亚磷酰胺单体的纯化方法

技术领域

本发明涉及一种亚磷酰胺单体的纯化方法，属于有机物合成技术领域。

背景技术

亚磷酰胺单体是合成寡核苷酸和DNA的单体，传统的工艺主要是合成2'-F-ibu-dG亚磷酰胺单体后，在对合成中的单体进行prep-HPLC,得到纯品。公开号为US2022177888A1和WO2023039076A1的两份专利文献中介绍的是用C18硅胶柱，乙腈和水（0.5%NH

发明内容

本发明的目的是提供一种亚磷酰胺单体的纯化方法，实现了工业化生产2'-F-ibu-dG 亚磷酰胺单体。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：

亚磷酰胺单体的纯化方法，包括以下步骤：

（1）控温10±5℃，向反应容器中加入溶剂、四氮唑、N-甲基咪唑、氮气保护下加入磷试剂（双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦，CAS:102691-36-1），搅拌，所述溶剂、四氮唑、N-甲基咪唑、磷试剂质量比为38-40:0.3-0.4:0.12-0.13:4-4.5；本步骤中，所述溶剂优选为DCM。

（2）控温10±5℃，将原料5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-2'-氟脱氧鸟苷溶于DMF溶剂中，其中，原料与磷试剂的摩尔比为1:1.6-1.7，加入步骤（1）的反应体系，反应氮气保护。

（3）控制反应体系温度15-20℃，采用HPLC检测，在HPLC谱图上除溶剂以外的原料峰面积占比≤0.5%，反应体系产品纯度95%以上反应结束。在本步骤中，反应时间优选为3-6小时。

（4）有机相进行浓缩至不出馏分，加入溶剂溶解，在本步骤中，所述溶剂为甲基叔丁基醚。

（5）控制体系温度5-15℃，向反应容器中加入水和3wt%NaCl水溶液，搅拌，分液，对上层有机相进行洗涤，采用HPLC检测，直至HPLC谱图上DMF峰面积占比＜0.5%。在本步骤中，搅拌前向反应容器中加入水和3wt%NaCl水溶液的质量比优选为（6-8）：(4-5)。在本步骤中，洗涤剂优选为水和3wt%NaCl水溶液，水和3wt%NaCl水溶液的质量比为（6-8）：(4-5)。

（6）有机相浓缩至反应体系体积的15%-20%，在20℃-30℃，-0.095Mpa~-0.1Mpa下滴加入长链烷烃溶剂中，析晶离心得到白色固体。在本步骤中，长链烷烃溶剂优选为正庚烷。

（7）控制体系温度5-15℃，白色固体用甲基叔丁基醚溶解，加入DMF与H

（8）有机相干燥，浓缩至有机相溶液体积的30%-40%，然后滴入长链烷烃溶剂中析晶，离心得到产品。在本步骤中，长链烷烃溶剂为正庚烷，有机相用硫酸钠干燥。

（9）N

本发明的纯化路线图：

本发明的方法来纯化2'-F-ibu-dG 亚磷酰胺单体，采用水洗和析晶常见的化学提纯方法来除去3价膦，用DMF和水洗涤5价膦，同时这些操作步骤又可以提纯产物。具体地，通过洗涤和析晶除去反应中原料剩余的膦试剂，同时再通过DMF和水的混合溶剂除去反应体系中产生的5价膦，再析晶得到白色粉末产品。这过程中析晶和洗涤都能除去一部分杂质，到最后产品的纯度达到》98.5%，P谱能达到98%，实现了工业化生产2'-F-ibu-dG 亚磷酰胺单体的目的。本发明工艺操作过程中使用反应釜，离心机，旋蒸，烘箱等常用的设备，用常规的方法和常用的溶剂提纯产品，做到了工厂放大简便，操作简单，溶剂量的减少，节约了成本，避免了制备不易放大，溶剂量大，成本高的缺点。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1为实施例1获得产品的核磁图。

