胞的反选择使适配体库富集，，则将所富集的库分离成等分试样，并且应用于几个不同的靶标，包括持续的双重阳性选择、针对HEK293细胞的阳性选择、仅针对细胞外结构域的阳性选择、基于与鼻细胞结合的适配体的鼻病毒颗粒洗脱的选择、以及基于通过用鼻病毒颗粒预处理阻断适配体与鼻细胞结合的选择。

这些所选择的库中的每个库均通过下一代测序来表征。针对双重阳性选择、细胞外结构域选择和鼻病毒颗粒启动选择方法中的任一者表现出更高水平富集和单独针对HEK293表现出更低富集的适配体将是阻断或抑制鼻病毒与鼻细胞结合的期望序列。

B.人细胞的生长

B.1.人鼻上皮细胞生长条件

将原代人鼻上皮细胞(HNepC；PromoCell，目录号C-21060)在气道上皮细胞生长培养基(PromoCell，目录号C-21160)中于37℃和5％CO

B.2.HEK293细胞的生长

购自ATCC(CRL-1573)的HEK293细胞在Eagle氏最低必需培养基(EMEM)+10％胎牛血清(FBS)中于37℃和5％CO

B.3.人鼻病毒A16悬浮液

购买UV灭活的HRV16病毒颗粒(Zeptometrix Corporation)并在-80℃下储存直至使用。计算病毒颗粒(VP)的浓度为98,700vp/mL。

C.适配体选择

C.1.库制备

在第一步中，使用2'-氟嘧啶核苷酸(2F-UTP和2F-CTP)和天然嘌呤核苷酸的混合物将含有40个核苷酸的随机区域，其侧翼为两个保守区、正向引物识别序列(5’-GGGTGCATCGTTTACGC-3’；SEQ ID No224)和3'反向引物识别序列(5’-CTGCTGCTGAGGAAGGATATGAG-3’SEQ ID No225)(参见图1)的约10

简而言之，使用引物Lib7_T7Fwd引物(序列：5’-TAATACGACTCACTATA

DNA扩增后，通过使用突变T7聚合酶(T7R&DNA聚合酶，Lucigen，目录号D7P9205K)聚合酶以及rATP、rGTP和修饰的核苷酸2F-UTP和2F-CTP的混合物，在26×20μL转录反应中转录52μg纯化的dsDNA。将NTP以3:1修饰与未修饰的比率混合在一起。每种反应混合物含有4μL5xT7R&D聚合酶、1μLNTP3:1混合物、2μLDTT(0.1M)、0.7μLT7R&D聚合酶、1.2μL无机焦磷酸酶、0.5μLRnase抑制剂和10.6μLDNA模板。将反应在37℃下温育16小时。

通过设置由10μL10xDnase缓冲液、4μLDnaseI、66μLRnase游离水和20μL转录反应组成的反应混合物对转录库进行Dnase处理。然后将反应混合物在37℃下温育30分钟，添加1μL0.5MEDTA并混合，在75℃下进一步温育10分钟，并且使用Monarch RNA清除试剂盒(NewEngland Biolabs，目录号T2040L)纯化。

C.2.将ICAM-1固定在His-PurNi-NTA树脂上

将在C端区域上具有His标签的冻干ICAM-1蛋白(50μgRay-Biotech，目录号：228-21751-2)重悬于100μLsH

将His-Pur Ni-NTA(Fisher Scientific，目录号PI88221)树脂的等分试样转移到0.6mL管中，并以700×g离心2分钟。去除上清液，并用500μLPBS缓冲液(pH7.4)洗涤树脂3次。然后，将1xPBS缓冲液(pH7.4)中的ICAM-1蛋白的等分试样与His-PurNi-NTA树脂在4℃下一起温育过夜，同时混合。对于选择轮次1，将300皮摩尔ICAM-1蛋白固定到50μL树脂上。对于随后的轮次，将50皮摩尔ICAM-1蛋白固定到25μL树脂上。在蛋白质固定后，将树脂转移到带有玻璃料过滤器的1mL筒中，并用2mL1xPBS缓冲液洗涤。最后，添加1xPBS缓冲液中0.5mM-1mM咪唑的等分试样并在4℃下与树脂一起温育30分钟，以阻断树脂上未反应的结合位点。用1mL等分试样的1xPBS缓冲液洗涤树脂三次。

为了用咪唑封端的树脂进行阴性选择，将His-PurNi-NTA树脂的等分试样与适当浓度的在1xPBS缓冲液中的咪唑一起温育30分钟，以阻断树脂上未反应的结合位点，随后用1x选择缓冲液洗涤。用于本申请中的所有实施例的选择缓冲液是补充有氯化钙(CaCl2，0.9mM)、氯化镁(MgCl20.49mM)、氯化钾(KCl，2.67mM)、磷酸二氢钾(KH2PO4，1.47mM)、氯化钠(NaCl，137.93mM)和磷酸氢二钠(Na2HPO4，8.06mM)的Dulbecco氏PBS缓冲液。

C.3.适配体选择概述

适配体选择在十四个选择轮次(“SR”)中进行，其在图2中示出。选择轮次1至5富集了适配体库中与固定到Ni-NTA树脂上的ICAM-1结合的序列。在选择轮次6至9中，对适配体库进行相同的ICAM-1固定的Ni-NTA树脂程序，并将洗脱的适配体进一步朝向与人鼻上皮细胞(HNepC)结合的序列富集，这被称为双重阳性选择。在选择轮次10至11中，进行针对HEK293细胞的反选择和针对HNepC的阳性选择。图3中所示的选择轮次12至14突破到不同选择条件并且被称为分裂。进行五种不同的分裂：分裂A：鼻上皮细胞，分裂B：HEK293细胞，分裂C：ICAM-1蛋白，分裂D：人鼻病毒A16(HRV16)洗脱，以及分裂E：HRV16阻断。

C.4.适配体选择过程

C.4.1选择轮次1

通过针对ICAM-1固定的Ni-NTA树脂进行阳性选择来完成适配体选择轮次1。将RNA库(如第C.1节中所述产生)加热至45℃持续10分钟，并使其冷却至室温持续10分钟。然后，将制备的适配体库添加到固定在Ni-NTA树脂上的300皮摩尔ICAM-1(如第C.2节中所述制备)中并在室温下旋转温育30分钟。用500μL选择缓冲液(pH7.4)从树脂上洗去未结合的RNA。

然后通过向树脂中添加200μL6M尿素的等分试样并将悬浮液在85℃下温育5分钟来洗脱结合的RNA两次。收集回收的RNA库并使用Monarch RNA清除试剂盒纯化。

按照Protoscript II逆转录酶制造商的方案逆转录所收集的适配体库。逆转录反应的数量根据进入所述特定选择轮次的RNA的量而变化。

然后，使用标准PCR方案和以下扩增步骤通过聚合酶链反应(PCR)扩增逆转录的适配体库：

步骤1：95℃-5分钟

步骤2：95℃-10秒

步骤3：56℃-15秒

步骤4：72℃-30秒

重复步骤2至4，持续4个循环

步骤5：95℃-10秒

步骤6：59℃-15秒

步骤7：72℃-30秒

重复步骤5至7，持续至多26个循环。

然后将PCR所扩增的dsDNA适配体库转录回RNA中并使用第C.1节中描述的方案进行Dnase处理。

C.4.2选择轮次2至5

选择轮次2至5并入两种选择策略：针对咪唑封端的Ni-NTA树脂的阴性选择和用ICAM-1固定的Ni-NTA树脂的阳性选择(参见图2)。进行阴性选择以选择不与咪唑封端的Ni-NTA树脂结合的适配体序列(如第C.2节中所述制备)。首先，将50μL咪唑封端的树脂的等分试样转移到装有20μm玻璃料的1mL筒中，并且用1mL等分试样的选择缓冲液洗涤两次。然后，将来自先前选择轮次的制备的RNA库加热至45℃持续10分钟，并使其冷却至室温持续10分钟。将RNA库添加到筒中并与咪唑封端的Ni-NTA树脂在室温下一起温育30分钟。温育后，收集流过的溶液。然后，使用500μL选择缓冲液的等分试样洗涤该筒，并收集溶液。将流过的溶液和柱洗涤收集物汇集在一起并按照制造方案用Monarch RNA清除试剂盒纯化。

然后对从阴性选择获得的RNA库进行阳性选择，其选择与ICAM-1固定的Ni-NTA树脂(如第C.2节中所述制备)结合的序列。简而言之，将RNA库加热至45℃持续10分钟，并使其冷却至室温持续10分钟。然后，将RNA库添加到固定在Ni-NTA树脂上的50皮摩尔ICAM-1(如第C.2节中所述制备)中并在室温下旋转温育30分钟。用500μL选择缓冲液的等分试样从树脂上洗去未结合的RNA。洗涤次数根据选择轮次和完成阳性选择的数量而变化，并且通过选择建模预先确定。然后，通过向树脂中添加200μL6M尿素的等分试样并将悬浮液在85℃下温育5分钟来洗脱结合的RNA库两次。收集所洗脱的RNA库并用Monarch RNA清除试剂盒纯化，随后如第C.1节和第C.4.1节中所述进行逆转录、PCR扩增、转录和DNAse处理。

