一种药用红树来源真菌中抗肿瘤活性化合物及其制备方法

技术领域

本发明属于红树真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种药用红树来源真菌中抗肿瘤活性化合物及其制备方法。

背景技术

红树植物生长于热带亚热带潮间带，其生存环境具有高压、高盐、低氧等特点，使得其内生真菌具有独特的代谢途径，进而具有产生结构新颖、生物活性多样的化合物的能力，其代谢产物具有抗菌、抗肿瘤、免疫调节、酶抑制等多种药用价值，是潜在的微生物药物开发资源，因此，红树植物内生真菌将成为新药研发的重要资源之一。申请人先前中国发明专利(CN 116287048 A)中公开了自真菌TGGP35的发酵物中分离获得系列联苯醚类化合物，本发明对真菌TGGP35进行近一步研究获得了系列抗肿瘤活性次级代谢产物。

发明内容

本发明提供一种药用红树来源真菌中抗肿瘤活性化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述抗肿瘤活性化合物具有化合物1-3所示结构：

本发明提供一种制备化合物1-3方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将真菌TGGP35菌株接入发酵培养基中，室温下静置培养28～30天得发酵物；

(2)将步骤(1)得到的发酵物用1-2倍体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并乙酸乙酯相后减压浓缩得到浸膏；

(3)步骤(2)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，将梯度60:40得到的洗脱液浓缩后，先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝10:1-5:1的混合溶剂，洗脱6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H

其中所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比；所述发酵培养基优选大米固体培养基，配方优选为1L锥形瓶中加入50g大米、60g水、0.5g海盐、1.5g蛋白胨。

本发明提供一种抗肿瘤药物，其特征在于以上述化合物1-3中任一或其药学上可接受的盐作为有效成分。

本发明提供的上述抗肿瘤药物，还包含其他抗肿瘤药物；也可以包含药学上可接受的载体或赋形剂。其剂型优选固体制剂或液体制剂。

本发明的另一实施方案提供所述的化合物1-3任一或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。

本发明所述“真菌TGGP35”分离自药用红树老鼠簕(Acanthus ilicifolius L.)，其中老鼠簕是发明人于2015年8月采集自中国南海海南东寨港红树林自然保护区。真菌TGGP35通过18S rRNA扩增和ITS测序，根据真菌的形态特征和分子生物学方法(ITS-rRNA序列比对)鉴定菌株为Talaromyces flavus(篮状属)；该真菌ITS区域的序列已提交至NCBI(GenBank accession No.MT071116)。本发明所述“真菌TGGP35”已在发明人的先前研究论文“Marine Drugs 2022,20,361，Talaromarins A–F:Six New Isocoumarins fromMangrove-Derived Fungus Talaromyces flavus TGGP35”和先前中国发明专利(CN116287048 A)中公开，本发明对中国发明专利(CN 116287048 A)中的内容进行全部引用。

附图说明

图1是TGGP35的菌株形态图；

图2是化合物1-3的

图3是化合物2-3的NOESY谱图；

图4是化合物1的实验ECD谱图；

图5是化合物2的实验ECD谱图；

图6是化合物3的Mosher’s酯化反应

图7是化合物1的135°-DEPT谱图；

图8是化合物1的HMQC图；

图9是化合物2的

图10是化合物2的

图11是化合物2的135°-DEPT图；

图12是化合物2的HMQC图；

图13是化合物2的NOESY图；

图14是化合物3的135°-DEPT图；

图15是化合物3的HMQC图；

图16是化合物3的

图17是化合物3的HR-ESI-MS图；

图18是化合物2的HR-ESI-MS图。

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

实施例1

(1)配制发酵培养基：配方为每个锥形瓶(1L锥形瓶)中加入50g大米、60g水、0.5g海盐、1.5g蛋白胨。120℃灭25–30分钟。

将真菌TGGP35菌株接入发酵培养基(200瓶)中，室温下静置培养30天得发酵物；

(2)将步骤(1)得到的发酵物用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相后减压浓缩得到浸膏；

(3)步骤(2)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，将梯度60:40得到的洗脱液浓缩后，先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝10:1-5:1的混合溶剂，洗脱6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H

化合物1：黄色油状物。结合高分辨质谱HR-ESI-MS的分子离子特征在m/z225.1473处给出准分子离子峰[M+H]

化合物1的核磁波谱数据(CDCl

化合物2：黄色油状物。根据高分辨质谱HR-ESI-MS的分子离子特征在m/z219.0992处给出准分子离子峰[M+Na]

化合物2的核磁波谱数据(CDCl

化合物3：黄色油状物。根据高分辨质谱HR-ESI-MS的分子离子特征在m/z197.1181处给出准分子离子峰[M-H]

化合物3的核磁波谱数据(CDCl

实施例2细胞毒活性测试：

1.实验仪器与材料：高速离心机，超净台，电子天平，多功能酶标仪，恒温培养箱，高压灭菌锅，DMEM高糖培养基，PBS缓冲溶液，胎牛血清，胰蛋白酶，噻唑蓝，二甲基亚砜(DMSO)，盐酸阿霉素(Adriamycin hydrochloride)，离心管，宫颈癌细胞(Hela)。

2.测试方法和步骤：通过MTT法测试单体化合物1-3的细胞毒活性，将细胞株活化后，放置在细胞培养箱(37℃，5％CO

4.实验结果：