图2为实施例1获得产品的P谱图。

图3为实施例1获得产品的HPLC检测色谱图。

图4为实施例2获得产品的核磁图。

图5为实施例2获得产品的P谱图。

图6为实施例2获得产品的HPLC检测色谱图。

图7为实施例3获得产品的核磁图。

图8为实施例3获得产品的P谱图。

图9为实施例3获得产品的HPLC检测色谱图。

具体实施方式

实施例1

控温15℃，向150L釜中加入二氯甲烷 39.75kg，四氮唑0.32kg、1-甲基咪唑0.125kg、氮气保护下加入双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦4.13kg，搅拌10min。控温15℃将1.6kg原料5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-2'-氟脱氧鸟苷溶于DMF中（原料与DMF的质量比为1:4），滴加入（使用蠕动泵泵入）反应体系，反应氮气保护。控制体系温度15℃，反应4h后开始采用HPLC取样检测，每小时取样检测一次，在HPLC谱图上溶剂以外的原料峰面积占比≤0.5%，体系产品纯度95%以上即为反应合格。有机相进行浓缩至不出馏分，加入甲基叔丁基醚75L溶解。控制体系温度15℃，向反应釜中加入30Kg水和3wt%NaCl水溶液 20kg，搅拌0.5h，分液，上层有机相用30Kg水和3wt%NaCl水溶液 20kg洗涤3次，有机相HPLC检测，HPLC谱图上的DMF峰面积占比＜0.5%即为合格。有机相进行浓缩至反应体系的15%（25℃，-0.095Mpa~-0.1Mpa）滴加入43.78kg的正庚烷中析晶离心得到白色固体。控制体系温度10℃，白色固体用49.36kg的甲基叔丁基醚溶解，加入DMF/H

实施例2

控温10℃，向150L釜中加入二氯甲烷 38kg，四氮唑0.30kg、1-甲基咪唑0.12kg、氮气保护下加入双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦4.5kg，搅拌10min。控温15℃将1.7kg原料5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-2'-氟脱氧鸟苷溶于溶于DMF中（原料与DMF的质量比为1:4.5），滴加入（使用蠕动泵泵入）反应体系，反应氮气保护。控制体系温度15℃，反应4h后开始采用HPLC取样检测，每小时取样检测一次，在HPLC谱图上溶剂以外的原料峰面积占比≤0.5%，体系产品纯度95%以上即为反应合格。有机相进行浓缩至不出馏分，加入甲基叔丁基醚75L溶解。控制体系温度10℃，向反应釜中加入40kg水和3wt%NaCl水溶液25kg，搅拌0.5h，分液，上层有机相用40kg水和3wt%NaCl水溶液 25kg洗涤3次，有机相HPLC检测，HPLC谱图上的DMF峰面积占比＜0.5%即为合格。有机相进行浓缩至反应体系的20%（20℃，-0.095Mpa~-0.1Mpa）滴加入46.51kg正庚烷中析晶离心得到白色固体。控制体系温度15℃，白色固体用50.32kg的甲基叔丁基醚溶解，加入DMF/H

实施例3

控温15℃，向150L釜中加入二氯甲烷 40kg，四氮唑0.40kg、1-甲基咪唑0.13kg、氮气保护下加入双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦4kg，搅拌10min。控温15℃将1.6kg原料5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-2'-氟脱氧鸟苷溶于DMF中（原料与DMF的质量比为1:4），滴加入（使用蠕动泵泵入）反应体系，反应氮气保护。控制体系温度15℃，反应4h后开始采用HPLC取样检测，每小时取样检测一次，在HPLC谱图上溶剂以外的原料峰面积占比≤0.5%，体系产品纯度95%以上即为反应合格。有机相进行浓缩至不出馏分，加入甲基叔丁基醚100L溶解。控制体系温度10℃，向反应釜中加入30Kg水和3wt%NaCl水溶液 20kg，搅拌0.5h，分液，上层有机相用30Kg水和3wt%NaCl水溶液 20kg洗涤3次，有机相HPLC检测，HPLC谱图上的DMF峰面积占比＜0.5%即为合格。有机相进行浓缩至反应体系的15%（30℃，-0.095Mpa~-0.1Mpa）滴加入43.78kg正庚烷中析晶离心得到白色固体。控制体系温度5℃，白色固体用47.36kg的甲基叔丁基醚溶解，加入DMF/H

上述实施例不以任何方式限制本发明，凡是采用等同替换或等效变换的方式获得的技术方案均落在本发明的保护范围内。