C.4.3.选择轮次6至9

从选择轮次1至5所富集的RNA适配体库在选择轮次6至9中进一步富集，其利用两种选择策略：用ICAM-1固定的Ni-NTA树脂的阳性选择和针对表达ICAM-1受体的人鼻上皮细胞(HNepC)的另一阳性选择。这组选择轮次被称为“双重阳性选择”。在选择轮次8中，进行了针对HNepC的两个阳性选择(即“三重阳性选择”)。

在选择轮次6和7中，将RNA库重悬于500μL1x选择缓冲液中。第一阳性选择(针对ICAM-1固定的Ni-NTA树脂选择)通过将所重悬的RNA添加到固定在Ni-NTA树脂上的ICAM-1中开始，随后在37℃下温育30分钟。丢弃未结合的RNA，并用500μL1x选择缓冲液的等分试样洗涤树脂。对于洗脱步骤，将200μL6M尿素的等分试样添加到树脂中并在85℃下温育5分钟，并收集洗脱溶液。重复洗脱步骤，并将洗脱液汇集在一起并使用Monarch RNA净化试剂盒清洗。

第二阳性选择开始于通过从细胞生长的6孔板(约3mL)抽吸培养基制备HNepC细胞，随后用3mL预热的1x选择缓冲液洗涤细胞三次。将1mLRNA库于1x选择缓冲液中的溶液立即施加到所洗涤的细胞，并在37℃和50转/分钟(rpm)下温育30分钟。温育30分钟后，收集含有约50％细胞的上清液，将细胞以500×g沉淀2分钟，并用200μL预热的1x选择缓冲液洗涤两次。收集细胞沉淀，并通过添加6M尿素从细胞中洗脱结合的RNA，随后在85℃下温育并进行RNA纯化。

将粘附的细胞(即剩余的约50％细胞)用1mL预热的1x选择缓冲液洗涤两次。然后，添加1mL10mMEDTA的等分试样并使其与细胞在37℃下以50rpm一起温育15分钟。将经EDTA处理的细胞以500×g沉淀2分钟。然后，将200μL6M尿素的等分试样添加到沉淀中，并将悬浮液加热至85℃持续5分钟，随后以13,000rpm离心以回收上清液中的RNA适配体。再次重复洗脱步骤，合并洗脱液，并纯化RNA适配体。按照第C.1节和第C.4.1节中的方案对纯化的样品进行逆转录、PCR扩增和转录。

在选择轮次8和9中，从方案中去除细胞的EDTA提升，并使用6M尿素将与细胞结合的RNA洗脱，同时它们仍附接到6孔板。另外，在两个轮次中包括阴性选择步骤以去除与6孔培养板的塑料结合的任何RNA序列。对于阴性选择，将RNA库重悬于1mL1x选择缓冲液中，随后加热至37℃持续至少10分钟。将6孔培养板中的一个孔用1mL1x选择缓冲液预洗涤两次。然后，将加热的RNA库添加到孔中并在37℃和50rpm下温育30分钟。收集孔中的溶液并使用选择缓冲液达到1mL体积。将所得的1mL RNA库溶液与在6孔板中生长的HNepC在37℃下以50rpm一起培温育1小时。从细胞中去除未结合的RNA，并将细胞用1mL1x选择缓冲液(预热至37℃)洗涤两次。通过添加1mL6M尿素并将细胞在85℃下温育5分钟来洗脱结合的RNA。重复洗脱步骤。将洗脱液汇集在一起，并使用Monarch RNA净化试剂盒纯化RNA。如先前所述，对所选RNA进行逆转录、PCR扩增、转录和DNAse处理。

C.4.4.选择轮次10和11

在选择轮次10和11中，引入针对HEK293细胞的阴性选择(参见图2)。HEK293细胞不表达ICAM-1受体，其允许对结合在细胞表面上不是ICAM-1的其他地方的序列进行反选择。

HEK293细胞在6孔培养板中生长，并以80％或更高的融合度使用。通过从孔中去除并丢弃所有培养基并用3mL预热的1x选择缓冲液洗涤细胞三次来制备细胞。然后，将所制备的RNA库添加到细胞中，并在温和振荡(50rpm)下将库和细胞溶液在37℃下温育1小时。温育后，去除并收集具有未结合的RNA库的上清液。然后，用1mL预热的1x选择缓冲液洗涤细胞，并且还收集溶液。合并所收集的RNA溶液并用Monarch RNA清除试剂盒纯化。然后按照如选择轮次8和9所述的相同方案(参见第C.4.3节)对该纯化的RNA库进行针对HNepC的阳性选择轮次。在选择轮次10中进行两个阳性选择，而在选择轮次11中完成单个阳性选择。

C.4.5.选择轮次12至14：鼻上皮细胞分裂

在选择轮次12至14的鼻上皮细胞分裂中(参见图3)，从选择轮次11中收集的RNA库进一步针对HEK293细胞进行阴性选择，随后使用在第C.4.4节中描述的方案用HNepC进行阳性选择。

C.4.6.选择轮次12至14：HEK293细胞分裂

在选择轮次12至14的HEK293细胞分裂中(参见图3)，从选择轮次11中收集的RNA库朝向结合HEK293细胞的序列富集。该选择轮次的方案遵循第C.4.4节中描述的选择轮次10至11的程序，不包括用HNepC进行选择。

C.4.7.选择轮次12至14：ICAM-1蛋白分裂

在选择轮次12至14的ICAM-1分裂中(参见图3)，从选择轮次11中收集的RNA库朝向结合固定在Ni-NTA树脂上的ICAM-1的序列富集。该选择轮次的方案遵循在第C.1节和第C.4.1节中描述的选择轮次1的程序。

C.4.8.选择轮次12至13：人鼻病毒A16(HRV16)洗脱分裂

仅在选择轮次12和13期间发生HRV16洗脱分离(参见图3)。在选择轮次11中收集的RNA库通过针对HEK293细胞的阴性选择进一步富集，随后使用人鼻病毒A16(HRV16)颗粒对HNepC进行阳性选择以洗脱适配体库。对HEK293细胞的阴性选择遵循在第C.4.4节中描述的选择轮次10和11的相同方案，但不包括针对HNepC的选择。

在用HEK293细胞进行阴性选择之后，将收集的RNA在1x选择缓冲液中稀释并加热至37℃持续15分钟。将HNepC细胞用1mL预热的选择缓冲液洗涤三次，并将加热的RNA库添加到细胞中并在37℃和50rpm下温育1小时。温育后，去除未结合的RNA并丢弃。将回收的细胞用1mL预热的1x选择缓冲液洗涤十次。然后，将50％(v/v)病毒颗粒(VP)(参见第B.3节)于1x选择缓冲液中的悬浮液与细胞混合并在37℃下以50rpm混合温育1小时。收集上清液，并按照第C.1节和第C.4.1节中描述的方案纯化并逆转录RNA。

C.4.9.选择轮次12和13：HRV16阻断分裂

在选择轮次12和13期间进行HRV16阻断分裂(参见图3)。选择轮11的RNA文库进一步通过对HEK293细胞的阴性选择来富集，随后在将细胞暴露于RNA库之前，用与ICAM-1受体结合的HRV16对HNepC进行阳性选择。HEK293阴性选择遵循第C.4.4节中描述的选择轮次10和11的相同方案，不包括用HNepC进行选择。

对HEK293细胞进行阴性选择之后，制备了50％(v/v)病毒颗粒(VP)于1x选择缓冲液中的悬浮液。然后，将悬浮液加热至37℃持续15分钟并与预洗涤的HNepC细胞混合，随后在37℃和50rpm下温育1小时。温育后，去除所有未结合的VP并丢弃。然后，将从阴性选择中回收的RNA库重悬于1x选择缓冲液中，添加到细胞中并在37℃下温育1小时。按照第C.1节和第C.4.1节中所述的方案收集，纯化并逆转录含有未结合RNA的上清液。

D.适配体测序

在14个选择轮次之后，对适配体库进行测序。概括地说，轮次10至14的选择库通过两步PCR过程制备以用于下一代测序(NGS)。在第一步中，将不同的hex代码(6碱基序列)和通用测序引物的一部分添加到每个适配体库的5'端。在第二步中，将完整的通用测序引物添加到两端。在第二个PCR步骤之后，通过丙烯酰胺电泳纯化这些库并且平衡相对量。然后将这些库合并，并将这些库发送到多伦多的病童医院使用Illumina HiSeq2500仪器进行NGS。

