一种富含迷迭香酸的迷迭香纯露的制备方法

本发明属于植物提取技术领域，主要涉及一种迷迭香纯露，特别涉及一种富含迷迭香酸的迷迭香纯露及其制备方法。

背景技术

迷迭香是多年生常绿小灌木，原产于欧洲地区和非洲北部地中海沿岸，现已被我国多地引种。迷迭香不仅可作为天然香料使用，而且还因具有抗菌、抗炎、抗氧化等作用可作为新一代纯天然绿色抗氧化剂使用。由于迷迭香提取物具有多种生物活性，因而可广泛应用于食品、化妆品、香料、医药等领域。

近年来，随着人们生活水平的提高，人们对天然产品健康与安全问题越来越重视与市面上合成抗氧化剂相比，迷迭香作为天然抗氧化剂，因具有绿色高效无毒等优点越来越受人们的追捧，吸引众多科学研究者将其研究开发。因而如何对迷迭香中的活性成分进行有效提取，以及如何提高其附加值已成为当前研究的热点。

迷迭香酸属于酚酸类化合物，普遍存在于唇形科、紫草科、伞形科和椴树科的多种不同科的草本植物中。Ellis初次从迷迭香植物中分离得到，因此得名。迷迭香酸具有抗氧化、抗抑郁、抗炎、抗肿瘤、抗血栓、血小板聚集等功效，已被国内外广泛应用于中成药、化妆品、食品等学科领域中，有迷迭香酸保健饮料、保健药物等多种产品，具有很高的功能和经济价值。迷迭香酸作为化妆品添加剂能有效护肤并且能抗衰老。

植物纯露一般是提取植物精油过程中作为副产物制备得到,通常为水蒸气提取精油过程中同时制备,通过冷凝水的作用,形成油水混合溶液,根据密度不同,油水分离,分离出油层部分为植物精油,水层部分即为植物纯露。由于植物纯露具有成分天然纯净、香气清新,易被皮肤吸收,温和无刺激,可经常性使用,具有良好的市场前景。市面植物纯露一般为单一植物,以补水保湿为主,可作为护肤水长期使用,为日常使用产品,但其他功效不明显或欠缺。本发明制备的富含迷迭香的迷迭香水纯露具有良好的抗衰功效，可以有效延缓皮肤衰老，同时由于海藻糖的加入发挥出了意想不到的保湿效果。在护肤品以及化妆品行业具有良好市场前景。

发明内容

针对以上问题，通过将新鲜的澳洲迷迭香茎叶冷冻干燥后进行球磨粉碎，将得到的粉末加入水或有机溶剂在超声-水浴条件下进行反复浸提富集，得到富含高纯度迷迭香酸的迷迭香纯露。具体合成步骤如下：

S1、原料的预处理：为了保持迷迭香中最原始的成分将新鲜的澳洲迷迭香的茎叶进行冷冻干燥，将干燥好的迷迭香进行球磨得到迷迭香超细粉末；

S2、迷迭香酸的浸取：称取2-5g澳洲迷迭香超细粉末置于单口烧瓶中加入水：乙醇：HCl体积比为20-80：80-20：1的混合溶液100-250ml在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h，然后进行抽滤将得到的滤液置于分液漏斗静置后进行油水分离，将油相用油系滤膜过滤得到为迷迭香酸精油，水相用水系滤膜过滤得到含迷迭香酸的迷迭香纯露；

S3、迷迭香酸的二次浸取：将S2中抽滤得到的滤渣置于单口烧瓶中加入S2中得到的迷迭香纯露，然后加入海藻糖复配的维生素E二聚甘油溶液，在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h后进行抽滤，将得到的滤液进行浓缩即可得到含高纯度迷迭香酸的迷迭香纯露。

优选地：所述步骤S1所用的原料为澳洲迷迭香的茎叶。

优选地：所述步骤S1所用的干燥方法为冷冻干燥，粉碎方法为球磨。

优选地：所述步骤S2中的料液比为1：50。

优选地：所述步骤S3中使用的维生素E二聚甘油溶液的维生素E含量为3％，海藻糖的加入量为2％，制备方法为：其中海藻糖溶解于同质量的水中后，和二聚甘油混合，滴入维生素E混匀。

