咖啡因及其代谢物在制备治疗灼口综合征的药物中的应用

优先权申请

本申请要求2021年12月10日提交的中国发明专利申请【202111505034.2】、名称为“咖啡因及其代谢物在制备治疗灼口综合征的药物中的应用”的优先权，该优先权发明专利申请以引用方式全文并入。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种咖啡因及其代谢物在制备治疗灼口综合征的药物中的应用。

背景技术

灼口综合征(Burning mouth syndrome，BMS)，又称为舌痛症、舌感觉异常、口腔黏膜感觉异常等，其特征是口腔内疼痛伴灼热或感觉不适，一些患者可能会出现灼热和/或刺痛感。BMS可以分为原发性BMS和继发性BMS，其症状可以累及整个口腔黏膜，尤其是舌尖或侧缘、嘴唇和硬腭。BMS主要影响高龄女性，但最近研究表明，年轻人的发病率呈上升趋势。目前没有确定的医学或牙科原因可以解释其发病机制，但研究表明，其发病机制可能与多种因素有关，包括神经病变、心理压力、神经内分泌和激素紊乱、免疫因素、睡眠障碍以及昼夜节律功能障碍等。由于病因复杂，BMS的治疗仍然具有挑战性。BMS在普通人群中的患病率为1.73％，在口腔黏膜科就诊的患者中患病率为7.72％，一些患者在接受治疗后部分症状缓解，然而对许多人来说，症状依然存在。

目前治疗BMS的方法主要是采用药物，主要包括口服或局部施用氯硝西泮、利多卡因、选择性血清素再摄取抑制剂(SSRIs)、α-硫辛酸，以及口服或局部施用辣椒素、三环类抗抑郁药奥氮平或托吡酯等。然而，上述药物不仅会给患者带来明显的不良反应，其实际治疗效果和安全剂量等方面目前尚无明确的共识。此外，还有观点认为，治疗灼口综合征的第一步是消除患者本身的致病因素，即应该避免接触刺激性的物质，如含酒精、烟草、咖啡因的产品。

综上所述，有必要提出一种新的缓解灼口综合征的技术方案，以弥补现有技术的不足。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种咖啡因及其代谢物在制备灼口综合征相关药物中的应用。具体技术方案如下。

咖啡因及其代谢物在制备缓解灼口综合征的药物中的应用。

进一步，所述药物中至少含有咖啡因200mg。

进一步，所述药物中可选地还含有副黄嘌呤和/或茶碱以及其他药学上可接受的载体和/或助剂(包括但不限于稀释剂、赋形剂等)。所述药物以剂量单位形式制备，从而给药时可以给含有预定量的化合物。

本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在医学判断的合理范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或超过合理的利益/风险比的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。

进一步，所述药物包括口服溶液剂、注射剂和/或片剂，所述片剂包括含片、贴片、咀嚼片、可溶片和口崩片中一种或几种。

举例来说，对于以片剂形式的口服给药，活性药物成分可与药学上可接受的无毒惰性载体(例如甘油、甘露醇、山梨醇、水等)相混合。还可以混合助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固态聚乙二醇)，或者崩解剂和增溶剂(例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)，制成含片、贴片、咀嚼片、口崩片或可溶片等。