将测序数据制成表格并进行分析。对总计16,116,086个序列进行分析，并且每个库包含超过200,000个序列。将来自选择轮次14(鼻上皮细胞分裂)的序列按拷贝数排序并按降序命名，其中最高拷贝数的序列命名为Nas.R-1。这些前面序列在表3中列出。

在从其他选择轮次获得的库上测定选择轮次14的前面序列的拷贝数。最后，通过将观察到的拷贝数除以在特定选择库中观察到的序列总数来计算每个序列的频率。绘制前20个序列在不同选择轮次的频率方面的富集轨迹(参见图4)。在选择期间，这些序列以相似的速率富集。

实施例2.适配体结合特异性

期望鉴定特异性结合ICAM-1受体并阻断鼻病毒感染人鼻上皮细胞的能力的适配体序列。上一节(实施例1)详述了确定在ICAM-1存在下富集的序列的选择过程的方案。本节将突出显示用于确定实施例1中发现的对ICAM-1受体靶标具有最高亲和力和特异性的序列的方案。

实施多种策略以确定来自RNA适配体的选择过程的重要序列，该适配体与人上皮细胞(HNepC)特异性结合并且对其具有高亲和力，但对不表达ICAM-1靶标的HEK293细胞不具有高亲和力。第一方案包括将HNepC和HEK293细胞暴露于一些所选适配体序列，然后温育、洗脱和定量与每种细胞类型结合的适配体浓度。实施的另一种策略包括可视化和鉴定与HNepC结合但不与HEK293细胞视觉结合的荧光标记的RNA适配体。最终策略包括固定前面RNA适配体序列，然后使ICAM-1蛋白和其他各种蛋白质的细胞外结构域流过适配体并使用等离子体共振来确定结合亲和力。以下部分详细描述了以上概述的策略。

A.通过qPCR检测结合特异性和亲和力

A.1.适配体RNA序列的合成

购买了对应于RNA适配体有义序列和反义序列以及T7RNA聚合酶启动子的DNA寡核苷酸(Integrated DNA Technologies)。将每种寡核苷酸以等摩尔浓度在含有50mM KCl和1.5mM MgCl2的10mM Tris缓冲液(pH 8.3)中混合，然后在95℃下温育5分钟。然后，通过dsDNA模板的转录来合成修饰的RNA适配体，然后进行DNAse处理，并如实施例1第C.1节和第C.4.1节所述进行纯化。

A.2.RNA适配体、HNepC和Hek293细胞制备

将修饰的RNA适配体以28.2nM的浓度溶解在1x选择缓冲液中。按照实施例1第B.1节和第B.2节中概述的方案，使HNepC或HEK293细胞在24孔板的孔中以在70％-75％(HNepC)或90％-95％(HEK293细胞)范围内的密度生长。

A.3.qPCR分析程序

对于每个样品，使用Luna qPCR universa lmastermix(New England Biolabs，目录号M3003L)、0.2μM每种引物(正向引物：5’-TAATACGACTCACTATAGGGTGCATCGTTTACGC-3’(SEQ ID No 226)、反向引物：5’-CTCATATCCTTCCTCAGCAGCAG-3’(SEQ ID No 227))和5μLcDNA样品制备两种20μLqPCR反应物。还制备含有已知量的有义DNA模板的qPCR反应物。使用以下条件进行PCR反应：

步骤1：95℃持续3分钟

步骤2：95℃保持15秒

步骤3：56℃持续15秒

步骤4：60℃持续30秒

重复步骤2至4，持续40个循环。

将结合测定样品的Ct值与已知量的DNA样品的Ct值进行比较，以确定与细胞结合的RNA的量。

A.4.人鼻上皮和HEK293适配体结合测定

测试选择过程(实施例1)中鉴定的前面适配体序列中的六个序列(Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4、Nas.R-5、Nas.R-7和Nas.R-8)对HNepC或HEK293细胞的结合特异性和亲和力。如第A.2节所述制备RNA适配体、HNepC和HEK293细胞。

将适配体与HNepC在37℃和5％CO2下温育1小时，每15分钟轻轻摇动。去除未结合的RNA，并用150μL在37℃下预热的1x选择缓冲液洗涤细胞四次。为了洗脱结合的RNA适配体，将200μL6M尿素的等分试样添加到细胞中，然后在85℃下温育5分钟。重复洗脱步骤，合并洗脱液，并按照制造商的方案使用Monarch RNA净化试剂盒纯化RNA适配体。按照制造商的方案，将每个RNA样品在20μLM-MμLV(New England Biolabs，M0253L)逆转录酶反应中逆转录。按照第A.3节中描述的方案，使用qPCR分析对逆转录序列进行定量。HEK293细胞遵循相同的步骤。结果示出于图5中。对于适配体Nas.R-2、Nas.R-4、Nas.R-5、Nas.R-7和Nas.R-8，对HNepC的结合亲和力高于对HEK293细胞的结合亲和力。

B.1.通过荧光可视化与HNepC和HEK293上的ICAM-1结合的适配体

B.1.1.荧光标记的RNA适配体的制备

先前在第A.1节中所述在3'端处合成具有间隔子的修饰的RNA适配体Nas.R-4(AAACAAACAAAC；SEQ ID No235)和有义结合序列(

5’-GGGUGCAUCGUUUACGCGCAACAUAAAAAUUUAAAGUGCUCAGUUGUCAAUCUAUGACUGCUGCUGAGGAAGGAUAUGAGAAACAAACAAAC

添加有义结合序列以退火到6-FAM标记的荧光反义寡核苷酸。在每次结合测定之前，将NAS-FAM反义寡核苷酸(5’6-FAM/CCTGTTGGAGACCGCCATAC-3’(SEQ ID No230))与等摩尔浓度的经过修饰的RNA适配体在1x选择缓冲液中混合，然后在37℃下温育15分钟。

B.1.2.HNepC和Hek293细胞制备

按照第A.2节中概述的程序制备HNepC和HEK293细胞，但在测定前一至两天以约50％的密度接种到浸没于24孔板的孔中的培养基中的12mm玻璃盖玻片(FisherScientific，目录号12-545-82)上。

B.1.3.荧光标记的适配体与细胞的结合

从HNepC培养物中抽吸培养基。然后，将如第B.1节所述制备的150μL适配体/NAS-FAM反义混合物的等分试样施加到细胞上，然后在37℃和5％CO

B.2.通过使用荧光的病毒抑制测定可视化H1-HeLa细胞上的病毒抑制

与阴性对照适配体相比，在病毒抑制测定中测试与ICAM-1结合的DNA适配体Nas.R-2和Nas.R-8，以证明其在阻断鼻病毒感染中的功效(图7A-图7H)。

B.2.1.适配体温育和病毒感染

将RPMI+2％胎牛血清中的H1-HeLa细胞以1×10

B.2.2.病毒抑制的定量

在总温育期后，将宿主细胞板在-60℃至-90℃冷冻过夜，并且然后在环境温度下解冻。分别收获每个孔的内容物并以2,000rpm离心10分钟。收集每次收获的上清液，在细胞培养基中连续稀释并接种到新鲜的H1-HeLa细胞上，以使用组织培养感染量50％(TCID

B.2.3.表1：结果

图7A-图7H将结果显示为图像。如果TRITC标记的病毒能够感染细胞，则在荧光图像中可以看到红色标记的细胞。荧光图像中细胞的位置基于明场图像中的对应位置用箭头标记。使用Nas.R-2适配体(图7A荧光图像；图7B明场图像)没有看到感染。使用Nas.R-8适配体(图7C荧光图像；图7D明场图像)可以看到几乎无感染。使用阴性对照适配体(图7F明场图像)感染细胞并呈现红色(图7E)，并且图7G和H显示未用病毒感染的对照细胞(图7G荧光图像图7H明场图像)。

C.通过表面等离子体共振(SPR)测定结合亲和力

C.1.金芯片中RNA适配体的固定

将RNA适配体Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4、Nas.R-8和阴性对照固定在金芯片的表面上。简而言之，将RNA适配体溶解于补充有10mMEDTA的1xPBS缓冲液中。然后，将20μL该溶液的等分试样添加到1.5mL管中的3.375mg1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)中。接下来，将13.5μL胱胺-咪唑溶液的等分试样添加到RNA适配体和EDC溶液中，随后混合并离心。去除上清液，并添加另外的54μL100μM咪唑(pH6.0)的等分试样。将溶液在室温下温育过夜。最后，使用RNA清除柱去除未掺入的胱胺和咪唑。

