一种药用核酸及其生产工艺

技术领域

本发明属于药用核酸技术领域，具体涉及一种药用核酸及其生产工艺。

背景技术

目前已有多种方法用来生产抗传染性病原体的疫苗，如灭活疫苗，减毒活疫苗、重组疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗等。它们的基本作用原理是相同的，即借助与病原体结合的靶蛋白激发免疫反应，达到免疫个体不被传染性病原体感染的目的。当个体与传染性病原体接触时，其免疫系统能够识别病原体蛋白而产生有效的保护反应抵抗传染。目前所用的许多疫苗就是由从病原体中分离出来的非传染性和低传染性的蛋白或核酸物质所组成。核酸疫苗的优点在于可以激活体液免疫反应和细胞免疫反应，而更有效地激发保护性和清除性的免疫反应，达到防治病原体感染，抗肿瘤，同时核酸疫苗制备方便，成本低廉，安全性好。

核酸疫苗要在生物机体中得到很好的表达，必须配合载体或佐剂。水凝胶的物理性质十分利于药物递送，能够实现包载药物的持续释放。通过合适的释放机制，水凝胶能在长时间内维持局部的高药物浓度，释放机制可以基于扩散、溶胀、化学或者其他环境刺激等。然而，目前以海藻酸钠盐或明胶等天然来源所合成的传统水凝胶聚合物，无法有效监控水凝胶载药系统在生物体内的核酸药物有效释放过程，不具备良好的生物相容性和生物降解能力，且对各种刺激的特异性响应能力较差。因此亟需一种药用核酸疫苗组合物解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药用核酸及其生产工艺，其药用核酸疫苗以水凝胶为载体，以解决现有技术中药用核酸疫苗生物相容性较差，无法有效监控水凝胶载药系统在生物体内的核酸药物有效释放过程、对刺激的响应能力较差的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种药用核酸，包括银纳米簇复合水凝胶、核酸疫苗和注射用水。

进一步的，所述银纳米簇复合水凝胶、核酸疫苗、注射用水用量比为6-8g：1-2g：10-15mL。

进一步的，所述银纳米簇复合水凝胶由以下步骤制成：

S1.将D型Fmoc-Phe凝胶因子溶解于的磷酸钠-亚磷酸氢钠缓冲溶液中，在70℃水浴中超声，使得D型Fmoc-Phe凝胶因子充分溶解，溶解后移除水浴。

S2.快速加入AgNO

进一步的，所述D型Fmoc-Phe凝胶因子与BSA的用量质量比为3：20。

进一步的，所述AgNO

进一步的，所述磷酸钠-亚磷酸氢钠缓冲溶液、AgNO

进一步的，所述NaBH

进一步的，所述磷酸钠-亚磷酸氢钠缓冲溶液浓度为0.15M，pH为7.4。

一种药用核酸生产工艺，包括以下步骤：

将核酸疫苗与注射用水混合后，将银纳米簇复合水凝胶分散其中进行吸附溶胀，室温搅拌(100-300rpm)90min，将混合液放于48孔板中，置于37℃培养箱中70-90min，即得一种药用核酸。

本发明的有益效果：

本发明所述的一种药用核酸具体为一种银纳米簇复合水凝胶载体核酸疫苗组合物，其采用合成多肽的主要原料之一的D型Fmoc-Phe凝胶因子与银纳米簇复合作为核酸疫苗的载体：

1.D型Fmoc-Phe凝胶因子价格便宜且方便易得，同时性状非常稳定，制备出的水凝胶在长达一年的放置期间没有性状变化。

2.本发明利用BSA合成的银纳米簇具有荧光效应，可响应癌细胞中产生的H

3.本发明中复合水凝胶载体通过吸附溶胀包载核酸疫苗，BSA对核酸疫苗产生生理和机械保护作用和载体作用。

4.本发明药用核酸生产过程中所用原料均具有良好生物相容性、低细胞毒性，为癌症治疗提供一种新的应用前景。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步的说明。

