Alda-1在制备促进缺血超长随意皮瓣存活药物的用途

技术领域

本发明涉及Ada-1的新用途，具体是Alda-1在制备促进缺血超长随意皮瓣存活的药物的作用。

背景技术

随意型皮瓣由于设计有较大的灵活性，在整形外科修复组织缺损、畸形时应用最为广泛。但皮瓣坏死是整形外科中常见并发症,为了使皮瓣在转移过程中能顺利成活，设计皮瓣时对其长度和宽度比例有一定的限制，如果长宽比例超过了规定的1.5-2：1的限制，皮瓣转移术后就可能发生远端部分皮瓣组织营养代谢障碍导致坏死。由于皮瓣受个体差异、皮瓣供区、受区血流因素和局部缺血时间、炎症反应等因素的影响，其坏死机制至今仍未完全阐明，从而影响了皮瓣修复的临床应用。因此，研究皮瓣远端坏死的发生机制，进一步提高皮瓣的成活率已成为目前皮瓣修复的研究重点，这对临床上提高皮瓣应用范围有重要的意义。如何能改善随意皮瓣远端的血供状况以及组织对缺血的耐受能力，有效减少可能发生的缺血坏死，成为创面治疗修复中核心问题之一，具有较强的社会价值、经济价值和理论、实践研究价值。

Alda-1，为乙醛脱氢酶激动剂。乙醛脱氢酶的活性提高有利于分解缺血及再灌注过程中产生的活性氧和毒性醛类物质，减轻线粒体自噬，减少细胞凋亡，从而保护多种器官免受缺血再灌注损伤。针对Alda-1的报道，其主要在抗氧化作用与心肌保护以及缺血再灌注损伤相关。其在缺血皮瓣存活中的应用未见报道，其在随意皮瓣中的治疗作用以及其潜在机制至今仍是空白，研究其新的疗效具有广阔的经济、社会效益。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供Alda-1新作用，克服现有治疗手段的不足，为缺血超长随意皮瓣存活临床治疗开拓了更多的选择。

为实现上述目的，本发明提供本发明涉及Alda-1在制备促进缺血超长随意皮瓣存活的药物的作用。

进一步的，所述缺血超长随意皮瓣的规格为3cmX9cm。

进一步的，药物为经腹腔注射给药药物。

进一步的，所述药物为口服液药物，口服液药物包括口服液药物载体，所述口服液药物载体成分包括二甲基亚砜(DMSO)、玉米油。

进一步的，所述腹腔注射药物的浓度为2.5mg/ml。

在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用腹腔注射的方式，使用方法为每日腹腔注射，预先配置浓度为2.5mg/mlAlda-1溶液10mg/kg或20mg/kg，每日一次，5-7天为一疗程。

本发明具有如下优点：通过大量的动物腹腔注射实验得出结论，使用Alda-1可以减少炎症反应以及促进血液灌注水平，使得皮瓣的的成活面积比明显提高，能很好地促进缺血随意皮瓣存活，特别是针对缺血超长随意皮瓣的存活。

附图说明

图1.Alda-1的化学结构式。

图2A.缺血随意皮瓣模型建立；

2B.离断双侧髂血管；

2C.大鼠自伤现象；

2D.带上颈套，防止咬伤皮瓣。

图3A.术后7d大鼠背部皮瓣存活情况对比图；

3B.皮瓣平均存活率对比统计图。

图4A.显微镜下各组皮瓣中端H&E染色观察情况；

4B.皮瓣Ⅱ区中性粒细胞密度对比；

4C.皮瓣Ⅱ区微血管密度。

图5A.术后七天各组激光多普勒血流评估；

5B.皮瓣平均血液灌注水平对比结果图。

图6A.在200倍放大下获取的IL-1β，IL-6和TNF-α的皮瓣表达情况；

6B.皮瓣中端IL-1β，IL-6和TNF-α积分吸光度统计结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例和效果例对本发明做进一步的详述，而非限制本发明的范围。

实施例1：Alda-1腹腔注射液的制备方法

其制备方法步骤如下：

270mg的Alda-1溶于10.8ml的DMSO，配成25mg/ml的母液，容器外包裹锡纸置于4℃冰箱内冷藏。使用时加入所取母液9倍体积的玉米油稀释至2.5mg/ml的浓度。