在5'磷酸基团处将胱胺部分与氨基磷酸酯键缀合之后，通过将浓度为10μM的10nL适配体溶液的等分试样沉积到芯片表面上来将适配体固定在金芯片上。金将胱胺还原成一对硫醇，并且然后催化还原反应，导致金表面和修饰的适配体的硫醇基团之间的共价键。

C.2.表面等离子体共振(SPR)程序

使用Openplex表面等离子体共振系统(Horiba,Kyoto,Kyoto,Japan)将200μLICAM-1蛋白或人血清白蛋白的溶液以250nM的浓度和50μL/min的流速流过金芯片。因此，缔合阶段在注射后持续4分钟，并且紧接着进行解离阶段(参见图8和图9)。从每个候选适配体观察到的总共振中减去阴性对照适配体的总共振。由于蛋白质与适配体的结合，结果对应于共振贡献。

通过将曲线拟合到等式[1]来计算kd(koff)值：

x’～-kd*x[1]

其中x是由于结合引起的共振，并且x'是在解离曲线上捕获的每个时间点处该值的导数。kd值然后用于通过使用等式[2]来确定ka值：

x’～ka*Rmax*c-(ka*c+kd)*x[2]

其中Rmax是由于观察到的结合引起的最大共振，并且c是注射剂的浓度。最后，将解离平衡常数kD计算为kd与ka的比率(参见表2)。针对不同适配体获得的低纳摩尔kD值证实了此类分子对ICAM-1的强结合亲和力并且验证实施例1中描述的适配体选择过程。如本文所用，“kd”是指解离速率，“ka”是指缔合速率，并且“kD”是指解离平衡常数。

表2.Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4和Nas.R-8在250nM外源性ICAM-1上的结合系数

D.适配体结合特异性

如实施例1中所述，在选择过程中，用HEK293细胞进行反选择。HEK293细胞不表达ICAM-1受体，但它们确实表达相关受体蛋白ICAM-3和ICAM-5。对于某些序列，例如Nas.R-2(SEQ ID NO:2)，与HEK293细胞相比，对鼻细胞的亲和力明显更高。不希望受理论约束，鉴于HEK293细胞上存在ICAM-5和ICAM-3，显然选择的适配体与来自ICAM-1受体蛋白区域的表位结合，该区域在序列上不同于来自ICAM-5或ICAM-3受体的那些。图10示出了ICAM-1、ICAM-3和ICAM-5的序列比对，并突出显示了可能引起ICAM-1特异性结合的区域。

鼻病毒与ICAM-1受体的N端Ig样C2型1结构域结合。鉴于选择策略，包括用人鼻病毒颗粒洗脱和针对HEK293细胞的反选择，本领域受过训练的人清楚地看到，成熟的选择的适配体库将在适配体序列中富集，该适配体序列不仅与ICAM-1受体的细胞外结构域结合，而且还特异性地结合在N端处的Ig样C2型1结构域。

图11示出了在适配体选择过程中应用的最后三轮选择中适配体频率的倍数比较。数据表示为针对鼻细胞选择的单个适配体序列的频率除以针对HEK293细胞的选择中观察到的相同序列的频率。对于适配体Nas.R-2、Nas.R-1和Nas.R-17，在针对HEK293细胞的选择中未观察到序列(图例是指选择轮次)。也就是说，至少就在下一代测序过程中观察到的序列的子样品而言，在针对鼻细胞的选择轮次14中以高频率观察到这些序列，但在针对HEK293细胞的选择中根本未观察到。

不希望受理论束缚，与HEK293细胞相比，在鼻细胞上选择时没有表现出频率富集的适配体应该被认为是可能不会阻断HRV结合的适配体。图12描绘了在选择轮次14中的序列，这些序列在HEK293阳性选择中均显示出比针对鼻细胞的阳性选择更高的富集水平。预期这些适配体将与不在N端并且与ICAM-3或ICAM-5区域具有相当大的序列同一性的ICAM-1受体的区域结合。

实施例3.序列相似性分析

使用软件AlignX进行SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:100的比对，该软件是Invitrogen的VectorNTIAdvanced11.5.4的组件。多个序列组具有至少90％、至少70％或至少50％的核苷酸序列同一性，如图13、图14和图15中的比对所示。在这些比对中，为了简单起见，仅包括适配体的中心可变区。因此，与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少50％、至少70％或至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸作为本发明的部分而被包括。

实施例4.基序分析和预测二级结构

适配体基于它们形成的自由能最低的形状结合到靶标分子。自由能最低的形状随着单链序列内的区域之间的同源性而变。这些同源性区域相互折叠，从而产生对于能够结合而言至关重要的适配体的二级和三级形状。我们通过对保守基序序列及其对整个适配体的预测结构的效应的组合分析来表征这些适配体的核心特性。在此上下文中，基序被定义为限定长度的核苷酸的连续序列。对于这个实施例，我们考虑了每个表征的适配体的随机区域内每个可能重叠的六个核苷酸基序。

确定选择轮次14的所有序列(鼻上皮细胞分裂库)中的来自前面适配体(Nas.R-1、Nas.R-2、Nas.R-4和Nas.R-8)的随机区域的六个核苷酸的基序的频率。然后，从每个基序的频率中减去平均基序频率，并且将该值除以该选择轮次中所有基序频率的标准偏差，从而得到每个基序的Z值。显然，包含高频基序的序列也结合到靶分子并且是本发明的一部分。

对适配体的二级结构的预测是用The Vienna RNA Websuite(http://rna.tbi.univie.ac.at//cgi-bin/RNAWebSuite/RNAfold.cgi.Gruber AR,Lorenz R,Bernhart SH,

A.保守基序在适配体Nas.R-1内结构上的作用的分析

基序分析的结果在图16中示出。在该图中沿着x轴连续地提供包括适配体的随机区域的重叠六个核苷酸基序。y轴为库中的每个基序提供统计学显著性(Z值)。将Z值计算为观察到的这一基序在库中的频率减去库中所有基序的频率平均值，并且将所得之差除以库中所有基序的标准偏差以提供Z值。因此，Z值2表示该基序在库中的频率，该频率比所有基序的平均值大两个标准差。

在图16中，清楚的是序列AAACAAAAAGA和UAAAAAUCA以表示比平均值多两个标准偏差的水平进行保守。图17中示出了Nas.R-1适配体和共有序列的最低自由能量预测结构。

SEQ ID NO:201：5’-AAACAAAAAGA-3’

SEQ ID NO:202：5’-UAAAAAUCA-3’

还预期含有这些基序中的任何基序的序列与ICAM-1结合并作为本发明的实施方案包括在内。在该实施例中得出的关于RNA序列中保守基序的结论也将适用于DNA序列。因此，含有对应的脱氧核糖核苷酸基序的任何序列

SEQ ID NO:203：5’-AAACAAAAAGA-3’

SEQ ID NO:204：5’-TAAAAATCA-3’

也作为实施方案包括在内。

B.保守基序在适配体Nas.R-4内结构上的作用的分析

以与针对Nas.R-1所述相同的方式，对保守基序在适配体Nas.R-4内的结构上的作用进行分析。图18提供了对适配体Nas.R-4的基序分析的总结。存在以与所选库中的总平均基序频率大于两个标准偏差的频率存在的十三个核苷酸基序，

SEQ ID NO 205：5’-AUAAAAAUUUAAA-3’。

还预期含有该基序的序列与ICAM-1结合并作为本发明的实施方案包括在内。还预期含有对应的脱氧核糖核苷酸基序的任何序列：

SEQ ID NO 206：5’-ATAAAAATTTAAA-3’。

与ICAM-1结合并作为本发明的实施方案包括在内。

C.保守基序在适配体Nas.R-8内结构上的作用的分析

以与针对Nas.R-1和Nas.R-4所述相同的方式，对保守基序在适配体Nas.R-8内的结构上的作用进行分析。图19提供了对适配体Nas.R-8的基序分析的总结。存在以与所选库中的总平均基序频率大于两个标准偏差的频率存在的十二个核苷酸基序，

SEQ ID NO:207：5’-GUAAAAAUUAAA-3’

还预期含有该基序的序列与ICAM-1结合并作为本发明的实施方案包括在内。此外，还预期含有对应的脱氧核糖核苷酸基序的任何序列：

SEQ ID NO 208:5’-GTAAAAATTAAA-3’

与ICAM-1结合并作为实施方案包括在内。

D.对适配体库内常见基序的分析

根据频率对前100个序列内的常见基序进行搜索(见图20)。在与随机分布的显著偏差方面，所鉴定的领头基序是SEQ ID NO:209和SEQ IP NO:210。

SEQ ID NO:209：5’-GUAAAAAAA-3’

SEQ ID NO:210：5’-UNAGCANUUU-3’

包含基序SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210或两者的寡核苷酸作为本发明的实施方案包括在内。类似地，还预期含有对应的脱氧核糖核苷酸基序的任何序列

