一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法

技术领域

本发明涉及医学检验领域，特别是涉及用于检测幽门螺杆菌核酸检测的口腔样本的前处理方法。

背景技术

幽门螺杆菌（

口腔作为幽门螺杆菌感染的必经途径，存在HP 的寄生，研究显示口腔中的HP与胃部中的HP具有较强的一致性（赵宇阳,李慧,张艳.胃及口腔幽门螺杆菌感染与慢性胃炎的相关性分析[J].中国实验诊断学,2018,22(03):507-508.），因此口腔标本作为HP检测对象，具备较强的可行性。然而，在实际工作中，其检测的阳性率与

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：提供一种用于口腔幽门螺杆菌核酸检测的样本富集方法。该方法能够有效收集口腔中的HP菌体，提高核酸提取的效率，进一步提高HP核酸检测扩增的灵敏度。

本发明的技术方案为：一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法，包括如下步骤：

（1）采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，然后用无菌生理盐水涑口；

（2）收集涑口后的生理盐水并将刮拭牙齿后的植绒拭子投入进行振荡；

（3）将步骤（2）处理后的液体用0.22~0.45μm无菌滤膜过滤；

（4）将步骤（3）过滤后的滤膜用无菌生理盐水振荡洗涤，离心，弃滤膜；

（5）将步骤（4）处理后的液体在12000rpm以上进一步离心，弃上清，沉淀用于下游核酸提取。

进一步地，步骤（1）中，所述无菌生理盐水涑口的用量为50ml。

进一步地，步骤（2）中，振荡时间为1min。

进一步地，步骤（3）中，滤膜孔径为0.22μm。

进一步地，步骤（4）中，无菌生理盐水的用量为1ml，振荡时间1min。

进一步地，步骤（5）中，所述离心为13200rpm离心5min。

进一步地，步骤（1）中，所述刮拭牙齿的无菌植绒拭子用量为两支。

本发明中，采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，以达到从牙菌斑中富集HP的目的。由于幽门螺杆菌在口腔中多数附着于牙菌斑上，因此普通的棉拭子擦拭很难将牙菌斑上的HP取下来。植绒拭子兼具柔韧性和释放性，在样本采集和释放中具备优良的性能。

在无菌植绒拭子擦拭的基础上，采用无菌生理盐水漱口的方式收集口腔中幽门螺杆菌，生理盐水可以将牙齿以外部分HP进行很好的富集。

最后采用无菌滤膜过滤的形式浓缩富集采集到的样本，提高下游核酸提取的浓度，从而提高核酸检测的灵敏度。在实际使用过程中，需要配备真空抽滤装置，对收集到的液体进行过滤。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的富集方法能够有效收集口腔中的HP菌体，提高核酸提取的效率，进一步提高HP核酸检测扩增的灵敏度。

附图说明

图1是实施实例1本发明方法处理后的口腔样本中幽门螺杆菌的扩增效果对比。

具体实施方式

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。

实施例1 本发明方法与传统采集方法对比

选择9例C

本发明方法的方式进行口腔标本采集具体步骤为：

1、在50ml螺口管中准备50ml无菌生理盐水，准备两支无菌植绒拭子（长度15cm，断点折痕处为2.5~3.0cm），无菌过滤膜（0.22μm）及过滤装置。

2、将无菌植绒拭子在生理盐水中润湿，然后在上下牙齿上刮拭，施加一定的力度。

3、用准备好的50ml无菌生理盐水反复漱口1min，并收集漱口水与50ml无菌螺口管中。

4、将2支采样后的无菌拭子，沿折断点折断，头部置于上一步的螺口管中，振荡1min。

5、无菌滤膜置于过滤器上，将上一步50ml的液体倒入收集杯中，并开机进行过滤。

6、从过滤器上取下过滤膜，置于一个干净的2.0ml离心管中，加入1.0ml的无菌生理盐水，振荡1min，并短暂离心，弃去滤膜。

7、将上一步液体13200rpm离心5min，弃去上清，沉淀用于下游核酸提取。

表1两种方法核酸浓度测试对比

根据两种样本采集方法的结果对比，本发明方法采集的样本核酸浓度更高，纯度与传统方法一致。

根据幽门螺杆菌特异基因荧光PCR扩增结果，同一患者来源的样本中，本发明方法富集样本中检测灵敏度更高，扩增Ct值更小（图1）。