适用于口服给药的药物制剂按独立的单位提供，例如水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂等。

进一步，所述药物的给药剂量为每天1次，持续给药2周。

进一步，所述药物的给药时间为每天的上午8点到中午12点之间(8:00am-12:00pm)。

进一步，所述药物用于缓解灼口综合征的灼烧疼痛感。

进一步，所述药物用于缩短灼烧疼痛感的时间。

进一步，所述药物用于通过竞争性拮抗腺苷受体发挥镇痛作用。

进一步，所述药物用于竞争性地阻断A2AR，使拮抗腺苷与A2AR结合，以发挥镇痛作用。

有益技术效果

本发明采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱分析方法(UPLC-TOF/MS)，对BMS患者的唾液代谢物进行鉴定和表征，并比较了灼口综合征患者和健康受试者的唾液代谢组谱，发现灼口综合征患者的唾液代谢组特征与健康个体有显著差异。现有技术往往只针对感兴趣的生物标记物，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)或其他可用的商业试剂盒或使用蛋白质组学方法进行定量，具有局限性；而本发明技术方案基于BMS患者唾液中非靶代谢组和代谢途径变化的整体信息，从12,982个代谢物离子中鉴定了与BMS相关的394个生物标志物，通过进一步统计分析区分出16种最突出代谢物和25个细胞通路，为揭示BMS的发病机制和潜在治疗方法提供了依据。本发明实验证实，与健康对照组相比，灼口综合征患者组具有显著的咖啡因、副黄嘌呤和茶碱水平低下，其咖啡因代谢途径具有最显著的差异。

进一步，本发明对招募的受试者进行了规律咖啡因给药和α-硫辛酸对照给药，咖啡因实验组的患者症状缓解率与α-硫辛酸药物对照组一致。证明咖啡因治疗组可以达到与α-硫辛酸同等的治疗效果。

现有观点认为，BMS患者不宜服用含有咖啡因的物质。而本发明却通过唾液代谢组学发现BMS患者的咖啡因水平低下，推测可能通过影响疼痛传导、神经保护、炎症和情绪调节等导致BMS的症状；此外，BMS患者的副黄嘌呤和茶碱水平同样低下，可能会进一步加重和延长疼痛感受。基于此，本发明的技术方案通过向BMS患者规律地施用一定剂量的咖啡因制剂，提高了BMS患者体内的咖啡因、副黄嘌呤和茶碱的水平，结果在一定程度上降低了BMS患者的疼痛程度和发病持续时间，其治疗效果与α-硫辛酸相同，证明咖啡因及其代谢物具有降低疼痛感、神经保护、抗炎症、促进积极情绪等作用。

综上所述，本发明提供的含有咖啡因及其代谢物的制剂是治疗BMS的潜在药物。咖啡因及副黄嘌呤和茶碱可能是治疗BMS的潜在靶点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为多元统计分析的实验图(1a为主成分分析PCA图；1b为正交偏最小二乘-判别分析OPLS-DA图；1c为Loading-OPLS-DA图；1d为OPLS-DA模型响应排列测试的排列检验图)；

图2为BMS组与对照组差异代谢物的聚类热图；

图3为筛选VIP和p值的火山图；

图4为参与BMS最显著的25个代谢途径；

图5为正常状态下咖啡因的镇痛和神经保护作用，以及BMS患者受咖啡因缺乏影响的症状示意图；

图6为咖啡因治疗组和α-硫辛酸治疗组的VAS值示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者装置中还存在另外的相同要素。

如在本说明书中使用的，术语“大约”，典型地表示为所述值的+/-5％，更典型的是所述值的+/-4％，更典型的是所述值的+/-3％，更典型的是所述值的+/-2％，甚至更典型的是所述值的+/-1％，甚至更典型的是所述值的+/-0.5％。

在本说明书中，某些实施方式可能以一种处于某个范围的格式公开。应该理解，这种“处于某个范围”的描述仅仅是为了方便和简洁，且不应该被解释为对所公开范围的僵化限制。因此，范围的描述应该被认为是已经具体地公开了所有可能的子范围以及在此范围内的独立数字值。例如，范围1～6的描述应该被看作已经具体地公开了子范围如从1到3，从1到4，从1到5，从2到4，从2到6，从3到6等，以及此范围内的单独数字，例如1，2，3，4，5和6。无论该范围的广度如何，均适用以上规则。

本发明所述的“咖啡因及其代谢物”是指咖啡因、副黄嘌呤和茶碱。

具体附图说明：

图1为多元统计分析的实验图(a为主成分分析PCA，其中绿色的点代表质量控制(QC)样本，红色和蓝色分别代表BMS和控制样本；b为正交偏最小二乘-判别分析OPLS-DA，其中BMS(红点)和对照组(蓝点)的唾液阳性模式的非靶向代谢组学分析得分图，显示对照受试者(n＝30)和BMS患者(n＝34)之间的显著差异；c为Loading-OPLS-DA；d为OPLS-DA模型响应排列测试的排列检验)。