SEQ ID NO:211：5’-GTAAAAAAA-3’

SEQ ID NO:212：5’-TNAGCANTTT-3’

与ICAM-1结合并作为本发明的实施方案包括在内。

表3.选择实验的前面序列的列表。所述嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置处被氟

/>

/>

/>

/>

表4.基于来自选择实验的前面序列的脱氧核糖核苷酸适配体的列

/>

/>

/>

/>

表5.保守基序的列表

表6.蛋白质序列的列表

/>

/>

/>

组合

A.一种适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物以及它们的混合物；其中所述适配体组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力；并且其中所述适配体被配置成减少一种或多种人鼻病毒与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合，并且其中所述适配体组合物包含

i.至少一种寡核苷酸，所述至少一种寡核苷酸选自由以下组成的组的寡核苷酸：与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少80％核苷酸序列同一性；和/或

ii.至少一种包含一个或多个基序的寡核苷酸，所述一个或多个基序选自由以下组成的组：SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210、SEQID NO:211和SEQ ID NO:212。

B.根据段落A所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。

C.根据段落A至B所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸显示与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200组成的组的序列具有至少90％、或95％、或96％、或97％、或98％或99％核苷酸序列同一性，或者其中所述至少一种寡核苷酸显示与选自由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少90％、或95％、或96％、或97％、或98％或99％核苷酸序列同一性。

D.根据段落A至C所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:200。

E.根据段落A至D所述的适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种选自由以下组成的组的寡核苷酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8。

F.根据段落A至E所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸包含天然或非天然核酸碱基；优选地其中所述非天然核酸碱基选自包含以下的组：次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-氨基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-氨基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam以及它们的混合物。

G.根据段落A至F所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的核苷通过选自包含以下的组的化学基序连接：天然磷酸二酯、手性硫代磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼烷磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚氨基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫甲醛、乙硫醚以及它们的混合物。

H.根据段落A至G所述的适配体组合物，其中所述核糖核苷酸的衍生物或所述脱氧核糖核苷酸的衍生物选自包括以下的组：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸以及它们的混合物。

I.根据段落A至H所述的适配体组合物，所述适配体组合物还包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料共价地连接到所述至少一种寡核苷酸；优选地其中所述至少一种聚合物材料是聚乙二醇。

J.根据段落A至I所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的5'-端和3'-端处的核苷酸为反向的。

K.根据段落A至J所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置处被氟化；优选地其中所述至少一种寡核苷酸的嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置处被氟化。

L.根据段落A至K所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸与一种或多种活性成分共价或非共价附接，其中所述一种或多种活性成分选自由以下组成的组：呼吸道疾病治疗剂、感冒治疗剂、流感治疗剂、抗病毒剂、抗微生物剂、凉爽剂、恶臭吸收剂、天然提取物、肽、酶、药物活性成分、金属化合物以及它们的组合。

M.一种适配体组合物，所述适配体组合物包含至少一种肽或蛋白质，其中所述肽或蛋白质由根据段落A至L中任一项所述的寡核苷酸中的至少一者翻译。

N.根据段落A至M所述的适配体组合物，其中所述适配体对所述细胞间粘附分子1(ICAM-1)的Ig样C2型1结构域(SEQ ID NO:215)、所述结构域的任何翻译后修饰形式以及它们的混合物具有结合亲和力。

O.根据段落A至M所述的适配体组合物，其中所述至少一种寡核苷酸共价地或非共价地附接到包含一种或多种活性成分的一种或多种纳米材料。

P.一种个人医疗保健组合物，所述个人医疗保健组合物包含根据段落A至O所述的至少一种适配体组合物。

Q.根据段落P所述的个人医疗保健组合物，其中所述至少一种核酸适配体与一种或多种活性成分共价或非共价连接附接，其中所述一种或多种活性成分选自包含以下的组：呼吸道疾病治疗剂、感冒治疗剂、流感治疗剂、抗病毒剂、抗微生物剂、凉爽剂、恶臭吸收剂、天然提取物、肽、酶、药物活性成分、金属化合物以及它们的混合物。

R.根据段落A至O所述的适配体组合物或根据段落P或Q所述的个人医疗保健组合物，该组合物通过抑制与细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合并由此抑制进入鼻腔和咽喉内的细胞中用于抑制人鼻病毒感染并且/或者优选地通过将组合物递送到上呼吸道用于预防和治疗与呼吸道病毒感染相关的症状。

S.一种用于向所述上呼吸道递送个人医疗保健组合物的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用包含至少一种核酸适配体的个人医疗保健组合物，其中所述适配体对细胞间粘附分子1(ICAM-1)具有结合亲和力，并且其中所述适配体被配置成减少一种或多种人鼻病毒与所述细胞间粘附分子1(ICAM-1)的结合。

本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。

本文所公开的作为范围端值的值不应被理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个数值范围均旨在表示所引用的值和所述范围内的任何实数包括整数。例如，公开为“1至10”的范围旨在表示“1、2、3、4、5、6、7、8、9和10”，并且公开为“1至2”的范围旨在表示“1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9和2”。

除非明确排除或以其他方式限制，否则本文中引用的每一篇文献，包括任何交叉引用或相关专利或专利申请以及本申请对其要求优先权或其有益效果的任何专利申请或专利，均据此全文以引用方式并入本文。对任何文献的引用不是对其作为与本发明的任何所公开或本文受权利要求书保护的现有技术的认可，或不是对其自身或与任何一个或多个参考文献的组合提出、建议或公开任何此类发明的认可。此外，当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文献中相同术语的任何含义或定义矛盾时，应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。

虽然已举例说明和描述了本发明的具体实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出各种其他变化和修改。因此，本文旨在于所附权利要求书中涵盖属于本发明范围内的所有此类变化和修改。

<110>宝洁公司

Velasquez, Juan E.

Rupard, Spencer C.

Trejo, Amy V.

Pitz, Adam M.

Schmeichel, Kelly L.

Swigart, Erin N.

Penner, Gregory A.

<120>用于个人医疗保健应用的适配体15819

<130>15819M

<160>223

<170>PatentIn版本3.5

<210>1

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>1

gggugcaucg uuuacgcgau uagucugaua aacaaaaaga uuucgcuaaa aaucaaucug

cugcugagga aggauaugag80

<210>2

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>2

gggugcaucg uuuacgcaga uagcagcagg aaucaagcgg uaggagucua gcagaagcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>3

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>3

gggugcaucg uuuacgcauu uucguuuuau uucaguuuaa uugcguuuag uaucuggcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>4

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>4

gggugcaucg uuuacgcgca acauaaaaau uuaaagugcu caguugucaa ucuaugacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>5

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>5

gggugcaucg uuuacgcgua aaugguccgc uauuaaaaga aaagaaugaa gucucagcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>6

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>6

gggugcaucg uuuacgcuau uuucauuugu uuuuuuaauu uacuagugua aacaauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>7

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>7

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaguaga uaaaguggca guuuguuuuc cuuggaacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>8

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>8

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauuaaag agauuaaggu ccuuaagcag uuuuguccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>9

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>9

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaaaucaa aacuucagca aauuauuuau caacguccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>10

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>10

gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaauua aaaagaacuu cuucagcaau caauauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>11

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>11

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaaaaug aaaaauuguc ucucagcuuu caaaguccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>12

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>12

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaaaaaau aucuucggag aauucagcaa uuuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>13

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>13

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauuuuca ucucagcaau uaaauccaaa gaauccacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>14

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>14

gggugcaucg uuuacgcgua aaauauauca gcaaaguagu uuaagccucc ucaguuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>15

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>15

gggugcaucg uuuacgcgua aauuaugaaa aauacagcaa ggauuuaacc ucaguuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>16

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>16

gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaauaa aucuucaaag uacagaccuc gauuuuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>17

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>17

gggugcaucg uuuacgcuua uagguauuag acauuuucaa uuaaagugaa uuagugucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>18

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>18

gggugcaucg uuuacgcgua aaaugugaca gcaggauaau aaaauaagua cucaguacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>19

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>19

gggugcaucg uuuacgcgua auuaagaaaa auaaaaguac ucugcaguuu uuauccacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>20

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>20

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaaaau uuucccagac caguuaucug ccuuaaacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>21

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>21

gggugcaucg uuuacgcgua aagaaaaaaa ucagcuuuua gucgccuucc auuuugacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>22

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>22

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaauaau caaaauuaca cucaguggca auuuccucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>23

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>23

gggugcaucg uuuacgcgua aaauacagga uacgacaaua acucagcaga uuuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>24

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>24

gggugcaucg uuuacgcguu aaaaauugug cacugagaug acgcagcauu aacuacacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>25

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>25

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaaaauu aaucagcaau uuuccacuca guuguaccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>26