其中Alda-1的化学结构式如下所示：

实施例2：缺血随意皮瓣模型建立

60只SD大鼠，由温州医科大学实验动物中心提供，清洁级，体重200-250g，2—3个月龄。随机分为对照组(controlgroup)、低剂量组(low-doseAlda-1group)和高剂量组(high-doseAlda-1group)，每组20只。大鼠腹腔注射1％戊巴比妥钠(40mg/Kg)麻醉，俯卧位固定四肢和牙齿。在大鼠背部建立改良的麦克法兰皮瓣。设计以中线为尾端轴蒂，髂嵴线为9cmx3cm矩形超长随机皮瓣底侧。保持皮下毛细血管网络，分离并结扎两条髂动脉。实验过程中结扎创面出血点。皮瓣完全揭开后，立即用4-0医用慕斯缝线原位闭合。手术后，在伤口处涂抹红霉素软膏，以防止感染。整个手术过程严格遵守无菌原则。为防止大鼠手术后的“自伤”影响实验结果的准确性，将大鼠戴上研究组成员设计的头套，单独饲养在笼子里。为减少外科手术造成的失误，所有手术均由一人完成。低剂量组每天一次腹腔注射Alda-110mg/Kg。高剂量组每天一次腹腔注射Alda-120mg/Kg。对照组给予1ml由10％DMSO和90％玉米油组成的溶液以除去DMSO和玉米油对皮瓣存活的影响。均每日1次，时间段相同，连续7天。为方便术后观察,根据皮瓣血供特点,将皮瓣三等分为皮瓣近端区(I区)、皮瓣中间区(II区)和皮瓣远端区(III区)，如图2A所示。大鼠的水的和食物由实验室统一提供,并控制实验室的温度(25摄氏度、湿度40-60％)及光照条件适宜且相同。腹腔注射生理盐水(50ml/kg)抗休克。

实施例3：皮瓣存活面积比与皮瓣存活状况检测

皮瓣存活面积比与皮瓣存活状况检测术后1～7d，每天肉眼观察大鼠皮瓣色泽、质地、组织弹性以及有无毛发生长或坏死现象。术后7d，采用100g/L水合氯醛麻醉大鼠(8mL/kg)并处死，以透明纸准确描记大鼠皮瓣成活面积及皮瓣总面积并裁剪，以电子秤称质量。计算皮瓣成活面积百分比[皮瓣成活面积透明纸质量÷皮瓣总表面积透明纸质量×100％]。每只大鼠测量两次，取其平均值。存活区域呈现粉红色，质地柔软，有新毛发生长；坏死区域呈黑褐色，结痂，质地坚硬，没有毛发生长。

结果：术后7天，Alda-1高剂量和低剂量组的中间区域皮瓣颜色淡红，表面无痂壳形成，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。对照组皮瓣中间区域及远端区域颜色均发黑，表面有痂壳形成，弹性极差，原位掀起皮瓣见皮瓣出血较少，内膜下炎性分泌物较多，血管相对较疏，其结果如图3A所示。

术后第七天，对照组(49.74±1.08％)与低剂量组(66.73±2.47％)和高剂量组(77.57±1.42％)皮瓣成活率相比较，数据差异有统计学意义(p＜0.01)，结果如图3B所示。

实施例4：皮瓣组织病理学检测

皮瓣术后第7天，从每个皮瓣的II区获得1.0cm×1.0cm的皮瓣组织，经4％多聚甲醛浸泡24小时处理后将组织包埋在石蜡中，制成厚度为4μm的切片用于组织学指标的检测。切片使用苏木精和伊红(HE)染色，并在光学显微镜下观察皮瓣的组织学特点。评估皮瓣中性粒细胞浸润、组织水肿、肉芽组织厚度等。观察中性粒细胞的浸润程度和微血管密度是在×100倍光镜下进行的。

HE染色的组织切片在光学显微镜下观察。各组缺血皮瓣Ⅱ区均有不同程度的炎性改变：组织水肿、大量中性粒细胞浸润、纤维增生，结果如图4A所示。高剂量组的中性粒细胞浸润密度为(57.54±3.15/mm

实施例5：皮瓣组织皮瓣血液灌注量的检测

术后第7天，每组随机选择6只大鼠麻醉后固定，使用激光多普勒流量计(LDF)测定各个区域(I区、II区和III区)的血流量。以灌注单位(PU)为基本指标，代表多普勒下红细胞流动产生的位移值，间接反应皮瓣新生血管。使用MoorLDIReviewV6.1软件获取并分析皮瓣血液灌注图片，结果如图5A所示，根据激光多普勒血流成像显示，其结果统计分析如图5B所示，高剂量组(381.62±21.13PU)和低剂量组(225.47±19.19PU)较对照组(99.97±9.32PU)显着改善皮瓣的血流灌注。

实施例6：皮瓣组织免疫组化检测IL-1β，IL-6，TNF-α含量的测量

使用已制备好的石蜡切片，按照链霉亲和素-过氧化物酶法进行免疫组织化学染色。显微镜下观察,细胞内有棕黄色颗粒者为阳性。测定每个皮瓣组织的阳性颗粒的累积吸光度IA值,以均值作为该样本IL-1β，IL-6，TNF-α,的相对表达。在×200倍光镜下随机选择6个区域拍照，并将图片保存在Image－ProPlusv6.0软件，计算上述物质的表达水平。

采用免疫组化法检测缺血皮瓣Ⅱ区促炎细胞因子的表达水平，如图6A和B所示。IL-1β的表达量，高剂量组(793.60±41.33IA)和低剂量组(1,050.45±46.31IA)的IL-1β显着低于对照组(1,810.10±74.53IA)。IL-6的表达量，与对照组(2,462.97±95.63IA)相比，高剂量组(1,055.66±55.18IA)和低剂量组(1,487.98±89.30IA)IL-6的表达水平显着降低。TNF-α的表达量，与对照组(2,236.99±90.35IA)相比，高剂量组(457.55±53.49IA)和低剂量组(1,313.13±75.58IA)TNF-α的表达水平显着降低。

最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。