图2为BMS组与对照组差异代谢物热图(其中红色和蓝色分别表示相对较高和较低的浓度，被粉色盒子(图的上方)识别出来的人来自健康对照组，其他的人来自BMS。

图3为筛选VIP和p值的火山图(红点代表BMS组代谢产物显著上调，蓝点代表BMS组中显著下调的代谢物，灰点代表BMS组中无显著变化的代谢物)。

图4为参与BMS最显著的25个代谢途径(对25个代谢通路进行p值和丰富因子分析，生成气泡图；富集因子(Rich factor，Rich factor＝显著差异代谢物个数/该代谢通路中的总代谢物个数)。富集因子越大，富集程度越高。气泡颜色由绿到红表示p-value依次降低。气泡越大，说明富集到该通路上的代谢物数目越多。

图5示出了正常状态下咖啡因的镇痛和神经保护作用，以及BMS患者受咖啡因缺乏影响的症状(在正常状态下，咖啡因水平保持动态平衡，阻断CNS和PNS的A2AR，从而维持疼痛信号或感觉传入的平衡，并表现出神经保护作用。因此咖啡因水平的变化，会刺激疼痛信号和神经保护作用的相应变化，表现为：当BMS患者的咖啡因水平降低时，A2AR的拮抗作用也随之降低，扰乱细胞中的疼痛信号和神经保护，从而使系统的平衡向有利于疼痛信号和较少的神经保护倾斜；这导致痛觉的增加和BMS的神经病性的参与)。

实施例一

材料与方法

1.1研究对象

本发明的实验采用《国际头痛疾病分类》第三版公布的BMS诊断标准：口腔黏膜中的灼烧感，每日发作2小时以上，持续3个月以上，没有临床明显的致病性病变。灼烧感通常为双侧，并与味觉障碍、口干、化学感觉和心理生理学的改变有关。灼烧感不影响睡眠，可能在吃或喝的时候缓解。

受试者来自在四川大学华西口腔医院口腔黏膜科就诊的患者。本发明实验经四川大学华西口腔医院医学伦理委员会审核批准。实验在每个受试者的理解和书面知情同意下进行，并按照世界医学协会赫尔辛基原则宣言进行。

纳入标准：符合第3版国际头痛疾病分类(ICHD-3)(国际头痛分类委员会，2013)中BMS诊断标准的18岁以上患者；慢性口面部疼痛每天复发，伴有口腔黏膜表面烧灼感或感觉迟钝感，持续>2小时/天，持续>3个月；口腔黏膜外观正常，包括感觉检查在内的临床检查正常；另一个ICHD-3诊断不能更好地解释病情。

排除标准：1)由局部(念珠菌病、扁平苔藓、唾液缺乏等)或全身性疾病(药物性、营养缺乏、糖尿病等)引起的继发性BMS；2)有治疗史的BMS；3)可能患有与BMS相关的精神疾病或退行性和进行性神经系统疾病，如抑郁症、焦虑症、痴呆症和帕金森病；4)已知可能与口腔疾病相关的全身性疾病；5)长期吸烟、饮酒或服用任何药物的；6)口腔卫生差的患者；7)血液检查结果异常(包括血细胞计数、葡萄糖、血清铁、铁蛋白和转铁蛋白、叶酸或维生素B12水平)的患者；8)个人病历不完整的患者；9)不愿参与研究的患者。