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>26

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaaaaa aucucgauca cugcaguuuu auuccggcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>27

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>27

gggugcaucg uuuacgcgua aacaaauauc gauuaaaaua aaaucucagc aagaauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>28

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>28

gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaauaa aauuauccca ggagcaaauu uucuucgcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>29

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>29

gggugcaucg uuuacgcgua gaagaauuaa uaguggacau aucaauagca guuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>30

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>30

gggugcaucg uuuacgcgua aacauauuca gcaguuaaaa uuuaguaggu ucaguagcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>31

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>31

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaagauaa aacuuaguug cagaauuugc cuucauucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>32

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>32

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaguuuga uggaagcaga uuaguuuagu caaauuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>33

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>33

gggugcaucg uuuacgcgua aaaugaaaua aggaauccuu cagcaguauu uauccuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>34

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>34

gggugcaucg uuuacgcgua aagaauaaaa augacaaaau ucucagcuuu ugucaaccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>35

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>35

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaaugaaa ugaaaaaauu cucagcuguc uaucuuccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>36

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>36

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaguaaa aaacucaguu uucaguuaag uauccaacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>37

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>37

gggugcaucg uuuacgcgua aauuucagca gaguaauaau aacacuucuu caguuugcug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>38

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>38

gggugcaucg uuuacgcgua aaauuaagaa guauuaucag uuagcuuuuu cuuccaacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>39

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>39

gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaaaag uuuuccuauc agcaaacuca caaauuccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>40

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>40

gggugcaucg uuuacgcgua aaaugaaaug uaaaagaauu gaacuuggca gauuuuccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>41

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>41

gggugcaucg uuuacgcgua aauuaaagua gcaguaauuu cagcaguuuu uaccucucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>42

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>42

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaaggau aaaauaauuu cagggcaguu ucucauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>43

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>43

gggugcaucg uuuacgcagg aucguuuuaa guaaaauaaa agauuuccuu gguaauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>44

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>44

gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaagau caauuaaagg cuuugaucga uuuuccucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>45

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>45

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauuagag auuaaaauag uuccuuucag uuuuguccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>46

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>46

gggugcaucg uuuacgcgua aaauugacaa ugugaaaagc agacagcaaa uauuccucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>47

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aauaaccagu uauacagaaa gaucucagca auuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>48

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>48

gggugcaucg uuuacgcuua cagaaggauu gcaccacaug cguacucgau gaaacaccug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>49

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaauaauaau uaaacucagc aaauucaauc caacuuucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>50

gggugcaucg uuuacgcgua aacaagaaua aauucagcag ugguuuugau ccuuugacug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>51

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>51

gggugcaucg uuuacgcgua aauuaaucag auugaacaaa aguuuucccu caguuuucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>52

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>52

gggugcaucg uuuacgcgua aagaaaaaca ucagagcagu uauaauaguc cuuuuuccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aagaaaauaa acuugaucaa acuuagcagu uuuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcauu uucguuauau uucugguuuu uaugcgugag aauccugcug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaagau cucacagcga caaauuuuuc uuccagucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>58

gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaaauu ccaaaauauu cagcagaaau ccucgaacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaaaucuaa aaagauauca gcaggcaaau uuuccuucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaagag gauaacuaca aucaucagca aucauaucug60

cugcugagga aggauaugag80

<210>62

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>62

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>68

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaaauag cucagcaagg aaguuuuuuu ccucaaacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>72

gggugcaucg uuuacgcgua uuuacaagca acaaaguuac aaucagcaga auuuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>73

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>74

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaaaucag caaaaucgaa aacucaugca guuuguccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>75

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaauuccu uaaaaauuua acuaacugga uaggucucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>76

gggugcaucg uuuacgcgua aaacaaaauu ucugacagca auuccuucgu uaaaaaucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

<210>80

<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaauaaauaa aaaucaguag caaucuuucu cacagugcug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>82

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cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aauaaugaag gacucagaca guuaaaagau gcauuaacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>84

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaacaa acuucucagc uguuuaauau cuccugacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>87

gggugcaucg uuuacgcgua auuaaaaaac cuucacacag aaaacauucc ucaauuucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>88

gggugcaucg uuuacgcauu uucguuuuau uuuaguuuaa uugcguuuag uaucuggcug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>89

gggugcaucg uuuacgcgua aaaaguauaa agguuagaaa uucagcaguu ugauauccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaauaaaua acuacgagau cucagcagau cauuauccug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>92

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>94

gggugcaucg uuuacgcgua aauaaacuca cagcagaaaa aauuccuuca acuuguacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaauagcag uagauagcgg caguuuugua uuuguuacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aaaauuuaaa uaacucagca aucauagauc cgacugacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<211>80

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

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gggugcaucg uuuacgcgua aagaacagcu gacaagaaau ucaaaccuuc agauuuucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>99

gggugcaucg uuuacgcgua aagauaauaa gcaguauuca gcagauuugu aagguuucug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>100

gggugcaucg uuuacgcgua aauaagaggc agacaguauu acaaauaucc uaaaauacug60

cugcugagga aggauaugag80

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<212>DNA

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<212>DNA

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ctgctgagga aggatatgag80

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<212>DNA

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ctgctgagga aggatatgag80

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ctgctgagga aggatatgag80

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ctgctgagga aggatatgag80

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ctgctgagga aggatatgag80

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ctgctgagga aggatatgag80

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<223>合成的适配体序列

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ctgctgagga aggatatgag80

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<212>DNA

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<223>合成的适配体序列

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gggtgcatcg tttacgcgta aagaaaaaaa tcagctttta gtcgccttcc attttgactg60

ctgctgagga aggatatgag80

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gggtgcatcg tttacgcgta aagaacagct gacaagaaat tcaaaccttc agattttctg60

ctgctgagga aggatatgag80

<210>199

<211>80

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>199

gggtgcatcg tttacgcgta aagataataa gcagtattca gcagatttgt aaggtttctg60

ctgctgagga aggatatgag80

<210>200

<211>80

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>200

gggtgcatcg tttacgcgta aataagaggc agacagtatt acaaatatcc taaaatactg60

ctgctgagga aggatatgag80

<210>201

<211>11

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>201

aaacaaaaag a 11

<210>202

<211>10

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>n为a、c、g或u

<400>202

uaaaaaucan 10

<210>203

<211>11

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>203

aaacaaaaag a 11

<210>204

<211>10

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>n为a、c、g或t

<400>204

taaaaatcan 10

<210>205

<211>13

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>205

auaaaaauuu aaa 13

<210>206

<211>13

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>206

ataaaaattt aaa 13

<210>207

<211>12

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>207

guaaaaauua aa12

<210>208

<211>12

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<400>208

gtaaaaatta aa12

<210>209

<211>10

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>n为a、c、g或u

<400>209

guaaaaaaan 10

<210>210

<211>10

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>n为a、c、g或u

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>n为a、c、g或u

<400>210

unagcanuuu 10

<210>211

<211>10

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>n为a、c、g或t

<400>211

gtaaaaaaan 10

<210>212

<211>10

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的适配体序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>n为a、c、g或t

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>n为a、c、g或t

<400>212

tnagcanttt 10

<210>213

<211>532

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>213

Met Ala Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ala Leu Pro Ala Leu Leu Val Leu

1 5 1015

Leu Gly Ala Leu Phe Pro Gly Pro Gly Asn Ala Gln Thr Ser Val Ser

202530

Pro Ser Lys Val Ile Leu Pro Arg Gly Gly Ser Val Leu Val Thr Cys

354045

Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Lys Leu Leu Gly Ile Glu Thr Pro Leu

505560

Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro Gly Asn Asn Arg Lys Val Tyr Glu

65707580

Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser Gln Pro Met Cys Tyr Ser Asn Cys

859095

Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu Thr Val Tyr Trp Thr

100 105 110

Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Ser Trp Gln Pro Val Gly

115 120 125

Lys Asn Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly Gly Ala Pro Arg Ala

130 135 140

Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys Glu Leu Lys Arg Glu

145 150 155 160

Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr Thr Val Leu Val Arg

165 170 175

Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg Thr Glu Leu Asp Leu

180 185 190

Arg Pro Gln Gly Leu Glu Leu Phe Glu Asn Thr Ser Ala Pro Tyr Gln

195 200 205

Leu Gln Thr Phe Val Leu Pro Ala Thr Pro Pro Gln Leu Val Ser Pro

210 215 220

Arg Val Leu Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Val Val Cys Ser Leu Asp

225 230 235 240

Gly Leu Phe Pro Val Ser Glu Ala Gln Val His Leu Ala Leu Gly Asp

245 250 255

Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Asn Asp Ser Phe Ser Ala

260 265 270

Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Ala Glu Asp Glu Gly Thr Gln Arg Leu

