一种柠檬香桃木精油在制备抗癌药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，主要涉及一种柠檬香桃木精油在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

癌症是全球死亡的主要原因之一。在过去的二十年中，癌症的发病率急剧增加，这个问题的严重性引起了人们的广泛关注。根据以前的研究，用于治疗癌症的药物显示出显著的局限性。而数千年来，大量药用植物被用于治疗癌症；据统计，全世界有超过3000种植物用于治疗癌症。其中来源于植物的紫杉醇、鬼臼毒素、美登木碱、喜树碱等天然分子在抗癌药物的制备中发挥了重要作用，植物来源的抗癌剂是抗癌药物的重要来源。因此，发现具有抗癌活性的相关分子研究具有重要意义。

柠檬香桃木(Backhousia citriodora)是澳大利亚东部特有的植物，属于桃金娘科，是香料和香精精油中销量最高、交易最频繁的精油之一。其中柠檬香桃木叶子和果实的精油已被广泛用作香料、食品调味品和草药茶的主要成分。柠檬香桃木精油有两种精油化学型：柠檬醛化学型和香茅醛化学型，其中柠檬醛化学型更为普遍。随着体外和体内研究证明柠檬醛化学型在许多领域的有效性，近几十年来，柠檬醛型柠檬香桃木精油吸引了全世界的关注。有研究表明，柠檬醛型柠檬香桃木精油具有显著的杀菌、抗病毒、抗炎抗氧化等活性，然而尚未有文献报道柠檬香桃木精油是否具有显著抗癌活性。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种柠檬香桃木精油在制备抗癌药物中的应用，为柠檬香桃木在抗癌药物或辅助治疗作用研究中的应用奠定了一定的基础。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种柠檬香桃木精油在制备抗癌药物中的应用。

进一步地，所述柠檬香桃木精油为桃金娘科植物柠檬香桃木(Backhousiacitriodora)的叶提取的挥发性成分。

本发明是将柠檬香桃木精油作为制备治疗癌症药物或健康产品的有效成分，还可以加入一种或多种药物或健康产品上可接受的辅料，并可将药物制成片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体、注射剂、气雾剂、栓剂、皮下给药剂型中的任何一种。

所述健康产品可以为特殊化妆品、保健食品、消字号产品中的任何一种。

在本发明之前尚未发现上述柠檬香桃木精油具有抑制人肝癌细胞(HepG2)、神经母瘤癌细胞(SH-SY5Y)和结肠癌细胞(HT-29)的作用；也尚未发现上述柠檬香桃木精油治疗癌症或以其为原料制备药物制剂或健康产品用于治疗癌症疾病和病症的报道。本发明柠檬香桃木精油在制备治疗癌症药物中的用途主要归功于柠檬香桃木精油显著抑制人肝癌细胞(HepG2)、人神经母瘤癌细胞(SH-SY5Y)、人结肠癌细胞(HT-29)和人肺癌细胞(A549)的作用，IC

附图说明

图1柠檬香桃木精油对人肝癌细胞(HepG2)IC

图2柠檬香桃木精油对人神经母瘤癌细胞(SH-SY5Y)IC

图3柠檬香桃木精油对人结肠癌细胞(HT-29)IC

图4柠檬香桃木精油对人肺癌细胞(A549)IC

图5柠檬香桃木精油对人肝癌细胞(HepG2)时间和浓度依赖抑制活性示意图；其中，紫杉醇组和鬼臼毒素组为阳性对照组，每组添加浓度均为3μM。

图6流式细胞术检测柠檬香桃木精油对人肝癌细胞(HepG2)周期影响示意图；

图7流式细胞术检测柠檬香桃木精油对人肝癌细胞(HepG2)凋亡影响示意图。

具体实施方式

下面将结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容，应当理解为可以以各种形式实现本发明而不应该被所阐述的实施例限制。相反，提供这些实施例是为了更加透彻地理解本发明。实施例中方法如无特殊说明的采用常规方法，使用的试剂如无特殊说明的使用常规市售试剂或按常规方法配制的试剂。

本发明提供了一种柠檬香桃木精油在制备抗癌药物中的用途，所述柠檬香桃木(Backhousia citriodora)为桃金娘科植物，柠檬香桃木精油为柠檬香桃木叶片的挥发性成分，通过水蒸气蒸馏法制备得到。所述抗癌药物为口服剂型或非口服剂型等。

本发明所述口服剂型包括但不局限于固体口服剂型(如肠溶衣片、滴丸、口服片、咀嚼片、颗粒剂、粉末或胶囊)或液体口服剂型(如糖浆或酊剂)。此外，本发明中的柠檬香桃木精油还可以添加到食物和饮料中，用于口服施用。此外，本发明中的柠檬香桃木精油也可以配制成口香糖，以促进口服递送和吸收。