对照组由口腔卫生状况良好、无黏膜病变和无黏膜异常的健康志愿者组成，其年龄、性别、教育程度和社会经济地位与疾病组相匹配。

1.2唾液样本收集

使用Navazesh描述的标准流程，在09:00～11:00之间收集非刺激性全唾液(unstimulated whole-saliva，UWS)。在样本收集前至少两小时，受试者被限制任何食物、饮料、口腔临床治疗或口腔保健。在收集唾液前，指导受试者用去离子水漱口1分钟，取舒适坐位，头稍前倾，用消毒好的一次性50mL的离心管收集5分钟的唾液。将离心管口置于下唇，使唾液自然流入管内。嘱收集唾液期间勿吞咽。将收集到的唾液样本迅速置于冰上，并在4℃条件下将样本以3500×g离心10min，去除细胞碎片、不溶物和食物残渣。收集上清液，分装，存于-80℃直到检测。所有样本在实验过程中只解冻一次。

1.3样本预处理

将冷冻唾液样本在4℃下解冻并涡旋30s。每150μL唾液样本加入900μL预冷的甲醇和乙腈的混合溶液(甲醇：乙腈＝1:1,v/v)中，剧烈涡旋30s。将得到的混合物于4℃孵育10min，并在4℃、以17，000g离心30min。将上清液转移到一个新的离心管中，在氮气中蒸发干燥。将干燥后的样本溶于水:乙腈:甲酸(水:乙腈:甲酸＝50:50:0.1v/v)的混合溶液中，于4℃条件下以17,000g离心10min，上清液注入样本瓶中进行UPLC-QTOF/MS分析。

1.4UPLC-Q/TOF MS分析

UPLC-QTOF/MS分析在Waters ACQUITY UPLC系统(Waters,Milford,MA,USA)上进行，使用aquity UPLC HSS T3(2.1×100mm,1.8μm,Waters Corp,Milford,USA)。柱温为45℃，进样量为5μL。流动相为(A)0.1％v/v甲酸乙腈和(B)0.1％v/v甲酸水，流速为0.4mL/min。洗脱梯度程序为：5％ A，95％ B(0-15min)；95％ A，5％ B(15-18min)；5％ A，95％ B(18-20min)。所有质谱数据均在正电喷雾电离(ESI+)模式下，使用Xevo G2-S四极杆飞行时间质谱仪(Waters,Milford,USA)收集。仪器参数如下：毛细管电压：3kV；扫描范围：50-1200Da；扫描时间：0.2s；源温：100℃；脱溶温度：350℃；锥形气体流量：50L/h；脱溶气体流量：800L/h。干燥气体为氮气。

1.5质量控制(QC)

质量控制(QC)标准(Waters,Milford,MA,USA)为仪器基准性能测试提供了广泛的质量/电荷比(m/z)覆盖，在进样前先检测QC标准品，查看各组分在设定条件下的分离情况，可进行仪器稳定性及准确性能测试。QC样本,即所有唾液样本的样本池,能够最大限度地反映所有样品的成分特点。一般在检测前需要先进行5个QC样本的检测，确定仪器达到良好的稳定性之后再进行其余样品的检测。在检测样本时，需要以相等的间隔检测QC样品，检查机器稳定性以及可重复性。此外，检测正式样本前，要先进行空白样本的检测，空白样品为150μL超纯水，与其他样本同步预处理。此空白样品的检测用以排除实验过程中试剂、仪器以及操作等带来的干扰。另外，每检测5个样本后会检测一次空白样本，以此来监控多次测样是否对质谱造成污染，排除对随后检测样本产生的信号干扰。使用Waters公司的UPLC-QTOF/MS操作软件，实时监测每个样本，并对仪器稳定性进行校正。

1.6数据收集

采用MassLynx软件(V4.1,Waters)进行数据收集。对收集到的原始数据进行峰识别、峰对齐、峰过滤、总面积归一化等预处理。使用SIMCA-P软件，对结果数据矩阵(如m/z、保留时间和峰面积)进行多变量统计分析。

