一种II型聚酮化合物Actketone及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是来自放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC15665菌株所产的，具体涉及一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。

背景技术

天然产物是自然界生物体在进化过程中为了适应环境、竞争拮抗、沟通交流、抵御外侵、传递信号等而产生的代谢产物。从这个意义上讲，天然产物本身就赋予了特定的生物活性。天然产物也一直被认为是新药发现的重要源泉。

目前，缺乏一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的问题，而提出的一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：本发明的一种II型聚酮类化合物actketone，所述的II型聚酮类化合物actketone的化学结构式如式(I)所示：

本发明所述的II型聚酮类化合物actketone的制备方法，包括如下步骤：

(1)将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株，采用38#平板发酵培养；

(2)将步骤(1)所得培养基切成小块，放入F培养基中，30℃摇床120rpm培养7天；

(3)将步骤(2)所得培养基采用乙酸乙酯萃取，浓缩得到浸粗膏F1；

(3)对浸粗膏F1进行正向硅胶柱层析，先采用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，再用二氯甲烷和甲醇洗脱，共获得10个组分；

(4)再将第四出峰组分，分别经反向硅胶、凝胶柱层析和HPLC分离纯化，制得的II型聚酮类化合物actketone。

进一步地，在步骤(1)中，38#平板发酵培养的培养条件为26～30℃培养7天。

进一步地，在步骤(4)中，HPLC色谱条件为：使用反相色谱柱，流动相A：水，流动相B：乙腈，梯度洗脱程序为：流动相A的质量百分比为5％，流动相B的质量百分比为95％，时间为18min；HPLC分离纯化过程如下：semi-HPLC半制备反相高效液相色谱：ODS-2Hypersilcolum，5μm，250mm×10mm，流动相为：乙腈和水体积比为4：1，以2mL/min流速梯度洗脱18min，泵的型号为Hitachi pump L-7100，紫外灯的型号为UV detector L-7400。

本发明所述的II型聚酮类化合物actketone在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

进一步地，所述的II型聚酮类化合物actketone在制备治疗乳腺癌疾病的先导药物中的应用。

进一步地，所述的II型聚酮类化合物actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞。

有益效果：本发明首次从放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的发酵产物中，发现了一种II型聚酮化合物actketone，其细胞毒活性数据表明，actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞，其IC50值为26.8μM，可进一步作为用于治疗乳腺癌疾病的先导药物。

附图说明

图1为

图2位

图3为DEPT-135NMR谱图。

图4为HSQC NMR谱图。

图5为

图6为HMBC NMR谱图。

图7为NOESY NMR谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1

本发明的一种II型聚酮化合物actketone，所述的II型聚酮类化合物actketone的化学结构式如式(I)所示：

本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone的制备方法，包括如下步骤：

(1)将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株，采用38#平板发酵培养；放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株是从日本NBRC菌种保藏中心购买。

(2)将步骤(1)所得培养基切成小块，放入F培养基中，30℃摇床120rpm培养7天；

(3)将步骤(2)所得培养基采用乙酸乙酯萃取，浓缩得到浸粗膏F1；

(3)对浸粗膏F1进行正向硅胶柱层析，先采用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，再用二氯甲烷和甲醇洗脱，共获得10个组分；

(4)再将第四出峰组分，分别经反向硅胶、凝胶柱层析和HPLC分离纯化，制得一种II型聚酮化合物actketone。HPLC色谱条件为：使用反相色谱柱，流动相A：水，流动相B：乙腈，等度洗脱程序为：流动相A的质量百分比为5％，流动相B的质量百分比为95％，时间为18min。HPLC分离纯化过程如下：semi-HPLC半制备反相高效液相色谱：ODS-2 Hypersilcolum，5μm，250mm×10mm，流动相为：乙腈-水体积比＝4：1，以2mL/min流速梯度洗脱18min；泵的型号可以为Hitachi pump L-7100，紫外灯的型号可以为UV detector L-7400。

本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone在制备治疗乳腺癌疾病的先导药物中的应用。

本发明所述的II型聚酮化合物actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞，其IC50值为26.8μM。

实施例2

实施例2与实施例1的区别在于：

本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone的制备方法，包括如下步骤：

在步骤(1)中，将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株，采用38#平板发酵培养；38#平板发酵培养的培养条件为30℃培养7天。

试验例1

Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的活化。

将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的冻存干粉涂布于38#平板培养基(蛋白胨：20.0g，磷酸氢二钾：1.5g，硫酸镁：1.5g，琼脂：15.0g，水1L)中，置于30℃恒温箱中培养，得到该放线菌。

试验例2

Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株F培养基发酵

将菌株Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665转接至平板38#培养基上，在30℃恒温箱中进行培养7天。待菌丝体铺满平板后，将其切成小方块，转入F培养基中，30℃摇床120rpm培养7天。

试验例3

actketone的提取与分离

试验例2中所得的F培养基加入乙酸乙酯萃取，浓缩得到浸膏F1。对浸膏F1进行正向硅胶柱层析，先用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，再用二氯甲烷和甲醇洗脱，得到10个组分；再将第四出峰组分，分别经反向硅胶、凝胶柱层析和semi-HPLC(色谱柱：AllsphereODS-2.5mm column)，乙腈-水体系，以2mL/min流速，乙腈-水体积比＝14:1等度洗脱18min，制得本发明所述actketone(6.0mg)。泵的型号可以为Hitachi pump L-7100，紫外灯的型号可以为UV detector L-7400。

试验例4

actketone的结构鉴定详见附图1-7。acautalides A

表1

actketone结构如下：

试验例5

细胞毒活性试验

用含有体积分数为10％胎牛血清的MEM完全培养液,在含有体积分数5％CO

本发明的细胞毒活性实验表明，actketone具有显著的抑制乳腺癌细胞毒活性，可进一步作为开发治疗乳腺癌疾病的先导药物。本发明所述actketone的结构是基于质谱、核磁共振谱确定的。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。