本发明所述的非口服剂型包括但不局限于通过注射或其他全身途径给药，所述其它全身途径例如经皮施用或经粘膜施用(例如经鼻、舌下、口含、经阴道或直肠，通过栓剂)。其他施用途径(例如可在兽医应用中使用的)包括肠内和胃肠外递送，包括肌肉、皮下或髓内注射，以及鞘内注射、直接脑室注射、静脉内注射、腹膜内注射、鼻内注射或眼球内注射。

本发明所述可药用载体包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、硫酸钙、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、木糖醇、山梨醇、淀粉、淀粉糊、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、糊精、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、植物油、聚乙二醇、无菌磷酸盐缓冲盐水、盐水、林格氏溶液以及它们的组合。

本发明涉及的柠檬香桃木精油也可与其他药物活性成分联用，以制备其他的新药物组合物。

本发明的柠檬香桃木精油或其组合用以缓解脑癌、神经母瘤癌、肺癌、肝癌和结肠癌症状的证实性疗效和治疗相关活性，是通过细胞模型试验进行证实的。

本发明柠檬香桃木精油或其组合的治疗作用、良好的药物代谢参数和通常无毒性使得本发明化合物成为用于治疗上述病症的理想药物和健康产品。本发明所述柠檬香桃木精油具有良好的抗癌活性具体表现在不同浓度的柠檬香桃木精油处理肝癌细胞(HepG2)、神经母瘤癌细胞(SH-SY5Y)和结肠癌细胞(HT-29)后，运用MTT法检测细胞活力，计算细胞活力公式如下。

实施例1

本实施例所述柠檬香桃木精油的制备和GC-MS分析方法：

本发明所述柠檬香桃木精油制备方法以柠檬香桃木叶为原料，使用水冷式增速高效流水粉碎机粉碎，随后过药典标准筛3号筛，得到粉碎后柠檬香桃木样品；将500g粉碎后的柠檬香桃木粉末放置于10L圆底烧瓶中，浸泡时间为1h，加水量为8L，搅拌混匀，采用水蒸气蒸馏法提取7小时，温度为60-70℃。收集蒸馏液，加入少量乙酸乙酯萃取3次，再加入无水硫酸钠除水，静置过夜，使乙酸乙酯挥发，分离无水硫酸钠后得柠檬香桃木精油，得率为0.25％。采用气相色谱-质谱联用仪分析，并用Nist.14谱库联合检索，确定柠檬香桃木精油中的成分(如表1)。柠檬香桃木精油中的化合物按质量百分比为：(E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛(＞40％)、顺式-柠檬醛(＞34％)、6-甲酰基-4'-(甲氧基甲氧基)-2'，6'-二甲基联苯-3-羧酸甲酯(＞3％)。

表1：柠檬香桃木精油的GC-MS分析鉴定

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实施例2

柠檬香桃木精油抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖实验

将HepG2细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于96孔板(细胞数约3×10

由图1可知，加入不同浓度的精油后，人肝癌细胞的存活率明显降低，IC

实施例3

柠檬香桃木精油抑制人神经母瘤癌细胞(SH-SY5Y)增殖实验

将SH-SY5Y细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于96孔板(细胞数约3×10

由图2可知，加入不同稀释比例的精油后，神经母瘤癌细胞的存活率明显降低，IC

实施例4

柠檬香桃木精油抑制人结肠癌细胞(HT-29)增殖实验

将HT-29细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于96孔板(细胞数约3×10

由图3可知，加入不同稀释比例的精油后，人结肠癌细胞的存活率明显降低，IC

实施例5

柠檬香桃木精油抑制人肺癌细胞(A549)增殖实验

将A549细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于96孔板(细胞数约3×10

由图4可知，加入不同稀释比例的精油后，人肺癌细胞的存活率明显降低，IC

实施例6

柠檬香桃木精油抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖浓度和时间效应实验

将HepG2细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于96孔板(细胞数约3×10

由图5可知，在柠檬香桃木精油不同浓度和不同时间的处理后，可以明显看出肝癌细胞在相同浓度精油的作用下，随着处理时间的增加细胞存活率明显降低，说明柠檬香桃木精油对人肝癌细胞的抑制活性具有明显时间依赖效应。

实施例6

将HepG2细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于6孔板(细胞数约1×10

由图6、表2可知，在浓度为40μg/ml的柠檬香桃木精油下处理48h能显著影响HepG2细胞的S期和G2期。说明柠檬香桃木精油通过调控细胞周期发挥人肝癌细胞的抑制活性。

表2柠檬香桃木精油处理组及对照组HepG2细胞处于细胞周期各期的细胞比例

注：经统计学分析*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

实施例7

将HepG2细胞培养至对数生长期，胰酶消化，接种于6孔板(细胞数约1×10

由图7、表3可知，在浓度为40μg/ml的柠檬香桃木精油下处理48h后，晚期凋亡HepG2细胞显著增加。说明柠檬香桃木精油能加速细胞凋亡发挥人肝癌细胞的抑制活性。

表3柠檬香桃木精油处理组和对照组HepG2细胞处于细胞凋亡各期的细胞比例

注：经统计学分析*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。