1.7数据分析

在数据分析之前，先进行了QC分析，以确认实验数据的可靠性。采用主成分分析(PCA)和(正交)偏最小二乘-判别分析((orthogonal)partial least-squares-discriminant analysis，(O)PLS-DA)相结合的方法，对数据进行均值中心和Pareto方差标度归一化后，观察BMS组和对照组之间的代谢变化。代谢产物通过代谢产物数据库(METLIN、Human Metabolome database[HMDB])、LipidMaps和京都基因与基因组百科全书[KEGG])进行鉴定。为了防止过拟合，进行了默认的7轮交叉验证和200个响应排列测试(Permutationtest)，每轮剔除1/7的样本。对OPLS-DA模型中投影变量重要性(variable importance inthe projection，VIP)评分进行评估，以表明其对分类的贡献。差异代谢物的选择是基于VIP分数超过1.0和p<0.05(使用双尾学生t检验确定)。利用KEGG数据库，对候选代谢通路进行富集分析。

实施例二

人口统计特征：

受试者的人口学特征见表1。本发明实验先纳入64例受试者(男13例，女51例)，其中BMS患者34例，健康人30例(对照)，平均年龄(53.33±9.85)岁。两组间年龄(P>0.05，t检验)、性别(P>0.05，卡方检验)差异均无统计学意义。在BMS组中，79.7％的参与者是女性，尤其是围绝经期、绝经期和绝经后年龄的女性。样本人群的特征与BMS组的流行病学数据相一致。

表1：对照组和BMS组的研究对象的人口学统计

备注：BMS为灼口综合征；a为非参数检验；b为卡方检验

差异代谢物分析：

利用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF/MS)进行测试，测试结果表明，本实验所使用的仪器可以检测出QC标准的所有成分，说明UPLC-QTOF/MS平台具有良好的检测能力。采用UPLC-QTOF/MS分析唾液样本，共检测到12,982个代谢物离子。进行多变量和单变量统计分析。对原始数据进行无监督的多变量统计分析。BMS组和对照组之间有明显的分离趋势，在PCA评分图(PCA score plot)中所有QC样本都呈现令人满意的聚类趋势(图1a)。QC样本紧密聚集在一起，表明此实验稳定性和重复性较好。

为了进一步分类和验证这些组，采用PLS-DA和OPLS-DA进行有监督的模式识别分析。模型得分图(score plots of the models)中的椭圆，表示霍特林T2确定的95％置信区间。大部分样本在预测主成分的OPLS-DA分析得分的置信区间内，正交主成分的正模式显示了数据的合理性。两组样本分别位于正侧或负侧，位置相对较远，表明两组之间存在明显的差异(图1b)。OPLS-DA的加载图(loading plot)显示了各代谢物对OPLS-DA贡献的简化概述(图1c)。此外，OPLS模型的拟合检验未见正模式过拟合(R

利用热图，对代谢物进行无监督分层聚类识别，充分直观地展示了样本之间的关系和差异(图2)。BMS患者和对照组之间差异表达代谢物的水平进行聚类热图分析。横坐标代表不同唾液样本的名称，粉红色框(图上方)中的样本来自健康对照，其他样本来自BMS患者；纵坐标代表差异代谢物；红色和蓝色分别表示相对较高和较低的水平。也就是说，颜色越红，这种差异代谢物的表达丰度越高。差异表达代谢物的热图展示了每个样品中差异代谢物的表达模式。

有VIP>1的变量被认为与群体区分有关。VIP值>1.0且p值<0.05的代谢物被视为差异代谢物。之所以设定如此严格的标准，是因为代谢物数据库鉴定出的化合物数量庞大。利用火山图可视化p值、VIP值和fold change值，有利于差异代谢物的筛选(图3)。最后，鉴定了394个与BMS相关的生物标记物。

差异代谢通路分析：

基于Q-TOF/MS检测到的质谱片段离子的高精度信息，并通过检索代谢产物数据库(METLIN、HMDB、LipidMaps和KEGG)进行代谢物鉴定。通过这种方式，30种代谢物被鉴定为潜在的生物标记物(表4)。本发明实验发现，在BMS患者中，咖啡因及其两种代谢物(副黄嘌呤和茶碱)的水平显著下调。唾液的代谢物与血液的代谢物一致，其可以反映身体暴露于各种刺激(包括病理生理和营养的变化)的反应。因此，BMS患者唾液中的咖啡因及副黄嘌呤和茶碱的水平较低，可以表明BMS患者体内的咖啡因及副黄嘌呤和茶碱含量较低。