275 280 285

Thr Cys Ala Val Ile Leu Gly Asn Gln Ser Gln Glu Thr Leu Gln Thr

290 295 300

Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Ala Pro Asn Val Ile Leu Thr Lys Pro

305 310 315 320

Glu Val Ser Glu Gly Thr Glu Val Thr Val Lys Cys Glu Ala His Pro

325 330 335

Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala Gln Pro Leu Gly Pro

340 345 350

Arg Ala Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu Asp Asn Gly Arg Ser

355 360 365

Phe Ser Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Ala Gly Gln Leu Ile His Lys

370 375 380

Asn Gln Thr Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Gly Pro Arg Leu Asp Glu

385 390 395 400

Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu Asn Ser Gln Gln Thr

405 410 415

Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro Glu Leu Lys Cys Leu

420 425 430

Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu Ser Val Thr Val Thr

435 440 445

Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala Arg Ser Thr Gln Gly

450 455 460

Glu Val Thr Arg Lys Val Thr Val Asn Val Leu Ser Pro Arg Tyr Glu

465 470 475 480

Ile Val Ile Ile Thr Val Val Ala Ala Ala Val Ile Met Gly Thr Ala

485 490 495

Gly Leu Ser Thr Tyr Leu Tyr Asn Arg Gln Arg Lys Ile Lys Lys Tyr

500 505 510

Arg Leu Gln Gln Ala Gln Lys Gly Thr Pro Met Lys Pro Asn Thr Gln

515 520 525

Ala Thr Pro Pro

530

<210>214

<211>453

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>214

Gln Thr Ser Val Ser Pro Ser Lys Val Ile Leu Pro Arg Gly Gly Ser

1 5 1015

Val Leu Val Thr Cys Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Lys Leu Leu Gly

202530

Ile Glu Thr Pro Leu Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro Gly Asn Asn

354045

Arg Lys Val Tyr Glu Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser Gln Pro Met

505560

Cys Tyr Ser Asn Cys Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu

65707580

Thr Val Tyr Trp Thr Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Ser

859095

Trp Gln Pro Val Gly Lys Asn Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly

100 105 110

Gly Ala Pro Arg Ala Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys

115 120 125

Glu Leu Lys Arg Glu Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr

130 135 140

Thr Val Leu Val Arg Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg

145 150 155 160

Thr Glu Leu Asp Leu Arg Pro Gln Gly Leu Glu Leu Phe Glu Asn Thr

165 170 175

Ser Ala Pro Tyr Gln Leu Gln Thr Phe Val Leu Pro Ala Thr Pro Pro

180 185 190

Gln Leu Val Ser Pro Arg Val Leu Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Val

195 200 205

Val Cys Ser Leu Asp Gly Leu Phe Pro Val Ser Glu Ala Gln Val His

210 215 220

Leu Ala Leu Gly Asp Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Asn

225 230 235 240

Asp Ser Phe Ser Ala Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Ala Glu Asp Glu

245 250 255

Gly Thr Gln Arg Leu Thr Cys Ala Val Ile Leu Gly Asn Gln Ser Gln

260 265 270

Glu Thr Leu Gln Thr Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Ala Pro Asn Val

275 280 285

Ile Leu Thr Lys Pro Glu Val Ser Glu Gly Thr Glu Val Thr Val Lys

290 295 300

Cys Glu Ala His Pro Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala

305 310 315 320

Gln Pro Leu Gly Pro Arg Ala Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu

325 330 335

Asp Asn Gly Arg Ser Phe Ser Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Ala Gly

340 345 350

Gln Leu Ile His Lys Asn Gln Thr Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Gly

355 360 365

Pro Arg Leu Asp Glu Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu

370 375 380

Asn Ser Gln Gln Thr Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro

385 390 395 400

Glu Leu Lys Cys Leu Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu

405 410 415

Ser Val Thr Val Thr Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala

420 425 430

Arg Ser Thr Gln Gly Glu Val Thr Arg Lys Val Thr Val Asn Val Leu

435 440 445

Ser Pro Arg Tyr Glu

450

<210>215

<211>63

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>215

Gly Gly Ser Val Leu Val Thr Cys Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Lys

1 5 1015

Leu Leu Gly Ile Glu Thr Pro Leu Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro

202530

Gly Asn Asn Arg Lys Val Tyr Glu Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser

354045

Gln Pro Met Cys Tyr Ser Asn Cys Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala

505560

<210>216

<211>66

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>216

Gly Lys Asn Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly Gly Ala Pro Arg

1 5 1015

Ala Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys Glu Leu Lys Arg

202530

Glu Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr Thr Val Leu Val

354045

Arg Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg Thr Glu Leu Asp

505560

Leu Arg

65

<210>217

<211>68

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>217

Asp Thr Gln Gly Thr Val Val Cys Ser Leu Asp Gly Leu Phe Pro Val

1 5 1015

Ser Glu Ala Gln Val His Leu Ala Leu Gly Asp Gln Arg Leu Asn Pro

202530

Thr Val Thr Tyr Gly Asn Asp Ser Phe Ser Ala Lys Ala Ser Val Ser

354045

Val Thr Ala Glu Asp Glu Gly Thr Gln Arg Leu Thr Cys Ala Val Ile

505560

Leu Gly Asn Gln

65

<210>218

<211>54

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>218

Gly Thr Glu Val Thr Val Lys Cys Glu Ala His Pro Arg Ala Lys Val

1 5 1015

Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala Gln Pro Leu Gly Pro Arg Ala Gln Leu

202530

Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu Asp Asn Gly Arg Ser Phe Ser Cys Ser

354045

Ala Thr Leu Glu Val Ala

50

<210>219

<211>53

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>219

Asn Ser Gln Gln Thr Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro

1 5 1015

Glu Leu Lys Cys Leu Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu

202530

Ser Val Thr Val Thr Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala

354045

Arg Ser Thr Gln Gly

50

<210>220

<211>13

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>220

Gln Thr Ser Val Ser Pro Ser Lys Val Ile Leu Pro Arg

1 5 10

<210>221

<211>10

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>221

Ser Cys Asp Gln Pro Lys Leu Leu Gly Ile

1 5 10

<210>222

<211>16

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>222

Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro Gly Asn Asn Arg Lys Val Tyr Glu

1 5 1015

<210>223

<211>15

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>223

Tyr Ser Asn Cys Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu

1 5 1015

<210>224

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>224

gggtgcatcg tttacgc 17

<210>225

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>225

ctgctgctga ggaaggatat gag23

<210>226

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>226

taatacgact cactataggg tgcatcgttt acgc34

<210>227

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>227

ctcatatcct tcctcagcag cag23

<210>228

<211>461

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>228

Gln Thr Ser Val Ser Pro Ser Lys Val Ile Leu Pro Arg Gly Gly Ser

1 5 1015

Val Leu Val Thr Cys Ser Thr Ser Cys Asp Gln Pro Lys Leu Leu Gly

202530

Ile Glu Thr Pro Leu Pro Lys Lys Glu Leu Leu Leu Pro Gly Asn Asn

354045

Arg Lys Val Tyr Glu Leu Ser Asn Val Gln Glu Asp Ser Gln Pro Met

505560

Cys Tyr Ser Asn Cys Pro Asp Gly Gln Ser Thr Ala Lys Thr Phe Leu

65707580

Thr Val Tyr Trp Thr Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Ser

859095

Trp Gln Pro Val Gly Lys Asn Leu Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Gly

100 105 110

Gly Ala Pro Arg Ala Asn Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Gly Glu Lys

115 120 125

Glu Leu Lys Arg Glu Pro Ala Val Gly Glu Pro Ala Glu Val Thr Thr

130 135 140

Thr Val Leu Val Arg Arg Asp His His Gly Ala Asn Phe Ser Cys Arg

145 150 155 160

Thr Glu Leu Asp Leu Arg Pro Gln Gly Leu Glu Leu Phe Glu Asn Thr

165 170 175

Ser Ala Pro Tyr Gln Leu Gln Thr Phe Val Leu Pro Ala Thr Pro Pro

180 185 190

Gln Leu Val Ser Pro Arg Val Leu Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Val

195 200 205

Val Cys Ser Leu Asp Gly Leu Phe Pro Val Ser Glu Ala Gln Val His

210 215 220

Leu Ala Leu Gly Asp Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr Gly Asn

225 230 235 240

Asp Ser Phe Ser Ala Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Ala Glu Asp Glu

245 250 255

Gly Thr Gln Arg Leu Thr Cys Ala Val Ile Leu Gly Asn Gln Ser Gln

260 265 270

Glu Thr Leu Gln Thr Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Ala Pro Asn Val

275 280 285

Ile Leu Thr Lys Pro Glu Val Ser Glu Gly Thr Glu Val Thr Val Lys

290 295 300

Cys Glu Ala His Pro Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ala

305 310 315 320

Gln Pro Leu Gly Pro Arg Ala Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu

