有机云母在制备防治牙周炎症药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种有机云母在制备防治牙周炎症药物中的应用。

背景技术

受到现代快速的生活方式影响，人们正面临着严峻的口腔问题。在口腔疾病中，牙周炎的危害和发病率是目前最严峻的口腔疾病之一。牙周炎不仅会影响牙龈、牙周韧带和牙槽骨，如果不及时治疗，还会导致牙齿失去组织支撑，甚至牙齿脱落。牙周炎患者面临缺牙和咀嚼功能障碍的风险，从而影响他们的营养、生活质量和自尊心，并产生巨大的社会经济影响和医疗保健成本。

目前，临床上多通过机械清除牙菌斑生物膜以用于牙周病的治疗，但这种治疗手段所用器械均难以进入患者牙周袋根部分叉部及底部,治疗效果局限性较大。在牙周规范化治疗基础上,使用药物辅助能够进一步消除病原菌,有效抑制炎症反应,同时调节宿主防御功能。在牙周炎的病原菌中，牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)是重要的致病菌，其影响着牙周炎的发生与发展，因此P.gingivalis抗菌治疗是牙周炎的重要防治策略之一。抗生素类药物是目前临床常用用于治疗P.gingivalis的药物，但长期使用造成的抗生素滥用(耐药性)及副作用(胃肠道不适、过敏反应、黏膜炎症；破坏正常微生物群落，使得宿主易感染其他感染、消化问题等)局限其应用。

天然药物具有来源广泛，副作用小，不易产生耐药性的特点，近年来受到越来越多的国内外专家学者青睐从天然产物中挖掘潜在的抗炎物质。其中，云母是最常见的硅酸盐矿物，有机云母是一种含有有机物质(通常是有机酸)的云母矿物。有机云母发酵提取液是由黄岗岩和青梅为主要原料，适当温度条件下发酵提取获得。具有抗菌、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等功效。基于有机云母功效丰富，生物相容性好，生产成本低，毒副作用小，因此以有机云母为有效成分的高效低毒药物的开发具有重大意义。

发明内容

本发明意在提供一种有机云母在制备防治牙周炎症药物中的应用，将有机云母的提取液用在制备防治牙周炎症的药物中，有机云母通过改变细菌细胞壁通透性以及调控金属蛋白酶的活性来抑制和杀伤多种微生物，同时它还具有抑制机体的炎症等功效，其可以防治的牙周炎症包括牙龈红肿、出血、口臭、菌斑。将含有有机云母的药物用于牙周炎的防治，可以有效抑制牙周炎症，为牙周炎症的防治提供新的思路和方法。解决了背景技术中的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

有机云母在制备防治牙周炎症药物中的应用。

进一步地，在所述防治牙周炎症药物中，有机云母用于抑制炎症因子的表达。

进一步地，所述炎症因子包括IL-1β、IL-6和TNF-α。

进一步地，在所述防治牙周炎症药物中，有机云母抑制机体炎症的发生与恶化。

进一步地，在所述防治牙周炎症药物中，有机云母通过改变细胞壁通透性以及调控金属蛋白酶的活性来抑制牙龈卟啉单胞菌。

技术方案的有益效果是：

1、本发明将有机云母应用在制备防治牙周炎症药物中，有机云母用于抑制炎症因子的表达。炎症因子是导致炎症反应的关键分子，包括IL-1β、IL-6和TNF-α等。通过使用有机云母，可以降低这些炎症因子的产生，从而减轻局部炎症反应。

2、本发明将有机云母应用在制备防治牙周炎症药物中，有机云母可以抑制机体炎症的发生和恶化。牙周炎通常伴随着机体炎症反应，使用有机云母可以减轻炎症症状，降低炎症介质的产生，从而减少炎症的发展和恶化。

3、本发明将有机云母应用在制备防治牙周炎症药物中，有机云母可以通过改变细胞壁通透性和调控金属蛋白酶的活性来抑制牙龈卟啉单胞菌的生长和代谢。这种机制可以干扰菌株的生存和致病能力。