优选地：所述步骤S3中所用的浸提液为步骤S2中得到的迷迭香纯露。

优选地：所述步骤S3中所用的水系滤膜为0.45微米滤膜。

本发明的有益效果在于：

1、本发明将新鲜迷迭香的茎叶进行冷冻干燥，相比于加热烘干过程中迷迭香内部成分的挥发，保持了迷迭香最原始的成分状态。

2、本发明通过使用首次浸提得到的迷迭香纯露当作二次浸提的浸提液有利得到富含高纯度迷迭香酸的迷迭香纯露。

3、本发明在提取的过程中发现首次浸提得到的迷迭香纯露提取液和海藻糖复配的维生素E二聚甘油溶液具有令人意想不到的协同作用，二者的加入可以显著提高纯露的提取率及其抗氧化抗衰老效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实施例1和对比例1和2迷迭香酸的提取率图。

图2为实施例2以及对比例3和4的迷迭香酸的提取率图。

具体实施方式

为了使本发明专利所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明专利进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明内容，并不用于限定本发明专利。

实施例1：

S1、原料的预处理：为了保持迷迭香中最原始的成分将新鲜的澳洲迷迭香的茎叶进行冷冻干燥，将干燥好的迷迭香进行球磨得到迷迭香超细粉末；

S2、迷迭香酸的浸取：称取5g澳洲迷迭香超细粉末置于单口烧瓶中加入水：乙醇：HCl体积比为80：20：1的混合溶液250ml在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h，然后进行抽滤将得到的滤液置于分液漏斗静置后进行油水分离，将油相用油系滤膜过滤得到为迷迭香酸精油，水相用水系滤膜过滤得到含迷迭香酸的迷迭香纯露；

S3、迷迭香酸的二次浸取：将S2中抽滤得到的滤渣置于单口烧瓶中加入S2中得到的迷迭香纯露，然后加入海藻糖复配的维生素E二聚甘油溶液，在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h后进行抽滤，将得到的滤液进行浓缩即可得到含高纯度迷迭香酸的迷迭香纯露。

所述步骤S2中使用的维生素E二聚甘油溶液的维生素E含量为3％，海藻糖的加入量为2％，制备方法为：其中海藻糖溶解于同质量的水中后，和二聚甘油混合，滴入维生素E混匀。

对比例1：除步骤S3中不加入海藻糖外，其余步骤均与实施例1相同。

对比例2：除步骤S3中不加入维生素E二聚甘油溶液外，其余步骤均与实施例1相同。

图1为实施例1和对比例1和2迷迭香酸的提取率图。由图2可以看出不加入海藻糖和不加入维生素E二聚甘油溶液的情况下提取率有所下降，提取率几乎是实施例的一半。实验过程中由于不同浸提液的提取差异，不难发现维生素E二聚甘油溶液与海藻糖的同时使用具有令人意想不到的协同作用，显著提高了迷迭香酸的提取率。同时加入海藻糖溶液够在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏，可以达到长时间保湿水润的效果。维生素E能稳定细胞膜的蛋白活性结构,促进肌肉的正常发育及保持肌肤的弹性,令肌肤和身体保持活力；维生素E进入皮肤细胞更能直接帮助肌肤对抗自由基、紫外线和污染物的侵害,防止肌肤因一些慢性或隐性的伤害而失去弹性直至老化，可以达到养颜护肤、延缓衰老的目的。

实施例2：

S1、原料的预处理：为了保持迷迭香中最原始的成分将新鲜的澳洲迷迭香的茎叶进行冷冻干燥，将干燥好的迷迭香进行球磨得到迷迭香超细粉末；

S2、迷迭香酸的浸取：称取4g澳洲迷迭香超细粉末置于单口烧瓶中加入水：乙醇：HCl体积比为40：60：1的混合溶液200ml在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h，然后进行抽滤将得到的滤液置于分液漏斗静置后进行油水分离，将油相用油系滤膜过滤得到为迷迭香酸精油，水相用水系滤膜过滤得到含迷迭香酸的迷迭香纯露；

S3、迷迭香酸的二次浸取：将S2中抽滤得到的滤渣置于单口烧瓶中加入S2中得到的迷迭香纯露，然后加入海藻糖复配的维生素E二聚甘油溶液，在80℃下进行超声-水浴回流循环1.5h后进行抽滤，将得到的滤液进行浓缩即可得到含高纯度迷迭香酸的迷迭香纯露。

对比例3：除步骤S1中使用直立白花迷迭香外，其余均与实施例4相同。

对比例4：除步骤S1中使用针叶迷迭香外，其余均与实施例4相同。

图2为实施例2以及对比例3和4的迷迭香酸的提取率图。从图中对比可知，三种不同的迷迭香提取迷迭香酸的提取率差别不大，说明迷迭香酸广泛富含有于各种迷迭香中。同时从表1中可以看出三种迷迭香的非挥发成分含量相差不大，并且澳洲迷迭香酸的含量相对较高，所以澳洲迷迭香中的迷迭香酸的提取量相对较高。