表2：根据VIP值和p值，区分健康对照和BMS患者的30种最突出的代谢物

备注：VIP，投影变量重要性(variable importance in the projection)，获自OPLS-DA模式，阈值为1.0。P值(P-value)，使用双尾学生t检验计算得到。

进一步，根据富集因子和p值进行KEGG途径富集分析，发现16种差异代谢物(表3)，包括13种下调的代谢物和3种上调的代谢物，可富集到涉及BMS的25种紊乱代谢通路(表4,图4)。与对照组相比，BMS组的咖啡因、副黄嘌呤和茶碱水平较低。通过富集因子和p值测定，咖啡因代谢通路具有最高的意义和影响。

表3：通过多变量统计分析，在正离子模式的BMS的富集到代谢通路的16种差异代谢物

备注：RT，保留时间(retention time)；VIP，投影变量重要性(variableimportance in the projection)，获自OPLS-DA模式，阈值为1.0。P值(P-value)，使用双尾学生t检验计算得到。ID注释(ID Annotation)，差异代谢物富集到的代谢通路的KEGG ID。

表4：影响BMS的25个紊乱通路的排名

备注：P值(P-value)，使用超几何检验计算得到。FDR校正(FDR correction)，P值校正的错误发现率(Fasle Discovery Rate corrected P-value)。匹配IDs(MatchingIDs)，参与代谢通路的差异代谢物的KEGG IDs。

实施例三

咖啡因及其相关代谢物(副黄嘌呤和茶碱)水平的下降与BMS的发生密切相关

受试者招募：

按照实施例一的纳入和排除标准，共招募受试者50人，分为咖啡因治疗组和α-硫辛酸治疗组。咖啡因治疗组患者30例，其中女性24例，男性6例，年龄30-72岁，平均年龄(53.31±10.97)岁；α-硫辛酸治疗组患者20例，其中女性18例，男性2例，年龄48-71岁，平均年龄(58.00±7.21)岁。对比两组一般资料，差异无统计学意义(P＞0.05)。

实验方案：

将咖啡因治疗组定为实验组(n＝30)，α-硫辛酸治疗组定为对照组(n＝20)。实验组与对照组患者于初次就诊时，皆记录其症状、部位以及症状的持续时间。且根据VAS(Visual Analogue Scale)量表对患者的症状进行评估。实验组患者每日8:00am-12:00pm期间饮用含200mg咖啡因的黑咖啡，连续使用2周，2周后随访，根据VAS评分再次评估BMS症状的严重程度。对照组患者服用α-硫辛酸(目前国际学界较公认的BMS治疗药物)，每日服用3次，饭后服用，每次服用200mg，连续服用2周，2周后随访根据VAS评分再次评估BMS症状的程度。

统计分析：

采用SPSS统计学软件对数据进行分析处理，计数资料以百分数(％)表示，采用wilcoxon符号秩和检验和x

结果：

实验组(咖啡因治疗组，n＝30)中，18名患者连续2周摄入咖啡因后BMS症状缓解，缓解率60％，受试者表示灼烧疼痛感的时间缩短；对照组(硫辛酸治疗组，n＝20)中，12名患者连续2周服用α-硫辛酸后BMS症状缓解，缓解率60％。实验组和对照组在研究过程中均无不良反应或不良事件发生。详细结果见表5。

表5咖啡因和硫辛酸治疗组对比

对咖啡因治疗组治疗前后VAS值的变化情况进行统计分析，数据非正态，采用wilcoxon符号秩和检验，结果显示治疗后VAS均值降低，P＝0.00029<0.05，两组差异有统计学意义。

对硫辛酸治疗组治疗前后VAS值的变化情况进行统计分析，数据非正态，采用wilcoxon符号秩和检验，结果显示治疗后VAS均值降低，P＝0.0048<0.05，两组差异有统计学意义。