附图说明

图1为本发明具体实施例中，有机云母发酵液在牙周炎治疗中的作用机制；

图2为本发明具体实施例中，HGF细胞与浓度为1％-5％的有机云母发酵液一起孵育24及48小时的细胞活力柱状图；

图3为本发明具体实施例中，对活死细胞染色测定的示意图；

图4为本发明具体实施例中，IL-1β,IL-6,and TNF-α的蛋白水平变化图；

图5为本发明具体实施例中，PI3K/AKT通路中的蛋白水平变化图；

图6为本发明具体实施例中，NF-κB通路中蛋白水平的变化图；

图7为本发明具体实施例中，丝线结扎建立小鼠牙周炎模型；

图8为本发明具体实施例中，对心、肝、脾、肺、肾的HE染色图；

图9为本发明具体实施例中，牙龈炎的对照图；

图中，左图为牙龈炎的对照，右图是加有机云母和炎症抑制因子的对照；中图是加入用有机云母后，牙周炎状况明显转好；

图10为本发明具体实施例中，加入有机云母后，炎症因子的mRNA水平。

具体实施方式

下面结合附图和实施方式对本发明作进一步的详细说明：

有机云母在制备防治牙周炎症药物中的应用。

进一步地，在该防治牙周炎症药物中，有机云母用于抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。

在该防治牙周炎症药物中，有机云母抑制机体炎症的发生与恶化。

在该防治牙周炎症药物中，有机云母通过改变细胞壁通透性以及调控金属蛋白酶的活性来抑制牙龈卟啉单胞菌。

具体实施例

如图1至图9所示，将有机云母作用于实验小鼠，证实有机云母对炎症因子的抑制作用，具体步骤如下：

制备有机云母混合溶液

本实施例使用的有机云母的主要原料为黄岗岩，青梅和水，先将黄岗岩粉碎至0.5～0.8cm，并用振动机进行清洗；青梅去核；然后将黄岗岩、水、青梅加入到发酵罐中，在45℃条件下混合发酵140天，得到混合物；混合物过滤得到有活性的云母混合物；最后利用0.22μm的滤膜对混合溶液过滤后用于细胞实验。

利用qRT-PCR测定有机云母对TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6mRNA转录的影响；具体步骤如下：

(1)取对数生长期RAW264.7细胞，按细胞计数方法操作；

(2)调整细胞浓度为2×l06/孔接种于6孔板中，每孔2mL，在37℃、5％CO2培养箱培养24h；

(3)吸去培养液，实验组加入2mL 1μg/mL的LPS刺激细胞4h后加入浓度为1％和2％的2mL有机云母，LPS组加入2mL 1μg/mL LPS，空白对照组细胞加入2mL的完全培养液，在37℃、5％CO2培养箱培养24h；

(4)提取RNA

①倒出培养液，使用1×PBS清洗一次；

②向培养细胞中加入适当的裂解Buffer RL(使用前加入50×DTT Solution，每1mL Buffer RL加入20μL 50×DTT Solution)，放置片刻后然后用移液枪吹打细胞，使细胞完全脱落；

③将上步骤的细胞悬液转移至离心管中，用移液枪反复吹打；

④室温静置2min。；

⑤将gDNA Eraser Spin Column安放到2mL的Collection Tube上；

⑥将裂解液转移入到gDNA Eraser Spin Column中；

⑦12,000rpm，离心1min；

⑧弃去gDNA Eraser Spin Column，保留2mL Tube中的滤液；

⑨向步骤⑧中加入与液体等体积的70％乙醇，用移液枪吹打混匀；

⑩快速转移混合液至RNA Spin Column中；

12,000rpm，离心1min，弃去滤液，将RNA Spin Column放回到2mL CollectionTube中；

将500μL的Buffer RWA加入至RNA Spin Column中，12,000rpm离心30s，弃滤液；

将600μL的Buffer RWB加入至RNA Spin Column中，12,000rpm离心30s，弃滤液；

重复操作步骤/>

将RNA Spin Column重新安置于2mL Collection Tube上，12,000rpm离心2min；

将RNA Spin Column安置于1.5mL的RNase Free Collection Tube上，在RNASpin Column膜中央处加入100mL的RNase Free dH2O室温静置5min；/>

将第一次的洗脱液重新加回RNA Spin Column中，室温静置5min，12,000rpm离心2min洗脱RNA；

使用nano测定RNA浓度，将每个样本的浓度和体积调整至相同水平；

(5)去除基因组DNA反应：采用法，于冰上配制反应液，配方如下；室温静置5min，然后置于4℃保存。

如图10所示：加入有机云母后，炎症因子IL-1beta、TNF-alpha、IL-6、IL-1alpha的mRNA水平都有显著下降。说明：有机云母能够有效地抑制由炎症因子引起的细胞炎症反应。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。