抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体及应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，涉及黄曲霉毒素B

背景技术

生物毒素是自然界由动物、植物、微生物等各种生物产生的代谢物，种类繁多，主要是蛋白质、多肽或者小分子化合物。最为常见的生物毒素为海洋麻痹性贝毒以及各类真菌毒素均是小分子化合物(分子量小于1kDa)，其毒性剧烈且来源广泛，不仅给种植、畜牧、水产等行业带来极大的经济损失，也对人类健康和安全造成了危害，目前已有多种生物毒素被列入危险化学及生物武器目录。因此，生物毒素检测与救治研究具有重要的社会及军事意义。

黄曲霉毒素B

近年来，噬菌体抗体展示技术快速发展，极大的提高了生物毒素抗体获得率。目前已建立的抗体库包含天然抗体库、免疫抗体库以及合成或半合成抗体库三类。其中免疫抗体库特异性强但仍需动物免疫过程，它与天然抗体库中的抗体仍需进一步人源化改造才能应用于生物毒素中毒救治。而合成抗体库根据抗体序列人工合成，既避免了人源化改造的过程，又避免了生物毒素免疫动物致死亡的失败风险，库内抗体多样性高，将成为生物毒素抗体研发的重要手段。

黄曲霉毒素B

发明内容

本发明的目的是研制特异性识别黄曲霉毒素B

本发明第一方面，提供了一种抗黄曲霉毒素B

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSYYTMGWFRQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAARTFRYRWYPYDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO.1)。

本发明的第二方面，提供了编码上述抗黄曲霉毒素B

GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGTGGTCTCGTGCAGCCCGGCGGTAGTCTGCGCCTCAGCTGTGCCGCCAGCGGTAGCACCTTTAGCTATTATACCATGGGCTGGTTTCGCCAAGCCCCCGGCAAAGGTCGCGAACTGGTGGCCGCCATTTCCCGCACGGGCGGTAGCACCTACTACCCAGATAGCGTGGAAGGCCGCTTCACCATCAGCCGCGATAACGCCAAGCGCATGGTGTATCTGCAGATGAACAGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCGTGTATTATTGTGCCGCCCGCACCTTTCGCTATCGCTGGTATCCATACGATTACTGGGGCCAAGGCACCCAAGTGACCGTGAGCAGC(SEQ IDNO.2)。

本发明的第三方面，提供了一种表达载体，该表达载体承载有上述抗黄曲霉毒素B

本发明的第四方面，提供了抗黄曲霉毒素B

针对在制备预防或治疗黄曲霉毒素B

针对黄曲霉毒素B

经SDS-PAGE分析，在15-20kDa之间出现一条明显的蛋白条带(图2)，除去溶剂咪唑后即得到纯化的抗体蛋白；应用ELISA法，以抗体浓度为横坐标，黄曲霉毒素B1与抗体反应的OD450值为纵坐标绘制标准曲线，根据曲线及计算公式(n[Ab1]-[Ab])/(n-1)计算抗体的亲和常数，其亲和力值为1.96E-07。

附图说明

图1为不同紫外波长下黄曲霉毒素B

图2为抗体SDS-PAGE分析抗体的可溶性表达及纯化图，泳道1为IPTG诱导前细胞裂解液；泳道2为IPTG诱导后上清液；泳道3为IPTG诱导后细胞裂解液；泳道5-8为40nM咪唑洗涤流出液；泳道9-13为500mM咪唑洗脱液；

图3为阳性抗体与黄曲霉毒素B

具体实施方式

以下实施例、实验例对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制，同时实施例不包括对传统方法的详细描述。

一、黄曲霉毒素B

利用戊二醛法将黄曲霉毒素B

二、噬菌体抗体库的富集筛选

抗体库筛选采用固相抗原免疫吸附法，将黄曲霉毒素B

三、噬菌体抗体对黄曲霉毒素B

包被2μg/ml的黄曲霉毒素B

四、噬菌体抗体对黄曲霉毒素B

考虑到偶联过程对黄曲霉毒素B

五、抗黄曲霉毒素B

将抗体序列装载至pET-25b(+)质粒并转化至BL21感受态细胞，在IPTG诱导下表达抗体并进行亲和纯化，以含500mM咪唑的洗脱缓冲液纯化，经SDS-PAGE分析，在15-20kDa之间出现一条明显的蛋白条带(图2)，除去咪唑后即得到纯化的抗体蛋白。

六、阳性抗体亲和力分析

应用ELISA法，以抗体浓度为横坐标，黄曲霉毒素B

综上所述，该抗体具有较高体外结合力、可溶性及特异性，有可能作为一种抗黄曲霉毒素B

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。