图1是本发明实施例4中细胞荧光强度变化折线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

银纳米簇复合水凝胶载体的合成

S1.将0.06g D型Fmoc-Phe凝胶因子溶解于20mL 0.15M，pH为7.4的磷酸钠-亚磷酸氢钠缓冲溶液中，在70℃水浴中超声10min，使得D型Fmoc-Phe充分溶解，溶解后移除水浴。

S2.快速加入0.3M 1mL AgNO

实施例2

一种药用核酸的生产工艺，包括以下步骤：

将核酸疫苗与注射用水混合后，将实施例1合成的复合水凝胶分散其中进行吸附溶胀，200rpm搅拌90min，将混合液放于48孔板中，置于37℃培养箱中80min，得到一种银纳米簇复合水凝胶载体核酸疫苗组合物，其中银纳米簇复合水凝胶、核酸疫苗、注射用水用量比为7g：1g：12mL，其中核酸疫苗为人乳腺癌细胞株MDA-MB-231提取的重组质粒。

实施例3

一种药用核酸的生产工艺，包括以下步骤：

将核酸疫苗与注射用水混合后，将实施例1合成的复合水凝胶分散其中进行吸附溶胀，250rpm搅拌90min，将混合液放于48孔板中，置于37℃培养箱中70min，得到一种银纳米簇复合水凝胶载体核酸疫苗组合物，其中银纳米簇复合水凝胶、核酸疫苗、注射用水用量比为8g：1.8g：15mL，其中核酸疫苗为人乳腺癌细胞株MDA-MB-231提取的重组质粒。

实施例4

胞内荧光测试

在添加了10％胎牛血清(FBS)，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉菌的Eagle中转移人乳腺癌细胞MDA-MB-231，并收集以制备用于成像和光谱的活细胞。在直径6厘米的培养皿中，放置过夜。将生长培养基分别替换为含有50μg/mL实施例2、实施例3所生产的核酸疫苗组合物的培养基，立即将培养皿放置在倒置显微镜台上进行成像和光谱检测，模拟细胞的培养条件将培养温度设置为37℃。由于人乳腺癌细胞MDA-MB-231本身不具备荧光效应，其在480nm激发波长下无任何荧光；含有核酸疫苗组合物的培养基其荧光变化如图1所示，由图可知，0-20min荧光强度逐渐上升为生产的核酸疫苗组合物逐渐透过细胞膜进入细胞内，此时细胞内核酸疫苗浓度逐渐增大从而荧光增强；20min后，由于细胞代谢产生H

实施例5

免疫力测试

在SPF环境(温度：22-25℃，湿度：50±2.0％)中饲养雌性BALB/c裸鼠(四周，15-20g)，每三天在小鼠腹膜内注射0.15mL 0.8mg/mL雌性激素，两周后，将人乳腺癌细胞MDA-MB-231(1x10

表1

从表1中的数据可以看出，使用实施例2和3的核酸疫苗组合物后小鼠乳腺癌细胞增殖活性明显低于质粒对照组和空白对照组，说明本发明获得的核酸疫苗组合物对小鼠乳腺癌细胞增殖具有抑制作用。

对比例1

按照中国专利CN109079153A所述一种含银纳米颗粒的超分子水凝胶制备方法制备含银纳米颗粒的超分子水凝胶，将其与实施例1所合成的银纳米簇复合水凝胶一同用MTT法进行细胞毒性测试：

在96孔培养皿中以1×10

表2

由表可知，随着水凝胶的浓度从1到500μg/mL的变化，实施例1的浓度均保持较好的生物活性，且存在上升趋势，说明其具有潜在的促进细胞增殖能力，D型Fmoc-Phe凝胶因子与BSA具有协同增强复合载体生物相容性的能力；对比例1的细胞活性随着浓度的增大逐渐降低，证明抗坏血酸还原法合成的银纳米粒子具有一定的生物毒性。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。