表1三种不同迷迭香酸提取物主要的共有非挥发成分

实施例3

动物口服实验

选取50只8周龄清洁级昆明小鼠常规条件下适应性喂养1周，自由饮水；一周后随机分为空白对照组、模型组、实施例组和对比例组(共两组)，10只/组(n＝10)。

接着，正常饲养10天，其中，除了正常饲养，实施例组灌胃实施例1中制备得到的迷迭香纯露，100mg/kg/d，BW；对比例1组灌胃对比例1中制备得到的迷迭香纯露100mg/kg/d，BW；对比例2组灌胃对比例2中制备得到的迷迭香纯露100mg/kg/d，BW；N组和M组均分别胃等量蒸水。在第9天，模型组、实施例组和对比例组分别腹腔注射D-gal，500mg/kg/d，BW，进行造模。空白对照组腹腔注射等量生理盐水。

饲养结束后，第10天，将小鼠置于CO

为了研究本发明制备的迷迭香纯露的抗氧化效果，对小鼠血清中抗氧化指标进行了检测，如表2所示。模型组小鼠较空白组小鼠血清CAT、GSH-Px、POD、SOD等抗氧化酶水平显著降低(P<0.01)，GSH含量极显著减少(P<0.01，MDA含量极显著上升(P<0.01)，T-AOC也极显著下降(P<0.01)，表明注射D-gal对小鼠造成严重氧化损伤。通过喂食实施例1组制备的纯露可以让所有指标明显好转，说明本发明制备的纯露有很好的抗氧化性。根据对比例组1和对比例组2的结果可以说明，海藻糖和维生素E二聚甘油溶液进行提取，可以协同提高迷迭香纯露的抗氧化保护能力。

表2各组血清抗氧化指标检测结果

实施例4

本申请团队发现，二聚甘油的选择至关重要。如果换成其他甘油，如普通甘油，三聚，四聚等多聚甘油，抗氧化效果均显著差于本发明，原因暂时不清楚，申请人团队认为可能是二聚甘油在提取过程中可能和某些活性分子产生了复合体，或者在某些环节形成了一定的空间构象，进而影响了其他抗氧化物质的转化或者释放，在后续研究中有待进一步查明。

仅作为示例，提供2组数据。

甘油组：除二聚甘油替换为甘油外，其余步骤均与实施例1相同。

三聚甘油组：除二聚甘油替换为三聚甘油外，其余步骤均与实施例1相同。

HEK-A细胞损伤实验及测试

选用人体表皮角质细胞(HEK-A)进行测试。东村的HEK-A细胞常温解冻后，在培养条件：体积分数为5％CO2、37℃下进行培养，传代至4.8×10

称取10g实施例1和对比例1～2，甘油组和三聚甘油组得到的迷迭香纯露，和10gDMEM培养基混合得到测试培养液。

阳性对照组分别使用0.005％的水溶性虾青素和VC的DMEM溶液。

测试方法：

将HEK-A细胞接种到96孔板中，使用DMEM培养液培养24h后吸出，用PBS冲洗干净。

将过氧化氢孵育的细胞作为模型组，未经过氧化氢处理的细胞作为空白组。将空白培养液，分别含有测试样品、水溶性虾青素、VC的培养液与细胞共同孵育3h后，在浓度为0.8mmol/L过氧化氢下孵育1h，使用新鲜DMEM培养液培养24h后，用CCK-8染色来测试细胞成活数量(OD)。

计算细胞活性：细胞活性＝(各组OD样品-OD培养基)/(OD空白组-OD培养基)。

表3各组细胞活性检测结果

如表3可知，实施例1得到的迷迭香纯露抗氧化效果非常显著，能够很好地保护HEK-A细胞免受过氧化氢的氧化作用而受到损伤，而对比例组和其他甘油组效果相当，具有一定的保护作用，但是保护强度大大劣于实施例1组。

根据以上实验结果可知，实施例1-2得到的迷迭香纯露的迷迭香酸含量都较高。本发明二次浸提的浸提液采用首次浸提得到的溶液，二次浸提时加入海藻糖溶液，出现了令人意想不到的协同作用，得到了显著的浸提效果。海藻糖溶液够在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏，可以达到显著的长时间的保湿水润效果。总之，本发明制备的迷迭香纯露具有迷迭香酸含量高的特性，具有优良的保湿以及抗氧化功能，在化妆品以及皮肤护理领域有广阔的应用前景。

以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。