325 330 335

Asp Asn Gly Arg Ser Phe Ser Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Ala Gly

340 345 350

Gln Leu Ile His Lys Asn Gln Thr Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Gly

355 360 365

Pro Arg Leu Asp Glu Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu

370 375 380

Asn Ser Gln Gln Thr Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro

385 390 395 400

Glu Leu Lys Cys Leu Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu

405 410 415

Ser Val Thr Val Thr Arg Asp Leu Glu Gly Thr Tyr Leu Cys Arg Ala

420 425 430

Arg Ser Thr Gln Gly Glu Val Thr Arg Lys Val Thr Val Asn Val Leu

435 440 445

Ser Pro Arg Tyr Glu Val Asp His His His His His His

450 455 460

<210>229

<211>112

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>Aptamer

<400>229

gggugcaucg uuuacgcgca acauaaaaau uuaaagugcu caguugucaa ucuaugacug60

cugcugagga aggauaugag aaacaaacaa acguauggcg gucuccaaca gg 112

<210>230

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反义寡核苷酸

<400>230

cctgttggag accgccatac20

<210>231

<211>547

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>231

Met Ala Thr Met Val Pro Ser Val Leu Trp Pro Arg Ala Cys Trp Thr

1 5 1015

Leu Leu Val Cys Cys Leu Leu Thr Pro Gly Val Gln Gly Gln Glu Phe

202530

Leu Leu Arg Val Glu Pro Gln Asn Pro Val Leu Ser Ala Gly Gly Ser

354045

Leu Phe Val Asn Cys Ser Thr Asp Cys Pro Ser Ser Glu Lys Ile Ala

505560

Leu Glu Thr Ser Leu Ser Lys Glu Leu Val Ala Ser Gly Met Gly Trp

65707580

Ala Ala Phe Asn Leu Ser Asn Val Thr Gly Asn Ser Arg Ile Leu Cys

859095

Ser Val Tyr Cys Asn Gly Ser Gln Ile Thr Gly Ser Ser Asn Ile Thr

100 105 110

Val Tyr Arg Leu Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu Pro Pro Trp

115 120 125

Gln Pro Val Gly Gln Asn Phe Thr Leu Arg Cys Gln Val Glu Asp Gly

130 135 140

Ser Pro Arg Thr Ser Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Trp Glu Glu Glu

145 150 155 160

Leu Ser Arg Gln Pro Ala Val Glu Glu Pro Ala Glu Val Thr Ala Thr

165 170 175

Val Leu Ala Ser Arg Asp Asp His Gly Ala Pro Phe Ser Cys Arg Thr

180 185 190

Glu Leu Asp Met Gln Pro Gln Gly Leu Gly Leu Phe Val Asn Thr Ser

195 200 205

Ala Pro Arg Gln Leu Arg Thr Phe Val Leu Pro Val Thr Pro Pro Arg

210 215 220

Leu Val Ala Pro Arg Phe Leu Glu Val Glu Thr Ser Trp Pro Val Asp

225 230 235 240

Cys Thr Leu Asp Gly Leu Phe Pro Ala Ser Glu Ala Gln Val Tyr Leu

245 250 255

Ala Leu Gly Asp Gln Met Leu Asn Ala Thr Val Met Asn His Gly Asp

260 265 270

Thr Leu Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Arg Ala Asp Gln Glu Gly

275 280 285

Ala Arg Glu Ile Val Cys Asn Val Thr Leu Gly Gly Glu Arg Arg Glu

290 295 300

Ala Arg Glu Asn Leu Thr Val Phe Ser Phe Leu Gly Pro Ile Val Asn

305 310 315 320

Leu Ser Glu Pro Thr Ala His Glu Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Cys

325 330 335

Met Ala Gly Ala Arg Val Gln Val Thr Leu Asp Gly Val Pro Ala Ala

340 345 350

Ala Pro Gly Gln Pro Ala Gln Leu Gln Leu Asn Ala Thr Glu Ser Asp

355 360 365

Asp Gly Arg Ser Phe Phe Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val Asp Gly Glu

370 375 380

Phe Leu His Arg Asn Ser Ser Val Gln Leu Arg Val Leu Tyr Gly Pro

385 390 395 400

Lys Ile Asp Arg Ala Thr Cys Pro Gln His Leu Lys Trp Lys Asp Lys

405 410 415

Thr Arg His Val Leu Gln Cys Gln Ala Arg Gly Asn Pro Tyr Pro Glu

420 425 430

Leu Arg Cys Leu Lys Glu Gly Ser Ser Arg Glu Val Pro Val Gly Ile

435 440 445

Pro Phe Phe Val Asn Val Thr His Asn Gly Thr Tyr Gln Cys Gln Ala

450 455 460

Ser Ser Ser Arg Gly Lys Tyr Thr Leu Val Val Val Met Asp Ile Glu

465 470 475 480

Ala Gly Ser Ser His Phe Val Pro Val Phe Val Ala Val Leu Leu Thr

485 490 495

Leu Gly Val Val Thr Ile Val Leu Ala Leu Met Tyr Val Phe Arg Glu

500 505 510

His Gln Arg Ser Gly Ser Tyr His Val Arg Glu Glu Ser Thr Tyr Leu

515 520 525

Pro Leu Thr Ser Met Gln Pro Thr Glu Ala Met Gly Glu Glu Pro Ser

530 535 540

Arg Ala Glu

545

<210>232

<211>456

<212>PRT

<213>智人（Homo sapiens）

<400>232

Gln Glu Phe Leu Leu Arg Val Glu Pro Gln Asn Pro Val Leu Ser Ala

1 5 1015

Gly Gly Ser Leu Phe Val Asn Cys Ser Thr Asp Cys Pro Ser Ser Glu

202530

Lys Ile Ala Leu Glu Thr Ser Leu Ser Lys Glu Leu Val Ala Ser Gly

354045

Met Gly Trp Ala Ala Phe Asn Leu Ser Asn Val Thr Gly Asn Ser Arg

505560

Ile Leu Cys Ser Val Tyr Cys Asn Gly Ser Gln Ile Thr Gly Ser Ser

65707580

Asn Ile Thr Val Tyr Arg Leu Pro Glu Arg Val Glu Leu Ala Pro Leu

859095

Pro Pro Trp Gln Pro Val Gly Gln Asn Phe Thr Leu Arg Cys Gln Val

100 105 110

Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Ser Leu Thr Val Val Leu Leu Arg Trp

115 120 125

Glu Glu Glu Leu Ser Arg Gln Pro Ala Val Glu Glu Pro Ala Glu Val

130 135 140

Thr Ala Thr Val Leu Ala Ser Arg Asp Asp His Gly Ala Pro Phe Ser

145 150 155 160

Cys Arg Thr Glu Leu Asp Met Gln Pro Gln Gly Leu Gly Leu Phe Val

165 170 175

Asn Thr Ser Ala Pro Arg Gln Leu Arg Thr Phe Val Leu Pro Val Thr

180 185 190

Pro Pro Arg Leu Val Ala Pro Arg Phe Leu Glu Val Glu Thr Ser Trp

195 200 205

Pro Val Asp Cys Thr Leu Asp Gly Leu Phe Pro Ala Ser Glu Ala Gln

210 215 220

Val Tyr Leu Ala Leu Gly Asp Gln Met Leu Asn Ala Thr Val Met Asn

225 230 235 240

His Gly Asp Thr Leu Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Arg Ala Asp

245 250 255

Gln Glu Gly Ala Arg Glu Ile Val Cys Asn Val Thr Leu Gly Gly Glu

260 265 270

Arg Arg Glu Ala Arg Glu Asn Leu Thr Val Phe Ser Phe Leu Gly Pro

275 280 285

Ile Val Asn Leu Ser Glu Pro Thr Ala His Glu Gly Ser Thr Val Thr

290 295 300

Val Ser Cys Met Ala Gly Ala Arg Val Gln Val Thr Leu Asp Gly Val

305 310 315 320

Pro Ala Ala Ala Pro Gly Gln Pro Ala Gln Leu Gln Leu Asn Ala Thr

325 330 335

Glu Ser Asp Asp Gly Arg Ser Phe Phe Cys Ser Ala Thr Leu Glu Val

340 345 350

Asp Gly Glu Phe Leu His Arg Asn Ser Ser Val Gln Leu Arg Val Leu

355 360 365

Tyr Gly Pro Lys Ile Asp Arg Ala Thr Cys Pro Gln His Leu Lys Trp

370 375 380

Lys Asp Lys Thr Arg His Val Leu Gln Cys Gln Ala Arg Gly Asn Pro

385 390 395 400

Tyr Pro Glu Leu Arg Cys Leu Lys Glu Gly Ser Ser Arg Glu Val Pro

405 410 415

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<220>

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