结论：

规律性地连续摄入咖啡因对于缓解BMS症状的效果与使用BMS治疗药物α-硫辛酸的效果相仿，但α-硫辛酸的服用次数更多、用药量更大，因此规律性摄入咖啡因是一种更安全有效的BMS治疗手段。本发明的结论为使用咖啡因治疗BMS提供了临床依据。

在本实施例中，咖啡因及其代谢物(可选地包括副黄嘌呤和/或茶碱)的给药方式包括含服(例如，将药片置于口腔内的舌背、舌下、颊部以及尖牙窝等部位，保持药片位于口腔内直至药片完全崩解)、口服或注射(例如，肌肉注射、静脉注射)中的一种或多种。可以理解的是，用所述咖啡因及其代谢物制备的药物剂型包括口服溶液剂、注射剂和/或片剂，所述片剂包括含片、咀嚼片、贴片、可溶片、口崩片中一种或几种。

咖啡因的基本结构与腺苷相似，主要通过竞争性拮抗腺苷受体发挥作用。腺苷受体(A1R,A2AR,A2BR和A3R)是广泛表达的G蛋白偶联受体；当咖啡因水平增加时，它竞争性地阻断A2AR，拮抗腺苷与A2AR的结合，从而产生镇痛作用。BMS患者的咖啡因水平较低，这可能导致BMS患者拮抗中枢和外周A2AR的能力降低，进而导致中枢和外周疼痛传导增强，由此感知灼烧感。而咖啡因的作用可以被其主要的代谢物延长和加重，因此，BMS患者的较低水平的副黄嘌呤和茶碱，可能会加重和延长其疼痛感。上述实验证明，通过增加BMS患者的咖啡因水平，有效缓解了BMS患者的灼烧疼痛感。本发明实验人员进一步推测，BMS患者中较低水平的咖啡因可能由于神经损伤，而通过增加BMS患者的咖啡因水平，还利用了咖啡因的神经保护作用，以进一步缓解BMS患者的症状。另一方面，咖啡因还可以从调节情绪和抗炎症的角度，缓解BMS患者的症状。

总结：

本发明实验，首先基于UPLC-TOF/MS，对BMS患者唾液样本进行了代谢组学分析。利用这个非靶向、稳定、可重复的平台，本发明实验人员从12,982个代谢物离子中鉴定了与BMS相关的394个生物标志物，通过进一步统计分析区分出16种最突出代谢物和25个细胞通路。进一步分析发现，BMS患者的咖啡因及其主要代谢物副黄嘌呤和茶碱的水平显著低于对照组，从富集因子和p值来看，咖啡因代谢途径下调的意义和影响最大。本发明的技术方案基于对BMS患者的UWS中特有的代谢谱的非靶向检测和代谢途径的鉴定，提出一种通过对BMS患者规律性施用一定剂量的咖啡因的技术方案，能够在一定程度上缓解和/或治疗BMS。

现有观点认为，BMS患者不宜服用含有咖啡因的食品或药品，因为咖啡因被认为具有强刺激性，甚至是致病因素。而本发明的实验结果却证实BMS患者UWS的代谢物中咖啡因、副黄嘌呤和茶碱的水平显著低于健康对照组。进而本发明技术方案对受试者规律性施用一定剂量的咖啡因，达到了较好的缓解效果。

综上，本发明的技术方案利用咖啡因能够从疼痛传导(例如，咖啡因能够降低对疼痛的敏感度)、神经保护(例如，咖啡因具有抗氧化、抗炎症、抗凋亡等作用)、情绪调节(即心理因素，例如，咖啡能够提升情绪)、免疫调节(即炎症反应，例如，咖啡因可以抑制IL-1β的产生、STAT1信号、乙酰胆碱酯酶活性，保持高水平的乙酰胆碱和IL-10)等方面的优势，较好地缓解和/或治疗了BMS，如图5所示。

上面结合附图对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

参考文献

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